沙门氏菌检验标准操作规程

1目的P URPOSE

规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。

2范围SCOPE

适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。

3责任RESPONSIBILITY

微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。

4程序PROCEDURE

定义和原理

沙门氏菌广泛存在于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，是细菌性食物中毒的主要病因。本方法利用沙门氏菌呈辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈阴性的特性，对物料、产品进行沙门氏菌检验。

材料和设备

紫外灯：波长366nm，功率不小于6W。

放大镜：3至4倍。

毛细滴管。

LX-B35L压力蒸汽灭菌锅。

无菌的培养皿。

无菌的接种环。

培养基和试剂

SCDLP液体培养基：按《化妆品卫生规范》（2007版）或使用商品培养基干粉配制。

四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：按—2010附录配制或使用商品试剂。

SS琼脂培养基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)，蛋白胨，乳糖，蔗糖，胆盐，柠檬酸钠，硫代硫酸钠，柠檬酸铁，煌绿，中性红，琼脂，蒸馏水1000mL。

HE琼脂培养基：按—2010附录或使用商品培养基干粉配制。

玉米油维多利亚蓝琼脂培养基：灭菌后的基础培养基冷却至50℃左右，边摇边加入玉米油乳化液。倾注平皿，制成平板。基础培养基及玉米油乳化液配方如下：

a）基础培养基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化钠5g，琼脂13g，水900mL，。将

各成分加入水中，加热溶解。调节，116℃15min高压灭菌。

b）玉米油乳化液：玉米油100mL，%维多利亚蓝水溶液100mL，%琼脂溶液80mL，

吐温801mL。玉米油加维多利亚蓝水溶液混合，边振动边在沸水中加热溶化。然后，

放入分液漏斗中，弃去蓝色水部分，再将着色的脂肪用水洗1-2次。将着色脂肪20mL

加入810mL琼脂溶液中，再加1mL吐温80，116℃15min高压灭菌。冷却后用超声

波乳化。

MUCAP试剂：取MUCAP 100mg，加纤维溶解剂溶解，再加Triton X-100 ，贮存于4℃冰箱。使用时用的L醋酸盐缓冲液稀释10倍。

氧化酶试纸：将甲液与乙液等量混合。取定性滤纸，浸透混合液后，于70-80℃烘箱烘干，剪成大小适当的纸条，密封于塑料袋或瓶中，贮存于4℃冰箱备用。

甲液：1% α-萘酚乙醇液；乙液：1% 二甲基对苯二胺草酸盐水溶液。

检验步骤

增菌和前增菌

取样品按SOP-QM-B017制备1：10稀释的检液。取10mL加到90mLSCDLP液体培养基

中，置培养箱36℃±1℃培养18h～24h。移取10mL，转接种于100mL四硫酸钠煌绿

（TTB）增菌液内，42℃±1℃培养18h～24h。

分离培养

分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个SS 琼脂平板（含1%蔗糖）和一个HE琼脂平板。SS琼脂平板于36 ℃±1 ℃培养24～30h，HE平板于36 ℃±1 ℃

培养40～48h。

沙门氏菌菌落特征：

a）在SS 琼脂平板上：无色半透明，菌落中心带黑色的菌落；或者菌落为粉红

色，中心带黑色，但有时不明显。

b）在HE平板上：无色半透明，菌落中心带黑色或几乎全黑色；或者菌落呈粉

红色，中心带黑色。

试验

从培养的分离培养基或显色培养基上挑选疑似沙门氏菌的菌落，尽量选较大、分离较好的单个菌落，用中性笔做好标记并编号。

用毛细滴管吸取MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上(覆盖整个菌落)。将一个平板的被检可疑菌落全部都滴加试剂后，将平板置于366nm紫外灯下检视10至15

分钟。发蓝色荧光的为MUCAP试验阳性，将阳性菌落编号记录下来。

氧化酶试验

用接种环挑取MUCAP阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察涂菌点是否变蓝色。在10min内变蓝色为氧化酶试验阳性，不变色为阴性。

脂肪酶试验

将SS琼脂或HE琼脂上，MUCAP阳性且氧化酶试验阴性的菌落，用接种环挑取划

线接种至玉米油维多利亚蓝琼脂培养基平板于36 ℃±1 ℃培养40～48h。观察长出的菌落，脂肪酶阳性菌菌落呈蓝色；阴性菌菌落则呈无色或粉红色。（注：氧化酶试验和脂肪酶试验顺序可以交换，或同时进行。）

记录和检验结果报告

在检验原始记录上详细记录观察结果。

菌落的MUCAP试验阳性，且氧化酶试验与脂肪酶试验均为阴性，判定为沙门氏菌，报告沙门氏菌阳性。其它情况均报告阴性。

检验出阳性结果的培养基平板要保存至少1个月。