仪器分析(高职)黄一石主编 第六章 高效液相色谱法
高效液相色谱法的分离原理
高效液相色谱法的分离原理（原创版）目录一、高效液相色谱法的基本概念二、高效液相色谱法的分离原理1.流动相与固定相的相互作用2.溶质在两相间的分配3.平衡时的计算公式三、高效液相色谱法的应用领域四、高效液相色谱法的常见故障及其排除方法正文高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种以液体为流动相的色谱分析方法，广泛应用于医药卫生、食品安全、环境化学等各个领域。
其分离原理主要基于溶质在固定相和流动相之间的分配，达到平衡时，服从于高效液相色谱计算公式。
在高效液相色谱法中，流动相与固定相之间应互不相溶，且具有明显的分界面。
当试样进入色谱柱后，溶质会在两相间进行分配。
在达到平衡时，溶质在固定相和流动相中的浓度会达到一定的比例关系。
通过计算公式，我们可以得到溶质在固定相和流动相中的浓度。
高效液相色谱法的应用领域十分广泛，包括但不限于医药卫生、食品安全、环境化学等各个领域。
在医药卫生领域，高效液相色谱法可以用于药物分析、药物研发和药品质量控制等；在食品安全领域，可以用于食品成分分析、添加剂检测和农药残留检测等；在环境化学领域，可以用于水质分析、土壤污染检测和空气污染监测等。
在使用高效液相色谱法过程中，可能会遇到一些常见故障，如流动相泄漏、检测器信号不稳定、色谱柱分离效果差等。
对于这些故障，我们可以采取相应的排除和解决方法。
例如，对于流动相泄漏，可以检查流动相输送管路是否破损、接头是否松动等；对于检测器信号不稳定，可以检查检测器是否受到外界干扰、信号线是否接触良好等；对于色谱柱分离效果差，可以检查色谱柱是否损坏、固定相是否流失等。
综上所述，高效液相色谱法是一种分离效果高、速度快、应用广泛的色谱分析方法。
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《仪器分析》高效液相色谱法
《仪器分析》高效液相色谱法仪器分析是化学分析中的重要分支，是利用各种仪器设备对样品进行分析、测定和监控的科学方法。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）作为仪器分析中的一种常用方法，具有快速、高效、灵敏度高等特点，在许多领域得到广泛应用。
高效液相色谱法是基于液相色谱原理发展起来的一种方法，其主要原理是利用色谱柱对样品中的化合物进行分离，再通过检测器对各个化合物进行定量测定。
高效液相色谱法相比传统的液相色谱法，具有流动相流速快、柱温控制稳定、色谱柱填充剂的粒径更小等优点，从而使样品得到更高的分离效果和更好的分辨率。
高效液相色谱法可以应用于多种不同类型的样品分析，例如药物分析、环境分析、食品安全监测等。
以药物分析为例，在药物研发和质量控制中，高效液相色谱法可以用于分析药物的纯度、含量和杂质等指标，从而保证药品的质量和安全性。
而在环境分析方面，高效液相色谱法可以用于检测水、土壤和空气中的有机污染物，为环境保护提供科学依据。
此外，高效液相色谱法还可以用于食品安全监测，检测食品中的农药残留和添加剂等有害物质，保障人民群众的身体健康。
高效液相色谱法的操作相对简单，但是在实际应用中也需要注意一些技巧和注意事项。
首先，需要选择合适的色谱柱和填充剂。
不同的分析目标和样品类型需要选择不同的色谱柱和填充剂，以获得最佳的分离效果和分辨率。
其次，需要合理选择流动相的组成和流速。
流动相的组成和流速会直接影响样品的分离效果和检测结果，因此需要经过调试和优化。
最后，还需要进行准确的定量分析。
在高效液相色谱法中，常用的定量方法包括外标法、内标法和标准曲线法等，可以根据实际情况选择合适的方法进行定量分析。
综上所述，高效液相色谱法是一种快速、高效、灵敏度高的仪器分析方法，具有广泛的应用领域和潜力。
在实际应用中，需要根据具体的分析目标和样品类型选择合适的色谱柱和填充剂，合理选择流动相的组成和流速，并进行准确的定量分析。
仪器分析高效液相色谱法
仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的仪器分析方法，广泛应用于化学、药学、环境科学、食品科学等领域。
本文将介绍HPLC的原理、仪器组成、操作步骤以及应用领域。
HPLC的原理是利用样品在液态流动条件下在固定相上的分配行为进行分离和定量分析。
相比于传统的色谱法，HPLC具有操作简便、分离效果好、灵敏度高等优点。
HPLC的仪器组成主要包括溶液配制系统、进样系统、柱温控制系统、分离柱、检测器和数据处理系统。
其中，溶液配制系统主要用于调配流动相，进样系统用于将样品注入分离柱，柱温控制系统用于控制柱温度，分离柱用于实现样品的分离，检测器用于检测样品，数据处理系统用于处理和分析检测结果。
HPLC的操作步骤如下：1.首先，需要根据需要选择合适的固定相和流动相，然后将固定相充填到分离柱中。
2.将样品溶解于合适的溶剂中，并按照一定的稀释比例稀释溶液。
3.将稀释后的溶液注入进样器中。
4.打开柱温控制系统，设置合适的柱温。
柱温的选择应考虑到样品的性质以及分离柱的要求。
5.打开溶液配制系统，调配合适的流动相，并将流动相以一定的流速通过分离柱。
6.启动检测器，并设置适当的检测波长和灵敏度，以便对样品进行检测。
7.数据处理系统会自动记录检测结果，并进行相应的数据处理和分析。
HPLC广泛应用于化学、药学、环境科学、食品科学等领域，常见的应用包括药物分析、环境污染物检测、食品成分分析等。
例如，可以利用HPLC对药物中的成分进行分离并进行定量分析，以保证药物的质量和疗效。
在环境科学中，HPLC可以用于检测空气、水体和土壤中的有机污染物。
在食品科学中，HPLC可以用于检测食品中的残留农药、添加剂和重金属等。
总之，HPLC是一种常用的高效仪器分析方法，通过流动相在固定相上的分配行为实现样品的分离和定量分析。
由于其操作简便、分离效果好、灵敏度高等优点，成为化学、药学、环境科学、食品科学等领域中不可或缺的分析工具。
高效液相色谱原理和操作详解
高效液相色谱我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。
I．概论 (3)一、液相色谱理论发展简况 (3)二、HPLC的特点和优点 (4)三、色谱法分类 (5)四、色谱分离原理 (5)II．基本概念和理论 (10)一、基本概念和术语 (10)二、塔板理论 (17)三、速率理论（又称随机模型理论） (19)III．HPLC系统 (22)一、输液泵 (23)二、进样器 (27)三、色谱柱 (29)四、检测器 (35)五、数据处理和计算机控制系统 (41)六、恒温装置 (42)IV．固定相和流动相 (43)一、基质（担体） (43)二、化学键合固定相 (46)三、流动相 (49)1．流动相的性质要求 (49)2．流动相的选择 (50)3．流动相的pH值 (51)4．流动相的脱气 (52)5．流动相的滤过 (53)6．流动相的贮存 (54)7．卤代有机溶剂应特别注意的问题 (54)8．HPLC用水 (55)V．HPLC应用 (56)一、样品测定 (56)二、方法研究 (58)附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 (58)一、对起草单位的要求： (58)二、对复核单位的要求： (59)I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
仪器分析-高效液相色谱法
流动相的选择与制备
选择合适的流动相
根据被分析化合物的性质， 选择适当的流动相，如有 机溶剂、缓冲液等。
流动相的配制
按照实验要求，准确称量 流动相组分，混合均匀， 并进行过滤和脱气处理。
流动相的梯度洗脱
对于多组分分离，可以采 用梯度洗脱技术，以提高 分离效果。
仪器的开机与平衡
开机
按照仪器说明书，打开仪器电源， 启动仪器操作系统。
药物制剂质量控制
高效液相色谱法可以用于药物制剂的质量控制， 检测制剂中药物的含量、纯度和稳定性等指标。
环境样品分析中的应用
污染物检测
高效液相色谱法可以用 于检测环境中的有机污 染物，如农药、多环芳 烃等，为环境污染控制 和治理提供依据。
饮用水质量检测
通过高效液相色谱法可 以检测饮用水中的有害 物质，如消毒副产物、 微量有机物等，保障公 众的饮用水安全。
粒径
色谱柱的粒径影响分离效 果和分离时间。粒径越小， 分离效果越好，但分离时 间越长。
长度
色谱柱的长度影响分离效 果和载样量。长度越长， 分离效果越好，但载样量 越小。
检测器
类型
常用的检测器有紫外-可见光检测器、荧 光检测器、电导检测器等，根据被测物质 的性质和检测需求选择合适的检测器。
响应速度
线性范围
质。
测定水体、土壤、空气 中的污染物和有害物质。
用于蛋白质、核酸、细 胞等生物大分子的分离
和检测。
高效液相色谱法的优势与局限性
优势
高分离效能、高灵敏度、高选择 性、应用范围广。
局限性
需要专业操作人员、仪器昂贵、 样品前处理复杂、耗时长。
02 高效液相色谱法的仪器构成
CHAPTER
高效液相色谱法工作原理
高效液相色谱法工作原理
高效液相色谱法（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种用于化合物分离和分析的分离技术。
它是一种液相色谱法，可以用于分离极性、非极性和大分子化合物。
它广泛应用于化学、制药、生物、环境和食品等领域。
高效液相色谱法的工作原理主要基于化合物间在移动相（流动相）和静态相（固定相）之间相互作用的不同程度。
在HPLC分析中，样品会通过由强度调节器和检测器组成的色谱系统。
化合物从具有高压气源并被称为“移动相”的溶液中通过一个柱子，该柱子由高度填充的吸附剂组成。
柱子上的静态相被称为“固定相”，并且通过静态相和流动相之间的化合物相互作用来实现对化合物的分离。
高效液相色谱法中的移动相通常是一个高压液体。
固定相通常可以是任何一种吸附剂，但通常是硅胶或者高性能液相色谱固定相。
为了分离化合物，需要通过调整移动相的性质来调整化合物与静态相相互作用的程度。
这可以通过调整溶剂性质来实现，包括极性、pH 值、浓度和离子强度。
在高效液相色谱法中，化合物被分离并纯化时，它们同时被聚集并聚集在某些列与某些未受分离的化合物之间。
通过单独对某些列进行采集，可以隔离和收集已经分离的化合物。
可以使用不同类型的探测器来检测和量化化合物。
总结一下，高效液相色谱法可以用于分离和分析各种类型的化合物。
它基于化合物在移动相和静态相之间相互作用的程度而进行分离。
通过调整移动相的性质，
可以调整化合物与静态相相互作用的程度，从而实现更好的分离效果。
高效液相色谱法—认识高效液相色谱法(仪器分析课件)
二、高效液相色谱法的基本原理
基本原理：
混合组分的样品在色谱柱中，各组分由于在流动相 和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用力的 不同，随流动相在两相间进行反复多次分配过程，经过 一定长度的色谱柱，彼此分离开来，最后按一定顺序流 出。
三、高效液相色交换色谱
固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。各种 离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。
4. 凝胶色谱（空间排阻色谱）
以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同 孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、 聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。
以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～ 10μm的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。
2.分配色谱（液-液分配色谱）
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相，现多为化学键合 固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。
三、高效液相色谱法的主要分离类型
一、高效液相色谱法的基本概念
二、高效液相色谱法的基本原理
三、高效液相色谱法的主要分离类型 四、HPLC与GC的比较
一、高效液相色谱法的基本概念
基本概念：在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和高灵 敏度的在线检测器，是一种新型分离分析技术。
特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。
四、HPLC与GC的比较
1）应用范围不同 液相色谱非常适合分子量较大、难气化等物质的分离分析。
2）液相色谱能完成难度较高的分离工作 ① 可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离 的选择性。 ② 液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地大。 ③ 液相色谱通常在室温下操作。
仪器分析高效液相色谱法
仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。
它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用，使样品组分在柱子中发生分离，再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。
仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。
流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中，进样器将样品注入柱子中，柱子根据物理化学性质的差异，使不同组分发生分离，之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度，并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。
高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。
与传统的液相色谱法相比，高效液相色谱法的流动相的流速更高，柱子填充物颗粒更小，从而大大提高了分离效率。
同时，高效液相色谱法对样品的需求量较小，具有较好的分析灵敏度。
因此，高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。
在生物领域中，高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。
通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器，可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。
例如，对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态，对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。
在环境领域中，高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。
通过连接各种不同相的柱子，可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离，使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。
在食品领域中，高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。
通过选择合适的柱子和检测器，可以对复杂的食品样品进行分离和检测，以保证食品的安全性和质量。
在药物领域中，高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。
仪器分析12高效液相色谱法
应用领域
化学分析
药物分析
用于有机化合物、金属离子、无机阴离子 和阳离子的分离与测定。
用于药品质量控制、药物代谢研究以及新 药开发中的分离与鉴定。
环境监测
生物分析
用于水体、土壤、大气等环境样品中有机 污染物、重金属离子的检测。
用于生物样品中蛋白质、多肽、核酸等生 物大分子的分离与纯化，以及在生物医药 、食品安全等领域的应用。
原理
基于不同组分在固定相和流动相之间的分配平衡差异，通过不断改变流动相的 组成或流速，使各组分在固定相上得到分离，并依次流出色谱柱。
发展历程与分类
发展历程
高效液相色谱法自20世纪60年代 问世以来，经历了经典液相色谱 、薄层色谱、气相色谱等多种技 术的发展与完善。
分类
根据固定相和流动相的物理状态 ，高效液相色谱法可分为液固吸 附色谱、液液分配色谱、离子交 换色谱、凝胶渗透色谱等。
仪器分析12高效液相色谱法
目 录
• 高效液相色谱法简介 • 高效液相色谱仪的组成 • 高效液相色谱法的操作流程 • 高效液相色谱法的分离模式与优化 • 高效液相色谱法的应用实例 • 高效液相色谱法的未来发展与挑战
01 高效液相色谱法简介
定义与原理
定义
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离分析技术，利用流动相和固定相 之间的相互作用，使不同组分在两相之间进行分配，从而达到分离效果。
选择合适的色谱柱
根据待测物的性质选择合适的固定相和粒径， 以提高分离度。
调整洗脱液的流速
适当降低流速可以提高分离度，但过慢的流 速会导致分析时间延长。
梯度洗脱
通过在洗脱过程中改变流动相的组成，实现 复杂样品中不同组分的有效分离物的性质选择合适的流动相，如甲醇、乙腈、水等。
仪器分析高效液相色谱法共48页PPT
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟பைடு நூலகம்的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
仪器分析高效液相色谱法
31、园日涉以成趣，门虽设而常关。 32、鼓腹无所思。朝起暮归眠。 33、倾壶绝余沥，窥灶不见烟。
34、春秋满四泽，夏云多奇峰，秋月 扬明辉 ，冬岭 秀孤松 。 35、丈夫志四海，我愿不知老。
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《仪器分析》高效液相色谱法53页PPT
《仪器分析》高效液相色谱法
1、战鼓一响，法律无声。——英国 2、任何法律的根本；不，不成文法本 身就是 讲道理 ……法 律，也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正，其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等，但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
高效液相色谱仪的使用-学习指南.
知
识
要
求
了解高效液相色谱仪流动相的性质和选择的原则。
熟悉高效液相色谱仪的操作步骤。
技
能
要
求
能正确配制和准备液相色谱流动相
能按照仪器操作规程正确操作高效液相色谱仪。
素
质
要
求
态度端正，积极主动学习，勤于思考，乐于探究，科学严谨，积极和教师、同学交流遇到的疑问和学习心得；团结协作、乐于奉献。
《仪器分析》课程学习指南
项目
高效液相色谱法
学时
12学时
任务
高效液相色谱的使用
学时
4学时
知识点（技能点）
高效液相色谱仪的操作使用
学时
4学时
教学内容
1．液相色谱流动相的选择与配制。
2．高效液相色谱仪的操作流程。
3Байду номын сангаас高效液相色谱仪的操作步骤。
教学条件
教材、视频、PPT、理实一体化教室、高效液相色谱仪
教
学
要
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第二节 高效液相色谱仪
低压梯度： 只用一个高压泵， 在泵前安装了一个比例阀，混 合就在比例阀中完成。
第二节 高效液相色谱仪
二、 进样系统
将样品溶液准确送入色谱柱的装置 ——手动方式、自动方式
进样器要求
密封性好、死体积小、重复性好、进样时 引起色谱系统的压力和流量波动要很小。
常用手动进样器——六通阀进样器，
第二节 高效液相色谱仪
4、梯度洗脱装置：
梯度洗脱：在分离过程中逐渐改变流动相组成 ，如溶剂的极性、离子强度、pH值等。
为什么要进行梯度洗脱？ 使保留值相差很大的多种成分在合 理的时间内全部洗脱并达到相互分离
第二节 高效液相色谱仪
高压梯度： 用于二元梯度 ，用两个泵分别按设定的 比例输送A和B两溶液至 混合器
液—液分配色谱法 使用将特定的液态物质涂于担体表面，
或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分
离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离；
离子交换色谱法； 体积排阻色谱法； 离子对色谱法；
亲和色谱法；
第一节 高效液相色谱的主要类型
高效液相色谱分析的特点
能实现高效的分离; HPLC完成一次分离分析一般只需几分钟到几十分钟，
5、安培检测器
利用待测物在工作 电极表面发生反应产生 电流，此电流大小与待 测物浓度成正比。
1 cm 塑料块 Teflon 接参比电极 和对电极 接色谱柱
工作电极 (Pt, Au, 碳糊)
流动相必须含电解质，且呈化学隋性。 只能检测具有电活性的物质。
第二节 高效液相色谱仪 五 、 数据处理和计算机控制系统
第二节 高效液相色谱仪
六通阀进样
Load
Inject
第二节 高效液相色谱仪
三、 色谱柱
柱长15~30cm，内径4~5mm 基质 (硅胶或高分子聚合物微球)
功能层(固定在基质表面对样品分子保留起 实质作用的有机分子或功能团)
第二节 高效液相色谱仪
四、 检测系统
用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的 组成和含量变化的装置。
色谱工作站
在线显示
自动采集 处理储存
自动控制
第三节 高效液相色的应用
1、定性分析
色谱鉴定法：保留时间对照 化学鉴定法：利用专属化学反应对分离 后收集的组分定性
色谱-光谱联用定性
非在线色谱光谱联用法：
色谱光谱联用仪
第三节 高效液相色的应用
2、定量分析
外标法：外标工作曲线法、外标一点法
酶的纯化、分离和测定
第三节 高效液相色的应用
4、在医学检验中的应用 体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床 药物监测：
合成药物：抗生素、抗忧郁药、黄胺类药等 天然药物：生物碱（吲哚碱、强心甙）等
5、在无机分析中的应用
阳、阴离子的分析等。
2、在环境分析中的应用
多环芳烃、农药（如氨基甲酸脂类）残留等。
第三节 高效液相色的应用
3、在生命科学中的应用 分子水平上研究生命科学、遗传工程、临 床化学、分子生物学等必不可少的工具
低分子量物质：氨基酸、有机酸、有机胺、
类固醇、卟啉、糖类、维生素等分离和测定
高分子量物质：多肽、核糖核酸、蛋白质和
第二节 高效液相色谱仪
4、示差折光检测器
平面镜 样品 透镜 遮光板 光源
放大器 光电转换 记录仪 参比 光学零 调零
溶剂相和样品+溶剂相对光的折射率不同，造成两束 光强度差变化，差示信号放大记录代表样品浓度 通用型检测器，灵敏度为10-7g/ml 对温度变化敏感，且不适于梯度淋洗
第二节 高效液相色谱仪
比经典液相色谱快得多;
灵敏度高，使HPLC的最小检测量可达10-11~10-9g; 能与计算机联用，自动化程度高； 应用范围广，对样品的适用性广，不受分析对象挥
发性和热稳定性的限制；
流动相可选择范围广，可通过改变流动相组成来改
善分离效果；
馏分容易收集，更有利于制备；
第二节 高效液相色谱仪
液流稳定。
结构材料应耐化学腐蚀
第二节 高效液相色谱仪
第二节 高效液相色谱仪
活塞型往复泵——液相色谱仪中使用最广泛的 恒流泵
第二节 高效效液相色谱仪
3、脱气装置 ：
将相对分子量小的气体从溶剂中除去
离线超声波振荡脱气 在线惰性气体鼓泡吹扫脱气 在线真空脱气装置
溶质性检测器：仅对被分离组分理化特性响应
紫外、荧光、电化学检测器
总体检测器：对试样和洗脱液总理化性质响应
示差折光，电导检测器
第二节 高效液相色谱仪
1、紫外检测器
微量吸收池，光程为2-10mm, 体积约为1~10 L
最小检测量10-9g· ml-1
对流量和温度波动不敏感
接色谱柱
石英窗
可用于梯度洗脱。
第六章 高效液相色谱法
1
方法原理 气相色谱仪
实验技术
2
3
4
气相色谱应用实例 实验
5
第六章 高效液相色谱法
第六章 高效液相色谱法
第一节 高效液相色谱的主要类型
高效液相色谱（HPLC）分析的分类 液—固吸附色谱法 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱
柱上的分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离；
、外标二点法等
不需知道校正因子，但需进样量准确 内标法：内标工作曲线法、内标一点法
、内标二点法、内标对比法
第三节 高效液相色的应用
3、HPLC的应用领域
1、在食品分析中的应用
食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素 、维生素、香料、矿物质等； 食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂、抗氧 化剂等； 食品污染物分析：霉菌毒素、微量元素、多环芳烃 等。
UV 光电 倍增管
最常用的通用型检测器
废液
第二节 高效液相色谱仪
光电二极管阵列检测器
时间、光强度和波长三维谱
第二节 高效液相色谱仪
2、荧光检测器
灵敏度高 选择性好
样品量很小
适合药物和生化样品分析
第二节 高效液相色谱仪
3、蒸发光散射检测器
通用型和质量型检测器
适于无紫外吸收、无
电活性和不发荧光的
样品的检测
第二节 高效液相色谱仪
第二节 高效液相色谱仪
一、 高压输液系统
1、贮液器和吸滤器：
贮液器: 1-2L的玻璃瓶
溶剂吸滤器: Ni合金，
孔约0.45 m，防止颗 粒物进行泵内。
第二节 高效液相色谱仪
2、高压输液泵 要求
流量准确可调、可调范围宽：流动相流速在 0.5-2mL/min，输液泵的最大流量5-10mL/min 耐高压：输出压力常达30-60MPa