实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测PPT课件
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实验目的
• 1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 • 2.学会琼脂糖凝胶的制作和进行电泳的方法
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实验原理
琼脂糖是一种线性多糖聚合物，天然聚合长链状分子， 在沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径 的大小取决于琼脂糖的浓度，浓度越高，孔隙越小，其分 辨能力就越强。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效 应和分子筛效应。
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2. DNA分子进行染色的原理（以溴化乙锭为例）
观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖凝胶中的DNA分 子。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从 负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌 入到DNA分子中的碱基对之间形成络合物，这种络合物在紫外光下发射的 荧光要比单纯的DNA分子要强的多，便于DNA的检测。
感谢您的观看！
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实验原理
（1）电荷效应 DNA分子在PH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在
电泳时向阳极移动。
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（2）分子筛效益 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度主要取决
于分子筛效益，即DNA分子本身的大小和构象（共价闭环 DNA>线状DNA>开环DNA），而且其迁移速度与其相对分子 质量的对数值成反比，所以不用相对分子质量的DNA分子可 以在琼脂糖凝胶电泳中分离。
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实验步骤
琼脂糖凝胶的配制
1g琼脂糖
100mlTBE缓冲液
5µl GoldView
Hale Waihona Puke 冷却到60℃第7页/共12页
点样
1.将适量的DNA Marker用移液枪加入凝胶的第一个孔中。 2.在PCR产物中加入6×DNA LodingBuffer（每5ul产物加 入1ul），混匀后，用移液枪加入到样品孔内，每孔加2ul。
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实验仪器、材料、试剂
• 实验仪器及用具 电泳仪、移液枪、电磁炉、锥形瓶、容量瓶、紫外分析仪
• 实验材料及试剂
实验材料：鸡血DNAPCR扩增产物 DNA Marker 、GoldView核酸染色剂 、琼脂糖、三
羟甲基氨基甲烷（Tris） 、硼酸 、乙二胺四乙酸二钠、 6×DNA LodingBuffer 实验试剂：0.5×TBE（）缓冲液 、1.0%琼脂糖溶液、
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电泳、观察
肉眼可见指示剂泳至距制胶板前端约2-3cm处即可停止电泳。切断电源， 取出凝胶，置于紫外线透射仪上观察电泳结果，或用凝胶成像分析系统拍照 保存。
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注意事项
1.琼脂糖融化时，档位不宜太高。 2. 制胶和加样过程中要防治气泡的产生。 3. 操作过程必须戴手套操作，严格注意防护。 4. 加样时，Tip 头不宜插入样品孔太深，也不要
穿破胶孔壁，否则样品渗漏或DNA 带型不整齐。 5. 电源接通时，应核实凝胶的方向是否正确。 6. 电泳仪有电压显示，并不一定标志电泳槽已接
通，应观察电极气泡出现情况。负极的气泡比正 极多一倍，表示电泳已开始。将两者混匀后加入
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讨论
• 影响DNA迁移速率的因素有哪些？
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• 1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 • 2.学会琼脂糖凝胶的制作和进行电泳的方法
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实验原理
琼脂糖是一种线性多糖聚合物，天然聚合长链状分子， 在沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径 的大小取决于琼脂糖的浓度，浓度越高，孔隙越小，其分 辨能力就越强。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效 应和分子筛效应。
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2. DNA分子进行染色的原理（以溴化乙锭为例）
观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖凝胶中的DNA分 子。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从 负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌 入到DNA分子中的碱基对之间形成络合物，这种络合物在紫外光下发射的 荧光要比单纯的DNA分子要强的多，便于DNA的检测。
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实验原理
（1）电荷效应 DNA分子在PH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在
电泳时向阳极移动。
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（2）分子筛效益 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度主要取决
于分子筛效益，即DNA分子本身的大小和构象（共价闭环 DNA>线状DNA>开环DNA），而且其迁移速度与其相对分子 质量的对数值成反比，所以不用相对分子质量的DNA分子可 以在琼脂糖凝胶电泳中分离。
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实验步骤
琼脂糖凝胶的配制
1g琼脂糖
100mlTBE缓冲液
5µl GoldView
Hale Waihona Puke 冷却到60℃第7页/共12页
点样
1.将适量的DNA Marker用移液枪加入凝胶的第一个孔中。 2.在PCR产物中加入6×DNA LodingBuffer（每5ul产物加 入1ul），混匀后，用移液枪加入到样品孔内，每孔加2ul。
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实验仪器、材料、试剂
• 实验仪器及用具 电泳仪、移液枪、电磁炉、锥形瓶、容量瓶、紫外分析仪
• 实验材料及试剂
实验材料：鸡血DNAPCR扩增产物 DNA Marker 、GoldView核酸染色剂 、琼脂糖、三
羟甲基氨基甲烷（Tris） 、硼酸 、乙二胺四乙酸二钠、 6×DNA LodingBuffer 实验试剂：0.5×TBE（）缓冲液 、1.0%琼脂糖溶液、
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电泳、观察
肉眼可见指示剂泳至距制胶板前端约2-3cm处即可停止电泳。切断电源， 取出凝胶，置于紫外线透射仪上观察电泳结果，或用凝胶成像分析系统拍照 保存。
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注意事项
1.琼脂糖融化时，档位不宜太高。 2. 制胶和加样过程中要防治气泡的产生。 3. 操作过程必须戴手套操作，严格注意防护。 4. 加样时，Tip 头不宜插入样品孔太深，也不要
穿破胶孔壁，否则样品渗漏或DNA 带型不整齐。 5. 电源接通时，应核实凝胶的方向是否正确。 6. 电泳仪有电压显示，并不一定标志电泳槽已接
通，应观察电极气泡出现情况。负极的气泡比正 极多一倍，表示电泳已开始。将两者混匀后加入
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讨论
• 影响DNA迁移速率的因素有哪些？
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