第8章动物细胞培养制药工艺-2
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贴壁依赖性细胞：依赖于生长基质，并在 表面才能生长的细胞。只能贴壁生长，多 数天然细胞。
非贴壁依赖性细胞：不依赖于生长基质， 可悬浮生长，也称为悬浮细胞。淋巴细胞、 杂交瘤细胞、肿瘤细胞。
兼性细胞：对生长基质的依赖性不严格， 既可贴壁生长，也可悬浮生长。CHO细胞、 BHK细胞（幼地鼠肾细胞 ）。
血清成分与作用
含有基本的营养成分：补充合成培养基成分的不足。 脂类和微量元素：磷脂、胆固醇、铜、锌、钴、钼、硒。 缓冲物质：钾、钠、氯、铁、钙等，稳定pH和渗透压。 激素和生长因子：胰岛素、前列腺素、皮质醇、雌二醇。 贴附和延伸因子：纤维结合蛋白、软骨素、胶原等。 载体蛋白：白蛋白、转铁蛋白 蛋白酶抑制剂：降解细胞死亡的蛋白；消除毒素和金属毒
2、合成培养基
概念：用化学成分明确的试剂配制的培养 基。
组成：糖、氨基酸、无机盐、维生素及其 他成分。
特点：组分稳定，容易配置。
缺点：不能直接使用；需添加5%~20%血 清，才能培养。
已有几十种合成培养基，大部分已商品化。 如：MEM、BME、DMEM、GMEM、 JMEM、RPMI1640
作用：一类微量的小分子有机生物活性物 质，既不是细胞的物质基础，也不是能量 物质，对代谢和生长起调节和控制作用。
水溶性维生素：B族维生素和维生素C 脂溶性维生素：维生素A、D、E、K四种 8种以上维生素
4、无机盐类
作用： 细胞代谢作用：酶辅基（微量元素），调
节酶活性； 细胞构成成分：大量元素； 物质转运：生理电活动，Na和Cl； 正常生长环境：维持水平衡、保持渗透压
优点：容易更换全部培养液，如从血清培养基到 无血清培养基；可改变培养液与细胞的比例；容 易灌注培养，高密度和产物分泌表达。
缺点：需要更大空间；细胞活性无法检测；过程 参数检测和控制困难；放大困难而且昂贵。
最初采用滚瓶培养，现仍用于疫苗等生产。
•非贴壁细胞处于悬浮状态；而贴壁细胞则 在瓶内壁上贴附生长形成单层细胞。 •优点：表比面积增加，处于衡态转动，增 加气体交换。 •缺点：劳动强度大，操作较繁杂，占用空 间体积大，产量低，不宜控制和监测培养 环境变化。
优点：无剪切、高传质、营养成分的选择性渗入，使培养 细胞和产物密度都可达到比较高的水平。
缺点：膜的污染和堵塞，观察困难，细胞生长或过量气体 产生会破坏纤维。
目前中空纤维反应器已进入工业化生产，主要用于培养杂 交瘤细胞来生产单克隆抗体。
载体结合--微载体培养
Van Wezel在1967年 开发了一种微载体系统 培养贴壁依赖性细胞。
8.3.3 培养基质量的控制
培养用水质 缓冲液 生理盐水和平衡盐溶液 其他成分配置
1、培养用水质
必须适用纯净水配置培养基 水存放时间不宜超过2周 普通水必须除去各类元素、有毒或有害物
质及微生物和热源，达到纯净水标准。
2、缓冲液
弱酸与弱酸盐：碳酸/碳酸氢钠体系 弱碱与弱碱盐：磷酸二氢钠/磷酸氢二钠体
素 激素与附加成分：胰岛素等 pH指示剂：酚红 培养基研究的关键：不同细胞系所需基本成分相
同，但浓度和用量不同。
1、糖类
糖类：碳源和能源，经过EMP、HMP和 TCA循环、电子传递链，形成代谢产物和 能量ATP。
不能利用：多糖、双糖、寡糖等聚合物。 可利用：单糖化合物 主要：葡萄糖。
8.3 动物细胞培养基制备
1、培养基组成成分 2、培养基种类 3、培养基质量控制
动物细胞对培养基的要求高，完全异养， 要求结构简单、容易利用、相对分子量小 的营养物
8.3.1 培养基组成的成分
培养基的作用：基础营养与生理；适宜环境；利 于工艺
碳源与能源：糖类、谷氨酰胺 氮源：氨基酸（12种必需氨基酸） 维生素、无机盐类：多种维生素，大量和微量元
2、氨基酸
氮源作用：构成含氮化合物 不能利用：硝态和铵态氮，也不能利用多
肽、蛋白质等高分子化合物。 可利用：氨基酸等单体化合物。 12种必需氨基酸：Arg、Cys、His、Ile、
Leu、Lys、Met、Phe、Thr、Trp、Tyr、 Val 谷氨酰胺：也是重要碳源和能量
3、维生素
1、天然培养基
概念：直接取自于动物组织提取液或体液作为培 养基。
种类：血清、淋巴液、胚胎浸出液、水解乳蛋白。 特点：营养价值高，许多细胞系和原代及传代培
养。 缺点：成分复杂，质量不稳定，来源有限。 血源性污染：病毒、真菌、支原体污染的可能性 分离纯化：增加难度；干扰某些生物测定。 增加成本：工业化生产使用受限。
生物制药工程
主讲教师： 刘 凯 liukai_1982@
山东农业大学生命科学学院微生物系
第八章 动物细胞培养制药工艺
8.1 制药动物细胞的表达系统与特征 8.2 基因工程动物细胞系的构建 8.3 动物细胞培养基的制备 8.4 动物细胞培养技术 8.5 培养过程检测与工艺控制
3、固定化培养
3.1 载体结合
（1）吸附法：用固体吸附剂将细胞吸附在其 表面而使细胞固定化。
操作简便、条件温和，是动物细胞固定化 中最早研究使用的方法。
缺点：载体的负荷能力低，细胞易脱落。 例：中空纤维培养、微载体培养
载体结合--中空纤维培养
概念：中空纤维细胞培养技术是模拟细胞在体内生长的三 维状态，利用一种人工的“毛细管”（即中空纤维）给培 养的细胞提供物质代谢条件而建立的一种体外培养系统。
2、悬浮培养
细胞在反应器内游离悬浮在培养液中生长 的培养过程。
优点：操作简单，培养条件相对均一，传 质和传氧较好，容易放大培养。
缺点：细胞体积小，密度低，培养病毒易 失去标记而降低免疫能力。
适用范围鉴微生物发酵理论和经验，发挥动物细 胞的特性。
和酸碱平衡。
5、激素与附加成分
激素：调节细胞的生长（刺激作用），胰 岛素。
贴附因子：细胞的贴壁生长必需，胶原。 脂类：不饱和脂肪酸亚油酸、固醇等。 载体蛋白：铁离子、脂类、维生素等吸收。 碱基和核苷：核酸代谢。
8.3.2 动物细胞培养基的种类
天然培养基 合成培养基 无血清培养基
性。 蛋白质：抗机械剪切，保护细胞免于损伤的作用。 来源：胎牛、新生牛或成牛、马、鸡、羊血清及人血清。
3、无血清培养基
概念：不添加血清，使细胞能在体外生长 繁殖的合成培养基。
组成：合成培养基基础之上，添加激素与 附加成分（生长因子、结合于转运蛋白、 贴附与延伸因子、酶抑制剂、低分子因子 如H2SeO3）。
1、生长基质
概念：改变支持介质表面特性，促进细胞贴附的 物质。
作用：为支持介质表面提供适量带电荷，细胞被 吸附在介质上，实现贴壁生长。
原理：细胞、玻璃和塑料介质表面带负电荷；要 使细胞贴壁，必须进行二价阳离子或糖蛋白、其 他试剂交联，使之表面成正电荷（供应商已做 到）。
天然生长基质：胞外基质成分，如胶原。 人工生长基质：多聚赖氨酸
特点：提高了培养的质量，避免血清带来 的麻烦，产品纯化容易，组分稳定，大量 配置。
无血清培养基种类
Ⅰ类：无蛋白质成分，化学成分完全明确， 只适用于一些特定细胞系。
Ⅱ类：含有纯蛋白和激素成分，应用广， 相对比较昂贵。UitraCHO-F12+胰岛素+转 铁蛋白和专一纯化蛋白等成分。
Ⅲ类：非确定生物添加剂取代血清，化学 成分不太明确。可以灭菌，价格低廉。
悬浮培养反应器：小规模Spinner
搅拌桨及折流板 的设计可增加通 气和搅拌效果。
在侧出口可以很 方便使用25ml和 50ml规格的移液 管进行操作。
双侧臂玻璃细胞悬浮培养瓶
悬浮培养大规模：1~1000L以上
从玻璃瓶到不锈钢反应器 原位灭菌，加热保温，种子罐，培养基储
罐。 过程控制复杂。
变化。 复苏过程：将冷冻细胞取出，立即在37℃
水浴中，快速融化。
在保护剂存在下，慢冻快融是保存复苏细
胞的要领。
8.4.3 动物细胞大规模培养方法
1、单层贴壁培养 2、悬浮培养 3、固定化培养
1、单层贴壁培养
规模：取决于表面积/体积， 170~200cm2/100~200ml，2×107二倍体或108 异倍体。
一般培养液中含量为1~4mmol/L
5、NaHCO3配制
配成3.7%、5.6%、7.4%三种浓度。 过滤除菌或高压灭菌，4℃保存。 使用前加入，调节培养基pH。
6、培养基灭菌
不含葡萄糖的溶液常规高压灭菌。 含葡萄糖时，采用过滤除菌；或115℃，
15min。 血清使用：需要灭活（56℃,30min），过
2、接触抑制
概念：细胞在生长基质上分裂增殖，逐渐 汇集成片，当每个细胞与其周围的细胞互 相接触时，细胞就停止增殖。
特点：保持充足的营养，细胞仍可存活一 段时间，但细胞密度不再增加。
大多数细胞：形成单层细胞，有接触抑制 少数悬浮培养细胞（癌细胞），无接触抑
制
3、细胞生长的基质依赖性
传代时期：刚刚全部汇合的细胞。 消化方法：过程与原代细胞相同。 传代的次数：取决于细胞来源，保证特性 要领：适宜的时期和方法，消化不要过度 注意：防止细胞系之间混杂、非细胞生物
的污染。
3、细胞系的保存
常用低温冷冻方法进行保存。 冷冻保护液：10%血清的培养液，附加
7.5%~10%二甲基亚砜。 保存期间，要控制环境条件，并定期监测
8.4.2 动物细胞实验室培养技术
1、原代培养技术 2、传代培养技术 3、细胞系的保存
1、原代培养: 原代细胞的培养过程
动物组织或器官
从体内取出组织或器官
粉碎、洗涤、离心 酶解消化
37℃消化，胰蛋白酶， 胶原酶，获得单细胞
离心或过滤
洗涤
培养液稀释细胞
接种培养
2、传代培养: 过程
概念：对长满器皿表面的细胞进行消化分 离，接种到新的培养基上，进行新一轮培 养。
微载体是直径为 60~250μm的微珠。
细胞贴附于微载体上， 悬浮于培养基中，逐渐 生长成单层，具有单层 培养和悬浮培养的优点。
玻璃微珠
概念：细胞贴附于微载体上延伸和增殖，再悬浮 于培养液中的培养过程。
滤除菌，按一定比例加入。4℃保存。
思考题
动物细胞培养基组成成分及其作用是什么？ 与微生物培养基相比，有何特殊性？
如何控制动物细胞培养基的质量？ 生产用最适动物细胞培养基应该选择哪种？
为什么？
第八章 动物细胞培养制药工艺
8.1 制药动物细胞的表达系统与特征 8.2 基因工程动物细胞系的构建 8.3 动物细胞培养基的制备 8.4 动物细胞培养技术 8.5 培养过程检测与工艺控制
8.4 动物细胞培养技术
目前用于制药的动物细胞有四类：原代细 胞系、二倍体细胞系、异倍体细胞系和融 合的或重组的工程细胞系。
1、动物细胞生长和基质依赖性 2、动物细胞的实验室培养技术 3、动物细胞大规模培养技术 4、动物细胞培养的操作方法
8.4.1 细胞生长和基质依赖性
生长基质 细胞生长的基质依赖性 接触抑制
系 作用：pH恒定 应用：缓冲剂配置，进一步配置其他溶液。
磷酸盐缓冲液（PBS）
组成：KCl、KH2PO4、NaCl、Na2HPO4 PBS应用：培养物、器皿的洗涤液。
3、生理盐水和平衡盐溶液
生理盐水：调节渗透压的盐溶液， 0.9%NaCl等渗溶液。离体培养细胞的渗透 压应控制为等渗溶液280（以下是低渗）310（以上是高渗）m0sm/kg。每增加 1mg/ml NaCl，渗透压增加32 m0sm/kg。
平衡盐溶液：BSS，由生理盐水，缓冲剂 与指示剂、无机盐和葡萄糖组成。
作用：满足细胞对盐离子、碳营养的要求； pH和渗透压的环境要求；直观观察pH
4、氨基酸配置
用量：使用L型氨基酸，对于DL混合型氨 基酸，使用量应该加倍。
谷氨酰胺：不稳定，需单独配制 谷氨酰胺浓度：100倍浓缩液，-20℃保存。
非贴壁依赖性细胞：不依赖于生长基质， 可悬浮生长，也称为悬浮细胞。淋巴细胞、 杂交瘤细胞、肿瘤细胞。
兼性细胞：对生长基质的依赖性不严格， 既可贴壁生长，也可悬浮生长。CHO细胞、 BHK细胞（幼地鼠肾细胞 ）。
血清成分与作用
含有基本的营养成分：补充合成培养基成分的不足。 脂类和微量元素：磷脂、胆固醇、铜、锌、钴、钼、硒。 缓冲物质：钾、钠、氯、铁、钙等，稳定pH和渗透压。 激素和生长因子：胰岛素、前列腺素、皮质醇、雌二醇。 贴附和延伸因子：纤维结合蛋白、软骨素、胶原等。 载体蛋白：白蛋白、转铁蛋白 蛋白酶抑制剂：降解细胞死亡的蛋白；消除毒素和金属毒
2、合成培养基
概念：用化学成分明确的试剂配制的培养 基。
组成：糖、氨基酸、无机盐、维生素及其 他成分。
特点：组分稳定，容易配置。
缺点：不能直接使用；需添加5%~20%血 清，才能培养。
已有几十种合成培养基，大部分已商品化。 如：MEM、BME、DMEM、GMEM、 JMEM、RPMI1640
作用：一类微量的小分子有机生物活性物 质，既不是细胞的物质基础，也不是能量 物质，对代谢和生长起调节和控制作用。
水溶性维生素：B族维生素和维生素C 脂溶性维生素：维生素A、D、E、K四种 8种以上维生素
4、无机盐类
作用： 细胞代谢作用：酶辅基（微量元素），调
节酶活性； 细胞构成成分：大量元素； 物质转运：生理电活动，Na和Cl； 正常生长环境：维持水平衡、保持渗透压
优点：容易更换全部培养液，如从血清培养基到 无血清培养基；可改变培养液与细胞的比例；容 易灌注培养，高密度和产物分泌表达。
缺点：需要更大空间；细胞活性无法检测；过程 参数检测和控制困难；放大困难而且昂贵。
最初采用滚瓶培养，现仍用于疫苗等生产。
•非贴壁细胞处于悬浮状态；而贴壁细胞则 在瓶内壁上贴附生长形成单层细胞。 •优点：表比面积增加，处于衡态转动，增 加气体交换。 •缺点：劳动强度大，操作较繁杂，占用空 间体积大，产量低，不宜控制和监测培养 环境变化。
优点：无剪切、高传质、营养成分的选择性渗入，使培养 细胞和产物密度都可达到比较高的水平。
缺点：膜的污染和堵塞，观察困难，细胞生长或过量气体 产生会破坏纤维。
目前中空纤维反应器已进入工业化生产，主要用于培养杂 交瘤细胞来生产单克隆抗体。
载体结合--微载体培养
Van Wezel在1967年 开发了一种微载体系统 培养贴壁依赖性细胞。
8.3.3 培养基质量的控制
培养用水质 缓冲液 生理盐水和平衡盐溶液 其他成分配置
1、培养用水质
必须适用纯净水配置培养基 水存放时间不宜超过2周 普通水必须除去各类元素、有毒或有害物
质及微生物和热源，达到纯净水标准。
2、缓冲液
弱酸与弱酸盐：碳酸/碳酸氢钠体系 弱碱与弱碱盐：磷酸二氢钠/磷酸氢二钠体
素 激素与附加成分：胰岛素等 pH指示剂：酚红 培养基研究的关键：不同细胞系所需基本成分相
同，但浓度和用量不同。
1、糖类
糖类：碳源和能源，经过EMP、HMP和 TCA循环、电子传递链，形成代谢产物和 能量ATP。
不能利用：多糖、双糖、寡糖等聚合物。 可利用：单糖化合物 主要：葡萄糖。
8.3 动物细胞培养基制备
1、培养基组成成分 2、培养基种类 3、培养基质量控制
动物细胞对培养基的要求高，完全异养， 要求结构简单、容易利用、相对分子量小 的营养物
8.3.1 培养基组成的成分
培养基的作用：基础营养与生理；适宜环境；利 于工艺
碳源与能源：糖类、谷氨酰胺 氮源：氨基酸（12种必需氨基酸） 维生素、无机盐类：多种维生素，大量和微量元
2、氨基酸
氮源作用：构成含氮化合物 不能利用：硝态和铵态氮，也不能利用多
肽、蛋白质等高分子化合物。 可利用：氨基酸等单体化合物。 12种必需氨基酸：Arg、Cys、His、Ile、
Leu、Lys、Met、Phe、Thr、Trp、Tyr、 Val 谷氨酰胺：也是重要碳源和能量
3、维生素
1、天然培养基
概念：直接取自于动物组织提取液或体液作为培 养基。
种类：血清、淋巴液、胚胎浸出液、水解乳蛋白。 特点：营养价值高，许多细胞系和原代及传代培
养。 缺点：成分复杂，质量不稳定，来源有限。 血源性污染：病毒、真菌、支原体污染的可能性 分离纯化：增加难度；干扰某些生物测定。 增加成本：工业化生产使用受限。
生物制药工程
主讲教师： 刘 凯 liukai_1982@
山东农业大学生命科学学院微生物系
第八章 动物细胞培养制药工艺
8.1 制药动物细胞的表达系统与特征 8.2 基因工程动物细胞系的构建 8.3 动物细胞培养基的制备 8.4 动物细胞培养技术 8.5 培养过程检测与工艺控制
3、固定化培养
3.1 载体结合
（1）吸附法：用固体吸附剂将细胞吸附在其 表面而使细胞固定化。
操作简便、条件温和，是动物细胞固定化 中最早研究使用的方法。
缺点：载体的负荷能力低，细胞易脱落。 例：中空纤维培养、微载体培养
载体结合--中空纤维培养
概念：中空纤维细胞培养技术是模拟细胞在体内生长的三 维状态，利用一种人工的“毛细管”（即中空纤维）给培 养的细胞提供物质代谢条件而建立的一种体外培养系统。
2、悬浮培养
细胞在反应器内游离悬浮在培养液中生长 的培养过程。
优点：操作简单，培养条件相对均一，传 质和传氧较好，容易放大培养。
缺点：细胞体积小，密度低，培养病毒易 失去标记而降低免疫能力。
适用范围鉴微生物发酵理论和经验，发挥动物细 胞的特性。
和酸碱平衡。
5、激素与附加成分
激素：调节细胞的生长（刺激作用），胰 岛素。
贴附因子：细胞的贴壁生长必需，胶原。 脂类：不饱和脂肪酸亚油酸、固醇等。 载体蛋白：铁离子、脂类、维生素等吸收。 碱基和核苷：核酸代谢。
8.3.2 动物细胞培养基的种类
天然培养基 合成培养基 无血清培养基
性。 蛋白质：抗机械剪切，保护细胞免于损伤的作用。 来源：胎牛、新生牛或成牛、马、鸡、羊血清及人血清。
3、无血清培养基
概念：不添加血清，使细胞能在体外生长 繁殖的合成培养基。
组成：合成培养基基础之上，添加激素与 附加成分（生长因子、结合于转运蛋白、 贴附与延伸因子、酶抑制剂、低分子因子 如H2SeO3）。
1、生长基质
概念：改变支持介质表面特性，促进细胞贴附的 物质。
作用：为支持介质表面提供适量带电荷，细胞被 吸附在介质上，实现贴壁生长。
原理：细胞、玻璃和塑料介质表面带负电荷；要 使细胞贴壁，必须进行二价阳离子或糖蛋白、其 他试剂交联，使之表面成正电荷（供应商已做 到）。
天然生长基质：胞外基质成分，如胶原。 人工生长基质：多聚赖氨酸
特点：提高了培养的质量，避免血清带来 的麻烦，产品纯化容易，组分稳定，大量 配置。
无血清培养基种类
Ⅰ类：无蛋白质成分，化学成分完全明确， 只适用于一些特定细胞系。
Ⅱ类：含有纯蛋白和激素成分，应用广， 相对比较昂贵。UitraCHO-F12+胰岛素+转 铁蛋白和专一纯化蛋白等成分。
Ⅲ类：非确定生物添加剂取代血清，化学 成分不太明确。可以灭菌，价格低廉。
悬浮培养反应器：小规模Spinner
搅拌桨及折流板 的设计可增加通 气和搅拌效果。
在侧出口可以很 方便使用25ml和 50ml规格的移液 管进行操作。
双侧臂玻璃细胞悬浮培养瓶
悬浮培养大规模：1~1000L以上
从玻璃瓶到不锈钢反应器 原位灭菌，加热保温，种子罐，培养基储
罐。 过程控制复杂。
变化。 复苏过程：将冷冻细胞取出，立即在37℃
水浴中，快速融化。
在保护剂存在下，慢冻快融是保存复苏细
胞的要领。
8.4.3 动物细胞大规模培养方法
1、单层贴壁培养 2、悬浮培养 3、固定化培养
1、单层贴壁培养
规模：取决于表面积/体积， 170~200cm2/100~200ml，2×107二倍体或108 异倍体。
一般培养液中含量为1~4mmol/L
5、NaHCO3配制
配成3.7%、5.6%、7.4%三种浓度。 过滤除菌或高压灭菌，4℃保存。 使用前加入，调节培养基pH。
6、培养基灭菌
不含葡萄糖的溶液常规高压灭菌。 含葡萄糖时，采用过滤除菌；或115℃，
15min。 血清使用：需要灭活（56℃,30min），过
2、接触抑制
概念：细胞在生长基质上分裂增殖，逐渐 汇集成片，当每个细胞与其周围的细胞互 相接触时，细胞就停止增殖。
特点：保持充足的营养，细胞仍可存活一 段时间，但细胞密度不再增加。
大多数细胞：形成单层细胞，有接触抑制 少数悬浮培养细胞（癌细胞），无接触抑
制
3、细胞生长的基质依赖性
传代时期：刚刚全部汇合的细胞。 消化方法：过程与原代细胞相同。 传代的次数：取决于细胞来源，保证特性 要领：适宜的时期和方法，消化不要过度 注意：防止细胞系之间混杂、非细胞生物
的污染。
3、细胞系的保存
常用低温冷冻方法进行保存。 冷冻保护液：10%血清的培养液，附加
7.5%~10%二甲基亚砜。 保存期间，要控制环境条件，并定期监测
8.4.2 动物细胞实验室培养技术
1、原代培养技术 2、传代培养技术 3、细胞系的保存
1、原代培养: 原代细胞的培养过程
动物组织或器官
从体内取出组织或器官
粉碎、洗涤、离心 酶解消化
37℃消化，胰蛋白酶， 胶原酶，获得单细胞
离心或过滤
洗涤
培养液稀释细胞
接种培养
2、传代培养: 过程
概念：对长满器皿表面的细胞进行消化分 离，接种到新的培养基上，进行新一轮培 养。
微载体是直径为 60~250μm的微珠。
细胞贴附于微载体上， 悬浮于培养基中，逐渐 生长成单层，具有单层 培养和悬浮培养的优点。
玻璃微珠
概念：细胞贴附于微载体上延伸和增殖，再悬浮 于培养液中的培养过程。
滤除菌，按一定比例加入。4℃保存。
思考题
动物细胞培养基组成成分及其作用是什么？ 与微生物培养基相比，有何特殊性？
如何控制动物细胞培养基的质量？ 生产用最适动物细胞培养基应该选择哪种？
为什么？
第八章 动物细胞培养制药工艺
8.1 制药动物细胞的表达系统与特征 8.2 基因工程动物细胞系的构建 8.3 动物细胞培养基的制备 8.4 动物细胞培养技术 8.5 培养过程检测与工艺控制
8.4 动物细胞培养技术
目前用于制药的动物细胞有四类：原代细 胞系、二倍体细胞系、异倍体细胞系和融 合的或重组的工程细胞系。
1、动物细胞生长和基质依赖性 2、动物细胞的实验室培养技术 3、动物细胞大规模培养技术 4、动物细胞培养的操作方法
8.4.1 细胞生长和基质依赖性
生长基质 细胞生长的基质依赖性 接触抑制
系 作用：pH恒定 应用：缓冲剂配置，进一步配置其他溶液。
磷酸盐缓冲液（PBS）
组成：KCl、KH2PO4、NaCl、Na2HPO4 PBS应用：培养物、器皿的洗涤液。
3、生理盐水和平衡盐溶液
生理盐水：调节渗透压的盐溶液， 0.9%NaCl等渗溶液。离体培养细胞的渗透 压应控制为等渗溶液280（以下是低渗）310（以上是高渗）m0sm/kg。每增加 1mg/ml NaCl，渗透压增加32 m0sm/kg。
平衡盐溶液：BSS，由生理盐水，缓冲剂 与指示剂、无机盐和葡萄糖组成。
作用：满足细胞对盐离子、碳营养的要求； pH和渗透压的环境要求；直观观察pH
4、氨基酸配置
用量：使用L型氨基酸，对于DL混合型氨 基酸，使用量应该加倍。
谷氨酰胺：不稳定，需单独配制 谷氨酰胺浓度：100倍浓缩液，-20℃保存。