离子色谱法测定肝素钠粗品中多硫酸软骨素的含量

离子色谱法测定肝素钠粗品中多硫酸软骨素的含量
摘要：目的:建立离子色谱法测定肝素钠粗品中多硫酸软骨素的含量的测定方法。

方法:样品溶解后，使用戴安AS11色谱柱分离，流动相A为0.04% 磷酸二氢钾溶液（pH3.0），流动相B为含0.04% 磷酸二氢钾和14% 高氯酸钠的水溶液，梯度洗脱，流速1.0mL/min，紫外检测器，检测波长为225nm。

结果:本方法检出限为0.5%。

结论:本方法简便快捷,用于测定肝素钠粗品中多硫酸软骨素的含量,具有较低的检出限。

关键词肝素钠粗品多硫酸软骨素离子色谱法
肝素（heparin）是高度硫酸化的糖胺聚糖，由糖醛酸和葡萄糖胺以α1→4 键连接起来的重复二糖单位组成的多糖的混合物，含10—30 个二糖单位不等。

自从1937 年肝素在临床上用作抗凝剂以来, 肝素一直是一种主要的抗凝药物，它被广泛用于临床，包括肾透析，急性冠状动脉综合症等。

肝素主要从猪的肠粘膜中提取得到。

我国是肝素生产大国，为肝素原料的主要出口国。

肝素产品是一大类产品，包括肝素钠（钙）、低分子肝素钠（钙）、类肝素等等。

2008年年初，美国百特公司生产的肝素钠注射液在美国发生了严重的不良反应。

它的原料由我国的一家美资化工企业常州凯普生物化学有限公司生产。

百特肝素钠不良反应事件后，中国药品生物制品检定所随即对多个厂家多个批次的肝素钠进行了质量分析，通过多种不同分析测试手段的联合应用，发现某些肝素钠中含有硫酸软骨素、硫酸皮肤素及多硫酸软骨素(OSCS)三种杂质中的一种或几种。

肝素钠粗品，除含有以上几种物质外，还含有蛋白等其他杂质，成分复杂。

本文建立了离子色谱法测定肝素钠粗品中多硫酸软骨素含量的方法。

通过样品前处理方法和色谱条件的优化，建立了一种较为完善的分离和检验方法。

1.实验条件
1.1 仪器
Dionex ICS3000型离子色谱仪，Dionex AS11分析柱及保护柱，Dionex VWD紫外检测器。

1.2 样品前处理
准确称取样品0.1g，加水溶解后，加入2ml乙腈，充分混匀后，4℃放置沉降10min，取出后用10000 rpm高速离心机离心10min，取上层清液4ml，用氮气吹干后，用水定容至8ml，定容后的液体过0.22μm尼龙滤膜，之后过Dionex RP柱，滤液上机分析。

1.3 色谱条件
流动相A：0.04%磷酸二氢钾，pH3.0；流动相B：0.04% 磷酸二氢钾/14% 高氯酸钠，
pH3.0.二元梯度：0min，80%A；60min，10%A；61-75min，80%A；
流速：0.22mL/min柱温：30℃。

2. 结果与讨论
2.1 样品前处理
样品中含有大分子蛋白，如去除不彻底，容易降低柱效，造成分离度下降、保留时间缩短。

使用乙腈沉淀，Dionex RP柱过滤，可有效去除样品中蛋白，延长色谱柱寿命，保证实验重现性良好。

2.2 色谱柱的选择
样品去除蛋白后，含有的杂质与主成分均为硫酸化的多糖。

硫酸化多糖在强电解质溶液中，可电离成为阴离子。

根据其硫酸化程度的不同，在阴离子交换柱上有不同的保留。

在戴安AS11色谱柱上，肝素与多硫酸软骨素及其他离子均有较好分离。

分离色谱图如图1所示。

图1 肝素钠粗品中多硫酸软骨素含量测定色谱图
3. 结论
该方法准确度、精密度均较高,且操作简便,适合于聚明胶肽注射液中琥珀酸的测定。

参考文献
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