基因治疗PPT课件
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(一) 直接策略：
• 针对致病基因
(二) 间接策略：
• 导入与致病基因无直接联系的治疗基因
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction） 2. 基因置换（gene replacement） 3. 基因增补（gene augmentation）
又称为补偿性基因治疗 4. 基因失活（gene inactivation）
1990年9月14日，世界首例基因治疗：SCID
感染性疾病的基因治疗
• 引入治疗基因来抑制病原繁殖
• 方法: 1. Anti-sense 2. Ribozyme RNA
肿瘤基因治疗临床试验方案
黑色素瘤 83 前列腺癌 44
基因治疗
Gene therapy
传统治疗方法
1. 药物治疗 2. 手术治疗 3. 放射治疗 4. 理疗
• 新的生物治疗： • 基因治疗(gene therapy)
基因治疗
一、概念 二、策略 三、基本流程 四、应用与展望
一、基因治疗的概念
• Gene therapy is a medical intervention based on modification of genetic materials in living cells.
(3) 药物增敏基因治疗
• 将外源基因插入肿瘤细胞后，改变肿瘤细胞对 药物的敏感性。
• 如将钙调素基因转入癌细胞，利用其对癌细胞 MDR的逆转作用，使癌细胞对化疗药物的敏感 性明显提高。
3. 其它策略
(1) 特异性细胞杀伤 (2) 多基因转染
特异性细胞杀伤
• 指利用重组DNA技术将生物来源的细胞毒素基 因与一些特异受体的配体基因融合，构建融合 基因，导入高度表达该受体的肿瘤细胞，以特 异性杀伤该肿瘤细胞。
•体内法基因治疗：直接注射含治疗基因的载体于患者；
•体外法基因治疗：需要从患者体内取出细胞，并以治疗 基因修饰，回输表达治疗基国的修饰细胞于患者；
三、基因治疗的基本流程
（一）外源基因的选择与制备 （二）载体的选择与构建 （三）靶细胞的选择 （四）基因转移 （五）基因转染细胞的筛选与鉴定 （六）回输体内
(一)直接策略
3.基因增补（gene augmentation）
又称为补偿性基因治疗
• 是指不去除异常基因，将有功能的正常基因导 入病变细胞或其它细胞后发生非定点整合，表 达正常产物以补偿缺陷基因的功能，或使原有 的功能得以加强。
抑癌基因疗法
抑癌基因：是正常细胞内正常存在的，能抑
制细胞转化和肿瘤发生的一类基因群 Rb基因，p53基因，MTS基因，nm23基因
特异性细胞杀伤
• 如将绿脓杆菌外毒素（PE）或白喉毒素（DT） 基因与TGFα基因组成融合基因TGFα-PE，或 TGFα- DT。
• 由于TGFα与表皮生长因子EGF结构类似，也 能与表皮生长因子受体（EGFR）结合；
• 故该融合基因可特异性进入并杀死高度表达 EGFR的膀胱癌、肾癌、肺癌、乳腺癌等肿瘤 细胞。
(四) 基因转移
• 病毒法： • 主要通过携带有外源基因的病毒载体感染靶细
胞来实现基因的转移。 • • 非病毒法： • 物理方法——显微注射、电穿孔、微粒轰击及
DNA直接注射、基因枪技术等； • 化学方法——磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖法、
脂质体融合法等。 • 受体介导的内吞作用
肿瘤基因治疗的基因转移系统
• 安全性及其它 相对较安全 可引起炎症 无病原性 可能出现毒性反应
•
宿主范围广 和免疫反应
神经细胞嗜向性
病毒载体构建
（1）去除病毒的致病性结构的基因序列如逆转 录病毒的gag、pol、env基因，从结构上保证 病毒的安全性。同时产生的空白区以目的基因 取而代之；
（2）保留其基因的调控序列及包装序列等； （3）插入标记基因如NeoR基因以对基因转染细
胞的抗性筛选等。
(三) 靶细胞的选择
• 生殖细胞: 禁止
• 体细胞： • 淋巴细胞、造血细胞、 • 内皮细胞、肌肉细胞、 • 肝细胞、成纤维细胞 • 肿瘤细胞等
靶细胞的选择
• 可根据疾病的特点、目的基因及其转移的 方式等因素来确定。
• 选择的原则：
(1) 便于从体内取出和回输； (2) 便于在体外培养与增殖； (3) 便于基因的高效转移； (3) 能够持续表达目的基因。
• 基因治疗是指以改变细胞遗传物质为 基础的典概念：将具有正常功能的基因置换或
增补患者体内的缺陷基因，从而达到治疗疾病 的目的。
• 广义概念：将某种遗传物质转移至患者细
胞内，使其在体内有效表达，最终达到治疗疾 病目的的方法，均称之为基因治疗。
二、基因治疗的策略
二、基因治疗的策略
基因转移系统
No
腺病毒
118
逆转录病毒
96
脂质体
62
痘病毒
37
基因枪注射
5
RNA转移
5
疱疹单纯病毒
3
腺相关病毒
1
痘苗病毒
1
沙门菌
1
(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定
• 抗性筛选方法： • 重组载体上插入有标记基因NeoR，导入受体细
胞后可使其产生对G418（Geneticin）药物的 抗性。在加入G418的培养基中进行选择性培 养时，转染NeoR基因的细胞能够存活，而未转 染的细胞则死亡； • 将TK基因导入TK-的靶细胞后，只有转染细胞 才能在HAT（次黄嘌呤、氨甲喋呤和胸腺嘧啶） 培养基中生长。 • 应用标记基因作为探针进行分子杂交法筛选。
• 细胞色素P450基因
Targeted Killing Genetic Pro-drug Activation Therapy
viral vector （HSV）
tumour cell Ganciclovir（GCV）
thymidine kinase gene
tk
ganciclovir phosphate
2-7 kb
< 3.5 kb
30 kb
• 重组病毒滴度
中
高
较低
高
• 靶细胞状态 分裂细胞，表面 分裂细胞或 分裂细胞或 分裂细胞或
•
须有特殊受体 非分裂细胞 非分裂细胞 非分裂细胞
• 基因转移效率 高
高
高
高
• 基因整合
随机整合
不整合
定点整合于 不整合
•
染色体19q
• 外源基因表达状况 短暂/稳定表达 短暂表达 稳定表达 短暂/稳定表达
(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定
• 外源基因表达的鉴定：
• 采用Northern印迹杂交：检测 mRNA的表达
•
测定其表达产物即蛋白质的含量等
方法。
(六) 回输体内
• 方式：
• 静脉注射、肌注、皮下注射、滴鼻等
• 基因修饰的淋巴细胞以静脉注射的方式回输到血 液中；
• 将皮肤成纤维细胞以细胞胶原悬液注射至患者皮 下组织；
Ganciclovir phosphate inhibits DNA polymerase
Cell death – Including bystander cells
(2) 化疗保护性基因治疗
• 指将编码抗细胞毒性药物蛋白的基因导入人体 细胞，以提高机体耐受肿瘤化疗药物的能力。
• 如 将 多 药 抗 性 （ multiple drug resistance, MDR ） 基 因 MDR-1 导 入 骨 髓 造 血 干 细 胞 ， 减 少骨髓受抑制的程度，以加大化疗剂量，提高 化疗效果。
p53基因治疗研究：
（1）野生型p53基因的替代疗法 （2）突变型p53基因的阻断疗法 （3）与p53基因有关的新型肿瘤疫苗
4. 基因失活
• 指将特定的序列导入细胞后，阻断某些基 因的异常表达，以达到治疗疾病的目的。
基因失活
导入的特定序列：
• 反义RNA：在mRNA水平封闭基因表达 • 核酶（ribozyme）：对靶RNA分子进行剪切 • 双链RNA ： →小分子干扰RNA(SiRNA） • 脱氧寡核苷酸：与DNA结合，阻止转录或复制
• 自杀基因
• 单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因
• 编 码 胸 苷 激 酶 （ TK ） 催 化 丙 氧 鸟 苷 （ ganciclovir, GCV）磷酸化成为磷酸化的核苷酸类似物，阻断DNA 的合成。
• 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因
• 将5’-氟胞嘧啶（5’-FC）转化为5’-氟尿嘧啶（5’-FU） 而发挥细胞毒性作用。
三、基因治疗的基本流程
基因治疗的方式
• 根据基因导入的方式分为两种：
1. 直接体内疗法（in vivo）
• 是指将目的基因直接导入体内有关的组织器官， 使其进入相应的细胞并进行表达。
2. 间接体内疗法（ex vivo）
• 是指在体外将目的基因导入靶细胞，经过筛选 和增殖后将细胞回输给患者，使该基因在体内 有效地表达相应产物，以达到治疗的目的。
又称为反义基因治疗
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction） • 指将致病基因的异常碱基加以纠正，而保留
正常部分。
2. 基因置换（gene replacement） • 指通过体内基因同源重组，原位替换病变细
胞内的致病基因，使细胞内的DNA恢复正常 状态。
• 不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进行精 确的原位修复，是最理想的治疗方式。
•
单纯疱疹病毒（HSV)
•
痘苗病毒（VV)
•
人免疫缺陷病毒（HIV)
• 非病毒载体：质粒载体
常用的病毒载体及其基因转移的特点
•
逆转录病毒 腺病毒 腺相关病毒 单纯疱疹病毒
• 基因组
正链RNA 线性dsDNA
线性ssDNA dsDNA
•
8.5 kb
36 kb
5 kb
152 kb
• 外源基因容量 < 9 kb
• 采用自体骨髓移植的方法输入造血细胞； • 或以导管技术将血管内皮细胞定位输入血管等。
四、基因治疗的应用 与展望
基因治疗的应用
• 遗传病：
•
替补法，导入正常基因
• 病毒性疾病：
•
阻断病毒基因在体内的转录和翻译
• 肿瘤：
•
基因的补充和修复，免疫疗法，细胞毒
基因疗法
遗传病基因治疗的临床研究
1. 重症联合免疫缺陷综合征（SCID） 2. 家族性高胆固醇血症（FH） 3. 囊性纤维变性（CF） 4. Gaucher症 5. 血友病A和B
（一）外源基因的选择与制备
• 外源基因
•
目的基因：
•
与致病基因相对应的有功能的正常基因
•
与致病基因无关、有治疗作用的基因
•
标记基因:
•
新霉素磷酸转移酶Ⅱ（Neo）基因
• 外源基因的获得
•
基因克隆
•
人工合成
•
PCR扩增
（二）载体的选择与构建
• 病毒载体：
•
逆转录病毒（RV)
•
腺病毒（AV)
•
腺相关病毒（AAV)
（1）反义RNA技术
• 反义RNA： 与mRNA互补，能抑制相关基因表达
的RNA 。 • 在mRNA水平上封闭基因表达（翻译）
• 合成反义ON（寡核苷酸)
（2）核 酶 技 术
催化RNA切割和RNA剪接
Recognition sequences
“hammerhead” ribozymes
（3） RNA干扰技术
双链RNA(dsRNA)导入细胞，降 解成SiRNA，使同源mRNA发生 特异性的降解，从而阻断相应基 因的表达。
高度的序列专一性 高效性 易操作性
（4）三链DNA技术（反基因策略）
• 脱氧寡核苷酸（oligodeoxyribonucleotide,
ODN），也被称为TFO (triplex-forming oligo)
(1) 自杀基因疗法
• 将一些来源于病毒或细菌的基因导入肿瘤细胞
• 该基因表达产生的酶可催化无毒性的药物前体 转变为细胞毒性物质，从而杀死肿瘤细胞；
• 同时通过“旁观者效应”（bystander effect） 杀死邻近未导入该基因的分裂细胞而显著扩大 杀伤效应。
• 由于携带该基因的受体细胞本身也被杀死，所 以这类基因被称为“自杀基因”。
(1) 细胞因子基因治疗
IL-2、IL-4、IL-1、IL-6、IL-7、IL-12、 INF-γ、TNF-α、G-CSF、GM-CSF
(2) 免疫增强基因疗法
MHC I类抗原、共刺激分子
(3) DNA疫苗疗法
癌胚抗原（CEA）制备的肿瘤DNA疫苗
免疫基因治疗
2.分子化疗
(1) 自杀基因疗法： tk基因、CD基因 (2) 化疗保护性基因治疗： MDR基因 (3) 药物增敏基因治疗： 钙调素基因
• 与靶基因的DNA双螺旋分子的专一性序 列结合，形成三链DNA（三股螺旋）
• DNA水平，阻止基因转录或复制
Targeted inhibition of gene expression
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
1. 免疫基因治疗 2. 分子化疗 3. 其它策略
1.免疫基因治疗
• 针对致病基因
(二) 间接策略：
• 导入与致病基因无直接联系的治疗基因
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction） 2. 基因置换（gene replacement） 3. 基因增补（gene augmentation）
又称为补偿性基因治疗 4. 基因失活（gene inactivation）
1990年9月14日，世界首例基因治疗：SCID
感染性疾病的基因治疗
• 引入治疗基因来抑制病原繁殖
• 方法: 1. Anti-sense 2. Ribozyme RNA
肿瘤基因治疗临床试验方案
黑色素瘤 83 前列腺癌 44
基因治疗
Gene therapy
传统治疗方法
1. 药物治疗 2. 手术治疗 3. 放射治疗 4. 理疗
• 新的生物治疗： • 基因治疗(gene therapy)
基因治疗
一、概念 二、策略 三、基本流程 四、应用与展望
一、基因治疗的概念
• Gene therapy is a medical intervention based on modification of genetic materials in living cells.
(3) 药物增敏基因治疗
• 将外源基因插入肿瘤细胞后，改变肿瘤细胞对 药物的敏感性。
• 如将钙调素基因转入癌细胞，利用其对癌细胞 MDR的逆转作用，使癌细胞对化疗药物的敏感 性明显提高。
3. 其它策略
(1) 特异性细胞杀伤 (2) 多基因转染
特异性细胞杀伤
• 指利用重组DNA技术将生物来源的细胞毒素基 因与一些特异受体的配体基因融合，构建融合 基因，导入高度表达该受体的肿瘤细胞，以特 异性杀伤该肿瘤细胞。
•体内法基因治疗：直接注射含治疗基因的载体于患者；
•体外法基因治疗：需要从患者体内取出细胞，并以治疗 基因修饰，回输表达治疗基国的修饰细胞于患者；
三、基因治疗的基本流程
（一）外源基因的选择与制备 （二）载体的选择与构建 （三）靶细胞的选择 （四）基因转移 （五）基因转染细胞的筛选与鉴定 （六）回输体内
(一)直接策略
3.基因增补（gene augmentation）
又称为补偿性基因治疗
• 是指不去除异常基因，将有功能的正常基因导 入病变细胞或其它细胞后发生非定点整合，表 达正常产物以补偿缺陷基因的功能，或使原有 的功能得以加强。
抑癌基因疗法
抑癌基因：是正常细胞内正常存在的，能抑
制细胞转化和肿瘤发生的一类基因群 Rb基因，p53基因，MTS基因，nm23基因
特异性细胞杀伤
• 如将绿脓杆菌外毒素（PE）或白喉毒素（DT） 基因与TGFα基因组成融合基因TGFα-PE，或 TGFα- DT。
• 由于TGFα与表皮生长因子EGF结构类似，也 能与表皮生长因子受体（EGFR）结合；
• 故该融合基因可特异性进入并杀死高度表达 EGFR的膀胱癌、肾癌、肺癌、乳腺癌等肿瘤 细胞。
(四) 基因转移
• 病毒法： • 主要通过携带有外源基因的病毒载体感染靶细
胞来实现基因的转移。 • • 非病毒法： • 物理方法——显微注射、电穿孔、微粒轰击及
DNA直接注射、基因枪技术等； • 化学方法——磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖法、
脂质体融合法等。 • 受体介导的内吞作用
肿瘤基因治疗的基因转移系统
• 安全性及其它 相对较安全 可引起炎症 无病原性 可能出现毒性反应
•
宿主范围广 和免疫反应
神经细胞嗜向性
病毒载体构建
（1）去除病毒的致病性结构的基因序列如逆转 录病毒的gag、pol、env基因，从结构上保证 病毒的安全性。同时产生的空白区以目的基因 取而代之；
（2）保留其基因的调控序列及包装序列等； （3）插入标记基因如NeoR基因以对基因转染细
胞的抗性筛选等。
(三) 靶细胞的选择
• 生殖细胞: 禁止
• 体细胞： • 淋巴细胞、造血细胞、 • 内皮细胞、肌肉细胞、 • 肝细胞、成纤维细胞 • 肿瘤细胞等
靶细胞的选择
• 可根据疾病的特点、目的基因及其转移的 方式等因素来确定。
• 选择的原则：
(1) 便于从体内取出和回输； (2) 便于在体外培养与增殖； (3) 便于基因的高效转移； (3) 能够持续表达目的基因。
• 基因治疗是指以改变细胞遗传物质为 基础的典概念：将具有正常功能的基因置换或
增补患者体内的缺陷基因，从而达到治疗疾病 的目的。
• 广义概念：将某种遗传物质转移至患者细
胞内，使其在体内有效表达，最终达到治疗疾 病目的的方法，均称之为基因治疗。
二、基因治疗的策略
二、基因治疗的策略
基因转移系统
No
腺病毒
118
逆转录病毒
96
脂质体
62
痘病毒
37
基因枪注射
5
RNA转移
5
疱疹单纯病毒
3
腺相关病毒
1
痘苗病毒
1
沙门菌
1
(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定
• 抗性筛选方法： • 重组载体上插入有标记基因NeoR，导入受体细
胞后可使其产生对G418（Geneticin）药物的 抗性。在加入G418的培养基中进行选择性培 养时，转染NeoR基因的细胞能够存活，而未转 染的细胞则死亡； • 将TK基因导入TK-的靶细胞后，只有转染细胞 才能在HAT（次黄嘌呤、氨甲喋呤和胸腺嘧啶） 培养基中生长。 • 应用标记基因作为探针进行分子杂交法筛选。
• 细胞色素P450基因
Targeted Killing Genetic Pro-drug Activation Therapy
viral vector （HSV）
tumour cell Ganciclovir（GCV）
thymidine kinase gene
tk
ganciclovir phosphate
2-7 kb
< 3.5 kb
30 kb
• 重组病毒滴度
中
高
较低
高
• 靶细胞状态 分裂细胞，表面 分裂细胞或 分裂细胞或 分裂细胞或
•
须有特殊受体 非分裂细胞 非分裂细胞 非分裂细胞
• 基因转移效率 高
高
高
高
• 基因整合
随机整合
不整合
定点整合于 不整合
•
染色体19q
• 外源基因表达状况 短暂/稳定表达 短暂表达 稳定表达 短暂/稳定表达
(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定
• 外源基因表达的鉴定：
• 采用Northern印迹杂交：检测 mRNA的表达
•
测定其表达产物即蛋白质的含量等
方法。
(六) 回输体内
• 方式：
• 静脉注射、肌注、皮下注射、滴鼻等
• 基因修饰的淋巴细胞以静脉注射的方式回输到血 液中；
• 将皮肤成纤维细胞以细胞胶原悬液注射至患者皮 下组织；
Ganciclovir phosphate inhibits DNA polymerase
Cell death – Including bystander cells
(2) 化疗保护性基因治疗
• 指将编码抗细胞毒性药物蛋白的基因导入人体 细胞，以提高机体耐受肿瘤化疗药物的能力。
• 如 将 多 药 抗 性 （ multiple drug resistance, MDR ） 基 因 MDR-1 导 入 骨 髓 造 血 干 细 胞 ， 减 少骨髓受抑制的程度，以加大化疗剂量，提高 化疗效果。
p53基因治疗研究：
（1）野生型p53基因的替代疗法 （2）突变型p53基因的阻断疗法 （3）与p53基因有关的新型肿瘤疫苗
4. 基因失活
• 指将特定的序列导入细胞后，阻断某些基 因的异常表达，以达到治疗疾病的目的。
基因失活
导入的特定序列：
• 反义RNA：在mRNA水平封闭基因表达 • 核酶（ribozyme）：对靶RNA分子进行剪切 • 双链RNA ： →小分子干扰RNA(SiRNA） • 脱氧寡核苷酸：与DNA结合，阻止转录或复制
• 自杀基因
• 单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因
• 编 码 胸 苷 激 酶 （ TK ） 催 化 丙 氧 鸟 苷 （ ganciclovir, GCV）磷酸化成为磷酸化的核苷酸类似物，阻断DNA 的合成。
• 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因
• 将5’-氟胞嘧啶（5’-FC）转化为5’-氟尿嘧啶（5’-FU） 而发挥细胞毒性作用。
三、基因治疗的基本流程
基因治疗的方式
• 根据基因导入的方式分为两种：
1. 直接体内疗法（in vivo）
• 是指将目的基因直接导入体内有关的组织器官， 使其进入相应的细胞并进行表达。
2. 间接体内疗法（ex vivo）
• 是指在体外将目的基因导入靶细胞，经过筛选 和增殖后将细胞回输给患者，使该基因在体内 有效地表达相应产物，以达到治疗的目的。
又称为反义基因治疗
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction） • 指将致病基因的异常碱基加以纠正，而保留
正常部分。
2. 基因置换（gene replacement） • 指通过体内基因同源重组，原位替换病变细
胞内的致病基因，使细胞内的DNA恢复正常 状态。
• 不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进行精 确的原位修复，是最理想的治疗方式。
•
单纯疱疹病毒（HSV)
•
痘苗病毒（VV)
•
人免疫缺陷病毒（HIV)
• 非病毒载体：质粒载体
常用的病毒载体及其基因转移的特点
•
逆转录病毒 腺病毒 腺相关病毒 单纯疱疹病毒
• 基因组
正链RNA 线性dsDNA
线性ssDNA dsDNA
•
8.5 kb
36 kb
5 kb
152 kb
• 外源基因容量 < 9 kb
• 采用自体骨髓移植的方法输入造血细胞； • 或以导管技术将血管内皮细胞定位输入血管等。
四、基因治疗的应用 与展望
基因治疗的应用
• 遗传病：
•
替补法，导入正常基因
• 病毒性疾病：
•
阻断病毒基因在体内的转录和翻译
• 肿瘤：
•
基因的补充和修复，免疫疗法，细胞毒
基因疗法
遗传病基因治疗的临床研究
1. 重症联合免疫缺陷综合征（SCID） 2. 家族性高胆固醇血症（FH） 3. 囊性纤维变性（CF） 4. Gaucher症 5. 血友病A和B
（一）外源基因的选择与制备
• 外源基因
•
目的基因：
•
与致病基因相对应的有功能的正常基因
•
与致病基因无关、有治疗作用的基因
•
标记基因:
•
新霉素磷酸转移酶Ⅱ（Neo）基因
• 外源基因的获得
•
基因克隆
•
人工合成
•
PCR扩增
（二）载体的选择与构建
• 病毒载体：
•
逆转录病毒（RV)
•
腺病毒（AV)
•
腺相关病毒（AAV)
（1）反义RNA技术
• 反义RNA： 与mRNA互补，能抑制相关基因表达
的RNA 。 • 在mRNA水平上封闭基因表达（翻译）
• 合成反义ON（寡核苷酸)
（2）核 酶 技 术
催化RNA切割和RNA剪接
Recognition sequences
“hammerhead” ribozymes
（3） RNA干扰技术
双链RNA(dsRNA)导入细胞，降 解成SiRNA，使同源mRNA发生 特异性的降解，从而阻断相应基 因的表达。
高度的序列专一性 高效性 易操作性
（4）三链DNA技术（反基因策略）
• 脱氧寡核苷酸（oligodeoxyribonucleotide,
ODN），也被称为TFO (triplex-forming oligo)
(1) 自杀基因疗法
• 将一些来源于病毒或细菌的基因导入肿瘤细胞
• 该基因表达产生的酶可催化无毒性的药物前体 转变为细胞毒性物质，从而杀死肿瘤细胞；
• 同时通过“旁观者效应”（bystander effect） 杀死邻近未导入该基因的分裂细胞而显著扩大 杀伤效应。
• 由于携带该基因的受体细胞本身也被杀死，所 以这类基因被称为“自杀基因”。
(1) 细胞因子基因治疗
IL-2、IL-4、IL-1、IL-6、IL-7、IL-12、 INF-γ、TNF-α、G-CSF、GM-CSF
(2) 免疫增强基因疗法
MHC I类抗原、共刺激分子
(3) DNA疫苗疗法
癌胚抗原（CEA）制备的肿瘤DNA疫苗
免疫基因治疗
2.分子化疗
(1) 自杀基因疗法： tk基因、CD基因 (2) 化疗保护性基因治疗： MDR基因 (3) 药物增敏基因治疗： 钙调素基因
• 与靶基因的DNA双螺旋分子的专一性序 列结合，形成三链DNA（三股螺旋）
• DNA水平，阻止基因转录或复制
Targeted inhibition of gene expression
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
1. 免疫基因治疗 2. 分子化疗 3. 其它策略
1.免疫基因治疗