四君子汤中多糖的提取和含量测定

四君子汤中多糖的提取和含量测定
摘要：目的：提取四君子汤中的多糖，并进行含量测定。

方法：采用热水法提取、乙醇沉淀制备总多糖；蒽酮-硫酸法测定多糖含量。

结果：总多糖中多糖的含量为61.44%。

结论：四君子汤中多糖的含量为4.97%。

关键词：四君子汤；多糖；提取；含量测定
四君子汤出自宋代《太平惠民和剂局方》，由人参、白术、茯苓、炙甘草组成，具有益气健脾之功效，主治脾胃气虚证。

研究报道四君子多糖具有显著的免疫调节作用，可用于肿瘤等的辅助治疗［1~3］。

本文采用蒽酮-硫酸法对四君子汤水煎剂中多糖的含量进行了测定。

1 仪器与试药
WFZ-UV-2102 PC型紫外-可见分光光度计（尤尼柯中国上海仪器有限公司），RE-52C旋转蒸发器（河南巩义市英峪予华仪器厂），LXJ-Ⅱ离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），ZKXF-1型电热真空干燥箱（上海树立仪器仪表有限公司）。

四君子汤药材(济南建联中药有限公司)。

葡聚糖4万（中国医药集团上海化学试剂公司），蒽酮（上海五联化工厂）。

2 方法与结果
2.1 四君子总多糖的提取
精密称取四君子汤34g（人参10g，白术9g，茯苓9g，甘草6g），投入到15倍量的沸水中0.5h，以灭活共存酶，浸泡过夜，95℃提取3次，每次3h，六层纱布过滤，滤液合并，50℃减压浓缩至30mL，离心，弃去残渣，上清液加四倍量无水乙醇，沉淀过夜，离心，收集沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，将沉淀置于有五氧化二磷的真空干燥箱中，50℃真空干燥24h，得四君子总多糖样品2.75 g。

精密称取四君子总多糖样品20mg，定容于250mL的容量瓶中，为供试品溶液A，供多糖的含量测定用。

2.2 标准曲线的测定
采用蒽酮－硫酸法［4］测定多糖含量。

葡聚糖标准品溶液的配制：精密称取干燥至恒重的葡聚糖25mg，加适量蒸馏水溶解，转移至250mL容量瓶中，加水至刻度，即得0.1g/L的葡聚糖标准品溶液。

蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶解于100mL浓硫酸中，当日配制使用。

标准曲线制备：移液管分别量取0.1g/L葡聚糖标准溶液2mL、4mL、6mL、8mL、10mL转于10mL容量瓶，蒸馏水补至刻度，各取1mL于试管中并按顺序编号1、2、3、4、5，后分别加入4.00mL蒽酮试剂，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后充分振摇均匀，并一同浸入沸水浴中，管口加盖开始反应。

自水浴沸腾时起，准确煮沸10min，自来水冷却，室温放置约10min，振摇均匀，以蒸馏
水为空白，在λ 620nm处测定吸光度A。

以吸收度A为纵坐标，糖浓度C为
横坐标，得回归方程A=5.8965C+0.0478，r=0.9998。

2.3 精密度试验
按复方配比取四君子汤药材10.02g，精密称定，按2.1项提取制得供试液，取1mL依法重复测定5次，吸收度值的RSD为0.67%（n=5）。

2.4 重现性试验
按复方配比取四君子汤药材5 份，各10.02g，精密称定，依2.1项下提取后，进行多糖的含量测定，每份测定3次，取平均值，5份样品中多糖的含量分别为4.67%、4.98%、4.76%、4.86%、4.73%，计算RSD为2.54%（n=5）。

2.5 稳定性试验
对同一供试品液，蒽酮-硫酸法显色后，分别于0、10、20、40、60min 时在620nm处测定吸收度值，计算RSD为1.64%（n=5），表明吸收度值在1h内基本稳定。

2.6 样品含量测定
取供试品溶液1mL，依法进行测定，计算四君子总多糖中多糖的含量为61.44%，由粗多糖中多糖含量折合成四君子汤中多糖的含量为4.97%。

2.7 回收率试验
取已知多糖含量的四君子汤药材5份，各6.8g，精密称定，于每份中加入一定量的葡聚糖对照品，按2.1项下提取，依法测定多糖含量，计算得平均回收率为101.52%，RSD为3.20%(n=5)。

结果见表1。

3 讨论
蒽酮-硫酸法测定多糖含量，为避免氧化，蒽酮试剂要现用现配，由于硫酸密度比水大，容易分层，因此样品加入蒽酮试剂后和紫外测定前一定要振摇充分。

结果表明，该法测定多糖含量，可获得良好的线性关系（r=0.9998），回收率较高（101.52%），而且精密度试验、稳定性试验均符合分析要求，方法准确，重现性好，可用于四君子汤中多糖的含量测定。

参考文献：
［1］周华，刘良，王培训，等. 四君子汤复方总多糖口服和注射给药对免疫功能影响的对比研究［J］. 中药新药与临床药理，2001，12(5)：602-902.
［2］宁康健，何玉意，吕锦芳. 四君子汤对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响［J］. 中兽医医药杂志，2005，(5)：30-32.
［3］刘良，周华，王培训，等. 四君子汤复方总多糖对小鼠肠道粘膜相关淋巴组织的影响［J］. 中国免疫学杂志，2000（17）：402-602.
［4］张惟杰. 糖复合物生化研究技术（第二版）［M］.杭州：浙江大学出版社，1999：12.。