抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠OPG和RANKL的影响

抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠OPG和RANKL的影响
史传道;邓海东;樊晓晨
【摘要】目的:观察抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠骨保护素(OPG)和核因子κβ受体活化因子配基(RANKL)的影响,探讨抗疏健骨颗粒防治骨质疏松症的作用机理.
方法:60 只大鼠随机分为6 组,每组10 只,除假手术组外切除大鼠双侧卵巢诱发大
鼠骨质疏松症模型,连续给不同剂量的药物灌胃12 周,心脏取血,离心取上清,采用ELISA 法检测血清中OPG和RANKL 含量,并与假手术组、模型组和尼尔雌醇组进行比较.结果:假手术组、尼尔雌醇组、抗疏健骨颗粒大剂量组OPG 及
OPG/RANKL 与模型组比较P＜0.01;抗疏健骨颗粒中剂量组OPG、OPG/RANKL 及大剂量组RANKL 与模型组比较P＜0.05;抗疏健骨颗粒小剂量组OPG、RANKL、OPG/RANKL 与模型组比较P＞0.05;抗疏健骨颗粒中剂量组RANKL 与模型组比
较P＜0.01;OPG 含量随着抗疏健骨颗粒剂量的增大逐渐增高.结论:抗疏健骨颗粒
能够升高OPG,抑制成骨细胞表达RANKL,从而达到防治骨质疏松症的作
用.%Objective: To observe the influences of KangShu JianGu granules on osteoprotegerin (OPG) and nuclear factor kβ receptor activation factor ligand (RANKL) of osteoporotic rats and to explore the mechanism of KangShu JianGu granules preventing osteoporosis. Method: 60 rats were randomized into six groups on averagely. Osteoporotic rats were established through removal of bilateral ovaries except the ones in sham operation group. Different doses of medicines were given through intragastric administration for 12 weeks. The contents of OPG and RANKL
in serum, which was obtained from the heart by centrifugation, were detected with ELISA and compared with sham operation group, model
group and Nilestriol group. Result: The comparisons of OPG and
OPG/RANKL in Sham operation group, Nilestriol group and KangShu JianGu granules high-dose group and model group showed P<0.01; OPG and OPG/RANKL in KangShu JianGu granules medium-dose group as well as RANKL in KangShu JianGu granules high-dose group compared with model group indicated P<0.05; OPG, RANKL and OPG/RANKL in KangShu JianGu granules low-dose group compared with model group manifested P>0.05; RANKL in KangShu JianGu granules medium-dose group compared with model group demonstrated P<0.01; the contents of OPG ascended higher with the dose of KangShu JianGu granules. Conclusion: KangShu JianGu granules can raise OPG and inhibit osteoblasts expressing RANKL so that it can prevent osteoporosis.
【期刊名称】《西部中医药》
【年(卷),期】2012(025)003
【总页数】3页(P11-13)
【关键词】骨质疏松症;抗疏健骨颗粒;骨保护素;核因子κβ受体活化因子配体【作者】史传道;邓海东;樊晓晨
【作者单位】陕西中医学院,陕西,咸阳,712046;陕西中医学院,陕西,咸阳,712046;西安红十字会医院
【正文语种】中文
【中图分类】R274.9
骨质疏松症(osteoporosis，OP)是一种常见的骨代谢疾病，是困扰老年人最普遍、最常见的疾病之一。

调查表明，超过50岁的男人和超过40岁的女人都有不同程
度的骨质疏松，尤其是绝经后妇女的发病率更高。

随着我国进入老龄化社会，该病的发病率将不断攀升。

骨质疏松症的病因病理以及调节机制十分复杂，至今难以阐明，所以对该病的治疗比较困难。

因此目前对骨质疏松症的深入研究已成为医学界的一个热点问题。

抗疏健骨颗粒在临床试验和动物实验方面都显示了较好的效果［1-4］，本实验采用切除大鼠双侧卵巢诱发绝经后骨质疏松症模型，通过观察抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠血清OPG及RANKL的影响，探讨抗疏健骨颗粒
防治骨质疏松症的作用机理。

1.1 药品试剂抗疏健骨颗粒由陕西中医学院制药厂制备，使用时配成不同浓度的
混悬液。

尼尔雌醇片由上海医药有限公司华联厂生产；10%水合氯醛由陕西中医
学院实验中心提供。

大鼠骨保护素(OPG)ELISA试剂盒、大鼠核因子κβ受体活化
因子配基(RANKL)ELISA试剂盒由西安阿尔宝生物技术有限责任公司提供。

1.2 主要仪器设备电热恒温水箱(常州国华电器有限公司生产)；高速台式离心机(长沙湘仪离心仪器有限公司生产)；台式电子天平(上海恒平科学仪器有限公司生产)；酶标仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司生产)。

1.3 实验动物 6月龄雌性SD大鼠60只，体质量(250±10)g，由第四军医大学实
验动物中心提供，动物许可证号：SCXK-(军)2007-007。

所有大鼠均喂养在温度
为26℃，湿度为60%～70%的室内环境中，每天12小时光照/黑暗，任意进食。

1.4 动物分组与造模 60只大鼠适应性喂养1周后随机分为假手术组(10只)和去势组(50只)。

1周后去势组根据随机数字表随机分5组，每组10只，即模型组、尼尔雌醇组及抗疏健骨颗粒小剂量、中剂量、大剂量组。

除假手术组外，其余5组
大鼠行卵巢切除手术：各组大鼠在无菌条件下行10%水合氯醛腹腔注射麻醉。

从
背部腰椎两侧l cm纵向切口，切开皮肤，逐层剪开，钝性分离肌肉，进入腹腔在
肾下极附近找到卵巢，用4号线结扎并摘除双侧卵巢，止血、逐层缝合，用3号手术线缝合切口，术后75%酒精消毒切口，伤口涂抹红霉素软膏、肌注青霉素，以预防伤口感染。

假手术组切口同前，进入腹腔后，找到卵巢后并不切除，只切除与双侧卵巢重量相近的左右大网膜各一段，清创缝合及术后处置与去卵巢组相同［5-6］。

1.5 给药方法抗疏健骨颗粒大、中、小剂量组分别给予抗疏健骨颗粒混悬液0.4、0.2、0.1 g/mL，2 mL/d，1次/d，共12周。

尼尔雌醇组给予尼尔雌醇片［1 mg/kg(体质量)］，配成0.15 mg/mL混悬液，1周1次，2mL/次，其余6天生理盐水灌胃与假手术组相同，共12周。

模型组和假手术组以生理盐水［8
mL/kg(体质量)］灌胃，1次/d，共12周。

实验过程中每周称体质量1次，根据体质量调整给药剂量。

1.6 处理及指标测定各组动物均于用药12周后，在无菌条件下行10%水合氯醛腹腔注射麻醉，心脏取血5 mL滴入试管内，立即于4 000 r/min的离心机离心15分钟，取上清液备用，-50℃冰箱保存。

采用ELISA法检测血清中OPG和RANKL(参照大鼠骨保护素试剂盒和大鼠核因子κβ受体活化因子配基试剂盒说明严格操作)含量。

1.7 统计学方法数据采用SPSS 16.0统计软件处理，以均数±标准差(±s)表示。

组间统计采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，S-N-K法进行两两比较。

变量间的相关性采用Spearman秩相关性分析，以P＜0.05为显著性差异，P＜0.01为非常显著性差异。

对各组大鼠血清OPG和RANKL含量的影响：假手术组、尼尔雌醇组、抗疏健骨颗粒大剂量组OPG、OPG/RANKL与模型组比较P＜0.01；抗疏健骨颗粒中剂量组OPG与OPG/RANKL、大剂量组RANKL与模型组比较P＜0.05；抗疏健骨颗粒小剂量组OPG、RANKL、OPG/RANKL与模型组比较P＞0.05；抗疏健骨颗粒
中剂量组RANKL与模型组比较P＜0.01；OPG含量随着抗疏健骨颗粒剂量的增
大逐渐增高，见表1。

骨质疏松症是以骨量减少、骨组织显微结构退化为特征，致骨的脆性增高而骨折危险性增加的一种全身性骨病。

多发于女性，女性绝经后雌激素迅速减少，骨量丢失加快，形成高转换型病理特点，引发骨质疏松症。

虽然雌激素能抑制骨吸收，减少骨量丢失，对骨质疏松症有预防作用。

但其安全性经多中心随机临床试验结果显示，雌激素替代疗法虽然使绝经后机体的双侧髋部和椎体骨折危险性降低了1/3，但乳腺癌的发生率却增加了26%，而且冠心病、脑卒中和肺栓塞危险性均有不同程度
的增加，总体评价为雌激素替代疗法弊大于利，降低了临床应用雌激素替代疗法防治骨质疏松的信心指数［5］，因此寻找一种替代雌激素疗法成为目前的研究趋势。

中药(草药)复方治疗具有多成分、多靶点、安全性好副作用少等特点，已渐渐成为研究防治骨质疏松症的首选。

祖国传统医学对骨质疏松的临床表现及其病因病机有详尽记载。

中医理论认为骨质疏松的发生主要与肾虚、脾虚、血瘀3个因素有关。

肾虚是骨质疏松症的发病关键，脾虚是骨质疏松症的重要病机，血瘀是骨质疏松症的病理产物和加重因素。

抗疏健骨颗粒由仙灵脾、丹参等组成，经临床反复筛选，其主要功效为补肾壮骨健脾，活血通络祛瘀。

前期研究结果表明：抗疏健骨颗粒可明显降低血清IL-6、骨碱性
磷酸酶、尿羟脯氨酸含量，升高血清IGF-Ⅰ、CT、BGP含量，通过抑制破骨细胞的活性，改善骨代谢而达到防治绝经后骨质疏松症的作用。

近年来随着OPG的发现，对OPG／RANK／RANKL系统的研究受到关注，国内
外研究表明OPG具有抑制破骨细胞形成、分化、存活、活化并诱导破骨细胞凋亡的功能，其功能与RANKL密切相关，因为RANKL是OPG的配体，OPG与RANKL结合抑制破骨细胞形成和活化，发挥抗破骨作用［6］。

本次实验结果显示，模型组OPG水平显著减低，而抗疏健骨颗粒大、中剂量组和
尼尔雌醇组OPG含量均高于模型组，说明OPG含量与抗疏健骨颗粒呈一定剂量正相关性。

同时抗疏健骨颗粒能提高OPG的分泌，其机制可能是通过促进成骨细胞表达OPG，使之与RANKL的结合增多，抑制破骨细胞的功能，而达到治疗骨质疏松的作用。

而抗疏健骨颗粒大、中剂量组和尼尔雌醇组大鼠RANKL含量均低于模型组，说明抗疏健骨颗粒可能与抑制成骨细胞表达RANKL有关。

事实上OPG与RANKL的数量成反比，体内骨量的改变和体外破骨细胞(OC)的形成取决于RANKL与OPG的比值。

实验结果进一步说明抗疏健骨颗粒大剂量是防治骨质疏松症的最佳剂量，这和已往的研究结果相一致。

综上所述，抗疏健骨颗粒可能通过上调OPG，抑制RANKL表达，调节了OPG/RANKL/RANK系统，从而降低了破骨细胞的活性，减少了骨吸收，进而达到防治骨质疏松的作用。

【相关文献】
［1］史传道，张快强，贾文鹏，等.抗疏健骨颗粒治疗原发性骨质疏松症54例［J］.陕西中医，2005，26(8)：763-764.
［2］史传道，段永峰，贾文鹏，等.抗疏健骨颗粒对去势骨质疏松大鼠骨碱性磷酸酶、尿羟脯氨酸的影响［J］.陕西中医，2009，30(6)：739-740.
［3］史传道，贾文鹏.抗疏健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠降钙素和骨钙素的影响［J］.陕西中医学院学报，2008，31(4)：59-60.
［4］史传道，汶勇军，贾文鹏，等.抗疏健骨颗粒对糖皮质激素骨质疏松大鼠骨密度和血清IL-6的影响［J］.陕西中医学院学报，2007，30(5)：63-64.
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