肠炎沙门氏菌SEFA基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立

肠炎沙门氏菌SEFA基因表达和间接ELISA检测方法的初步
建立
朱春红;吴娟;张伟娟;陆光富;朱国强
【期刊名称】《中国预防兽医学报》
【年(卷),期】2010(032)001
【摘要】为了给,临床检测肠炎沙门氏菌的感染和血清学调查提供一种切实可行的方法,本研究根据肠炎沙门氏菌SEF14菌毛操纵子亚单位sefA基因序列设计一对引物,利用PCR技术从国内标准株CMCC(B)50336中扩增sefA基因,并按预定的阅读框插入表达载体pET22b+中,获得重组质粒pET-sefA,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列大小为498 bp,与已发表的sefA结构编码序列完全一致.重组质粒pETsefA转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)并能获得高效诱导表达,通过对菌体裂解上清液SDS-PAGE和westernblot分析鉴定,该重组苗可以表达大小为15.2 ku的可溶性重组蛋白rSEFA.纯化的rSEFA免疫小鼠所得高免血清以及标准株CMCC(B)50336感染小鼠后所获阳性血清,均能识别标准株肠炎沙门氏菌SEF14菌毛蛋白以及纯化的重组蛋白rSEFA,结果表明明体外表达的rSEFA蛋白有较好的免疫原性和反应原性.而基于rSEFA介导的间接ELISA有较好的特异性,对肠炎沙门氏菌特异性抗体检测有潜在的应用前景.
【总页数】5页(P44-48)
【作者】朱春红;吴娟;张伟娟;陆光富;朱国强
【作者单位】扬州大学兽医学院,江苏,扬州,225009;扬州大学兽医学院,江苏,扬州,225009;扬州大学兽医学院,江苏,扬州,225009;江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏,泰州,225300;扬州大学兽医学院,江苏,扬州,225009
【正文语种】中文
【中图分类】S855.1
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