不同季节牦牛卵泡发育的研究

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2020年第50卷第6期(总第270期)青海畜牧兽医杂志
不同季节耗牛卵泡发育的研究
杨启林・2,徐尚荣彭巍张君|
(1.青海大学畜牧兽医科学院，西宁810016；2.青海畜牧兽医职业技术学院，西宁812100)
摘要:本研究利用组织学和酶联免疫法对,夏季和冬季“牛卵巢状态变化进行研究。

通过收集冬季和夏季的卵巢组织，分别测定卵巢含量、卵巢大小及重量，用Graphad软件统计各级卵泡的数量,并观察卵泡发育情况，同时测定血液中的褪黑素含量。

结果表明，“牛卵巢重量夏季(3.34g)明显高于冬季(0.16g)，夏季“牛血液中褪黑素含量(37.6pg/mL)明显高于冬季“牛血液褪黑素(19.3pg/mL)的含量，并发现冬季卵巢组织切片中出现多囊卵泡，表现为颗粒细胞异常。

究其原因可能是“牛冬季卵泡发育过程被打乱，导致前期卵泡积累异常。

“牛卵巢这些变化特征与“牛发情症状和繁殖力息息相关,研究导致多囊卵泡的原因为后期卵泡积累异常提供理论依据。

关键词：“牛;卵巢;褪黑素
中图分类号:S823.85文献标识码:B文章编号：1003-7950(2020)06-0028-04
Study on Follicular Development of Yak in Different Seasons
YANG Qi-lin et al
(Academy of Animal Science and Veterinary Medicine of Qinghai University，Xining810016) Abstract：In this study，the changes of ovarian status of yaks in summer and winter were studied by histologi­cal and enzymatic immunoassay.By collecting the ovarian tissue in winter and summer，the content，size and weight of the ovaries were measured respectively.Graphad software was used to count the number of follicles at all levels and observe the development of follicles，and determine the content of melatonin in the blood.The results showed that the weight of yak ovary in summer(3.34g)was significantly higher than that in winter(0.61g)，and the melatonin content in yak blood in summer(37.6pg/mL)was significantly higher than that in winter(19.3pg/ mL).Polycystic follicles were found in the ovarian tissue sections in winter，which showed abnormal granulocyte cells.The reason may be that the follicular development of yaks was disrupted in winter，which led to abnormal follicular accumulation in early stage.These changes in yak ovaries are closely related to the oestrus symptoms and feculence of yaks.The study on the causes of polycystic follicles provides a theoretical basis for abnormal follicular accumulation in the late stage.
Key words：Yak；Ovarian；Melatonin
“牛受到高寒、缺氧、枯草期长等恶劣的自然条件所限，性成熟晚，体成熟早，繁殖率低下，严重限制
了“牛产业的发展。

如何提高“牛繁殖力及发情特征是目前畜牧生产中亟待解决的问题。

母“牛繁殖效率低下，主要由以下三个原因导致:第一，“牛性成熟晚，发情年龄个体差异大;第二,“牛为季节性发情动物，和常年发情的肉牛和奶牛比较，发情受孕时间短;第三，“牛卵母细胞数量少,卵母细胞凋亡导致的卵泡闭锁比例高。

和其他家养动物比较，“牛生殖生理研究较少，尤其是卵母细胞发育的调控机理方面。

对基本生殖生理过程知识的缺乏，直接导致繁育技术在“牛上应用率低的情况，如同情发情虽然有很广的应用前景，但在“牛上效率很低。

与之相关联的其他技术，如胚胎移植、超数排卵等技术，在“牛上的推广程度也需要大力加强。

从生理学角度来看，卵巢是雌性哺乳动物最重
收稿日期:2020-11-02
作者简介:杨启林(1990-)，讲师，主要从事耗牛繁殖方面研究。

E-mail：yangqi_lin123@
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要的生殖器官，可以周期性地排出卵子，促使雌激素、黄体酮等激素分泌。

卵泡发育是卵泡由原始卵
泡发育成为初级卵泡、次级卵泡至成熟卵泡的生理过程。

雌性耗牛的激素水平、卵泡闭锁现象和光周期调控均会影响卵泡排出的成熟卵母细胞数量。

而大量研究证实，成熟卵母细胞数量较少是限制耗牛繁殖率的一个主要因素。

从耗牛卵母细胞发育调控的分子机制方面研究如何提高耗牛繁殖率,对推动和促进耗牛产业、青海畜牧业发展和提高牧民生活水平具有重要意义。

余四九等⑴在生殖激素控制卵泡细胞凋亡的研究进展中提到GnRH可以通过与颗粒细胞上的受体结合直接诱导颗粒细胞凋亡而导致卵巢卵泡闭锁，但是其机理尚不清楚。

众所周知卵泡液内雄激素与雌激素的比值作为卵泡闭锁的生化指标之一,比值升高表明正在发生闭锁。

FSH和LH的水平在卵泡闭锁中表达也很低，因此生殖激素是卵巢卵泡细胞存活和凋亡的重要调节因子〔2打另外,耗牛的繁殖活动有明显的季节性，褪黑素在调节季节性动物生殖中有显著的作用。

褪黑素可能通过降低细胞内活性氧基团来促进卵母细胞的存活和成熟，并且提高受孕。

综上所述,褪黑素在耗牛发情期中起着
2.2卵巢重及各级卵泡数量统计
冬季和夏季卵巢重及各级卵泡数的统计结果见图2。

图2(A)为卵巢重量分析结果，夏季卵巢重为3.34g，冬季卵巢重为0.61g，夏季卵巢重量明显高重要的作用，因此从形态学观察卵巢季节性动态变化以及对耗牛血液进行褪黑素测定，对提高耗牛繁殖力将会提供一定的理论依据。

1材料与方法
1.1试验样品
卵巢样品采自青海省裕泰肉食品公司屠宰场,收集冬季和夏季耗牛血液和卵巢，对两者分别采取不同的方法进行处理，将卵巢横切、纵切后，用PFA 和Bouin固定液固定。

将血液进行抗凝处理。

1.2试验方法
前期处理的血液,使用酶标仪检测褪黑素水平。

将固定好的卵巢组织进行石蜡包埋，HE染色。

通过Graphad软件统计卵原细胞、各级卵泡及其卵母细胞、卵母细胞核的数量，并对数据进行分析。

2试验结果
2.1褪黑素的测定
褪黑素的测定结果如图1所示:夏季耗牛卵巢褪黑素的含量为37.610pg/mL,冬季耗牛卵巢褪黑素的含量为19.312pg/mL,褪黑素的含量在不同季节血样中差异显著。

褪黑素浓度检测
夏季
季节
图1褪黑色素浓度检测
于冬季卵巢重量；图2(B)为成熟卵泡统计图，通过
观察卵巢HE染色图片，利用Graphad软件统计得
出，各级卵泡中9月份成熟卵泡数量为0.25个,12
月份成熟卵泡数量为0.18个；图2(C)为生长卵泡
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）
统计图,9月份生长卵泡为1.21个,12月份生长卵
泡数量为2.21个;图2（D ）
为囊状卵泡统计图,
9月
份卵巢中囊状卵泡数为0. 19个，
12月份卵巢中囊
状卵泡数量为0.49个，差异显著。

刑份
■槪份
图2冬季和夏季卵巢重及各级卵泡数的测定
2.3 HE 染色结果 育正常。

图3 （B 、D ）为冬季耗牛卵巢HE 染色，显示
冬季耗牛卵巢和夏季耗牛卵巢HE 染色结果见 卵泡发育异常，出现了多囊卵泡，用油镜观察到颗粒
图3。

图3（A 、C ）为夏季耗牛卵巢HE 染色,卵泡发
细胞增生,出现空泡状。

图3冬季和夏季卵巢HE
染色
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3结论
余四九等⑼在研究超排中发现卵巢卵泡系统存在广泛的闭锁现象。

卵泡闭锁实质就是卵泡中发生了细胞凋亡，其中卵泡颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的重要且直接的诱导因素。

“牛进入青春期时间是24到60月龄，主要集中于31到48月龄［10〕
，相对于报道过的印地卡斯牛⑴〕和黄牛［12〕延迟很多，这也是“牛繁殖率低的一个主要因素。

在1月龄、12月龄、24月龄和7~10月龄的“牛的卵巢中原始卵泡的数量远远低于黄牛山鳥褪黑素调节“牛季节性繁殖（6~10月份）的主要因子，是一种从松果体内分离和发现的PQ类神经分泌激素
,其合成受光照调节［14鳥其受体在“牛松果体、下丘脑、垂体、卵巢中都有表达，参与“牛季节性发情的启动。

褪黑素可能通过降低细胞内活性氧基团来促进卵母细胞的存活和成熟,并且提高受孕［15鳥
本研究从组织形态学的手段，配合酶联免疫法研究“牛繁殖力低下的原因，从组织形态学方法得出“牛排卵集中在9月~10月，是由于“牛黄体在这个时段数量明显高于其他月份，冬季和夏季卵巢HE染色表明“牛冬季卵巢卵泡发育过程被打乱导致前期卵泡积累异常,多囊泡出现在囊状卵泡中,表现为颗粒细胞异常,颗粒细胞增生,出现空泡,这可能导致卵母细胞不能发育为成熟卵母细胞的原因，进一步导致繁殖力低下。

褪黑素能够促进发情，并且提高受孕，结果显示夏季“牛血液中的褪黑素高于冬季，这也表明夏季“牛发情症状明显，受孕率高的原因。

因此在组织形态学方面得出冬季卵泡发育异常的影响因素是出现多囊泡导致繁殖力低下。

目前,不同研究团队对“牛卵母细胞闭锁、候选基因表达等做了研究，但尚未见系统性的工作，从冬季“牛卵巢卵泡中出现多囊泡导致繁殖力低下方面研究较少,因此需要进一步研究，这也为后续研究提供了理论依据。

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