中药复方开心散调控慢性压力应激小鼠海马炎性细胞因子水平抗抑郁

摘 要 ：目的探究中药复方开心散调控中枢神经炎症系统抗抑郁的作用机制。方 法 制 备 开 心 散 不 同配伍比例提取物，采用小鼠慢性应激压力（CUMS)模型 ，通过糖水偏嗜实验、悬尾实验和强迫游泳实验评 价开心散不同配伍比例的抗抑郁功效。采用 ELISA法测定受试动物海马组织促炎物质如脂多糖(1^3)、扎丨0、1!^-6、了~厂-〇的含量。采用免疫组织化学染色法观察受试动物海马区小胶质细胞形态。进而采用1^3 促进小鼠小胶质永生化细胞（BV2)炎性因子表达细胞模型，采 用 ELISA法评价开心散抑制炎症因子表达的 作 用 ，采用Western blotting法考察NF- kB信号通路的调控情况。结 果 开 心 散 不 同 配 伍 比 例 能 显 著 上 调 模 型小鼠糖水偏嗜率，缩短小鼠悬尾和强迫游泳不动时间，以 D-652效用最强。该配伍比例通过抑制NF-kB 的入核和抑制NF-kB磷酸化等环节，下 调 BV2 细胞中炎症因子IL-1/3、IL_ 6 、TNF-q:的表达水平。结 论 对 中枢神经炎症的调控是中药复方开心散抗抑郁的重要作用环节。
1 材料
1 . 1 动物 ICR小 鼠 ，雄 性 ,体 质 量 22 g-25 g，购自江苏集萃
药 康 生 物 科 技 有 限 公 司 ，动 物 许 可 证 SCXK(苏 ） 2018-0008。动物伺养于南京中医药大学实验动物中 心 SPF环 境 中 ，常 规 词 养 ，12 h 光 照 ，温 度 22-25T ，湿 度 40%-70%。
对 于 开 心 散 抗 抑 郁 机 制 的 研 究 ，过 往 报 道 多 集 中 于 神 经 递 质 和 神 经 营 养 因 子 系 统 ，而 对 其 调 控 中 枢 神
经炎症的效用和机制研究报道极少。因 此 ，我们拟对 开心散调控中枢炎性细胞因子水平抗抑郁效用及作 用 机 制 进 行 研 究 ，为 进 一 步 阐 明 中 药 复 方 开 心 散 多 靶 点抗抑郁的科学内涵提供更多现代科学解释。
朱 悦 ；江 苏 省 方 剂 高 技 术 研 究 重 点 实 验 室 开 放 课 题 (FJG JS -2015-10):抗 抑 郁 六 类 中 药 新 药 加 味 开 心 散 的 成 药 性 研 究 ；负 责 人 ：朱 悦 ，詹 华 强 ；
江 苏 省 研 究 生 科 研 与 实 践 创 新 计 划 （KY CX18-1612):开 心 散 调 控 压 力 应 激 - 肠 道 微 生 态 - 中 枢 神 经 炎 症 系 统 抗 抑 郁 机 制 研 究 ，负 责 人 ：曹 程 。
世 界 科 学 技 术 - 中 医 药 现 代 化 ★专题讨 论 一 :中 医 情 志 病 与 脑 稳 态 调 控 研 究 进 展 -第 二 届 “中 医 脑 科 学 大 会 ”优 秀 论 文 (二 ）
1.2 药物 人 参 （Panaa:gtVwereg C.A. Mey.)、远 志 （ PofygaZa
收 稿 日 期 ：2019-06-19
修 回 日 期 ：2019-12-13
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国 家 自 然 科 学 基 金 委 员 会 面 上 项 目 （81673720):基 于 压 力 应 激 - 肠 道 微 生 态 - 中 枢 神 经 炎 症 系 统 调 节 的 开 心 散 抗 抑 郁 作 用 机 制 研 究 ；负 责 人 :
小鼠 ELISA 检测试剂盒 LPS(JEB- 12983 )、IL -lp (JEB-12787)、IL-6(JEB-12267)、TNF-a (JEB-12474) 均 购 自 南 京 金 益 柏 生 物 科 技 有 限 公 司 。 TRIzolRNA (15596-026)购自美国 Thermo Fisher 公 司 。RT-PCR 反 转 录 试 剂 盒 （AE311)和 SYBR荧 光 定 量 qPCR检测 试剂 盒 (AQ132)购自北京全式金生物科技有限公司。 实验所用抗体1''^-/<:13卩65 1131)1)丨[111八15、？11〇8卩11〇-1^>cB p65 Rabbit mAbNLamin B1 Rabbit mAb,Histone H3 Rabbit mAb > GAPDH Rabbit mAb, Anti-rabbit IgG, HRP—linked Antibody,Anti—rabbit IgG (H+L), F (ab,)2 Fragment (Alexa Fluor@ 488 Conjugate) 购自 CST 公 司 ， Anti Ibal polyclonal antibody, Rabbit, for Immunocytochemistry购 自 日 本 Wako和 光 纯 药 公 司 。 DAP1购自Sigma公司 。
ien.u^/b/ia Wild.)、石 富 蒲 （Acor!M totfari/iowii Schott) 、获 等 （ Poriacoaw (Schw.) Wolf)药材饮片购自苏州天灵中 药 饮 片 公 司 ，经 南 京 中 医 药 大 学 严 辉 副 教 授 鉴 定 为 相 应药材。 1 . 3 试剂
* * 通 讯 作 者 ：朱 悦 ，男 ，博 士 ，副 研 究 员 ，主 要 从 事 中 药 复 方 物 质 基 础 研 究 =
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2019 第 二 十 一 卷 第 十 一 期 ★ ▽ 〇!. 21 No.ll
中药复方幵心散调控慢性屈力启激小氮海马炎 性細施因子水平抗抑郁作用机剎研堯*
曲苏晨，曹 程 ，戚明珠，刘梦秋，段金廒，朱 悦 h
(南京中医药大学药学院，江苏省方剂研究重点实验室/江苏省方剂高技术研究重点实验室/中药资源产业化于方剂创新 药物国家地方地方联合工程研究中心/江苏省中药资源产业化过 程 协 同 创 新 中 心 南 京 210029)
关键词：开 心 散 神 经 炎 症 抑 郁 症 doi: 10.11842/wst.20190619010 中图分类号：R258 文献标识码： A
开 心 散 始 载 于 唐 代 孙 思 邈 所 著 的 《备急千金要 方 》，由 人 参 、远 志 、石 菖 蒲 、茯苓组成m 。在长期的临 床 实 践 中 ，根 据 辨 证 论 治 的 需 要 ，开心散形成了多种 配 伍 比 例 。尤 以 人 参 、远 志 、石 菖 蒲 、茯 苓 配 比 为 3 : 2 : 2 : 3 (D-652) 、 1 : 1 : 1 : 2 (K- 9 8 4 ) 、 1 : 1 :4 : 8(K- 1640)的 比 例 应 用 较 多 无 论 配 伍 比 例 如 何 变 化 ，开 心 散 均 用 以 治 疗 情 志 疾 病 证 见 心 气 不 足 、忧 愁 悲 伤 、好 忘 等 ，这些症状与抑郁症和阿尔兹 海 默 症 的 症 状 极 为 相 似 ，故 该 方 在 现 代 常 用 于 以 上 疾 病的治疗。