外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒感染与细胞表面HLA—I类抗原表达的关系探讨

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简报 ．
外周 血 单个 核 细胞 中乙型肝 炎 病 毒 感 染 与细 胞 表 面 Ｈ Ａ Ｉ 抗 原 表 达 的关 系探 讨 Ｌ —类
杨 晓 静 邹 雄 王 传 新 邹 明 瑾 张 锑
乙 型肝 炎 病 毒 （ Ｂ 属 嗜 肝 Ｄ Ａ病 毒 ， 要 侵 犯 肝 脏 ， Ｈ Ｖ） Ｎ 主
与 其 表 面 Ｈ ～Ｉ 抗 原 表 达 的 关 系 进 行 了研 究 ， 讨 Ｐ ＭＣ Ｌ ．类 探 Ｂ
中 Ｈ Ｖ感 染 在 乙 型 肝 炎 慢 性 化 及 向 肝 癌 恶 性 转 化 中 的 作 Ｂ
用。
一Байду номын сангаас
用 ｔ 验 、 关及 回归分析对 数据进行统 计学处理 。 检 相
、
对 象 与 方 法
裂 解 。取 Ｐ ＭＣ裂 解 液 或 洗 液 １０ １以 常 规 碱 裂 解 法 提 取 Ｂ ０ ， Ｈ Ｖ Ｄ Ａ， 用 荧 光 定 量 Ｐ Ｒ 法 进 行 测 定 。 该 试 验 的 灵 敏 Ｂ ．Ｎ 采 Ｃ 度 为 １ ０ 拷 贝／ ｌ ＜１ ０ ×１ ｍ ， ×１ 拷 贝 ／ 判 为 阴 性 。 为 便 于 统 ｍｌ 计， 以检 测 结 果 绝 对 值 的 对 数 值 进 行 比较 。 ５ 统 计 学 处 理 ： 用 ＳＳ ００ｆ ｉ ｏ ｓ统 计 软 件 ， ． 使 Ｐ Ｓ１． ｒｗｎ ｗ ｏ ｄ 采
乙 肝 组 和 肝 癌 组 外 周 血 淋 巴 细 胞 Ｈ ～Ｉ 抗 原 的 表 达 率 和 Ｌ ．类 Ｍ Ｉ 明 显 低 于 正 常 对 照 组 （ ＜０ ０ ） 肝 癌 组 Ｈ ～Ｉ 抗 Ｆ均 Ｐ ．１ ； Ｌ ．类 原 的 ＭＦ 明 显 低 于 乙 肝 组 （ ＜ ． １ 。 Ｉ Ｐ ０ ０ ）
二 、 果 结
１ 对 象 ： ２０ 年 １ 月 至 ２ ０ ． 自 ０１ １ ０２年 ４月 在 山 东 大 学 齐 鲁 医 院 消 化 内科 住 院 和 在 传 染 肝 病 门诊 就 诊 的 病 人 ， ５ 共 １例 。
外 周 血 淋 巴 细胞 Ｈ ～Ｉ 抗 原 表 达 的 检 测 结 果 见 表 １ Ｌ ．类 。
Ｐ Ａ ＭＩ Ｇ Ｎ公 司产 品 ） Ｈ Ｖ Ｄ Ａ 试 剂 盒 （ 圳 匹 基 生 物 Ｈ Ｒ Ｎ Ｅ ， Ｂ －Ｎ 深
注 ： 正 常 对 照 组 比较 ， Ｐ＜Ｏ０ ； 乙肝 组 比较 ， Ｐ ＜Ｏ０ 与 。 ．１ 与 ．１
血 清 和 Ｐ ＭＣＨＢ ． Ｎ Ｂ Ｖ Ｄ Ａ检 测 结 果 见 表 ２ 乙 肝 组 和 肝 。 癌 组 血 清 Ｈ Ｖ Ｄ Ａ 阳 性 率 和 Ｈ Ｖ Ｄ Ａ含 量 的 差 异 无 显 著 Ｂ ．Ｎ Ｂ —Ｎ
性 率 更 高 。Ｐ ＭＣ为 免 疫 活 性 细 胞 群 体 ， Ｂ Ｂ Ｈ Ｖ感 染 Ｐ Ｍ Ｂ Ｃ对 机 体 免 疫 功 能 的影 响 尚 未 阐 明 。 我 们 就 Ｐ Ｍ 中 Ｈ Ｖ感 染 ＢＣ Ｂ
ｍ ｏ Ｌ ０５ Ｎ ．０ 反 应 ２ ｉ， 微 镜 观 察 证 实 细 胞 完 全 ｍ ｌ ，． ％ Ｐ４ ） ／ ０ｍｎ 显
ｐ ８ ０ 的 Ｈ ． ｓＨＣ ０ — Ｉ５ ｍｍｏ／ Ｎａ Ｉ ０ ｍｍｏ／ ＬＬ， Ｃ １ ０ ｌＬ，Ｍｇ Ｉ Ｃ２ ５
但 目前 在 肝 外 组 织 和 细 胞 中也 发 现 Ｈ Ｖ 的 存 在 ， 别 在 外 Ｂ 特 周 血 单 个 核 细胞 （ｅ ｐｅ￣ ｂｏｄｍ ｎｎ ｃ ａ ｃｌ Ｐ ＭＣ 中 阳 ｐｆ ｈｒ ｌｏ ｏｏｕｌ ｒ ｅ ，Ｂ ） ｉ ｅ ｌ
工 程 公 司 ） 淋 巴 细 胞 分 离 液 （ 国 医 学 科 学 院 血 液 学 研 究 ， 中 所 ） Ｆ Ｃ ａｔ ｅ型 流 式 细 胞 仪 （ 国 Ｂ ，Ａ ＳＶ ｎ ｇ ａ 美 Ｄ公 司 ） ｉｙｌ 荧 ，Ｃｃ ｒ ｅ 光 Ｐ Ｒ检 测 仪 （ 国 ＢＯ Ｒ Ｄ公 司 ） Ｃ 美 Ｉ ．Ａ 。 ３ 外 周 血 淋 巴细 胞 Ｈ ～Ｉ 抗 原 表 达 的检 测 ： 受 试 者 ． Ｌ ．类 取 新 鲜 抗 凝 全 血 １０ ｌ加 人 Ｆ Ｃ 抗 ＨＬ ．Ｂ ５ ， 温 下 避 ０ ， Ｉ 一 Ｔ ～Ａ Ｃ １ 室 光 反 应 ３ ｉ， 人 溶 血 素 ２ ｍ 裂 解 红 细 胞 １ ｉ， 磷 酸 ０ｍｎ 加 １ ０ｍｎ 用 盐 缓 冲 液 （ Ｂ ） ｍ 洗 涤 ２次 ， 上 清 。 人 Ｐ Ｓ０ ５ｍ 悬 浮 Ｐ Ｓ１ ｌ 弃 加 Ｂ ． １ 细 胞 。 收 集 １ 细 胞 ， 流 式 细 胞 仪 检 测 其 荧 光 强 度 ， ０个 用 并 计 算 平 均 荧 光 强 度 （ ｅｉ ｕｒ ｃｎｅ ｎ ｎｉ ， Ｉ。 用 Ｃ ｌ ｍ ｄ ｎｆ ｏ ｓｅｃ ｔ ｓｙ ＭＦ） ａｌ ｅ ｉｅ ｔ ｅ ｌ Ｑ ｅｔ ｌ 软 件 进 行 荧 光 参 数 获 取 及 分 析 。 同时 做 阴 性 对 照 。 ｕｓ Ｐｏ ｔ ４ Ｐ ＭＣ Ｈ Ｖ Ｄ Ａ 的 测 定 ： 受 试 者 新 鲜 抗 凝 血 ３ｍ ， ．Ｂ Ｂ － Ｎ 取 １ 加 人 比重 为 １０ ７ｇＬ± ．Ｏ ／ ．７ ／ ０ Ｏ２ｇＬ的 ＦｃｌＨｐｑ ｅ 巴细 胞 ｉ １ ｉ ｕ淋 ｏ． ａ 分 离 液 １ｍ ， ０ ｍｎ离 心 ２ ｉ， 出淋 巴 细 胞 层 ， ｐ ｌ２０ ０ｒ ｉ ／ ０ｍｎ 吸 用 Ｈ ７２的 Ｐ Ｓ 细 胞 洗 ５次 （ 次 １ １ ， 去 除 残 留 的 血 浆 ． Ｂ将 每 ０ｒ ） 以 ｎ Ｈ Ｖ Ｄ Ａ 分 别 收 集 末 次 洗 液 （０ ） 细 胞 ，调 整 细 胞 浓 Ｂ ．Ｎ 。 ５０ 及
的《 毒性肝炎 防治 方案 （ 行 ）¨。正常 对 照（ 照组 ） 病 试 》Ｊ 对 选
择 本 院健 康 职 工 和健 康 查 体 者 ２ ０名 （ 性 １ 男 ４名 ， 性 ６名 ） 女 ， 年 龄 ２ —５ １ ０岁 ， 均 ３ 岁 。 平 １ ２ 主 要 试 剂 与 仪 器 ：ＩＣ标 记 的 小 鼠 抗 人 单 克 隆 抗 体 ． ＦＴ Ｈ ＡＡ Ｃ Ｌ －Ｂ ，阴 性 对 照 ＦＴ ． Ｇ ，溶 血 素 （以 上 为 美 国 ＩＣ Ｉ １ ｇ
其 中 慢 性 乙 型 肝 炎 （ 肝 组 ）６例 （ 性 ２ 例 ， 性 １ 例 ） ， 乙 ３ 男 １ 女 ５
年 龄 １ —５ ７ ５岁 ， 均 ３ 岁 ； 炎 后 肝 癌 （ 癌 组 ） ５例 （ 性 平 １ 肝 肝 １ 男
１ 例 ， 性 ３例 ） 年 龄 ３ ２ 女 ， ４—６ ８岁 ， 均 ４ 平 ８岁 。 诊 断 依 据 １９ ９５年 ５月 北 京 第 五 次 全 国传 染 病 寄 生 虫 病 学 术 会 议 制 订 表 １ 各 组 外 周 血 淋 巴细 胞 Ｈ ～Ｉ 抗 原 的表 达 （ ±ｓ Ｌ ．类 ）
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中华 医学 杂 志 ２０ 年 １ 月 １ 日第 ８ ０２ １ ０ ２卷 第 ２ 期 Ｎ ｔＭｅ ｈ ａ ｏｅ ｂｒ１ ，０ ２ Ｖ ｌ ２ ｏ２ ｌ ａｌ ｄＪＣ ｉ ，Ｎ ｖｍ ｅ ０ ２０ ， ｏ ８ ，Ｎ ．１ ｎ
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