复方三黄酊质量标准研究

复方三黄酊质量标准研究
董宁霞;满玉清;王滨;成植温;王越
【摘要】目的完善复方三黄酊质量标准.方法采用薄层色谱法对黄芩、黄连、黄柏进行定性鉴别,采用高效液相色谱法测定复方三黄酊的主要有效成分盐酸小檗碱的含量.结果薄层鉴别专属性强.盐酸小檗碱的含量测定方法快速准确,线性关系良好,平均回收率为98.91%.结论这种质量控制方法简便可靠,可有效控制复方三黄酊的质量.
【期刊名称】《滨州医学院学报》
【年(卷),期】2016(039)002
【总页数】3页(P124-125,129)
【关键词】复方三黄酊;质量标准;盐酸小檗碱
【作者】董宁霞;满玉清;王滨;成植温;王越
【作者单位】滨州医学院附属医院药学部滨州 256603;滨州医学院附属医院药学部滨州 256603;滨州医学院附属医院药学部滨州 256603;滨州医学院附属医院肿瘤科;滨州医学院附属医院药学部滨州 256603
【正文语种】中文
【中图分类】R93
复方三黄酊由黄连、黄芩、黄柏、冰片等药材组成，为我院的自制制剂，具有抗菌消炎、止痛消肿、祛腐生肌的功效，对各种原因引起的创面感染、慢性皮肤溃疡、软组织损伤、褥疮、Ⅱ度以下烧烫伤、皮下瘀血肿胀等疗效显著[1，2]，在临床上
得到了广泛应用。

但其质量标准只有性状、黄芩苷鉴别、乙醇量检查等。

为加强对复方三黄酊的质量控制，我们在原质量标准的基础上，增加了黄芩素、盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的鉴别，建立了盐酸小檗碱的含量测定方法，使其质量标准更科学可行，确保疗效稳定可靠。

1.1 仪器与材料Agilent 1260(DAD检测器)；KQ-300V台式超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司)；AE100电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；HH-S
恒温水浴锅(江苏省金坛市医疗仪器厂)；硅胶G薄层板；聚酰胺薄膜等。

乙腈为色谱纯，甲酸、甲苯、乙酸乙酯、十二烷基硫酸钠、乙醇、丁酮等试剂均为分析纯；复方三黄酊由滨州医学院附属医院药学部制剂室提供(批号20130422、20131007、20140307)；盐酸小檗碱对照品(批号110713-201212)、黄芩苷对照品(批号110715-201318)、黄芩素对照品(批号111595-201306)、盐酸黄柏碱(批号111895-201303)购于中国食品药品检定研究院。

1.2 方法
1.2.1 鉴别
1.2.1.1 黄芩取本品20 mL，蒸干，残渣加2 mL使溶解，取上清液作为供试
品溶液。

另取黄芩苷对照品、黄芩素对照品加甲醇分别制成每1 mL含0.5 mg、0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。

按照薄层色谱法【《中国药典(一部)》附录
Ⅵ B】[3]试验，吸取上述供试品溶液及两种对照品溶液各2 μL，分别点于同一聚
酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶1∶2)为展开剂，预饱和
30 min，展开，取出，晾干，置紫外灯365 nm下检视。

供试品色谱中，在与对
照品色谱相应的位置上，显相同的暗色斑点。

1.2.1.2 黄连取本品5 mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供
试品溶液。

另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

按照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各2 μL，分
别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365 nm下检视。

供试品色谱中，在与对照品色谱
相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

1.2.1.3 黄柏取本品20 mL，蒸干，残渣加2 mL使溶解，取上清液作为供试
品溶液。

再取盐酸黄柏碱对照品，加甲醇制成每l mL含0.5 mg的溶液，作为对
照品溶液。

按照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液及对照品溶液各2 μL，分
别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(30∶15∶4)的下层溶液为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。

供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点[3]。

1.2.2 含量测定
1.2.2.1 色谱条件色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×250 mm，
5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(46∶54)(每100 mL加十二烷基硫酸钠
0.1 g)；流速：1.0 mL/min；检测波长：265 nm；柱温：室温。

1.2.2.2 对照品溶液制备精密称取盐酸小檗碱对照品9.2 mg，置于2 mL量瓶中，用50%乙腈-水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

1.2.2.3 供试品溶液的制备将样品摇匀后，精密量取10 mL，超声处理5 min，放冷后转移至10 mL容量瓶内，加乙醇至刻度，摇匀。

临用前用0.45 μm微孔滤膜滤过。

1.2.2.4 线性关系考察精密量取对照品溶液20、50、100、200、500 μL分别置于5个1 mL量瓶中，用50%的乙腈-水溶液稀释至刻度，摇匀，分别进样2 μL，按上述色谱条件进行测定。

以峰面积y对含量x进行回归处理，回归方程为
y=4107.13296x-5.13652(r=0.99999)。

1.2.2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液，连续进样6次，每次进样2 μL。

计
算盐酸小檗碱含量的RSD为0.68%，精密度良好。

1.2.2.6 稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、4、8、16、24 h进样测定。

结果:盐酸小檗碱含量的RSD为1.24%，供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.1 加样回收试验结果精密量取已知含量的样品6份，每份10 mL，分别加入对照品适量，制备供试品溶液并测定含量，计算回收率，结果见表1。

2.2 样品测定取样品3批，制备供试品溶液，分别进样2 μL，记录色谱图(图1)，计算盐酸小檗碱含量，结果见表2。

复方三黄酊的处方药材主要为为黄芩、黄连和
黄柏。

黄芩主要含有黄酮类成分如黄芩苷、黄芩苷元、汉黄芩苷、汉黄芩苷元、黄芩新素I和Ⅱ等，以及氨基酸、挥发油、糖类及微量元素等，黄芩苷和其水解产物黄芩素是其主要有效成分，具有抗菌、消炎的作用[4]，与复方三黄酊的清热解毒、消肿止痛的功效相对应；黄连的主要有效成分主要是原小檗碱型生物碱，包括小檗碱、巴马丁、黄连碱、药根碱等，其中以小檗碱含量最高，可达10%[5，6]；黄
柏主要含小檗碱、黄连碱、木兰花碱、掌叶防己碱等多种生物碱，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌等均有一定抑制作用，其中小檗碱有显著抗炎性增生，抗溃疡等作用[7，8]。

另外，《中国药典(一部)》中黄芩鉴别项下的对照成分为黄
芩苷、黄芩素和汉黄芩素，黄连鉴别项下的对照成分是盐酸小檗碱，黄柏鉴别项下的对照成分是盐酸黄柏碱[4]。

综合以上，笔者在复方三黄酊质量标准研究中，选
择了黄芩苷和黄芩素、盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱作为复方三黄酊鉴别的指标成分，盐酸小檗碱作为复方三黄酊的含量测定成分。

采用高效液相色谱法测定复方三黄酊中盐酸小檗碱含量时，为避免检测成分损失，没有对样品进行精制，而是将样品超声5 min，用0.45 μm微孔滤膜滤过后直接
进样，以减少实验误差。

实验证明，此样品处理方法简单可行，测定结果准确度较高。

选择乙腈-0.1%磷酸水溶液作为流动相，各成分分离效果较好，但盐酸小檗碱拖尾现象严重，在0.1%磷酸水溶液中加入十二烷基硫酸钠作扫尾剂，显著改善了
盐酸小檗碱的峰形和对称性。

综上所述，该鉴别方法能同时鉴别复方三黄酊中的三种主要药材黄芩、黄连、黄柏，专属性强，重复性较好；盐酸小檗碱的HPLC定量方法快速准确，新的复方三黄
酊质量标准更加科学完善，能更有效地控制其质量，具有实际应用意义。

【相关文献】
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[2] 陈学芝,韩业坤,程春芳, 等.三黄酊治疗糜烂渗出面皮肤损伤的疗效观察[J].护理研
究, 2005, 19(1):56-57.
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