HPLC 法测定复方当归注射液中两种成分的含量

HPLC 法测定复方当归注射液中两种成分的含量
魏春芬
【摘要】目的：建立同时测定复方当归注射液中羟基红花黄色素 A 和阿魏酸含量的方法。

方法采用高效液相色谱法。

色谱柱为 Inertsil ODS -3（4.6 mm ×250 mm，5μm），流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液（35∶65，V/ V），流速为1.0 mL·min -1，检测波长为403 nm（0～10 min，羟基红花黄色素 A）、321 nm （10～20 min，阿魏酸），柱温为35℃，进样量为10μL。

结果羟基红花黄色素A、阿魏酸的进样量分别在0.0426～1.7060、0.0112～0.4480μg（r＝1.000）范围内与相应峰面积呈良好的线性关系；二者精密度、稳定性、重复性试验的 RSD 均＜2.0％；平均加样回收率分别为99.76％、100.50％，RSD 分别为1.35％、1.19％（n ＝9）。

结论本法简便、快速、重复性好，可用于复方当归注射液的质量控制。

%Objective To establish an HPLC method for the determination of 2 components in Fufang Danggui Injec-tion. Methods HPLC method was adopted. The Inertsil ODS - 3 column(4. 6 mm × 250 mm,5 μm)was used with the mo-bile phase of methanol - 0. 1% ammoniae aqua(35∶65,V/ V),and the flow rate was 1. 0 mL·min - 1 ,the detection wave-length was 403 nm(0 ~ 10 min,hydroxy safflower yellow A)and 321 nm(10 ~ 20 min,ferulic acid),the column tempera-ture was 35 ℃,and the injection volume was 10 μL. Results There was a good linear relationship between the amount of hydroxy safflower yellow A and peak area in the range of 0. 042 6 ~ 1. 706 0 μg(r = 1. 000)and ferulic acid in the range of 0. 011 2 ~ 0. 448 0 μg(r = 1. 000). The RSDs of precision,stability and repeatability tests < 2. 0% . The average recoveries were 99. 76%(RSD = 1. 35% ,n = 9)and
100. 50%(RSD = 1. 19% ,n = 9),respectively. Conclusion The method was simple,reproducible,and it can be used for the quality control of Fufang Danggui Injection.
【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2016(035)007
【总页数】3页(P393-395)
【关键词】高效液相色谱法;复方当归注射液;羟基红花黄色素 A;阿魏酸
【作者】魏春芬
【作者单位】东营市食品药品检验中心，山东东营 257091
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
复方当归注射液现收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二十册，由当归、川芎、红花3味中药组成，具有活血通经，祛瘀止痛的功效，其质量标准中采用薄
层扫描法测定阿魏酸的含量［1］，操作较为烦琐；另有文献报道［2－4］，采用高效液相色谱（HPLC）法测定复方当归注射液中阿魏酸或羟基红花黄色素A单一成分的含量，但仅测定某一成分的含量无法有效的控制该制剂的整体质量。

因此，本文建立了HPLC法同时测定制剂中当归、川芎的主要有效成分阿魏酸及红花的
主要有效成分羟基红花黄色素A。

该方法操作简便，能更有效的控制该制剂的质量。

1．1 仪器LC－20AT高效液相色谱仪，包括SPD－20A UV／VIS检测器、
SIL－20A自动进样器、CTO－20AC柱温箱（日本岛津公司）；MS205DU电子
分析天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）。

1．2 药品与试剂羟基红花黄色素A对照品（批号：111637－201106，含量
以92．5%计）、阿魏酸对照品（批号：110773－201313，含量以99．6%计）均购自中国食品药品检定研究院；复方当归注射液（江西桔都药业有限公司，批号：110305、131214、131223）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2．1 色谱条件色谱柱：Inertsil ODS－3（4．6 mm ×250 mm，5 μm），
流动相：甲醇－0．1%磷酸溶液（35∶65，V／V），流速：1．0 mL·min－1，
检测波长：403 nm（0～10 min，羟基红花黄色素A）、321 nm（10～20 min，阿魏酸），柱温30℃。

2．2 溶液的制备
2．2．1 对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A对照品23．05 mg、
阿魏酸对照品5．62 mg，置25 mL量瓶中，加50%甲醇适量使溶解，稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。

精密量取上述对照品贮备溶液5 mL，置50 mL 量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1 mL含0．085 3 mg羟基红花黄色素A、0．022 4 mg阿魏酸）。

2．2．2 供试品溶液的制备取本品，混匀，即得。

2．2．3 阴性对照溶液的制备参照质量标准中的［制法］项，取10 mL复方
当归注射液中所用辅料即聚山梨酯80，加水至100 mL，用20%氢氧化钠溶液调
节pH值至7．0，即得。

2．3 专属性试验精密吸取“2．2”项下的3种溶液各10 μL，按规定的色谱
条件进行测定，记录色谱图。

供试品中羟基红花黄色素A和阿魏酸色谱峰与相应
对照品色谱峰保留时间一致，其他组分对测定无干扰，详见图1。

2．4 线性关系考察分别精密吸取“2．2”项下的对照品溶液0．5、1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。

以进样量（X，μg）为横坐
标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得羟基红花黄色素A回归方程为Y＝
3 106X＋3 862（r＝1000），阿魏酸回归方程为Y＝6 106X＋2 241（r＝1000）。

结果表明，羟基红花黄色素A、阿魏酸进样量分别在0．042 6～1．706 0、0．011 2～0．448 0 μg范围内与各自峰面积具有良好的线性关系。

2．5 精密度试验分别精密吸取对照品溶液10 μL，按规定色谱条件连续进样6次，记录峰面积。

结果，羟基红花黄色素A、阿魏酸峰面积的RSD分别为0．077%、0．050%。

结果表明，仪器具有良好的精密度。

2．6 稳定性试验取同一批复方当归注射液（批号：110305），按“2．2．2”项下规定的方法制备供试品溶液，分别于放置0、2、4、6、8、10、12 h时精密吸取10 μL，按规定的色谱条件进样测定，记录峰面积。

结果，羟基红花黄色素A、阿魏酸的峰面积的RSD分别为0．27%、0．16%。

表明供试品溶液在12 h内具有良好的稳定性，可用于测定。

2．7 重复性试验取同一批复方当归注射液（批号：110305），按“2．2．2”项下规定的方法制备供试品溶液，共6份，分别精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，按规定的色谱条件进行测定并计算含量。

结果羟基红花黄色素A、阿魏酸平均含量分别为0070 4、0．016 0 mg·mL－1，RSD分别为0．19%、016%，表明该方法重复性较好。

2．8 加样回收试验分别精密量取同一批（批号：110305，羟基红花黄色素A、阿魏酸的含量分别为0．070 4、0．016 0 mg·mL－1）样品溶液2 mL，置5
mL量瓶中，共9份，3份分别精密加入“2．2．1”项下对照品溶液1 mL，3份分别精密加入“2．2．1”项下对照品溶液2 mL，3份分别精密加入“2．2．1”项下对照品溶液3 mL，分别加50%甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，按规定的色谱条件进行测定，记录峰面积，并计算加样回收率，结果见表1。

2．9 样品含量测定取3批复方当归注射液（批号：110305、131214、131223）样品，按“2．2．2”项下规定的方法制备供试品溶液，分别精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，按规定的色谱条件进测定，记录峰面积，并计算含量，结果详见表2。

HPLC法同时测定制剂中的多种成分，选择合适的波长尤为关键。

羟基红花黄色素A和阿魏酸的测定波长多采用403、321 nm［5－6］。

有文献报道，采用同一检测波长［7］或采用双波长［8］同时测定二者的含量，本试验中曾分别选用403 nm和321 nm进行测定。

采用403 nm进行测定时，阿魏酸的吸收峰较弱，采
用321 nm进行测定时，羟基红花黄色素A色谱峰存在较大干扰，因此采用切换
检测波长的方法分别测定二者的含量。

测定羟基红花黄色素A和阿魏酸常用的流动相系统有甲醇－乙腈－磷酸溶液、乙
腈－水－三氟乙酸和乙腈－磷酸溶液、甲醇－磷酸溶液等。

本试验中以甲醇－0．1%磷酸溶液为流动相以不同的比例进行试验，结果采用甲醇－0．1%磷酸溶
液（35∶65）为流动相，获得了较好的分离效果。

羟基红花黄色素A和阿魏酸均对光、热不稳定［9－11］，采用本文方法进行测定时，供试品无须前处理，可降低有效成分的损失。

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