甘南高原野生与人工栽培翼首草根部多糖含量测定

甘南高原野生与人工栽培翼首草根部多糖含量测定
作者：丁耀光，马富花，付育红
来源：《湖北农业科学》 2014年第18期
丁耀光，马富花，付育红
（甘肃民族师范学院化学与生命科学系，甘肃甘南７４７０００）
摘要：翼首草［Ｐｔｅｒｏｃｅｐｈａｌｕｓｈｏｏｋｅｒｉ（Ｃｌａｒｋｅ）Ｈｏｅｃｋ］系川续断科翼首花属植物匙叶翼首花全草，富含植物多糖，块根可入药。

通过超声波提
取法从翼首草根部提取多糖，采用苯酚－硫酸比色法对其含量进行测定。

结果表明，超声波提
取的甘南高原野生翼首草的多糖含量为１８．７８ｍｇ/１００ｍＬ，超声波提取的甘南高原人工栽培翼首草多糖含量为２０．６３ｍｇ/１００ｍＬ，可见人工栽培翼首草根部多糖含量明显高于野生的。

关键词：翼首草［Ｐｔｅｒｏｃｅｐｈａｌｕｓｈｏｏｋｅｒｉ（Ｃｌａｒｋｅ）Ｈｏｅｃｋ］；多糖含量；甘南高原；人工栽培
中图分类号：Ｏ６２９．１２
文献标识码：A
文章编号：0439－８114（２０14）18－4361-03
翼首草［Ｐｔｅｒｏｃｅｐｈａｌｕｓｈｏｏｋｅｒｉ（Ｃｌａｒｋｅ）Ｈｏｅｃｋ］系川续断科翼首花属植物匙叶翼首花全草，为常用藏药，藏语名为“榜孜毒乌、榜子毒乌、榜
孜夺吾”等，为著名藏药“洁白丸”的主要成分之一。

味苦、性寒，有小毒，有解毒、清热止痢、祛风除痹之功效。

藏医常用它来治疗感冒发热及各种温热病引起的发烧，心中烦热，咳血、吐血、尿血、便血等症［１，２］。

全世界翼首花属植物约２５种，我国主要有匙叶翼首花和
裂叶翼首花２种，分布于云南、四川、甘肃、青海和西藏东部海拔３０００ｍ以上的向阳地、草地、林间、林缘［３］。

１材料与方法
１．１材料
１．１．１原料翼首草采自甘肃省甘南藏族自治州合作市。

该区域地处青藏高原东北
部边缘，位于１０２°５３′Ｅ、３４°５７′Ｎ，海拔高度为２９６３ｍ。

冬季寒冷而漫长，夏季温暖而短暂，全年日照充足，平均气温为-０．５～３．５℃，最高气温为２８℃，最低气温为-２３℃，平均无霜期为４８ｄ，平均年降水量为５４５ｍｍ，一般集中于７～
９月。

该地区属于亚高寒草甸湿润类型，适合生长多种双子叶、禾本科和莎草科植物。

１．１．２药品与仪器药品：４０ｇ／Ｌ苯酚溶液、葡萄糖、正丁醇、石油醚、三氯甲烷、浓硫酸、乙醇，均为国产分析纯。

仪器：ＣＭＤ－２０Ｘ型智能型电热恒温鼓风干燥箱、ＯＲＷ１．５Ｓ－３Ｅ型微波萃取机、ＲＥ－５２ＡＡ型上海亚荣旋转蒸发仪、天津华鑫ＳＨ
Ｚ－Ｄ（Ａ）型循环水真空泵、离心机、分析天平（精确度为０．０００１ｇ）、ＨＨＳ型
数显恒温水浴锅、搅拌器。

１．２方法
１．２．１样品的预处理将翼首草自然阴干，粉碎过２０目筛，备用。

采用粉碎法对
匙叶翼首草样品进行预处理，预处理之后再用Ｓｅｖａｇｅ法［４］脱脂，用水煮提取粗多糖，对粗多糖除蛋白质，用水提醇沉法［５］提取纯净多糖，即得到纯净的翼首草多糖［６］。

比
色法广泛应用于多糖含量测定中，其中苯酚－硫酸比色法和蒽酮－硫酸比色法是试验中测定多
糖含量的常用方法［５］。

而苯酚－硫酸比色法测定多糖含量的准确度较高，因此本研究选用
此方法。

１．２．２脂的脱除称取１０ｇ制备好的翼首草样品装入圆底烧瓶中，加１００ｍ
Ｌ的石油醚（沸程６０～９０℃），在８５．５℃的恒温水浴中回流提取５０ｍｉｎ，冷却，离心４ｍｉｎ回收石油醚，重复两次，晾干残渣中华的溶剂，备用。

１．２．３粗多糖的提取在２５０ｍＬ圆底烧瓶中加入去离子水和脱脂后的匙叶翼首草残渣，以超声波功率５００Ｗ、料液比１∶１５（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ）、提取时间３０ｍ
ｉｎ［７］提取１次，离心６ｍｉｎ，抽滤，收集滤液；再将滤液加入旋转蒸发仪，重复两次，浓缩至约３０ｍＬ。

１．２．４蛋白质的去除将上一步获得的溶液倒入锥形瓶，加入三氯甲烷－正丁醇
（体积比５∶１）混合溶液２０ｍＬ，搅拌２０ｍｉｎ，离心７ｍｉｎ，收集上层溶液，本试验共重复７次至无蛋白质沉淀出现。

除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检测，如果在波长
２８０ｎｍ处无吸收，表明蛋白质已经除尽［８］。

１．２．５多糖的乙醇沉淀将多糖离心后所得的溶液转入１００ｍＬ量筒中，加入无水乙醇（溶液和无水乙醇的体积比为１∶５），将得到的多糖混合溶液静置２４ｈ，然后将溶液抽滤，收集滤渣，将滤渣真空干燥，得到翼首草多糖产品。

１．２．６多糖含量的测定
１）测定方法。

采用苯酚－硫酸比色法，以葡萄糖为参照物，使用紫外可见分光光度计对
制备出的产物的多糖含量进行测定。

２）最大吸收波长的确定。

用移液管取适量样品溶液，向其中加入显色剂，在波长４０
０～６００ｎｍ范围内进行检测［９］，绘制出吸收曲线。

３）最佳显色时间的确定。

显色反应是较为复杂的有机反应，需要一定的时间才能显色完
全［１０］。

在不同的显色时间下测定其吸光度，确定吸光度最大的显色时间。

４）标准溶液的制备。

标准溶液的配制方法是：称取干燥至恒重的葡萄糖１００ｍｇ，溶解定容于１００ｍＬ的容量瓶中［１１］，再用移液管吸取标准溶液０、２、４、６、８和１０ｍＬ，定容至１００ｍＬ容量瓶中。

５）标准曲线的绘制。

取上述标准溶液１ｍＬ于具塞试管中，分别加１ｍＬ４０ｇ／
Ｌ苯酚，快速加入７ｍＬ浓硫酸，振荡４ｍｉｎ，显色３０ｍｉｎ，于４９０ｎｍ波长处
测定吸光度，以二次去离子水作空白对照试验，以Ｙ轴为吸光度Ａ，Ｘ轴为葡萄糖浓度（ｍｇ
／ｍＬ），得到标准曲线。

６）换算因子的测定。

精密称取干燥至恒重的多糖样品０．０１０５ｇ，置于１００ｍＬ容量瓶中，定容。

移取该溶液１ｍＬ，定容于１０ｍＬ容量瓶中，即制得待测溶液。

吸取
１ｍＬ待测液，显色测定吸光度，依据回归方程得到溶液中的葡萄糖浓度，由公式ｆ＝ｍ／ｃ×Ｄ计算得出ｆ，其中ｍ表示多糖质量（ｇ），ｃ表示多糖液中葡萄糖的浓度（ｍｇ／ｍＬ），Ｄ表示多糖稀释倍数，即稀释前的溶液浓度除以稀释后的溶液浓度［１２］。

７）３份待测样品的制备。

选取３份匙叶翼首草根部，用微波萃取机超声波提取多糖，精
密称取干燥至恒重的多糖，定容至１００ｍＬ容量瓶中。

将匙叶翼首草多糖３份样品各吸取１ｍＬ定容至１００ｍＬ容量瓶中，即制得１号、２号、３号样品。

２结果与分析
２．１蛋白质的检测
为了检测样品中蛋白质是否除尽，在波长２８０ｎｍ［１３］处用紫外分光光度计检测，检测结果表明紫外吸收为零，蛋白质已除尽。

２．２多糖含量的测定
２．２．１最大吸收波长的确定由图1的吸收曲线可知，最大吸收波长为４９０ｎｍ。

２．２．２最佳显色时间的确定由图２可知，显色３０ｍｉｎ时有最大的吸光度，所以最佳显色时间为３０ｍｉｎ。

２．２．３标准方程的获得标准曲线见图3。

标准曲线方程为y＝０．０４７６x＋０．００６４，ｒ＝０．９９９５。

２．２．４换算因子的测定结果根据回归方程y=0.047 6x+0.006 4可知，多糖样品的浓度为０．０６４１ｍｇ／ｍＬ，由换算因子公式ｆ＝ｍ／ｃ×Ｄ计算得到ｆ＝１．６３８。

２．２．５野生样品溶液中多糖含量的测定结果分别从稀释１００倍的１号、２号、
３号样品中取１ｍＬ溶液于具塞试管中，显色测吸光度，每种样品重复３次，每个重复试验的吸光度分别记为Ａ１、Ａ２、Ａ３，平均值为Ａ，结果见表１。

表１结果表明，３份样品中多
糖含量分别为１８．９６、１８．４１、１８．９６ｍｇ／１００ｍＬ，说明测定误差极小。

２．２．６人工栽培样品溶液中多糖含量的测定结果分别从稀释１００倍的１号、２号、３号样品中取１ｍＬ溶液于具塞试管中，显色测吸光度，每种样品重复３次，每个样的吸光度分别记为Ａ１、Ａ２、Ａ３，平均值为Ａ，结果见表２。

表２结果表明，３份样品中多糖
含量分别为２０．６３、２０．６２、２０．６３ｍｇ／１００ｍＬ，说明测定误差极小。

３小结与讨论
通过超声波提取甘南高原人工栽培翼首草根部多糖，提高了多糖的产率。

在翼首草多糖含
量的测定中，选用了苯酚－硫酸比色法，以葡萄糖为对照品，使用紫外可见分光光度计测定制
备出的产物中的葡萄糖含量。

结果表明，超声波提取甘的南高原野生翼首草中多糖的含量为１８．７８ｍｇ／１００ｍＬ，超声波提取的甘南高原人工栽培翼首草中多糖的含量为２
０．６３ｍｇ／１００ｍＬ，人工栽培翼首草根部中多糖的含量明显高于野生的。

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