铜绿假单胞菌的耐药机制研究

铜绿假单胞菌的耐药机制研究
目的对铜绿假单胞菌的耐药机制进行分析探讨，为今后的临床合理用药工作提供可靠的参考依据。

方法采集2013年1月至2013年12月本院门急诊和住院患者各类标本3616份，共检出铜绿假单胞菌107株，将其按照对美罗培南、亚胺培南耐药情况分成四组，经PCR和测序法对各组铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶进行检测。

结果对亚胺培南和美罗培南耐药组均检出亚胺培南（IMP）、VIM 金属酶基因型。

结论外膜的低通透性、金属β-内酰胺酶的水解和主动外排泵过度表达相互作用为铜绿假单胞菌的耐药机制，值得关注。

标签：铜绿假单胞菌耐药机制金属β-内酰胺酶
在医院感染中铜绿假单胞菌为主要致病菌之一，亚胺培南、美罗培南等是治疗铜绿假单胞菌的常用抗菌药物，随着抗菌药物的广泛应用，不合理现象的增加，使得铜绿假单胞菌的耐药性显著增强[1]，本次研究中出于对铜绿假单胞菌的耐药机制进行分析探讨的目的，对107株铜绿假单胞菌进行了分组检测，并对检测结果进行了对比分析，报告如下。

1 材料与方法
1.1 菌株来源于与鉴定分组
研究中菌株来源于2013年1月至2013年12月本院门急诊和住院患者各类标本3616份，共检出铜绿假单胞菌107株，经菌种鉴定后采用ATB PSE5板条对美罗培南和亚胺培南的最低抑菌浓度（MIC）进行测定，并以2012年CLSI 标准为依据进行判断。

以铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南的耐药情况共分成4组，分别为A组：对亚胺培南及美罗培南均敏感的菌株；B组：对亚胺培南耐药、美罗培南敏感的菌株；C组：对亚胺培南敏感、美罗培南耐药的菌株；D组：对亚胺培南及美罗培南均耐药的菌株。

对A、B、D组菌株展开外排泵泵MexAB-OprM、外膜蛋白OprD2表达水平检测，并对各项检测结果进行对比分析。

1.2 仪器与试剂
生物梅里埃ATB半自动细菌及药敏鉴定仪，PCR产物纯化试剂盒，纯化焦磷酸二乙酯（DEPC），细菌RNA提取试剂盒，定量PCR仪Option2 Real-time PCR Detection，实时定量PCR采用TaKaRa SYBR ExScriptTMRT-PCR Kit试剂盒。

所有检测操作均按照试剂盒说明书要求进行。

1.3 数据处理
研究中相关数据资料采用SPSS18.0统计学软件处理，相关计量资料采用均数加减标准差（X±s）形式表示，对比中计量资料的对比采取t检验，计数资料
的对比则是采取Χ2检验，在P＜0.05时，视为差异存在统计学意义。

2 结果
2.1 金属β-内酰胺酶检出情况统计
经统计发现，不同组别β-内酰胺酶检出率存在一定的差异（P＜0.05），详见表1。

经统计发现，在A、B、D组MexAB-oprM高水平表达发生率分别为60.0%、57.1%、37.5%。

三组两两比较无明显差异（P>0.05）；在各组间MexAB-oprM表达水平无显著差异。

A、B、D组中OprD2表达降低发生率分别为20.0%、71.4%、87.5%，A组与D组比较差异显著（P＜0.05）；A组与B组，B组与D组比较无明显差异（P>0.05）。

3 讨论
碳青酶烯类抗菌药物在铜绿假单胞菌感染中具有显著地治疗效果，然而近几年的流行病学调查结果显示，随着抗菌药物应用的广泛和不合理性，使得致病菌耐药性明显增强，对临床抗菌治疗效果产生了显著的影响[2]。

对铜绿假单胞菌耐药机制进行探讨对于临床抗菌药物选择具有重要意义。

本次研究中对铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类药物的机制进行了研究，结果显示，外膜的低通透性、金属β-内酰胺酶的水解和主动外排泵过度表达相互作用为铜绿假单胞菌的耐药机制，在今后的临床用药过程中应对其给予重视[3]。

综上所述，铜绿假单胞菌耐药机制相对复杂，一株细菌可同时具有多种耐药机制，且机制间相互作用，从而对耐药表型产生一定程度的影响，值得关注。

参考文献
[1] 余算，周湘静，朱伦，等.耐碳青酶烯类抗菌药物铜绿假单胞菌金属酶研究[J].中华医院感染学杂志，2009，19（4）：368-370.
[2] 应春妹，应骏，罗柳林，等.耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究[J].中国感染与化疗杂志，2008，8（4）：300-302.
[3] 汪宏良，邹义春，柯俊，等.多药耐药铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究[J].中华医院感染学杂志，2008，18（11）：1505-1508。