PFAFFL Method for real timePCR
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PFAFFL Method for real time PCR
简介：
荧光定量PCR方法：用于相对定量。
适用条件：目标基因与内标基因扩增效率相差较大，特别适用于国内习惯于将内标与目标分开扩增。
优点：不需要标准曲线，结果比delta-delta-Ct法更加精确。
缺点：需要知道在Ct值处的扩增效率，好在OM3已经可以提供该值。
数学推导：
M01：处理1目标基因初始拷贝数Mn1：处理1目标基因n次循环后拷贝数
M02：处理2目标基因初始拷贝数Mn2：处理2目标基因n次循环后拷贝数
N01：处理1内标基因初始拷贝数Nn1：处理1目标基因n次循环后拷贝数
N02：处理2内标基因初始拷贝数Nn2：处理1目标基因n次循环后拷贝数
E M：目标基因扩增效率E N：内标基因扩增效率
CtM2：处理2目标基因的Ct值CtM1：处理1目标基因的Ct值
CtN2：处理2内标基因的Ct值CtM1：处理1内标基因的Ct值
目标基因扩增结果：
Mn2=M02(1+ E M)n
Mn1=M01(1+ E M)n
将Ct带入：
Mct2=M02(1+ E M)CtM2=A(域值)
Mct1=M01(1+ E M) CtM1=A(域值)
两式相除得：
M02/M01=(1+ E M) CtM2－CtM1 1
同理得：
N02/N01=(1+ E N) CtN2－CtN1 2
两个处理的目标基因相对表达量为：(利用1式和2式)
(M02/N02) ：（M01/N01）=(1+ E M) CtM2－CtM1/(1+ E N) CtN2－CtN1。