RT-PCR检测人膀胱上皮细胞双功能氧化酶表达
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（ Ａ 对基 因表 达水 平的影响。方法 ： 外培 养人膀胱上皮 （ “ 细胞 ， 波酯（ ＭＡ 、 儿 ） 体 Ｔ ） 经佛 Ｐ ）炎症细胞 因子（ Ｎ ．及 ＩＩ 刺激后 Ｔ Ｆａ Ｆ ＇） Ｎ 提取细胞 总 Ｒ ＮＡ， 采用半定量 Ｒ －Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ方法观察细胞 ＤｕｘｉＤｕ ｘ２ｍＲ ｏ－ ， ｏ － ＮＡ表 达水平。结果 ： ｕ ｘ１Ｄｕ ｘ２ｍＲ Ｄ ｏ－ ， ｏ － ＮＡ在 Ｔ 细胞 中组成性表达 ， 在佛波酯（ＭＡ 、Ｎ － 及 ＩＮ 作 用下， ｕｘ２ 因表 达水平 明显增加 ， Ｄ ｏ－ 基 因表 达水平 元 明显 变化 。 Ｐ ）Ｔ Ｆａ Ｆ ＿ Ｄ ｏ－ 基 而 ｕｘＩ
ｖｎ ｕ ｊｃｉ１ ｅ ｏ ｓｉ ｅｔ １ ｎ ｏ ．Ａｔ ： ａｓｉ ｅｔｔ ｎ ｅ ｒｏＲ ａ ｘｒｃ ｄａｄｉｅ ｔｉ ｈ ｘ ｒｓｉｎｏ Ｇ ２ｂ Ｐ Ｒ ｅ ５ｄ ｙ ｇ ｓａｉ ，ｍｂｙ ＮＡ ｗ ｓｅｔ ｔ ｎ ｎｉｅ ｔｅｅｐ ｅｓ ｆＨＭ Ｎ ｙＩ Ｃ Ｒ － ８ ｎ ｏ ａｅ ｄ ｆ ｄ ｏ
Ｈ ＭＧＮ２ Ｍ ｅｈ ｄ ：ｓ Ｉ Ａ ｓｌｎ ｅ －ｍｗ４ １ ＨＭ ＧＮ２ ｗａ ｏ ｓｒ ｃｅ ｎ ｓｔａ ｓ ｔｅ ｎ ｏ ｔｅ ｐ ｅ ｎ ｎ Ｃ ｍｉｅｗｉ ａｌ ． ｔｏ ｓ ｈ ｐ ｉ ｃ ｒｃ ｅ ．－ ｓｃ ｎ ｔ ｔｄａ ｄ ｗａ ｒｎ ｍｉｔｄ ｉｔ ｈ ｒｇ ａ ｔＩＲ ｃ ｔ ｔｉ ｕ ｈ
Ｒ － Ｃ 检 测人 膀 胱 上 皮细 胞 双 功 能氧 化 酶表 达 ＊ ＴＰ Ｒ
耿会珍 刘明岩 赵丽君 刘珍 刘燕翔 黄宁 王伯瑶 吴琦△ （ 四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室， 四川 成都 ６０ ４） １０ １
摘 要 目的： 检测人膀胱上皮细胞（ ２细胞） Ｔ 是否表达双功能氧化酶（ ｕｘ１Ｄ ｏ－）并观察炎症细胞因子及佛波酯 Ｄ ｏ－、 ｕｘ２ ，
ＨＭ Ｇ ｓｃｎｔｕｔｄｓｃｅｓ ｌ ｎ ｅｉｔｒ ｒｎｅｅｆ ｉ ｃ ａ ０ ． Ｎ２ｗａ ｏ ｓ ｃｅ ｕｃｓｆ ｌ ａ ｄｔ ｅｆ ｅ ｃ ｆｃ ｎｙｗ ｓ７ ｒ ｕｙ ｈ ｎ ｅ ｉｅ Ａ ０
Ｋｅ ｏ ｄ ： ＭＧＮ２； ｉ ｎ ｅ － － ． － ｙＷ ｒｓ Ｈ Ｐｓｌ ｃ ｒ ｃｍｙ ４ １ ＨＭ ＧＮ２ ｅ
１ ２ １ 细胞培养及刺 激 ． ．
Ｔ２细胞 采用含 成 为 细 胞 杀 灭微 生 物 的 重要 成 分。 Ｒ Ｓ， ２ ０ 以后 ， ０ ０年 在非吞 噬 细胞发 现 了 Ｎ ）Ｈ 氧化酶 的同源物 Ｐ 家族 ， 被命名 为 Ｎ０ ＮＡ Ｈ ｘ ａｅ 家族 。人类 Ｎ０Ｘ家族 ｘ（ ＤＰ ｏ ｉ ｓ） ｄ 共有 ７个成员 ， Ｎ 即 Ｏｘ１Ｎ０＝ 、 ｘ３卜０ｘ 、 ｘ 、 ｏ－ 、 Ｎ０ 、 １ ４ Ｎ０ ５ Ｄｕｘ１ 和 Ｄｕ ｘ２１ｓ。ＮＯＸ家族广 泛表 达 于机体 的组织 器官 ， ｏ －［ ］ － 其生 物学功能成为研究 的热点 。双 功能氧化酶 （ ｕ ｘＩ和 Ｄ ｏ －） Ｄ ｏ－ ｕ ｘ２ 最初在甲状腺 中发现 ， 它们 除了具有 ＮＯ ｘ的 ｃ端结构域外 ， 还 有一个 Ｎ端过氧化 物酶样胞外域 ， 故称为双功能氧化酶 。近年
ｍ ｔ： ｅｓ ＲＮＡ ｓｌｎ ｅｃ －． 一 ｄｓ Ｔｈ ｂ ｐ ｉ ｃ －ｍｖ４ １ＨＭ ＧＮ２ｗａ ｎ ｔｕ ｔ ｕ ｃｓ ｆｌ ｎ ｈ ｘ ｒ ｓｉｎｏ ｅ ｓｃ ｓｒｃｅ ｓ ｃｅ ｓｕ ｌ ａ ｄ ｔｅｅ ｐ ｅｓｏ ｆＨＭ ＧＮ２ｗａ ｉｈ ｒａ ． ａ ｓｉ ｏ ｄ ｙ ｓｈｇ ｅ ｔ８ ５ ｄ ｙ ｎ ｇ ｓａ ｉｎ ｅ ｒ ｏ ａ ｄ ｉｎｆ ａ ｔ ｏ ｒ ｇ ｌｔｄ ｙ ｅｔｔ ｍｂ ｙ ， ｎ ｓ ｉｃ ｎ ｌ ｄ ｗｎ ｅ ｕａｅ ｂ ｓ ｏ ｇ ｉ ｙ Ａ ｓｌｎ ｅ－ｍｖ ４ １ＨＭ ＧＮ２ Ｃ ｎ ｉ ｉｎ ｐ ｉ ｃｒｃ －． － ｅ ． ｏ ｃｓ ｏ ：Ｔｈ ｐ ｉ ｎ ｅｃ ｅ ｓｌ ｃ－ｍｗ４ １ ｅ ．一
结论 ： 双功能氧 化酶 Ｄｕ ｘＩ Ｄｕ ｘ２基因在膀胱上皮 细胞表达 ， ｏ－ 和 ｏ－ 并受炎症刺激的影 响， 其在膀胱上 皮细胞 中的生理 功能值得深入
研究 。
关键 词 ： 膀胱上皮细胞 ； 双功能氧化酶； 基因表达
‘
吞噬细胞 Ｎ ）Ｈ 氧化 酶被激 活后 ， Ｐ 细胞发 生呼 吸爆 发 ，
８
四川 生理科 学杂 志 ２ １ ；２１ ０ ０３ （）
Ａ ｓ ａｔＯｂ ｃｉ ：Ｔ ｎ ｔ ｃ ｉｈｙｅｆ ｉ ｔ ｕｅ ｈ ＮＡ ｓｅ ｃｒｃ ｗ４ １ＨＭ．Ｎ２ ａｄｔｅｔ ｎ ｃｉｔ ｎｍｅｈ ｎｓ ｏ ｂｔ ｃ ｊ ｔ ｅ ｏｃ ｓｒ ｔ ｇ ｌ ｆｃ ｎ ｓ Ｒ ｒ ｅ ｖ ｏ ｕ ｈ ｉｅ ｍｏ ｓ ｐ ｉｎ ｅ－ｍ ． 一 Ｇ ， ｎ ａ ｓｒ ｉ ｃａ ｉ ｌ ｈ ｒ ｐｏ ｍ ｆ
清的 １４ ６ ０培养基 （ 抗生 素） 无 常规培养 和传代 。实验前 在每个
细胞培养． （０ ５ １ ６ Ｘ１ｍｍ） ｌ Ｉ ［ 中接种 ３ 万个 Ｔ４ Ｏ ２ 细胞 ， ７ ５ Ｃ ３ ℃ Ｏ２
孵箱培养 ２ ｈ ４ 。加入 Ｐ ＭＡ（ 度 为 ５Ｍ） 细胞 因子 （ ＩＦａ 浓 ｎ 或 Ｔ、 － 『
２ ｇ ｎ ＋ 吖 ２ ｇ・ ｌ ， ｏｎ ・ Ｉ ｌ ０ｎ ｍ 叫）分别在刺激后的 １、４ ２ ２ｈ
收集细胞抽 提 Ｒ ＮＡ。实验同时设无刺 激的空 白对照组 。 １ ２２ Ｐ、 ． ． （ Ｒ引物设计 根据 ＧｅＢ ｎ ｎ ａｋ的序列 ， Ｐ ｉ ５ ０ 用 ｒ ． 软 ｍｅ 件分 别 设 计 Ｄｕ ｘｉ（ 录 号 Ａ ２ ３６ ） Ｄｕ ｘ２（ 录 号 ｏ－ 登 Ｆ １４５ ， ｏ－ 登 ＡＦ ６ ９ １ ， ｃｉ 登录号 Ｂ ０ ６ ４ ） ２ ７８ ）￣ａｔ ｎ（ Ｃ １０ ５ 的引物 。
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关键 词 ： 膀胱上皮细胞 ； 双功能氧化酶； 基因表达
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四川 生理科 学杂 志 ２ １ ；２１ ０ ０３ （）
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