脓汁和粪便标本中病原菌的检测课件

❖ 实验步骤：每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实 验室、卫生间或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放 置在平板旁边，平板暴露于空气中15分钟，然后平板倒 扣盖上，作标记。37℃温箱培养24小时，观察结果。
※ CFU/m3 ＝ 50000N÷AT≈86N(直径7cm平板）。
N：平板上的菌落数。 A：平板面积(平方厘米)。 T：采样时间(分钟)。
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平板盖打 开，盖朝 下放在平 板旁边， 平板暴露 15分钟。
5
空气的细菌学检查 暴露法（Exposure Method)
组号 采样地点 采样时间(min) 菌落形成单位(CFU)
1
实验室
15
2
卫生间
15
3 门诊大厅
15
4 呼吸科走廊
15
5 呼吸科病房
15
6 呼吸科ICU
15
7 外科走廊
❖ 作用：可迅速全球传播。
❖ 危害：引起培养基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸
道传染病。
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❖ 实验方法(自然沉降法):根据空气中细菌气溶胶粒子， 在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基 表面，培养以后，计数菌落形成单位（ colony forming unit ，CFU），可了解空气的污染情况。
❖ 常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和 数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗 手方法，常不易去除。
❖ 暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌 是外来的非正常菌群，种类和数量不定。引起人类 致病的通常是暂住菌。
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常规的洗手方法（甲和丙操作）
❖ 将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。 ❖ 反复搓揉双手，搓揉时间不少于 30秒。 ❖ 用流水冲洗干净，整个洗手过程不少于1分钟。
Colony:在固体培养基表面或基内，由单个细菌 在局部位置不断增值，形成肉眼可见的细菌集 团，称为单菌落。
Colony Forming Units:由单个或聚集成团的多 个菌体，在固体培养基上生长繁殖堆积形成肉 眼可见的细菌集落，称为菌落形成单位。
Lawn:在固体培养基表面，由许多菌落融合在一 起形成一片密集的的细菌群落,称为菌苔 。
※能有效地去除大多数暂住菌。
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医学微生物学教学实验室标准洗手方法（乙和丁操作）
❖ 用流动的水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。
1.掌心对掌心搓擦
2.手指交错掌心对手背搓擦
3.手指交错掌心对掌心搓擦
4.两手互握互搓指背
5.拇指在掌中转动搓擦
❖ 分别搓擦10～15次。 ❖ 保持双手低于肘部，流水冲洗一分钟以上。
影响分离结果。第 度，划线时就能
一区划线不得超过 看清划线痕迹，
1/5平板，
以便控制划线。
④接种环与平板呈30～ 40度角，在平板表面上 方，以曲线的形式，作 大幅度来回连续划线， 边划边退，线段要划得 长而密集，每区划线不 少于30条。
⑥转动平板，通 过第一区5～7次， 使接种环重新沾 上少量细菌，同 样的方法划第二 区。
①培养基的制备
②细菌的分离培养
③细菌的纯培养
④细菌的形态学检查Fra bibliotek⑤细菌的生化试验等
⑥细菌的血清学试验、结果分析→实验论文撰写
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平板划线分离法 Streak Plate Method
❖ 借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板 表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。 培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可 见的细菌集团（单菌落）。
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6.指尖在掌心中搓擦
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手指皮肤的 细菌学检查
上:甲、丙→常规洗手 下:乙、丁→标准洗手
甲和乙、丙和丁共用1个平板
第1格为洗手前， 第2格为洗手后， 第3格为消毒后， 第4格空白对照。
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在培养基表面触摸2～3厘米
甲（丙）
123 4
乙（丁）
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脓汁和粪便标本中病原菌的检测 实验流程(6次课12学时）
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⑨划第五区。
⑧转动平板，接种 环通过第三区1次，
⑦环转通动过平第板二，区1接13 次种，
划第四区。
划第三区。
①Flame loop, cool.
❖ 方法:见下一张幻灯片。 ❖ 充分利用平板面积，不能划破琼脂。
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划线示意图 分离结果12
①接种环烧 ②取标本
灼灭菌。
3～6ul。
⑤烧掉接种环上多 余的标本。
⑩每区划线不少于 ③平板采光，当
30条，整个平板划 看到平板表面象
线 不 少 于 150 条 线 。 镜面有反光的时
上下两条线重叠不 候，保持这个角
❖ 空气、水、土壤、人体的体表以及与外界相通的腔 道，均有不同种类和数量的微生物存在。
❖ 存在于人体消化道的细菌超过800种，数量可达100 万亿（1014），菌体重量1～1.5公斤。
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医学微生物学实验 综合性实验三
Comprehensive Experiment NO:3
❖Environmental flora and Normal Bacterial flora on Skin
器材准备
浓汁标本1支，粪便标本1支；碘酒棉球1瓶，酒精棉球 1瓶，眼科镊子2把；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板5个。
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自然界中的微生物
❖ 已经发现的微生物超过13万5千种，被认为非常危险 的有600种，在人间传染的病原微生物380种。它们 存在于地球的各个角落，从寒冷的极地到炎热的赤 道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢）,均 有它们的踪迹 。
15
8 外科病房
15
9 外科ICU
15
102021/4/9 外科治疗室
15
6
手指皮肤的细菌学检查P41
❖ 在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受 到污染的机会也最多。一只外观比较“干净 ”的手， 可携带10万个细菌、200多种病毒。经手传播的疾病， 包括肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病， 以及一切可经手传播的疾病。
空气的细菌学检查P38 手指皮肤的细菌学检查P41
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空气的细菌学检查
空气是人类赖以生存的环境之一，也是重要的疾病
传播媒介。空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分 泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶 胶的形式悬浮于空中，使空气受到污染。
❖ 环境：不利于微生物生长。
❖ 种类：主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致 病菌的数量比较多。