PHA-767491联合IL-24基因对肝癌细胞的杀伤研究
人白介素24基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
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人白介素24基因重组腺病毒载体的构建与鉴定【摘要】目的构建含有人白介素24(hIL-24)基因的重组腺病毒载体,为下一步病理性瘢痕的基因治疗研究奠定实验基础。
方法采用基因工程技术将hIL-24基因的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,鉴定正确后在PAdEasy系统中进行细菌内同源重组,通过脂质体将正确重组体包裹并转染293A 细胞以包装并扩增病毒。
采用酶切及PCR方法对重组腺病毒进行鉴定。
结果酶切和PCR结果证实hIL-24基因重组腺病毒载体构建成功并可在293A细胞中表达,病毒滴度达107pfu/ml。
结论成功构建了有较强感染能力的含hIL-24基因的重组腺病毒载体。
【Abstract】ObjectiveTo construct and identify the recombinant adenovirus vector of human IL-24 gene for future gene therapy of pathological scar tissue. MethodsThe human IL-24 gene fragment was cloned into the shuttle plasmid pAdTrack-CMV to form the transfer vector by the method of homogenous recombination in bacteria of PAdEasy system. Then the right recombinant adenovirus was transfected into 293A cells using Lipofectine 2000. The recombinant adenovirus vector was identified by restriction enzyme digestion and polymerase chain reaction (PCR). ResultsRestriction endonuclease and PCR analysis confirmed that the human IL-24 gene was successfully inserted into the adenovirus vector. The titer of the recombinant adenovirus was 107pfu/ml. ConclusionThe recombinant adenovirus vector of hIL-24 was successfully constructed with highly infection.【Key words】Human IL-24 gene; Adenovirus; Pathological scar人白介素24基因(hIL-24)是一种肿瘤抑制基因,通过多种途径抑制、诱导、细胞的生长,对肿瘤细胞有选择性杀伤作用而对正常组织几乎无毒副作用,并且具有调节免疫系统的功能,是当今人们研究的热点[1]。
白介素-24与肺癌
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星竖壁堡盘查!!业至里垫鲞笙!塑!!!』里!型!:兰!!:鲨!!:∑!!:!!-盟!:!白介素一24与肺癌朱晔涵杨吉成胡华成【摘要】白介素一24(IL_24)即是黑色素瘤分化相关基因一7(mda_7),属于IL10家族成员,除具免疫刺激应答功能外,还被认为是一抑癌基因。
II,24可以抑制多种肺癌细胞的生长,其主要机制是提高肿瘤抑制基因表达,减少原癌基因的表达,促进捅亡,以及抑制肿瘤血管生成。
IL羽还具有增加肺癌细胞对射线敏感性的作用。
IL_24有望成为肿瘤临床综合治疗的有效手段之一。
【关键词】白介素24;黑色素瘤分化相关基因一7;肺癌1995年,Jiang等“3用消减杂交(subcractionhybridization)的方法寻找到能使人黑色素瘤细胞系(H01细胞)在特定干预因素下诱导其终末分化,并使其失去增殖能力的一组基因,统一命名为黑色素瘤分化相关基因1—25(mdal一25)。
其中mda一7具有免疫刺激应答功能,其基因位于人l号染色体q32区,与IL-19、IL一20、lL_22紧密相连,与1L_10家族(IL一10、IL19、IL一20、II。
一22、IL-26等)结构上具有相似性。
2。
41;在免疫功能上与IL_10存在拮抗作用,因此mda一7被重新命名为IL24,归人lI,一10家族脚。
IL一24基因除具有免疫刺激应答功能外,还有抑制多种肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等作用,因此又被认为是一种新的抑癌基因。
现就近几年II,24在肺癌领域的研究作一综述。
lIL一24抑制多种肺癌细胞的生长Mhashilkar等一。
观察了腺病毒介导mda一7基因(ad—mda7)转染后的5种肺癌细胞系H1299(p53基因缺失型)、H460、A549、H322(p53基因突变型)、H358的生长的情况。
研究发现,adm如7使这些肿瘤细胞生长均受到抑制,其中ad-mda7对H1299和H322细胞的杀伤敏感性最为显著,并呈现时间依赖性和剂量依赖性,H1299细胞在ad—mda7作用后12小时即出现凋亡征象。
抑癌基因IL-24在乳腺癌细胞中的表达及意义
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E x p r e s s i o n a n d s i g n i f i c a n c e o f t h e t u mo r s u p p r e s s o r g e n e I L- 2 4 i n b r e a s t c a n c e r c e l l s LI Zh e n g — y i , LI Ya h, GUO Su ~
( 吉 林 医药 学 院 检 验 系 , 吉林 吉林 1 3 2 0 ห้องสมุดไป่ตู้ 3 )
摘要 : 目的
研究 h l L 一 2 4 ( 人 白细胞介素 2 4 ) 对 MDA — MB - 2 3 1乳 腺 癌 细 胞 的 生 长 抑 制 作 用 。方 法
将 p D C 3 1 6 ~
h I I 一 2 4 一 E GF P转 染 人 乳 腺 癌 MD A- MB - 2 3 1细胞 , 用 R T — P C R法 、 We s t e r n b l o t 法 检测 I L - 2 4基 因 在 肿 瘤 细 胞 中 的 表 达 。结 晶 紫 染 色 法 检 测 I L 一 2 4基 因 的 表 达 对 乳 腺 癌 细 胞 的 生 长 抑 制 。 R T — P C R 检测 侵 袭 、 转 移相 关 基 因 的转 录 。 E l I S A 法 检 测 VE GF 、 A n g 一 1的分 泌 水 平 。 结 果 I L 一 2 4基 因 可 在 MD A— MB - 2 3 1 细 胞 中成 功转 录及 表 达 , 并 对 乳 腺 癌
中 国实 验 诊 断 学
2 0 1 3年 2月
第 1 7 卷
第 2期
人白介素24(IL-24)的表达与纯化及其初步活性评价
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克 隆抗体购 自A b e a m公 司; 层 析用凝胶柱 、 填料及 A K T A蛋
白纯化仪均购 自G E公 司。
1 . 2 方 法
1 . 2 . 1 I L - 2 4核苷酸的序列验证
将获取 的 p E T 2 1 a (+) /
个 具有抗肿瘤特性 的细胞 因子 J , 它可 以 由免 疫和非 免
度1 m mo  ̄ L ) 诱导 表达。8 0 0 0#mi n离 心收集 菌体 , 重悬
于破 菌 缓 冲 液 ( 5 0 m m o UL T r i s — H C 1 , 1 0 0 mm o UL N a C 1 p H 8 . 0 ) , 在 冰水浴 中超声破 碎菌体 , 离心 分别 收集 上清液 和沉淀 , S D S — P A G E检测 目的蛋 白的表达形式 。 1 . 2 . 3 I L 一 4 的高密度发酵 2 挑取单克隆菌株 B L 2 1 / p E T 2 1 a (+) / I L - 2 A - 于L B培养基 ( 含氨苄青霉素 1 0 0 g / m L ) 中培养 1 2— 1 4 h , 按5 %接种 量接种 于 L B培 养基 ( 含 氨苄 青霉 素 1 0 0 mL ) 培养 4~ 5 h , 作 为二级种子 液。配制 高密度发
价值 奠定 了基础 。 关键词 I L - 2 4 ; 发酵 ; 纯化 ; 复性 Q 5 1 文献标 志码 A 文章编号 1 0 0 5 - 8 9 1 5 ( 2 0 1 3 ) 0 4 - 0 3 1 4 — 0 4 中图分类号
白细胞介素 2 4 ( I n t e r l e u k i n - 2 4 , I L 一 2 4 ) , 又称 黑素瘤分化
阴、 阳离子交换 层析联用进行 纯化 。高密度发酵后单 位体积 目的蛋 白的表达量高达 1 8 0 0 m g / L 。经 阴、 阳离 子 交换层析 联用纯化后 的 回收率达 2 0 %, 纯度达 到 9 5 % 。获得高 纯度 I L - 2 4, 为进 一步研 究其生 物学 活性 及 临床
ING4及IL-24双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞体外抑癌增效作用研究
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关键 词 : I N G 4基 因 ; I L 一 2 4基因 ; 腺病毒载体 ; MG - 6 3人骨肉瘤 细胞 ; 肿瘤抑制
中图分类号 : R 3 9 2 . 1 1 文献标志码 : A
Gr o wt h - i n h i bi t i o n Ef fe c t o f Re c o mb i n a n t Ad e n o v i r u s Ex p r e s s i n g
g e n e o f a d e n o v i r u s g e n e C O — e x p r e s s i o n v e c t o r( A d — I N G 4 一 I L _ 2 4 ) , a n d a s i n g l e g e n e A d - I N G 4 a n d A d — I L 一 2 4 s i n g l e
( C o l l e g e o f Me d i c i n e , S o o c h o w U n i v e r s i t y , S u z h o u 2 1 5 1 2 3, C h i n a )
A b s t r a c t : Ob j e c t i v e B y u s i n g t h e t u m o r g r o w t h i n h i b i t o r y f a c t o r( m I N G 4 )a n d h u m a n i n t e r l e u k i n 2 4( I L 一 2 4 )
第1 4卷 第 3期
2 0 1 3年 6月
北华 大学学报(自然科学版 )
J O U R N A L O F B E I HU A U N I V E R S I T Y ( N a t u r a l S c i e n c e )
综述-IL24抗肿瘤研究进展
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hIL24抗肿瘤研究进展刘洪福,方哲平,朱昱,郑双温州医学院附属台州医院肝胆外科(浙江省,临海市,317000)【关键词】:IL24;抗肿瘤;肝癌;基因治疗原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,目前肝癌治疗以外科手术仍是肝癌切除的首选方案。
但是总体治疗效果不佳。
基因治疗的提出已经有很多年。
白细胞介素(interleukin,IL) 是一组由白细胞产生的在细胞间发挥作用的细胞因子,具有重要的免疫学功能。
白介素-24是近年发现的、具有细胞因子样特性的肿瘤抑制基因。
IL -24 基因能抑制肿瘤生长、诱导细胞凋亡。
本文就hIL24抗肿瘤研究进展作一综述1.白细胞介素24白细胞介素24(interleukin24,IL-24)又称黑色素瘤分化相关基因7(melanoma.differentiation associated gene7,mda7),最初于1995 年由美国哥伦比亚大学的Jiang等1通过差示杂交的方法从人干扰素(IFN)-β和瑞香素(mezerein,MEZ)诱导的人类黑色素瘤细胞中获得。
从其结构、染色体定位、碱基序列同源性及细胞因子样特性等方面考虑,MDA7于2002年被归于IL-10家族,正式命名为IL-24。
人IL-24基因是单拷贝基因,与IL-10家族成员IL-10、IL-19、IL-20等共同位于人类第一染色体上,定位于的1q32-41,由7个外显子和6个内含子组成,其mRNA长约2 kb,编码由206个氨基酸组成、相对分子质量约为23.8KD的蛋白质。
含有49个氨基酸的信号肽。
在脾,胸腺和外周血单核细胞(PBMC)等免疫器官中可以检测到IL-24的表达。
除此之外,一些非黑素细胞或造血起源的细胞,在适当的状态下也可以诱导IL-24mRNA一过性的表达。
IL-24表达可以特异性地诱导癌细胞凋亡,抑制原位肿瘤和转移瘤的生长,但对正常细胞没有影响。
研究发现,IL-24在正常黑色素细胞和早期黑色素瘤细胞中表达水平较高,随着肿瘤恶性程度的增加,它的表达逐渐减少,在转移性黑色素瘤细胞中几乎看不到IL-24的表达。
白细胞介素24抑制人宫颈癌细胞增殖的机制研究论文
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白细胞介素24抑制人宫颈癌细胞增殖的机制研究【摘要】目的:探讨人白细胞介素24(interleukin-24 il-24)抑制人宫颈癌细胞增殖的可能机制。
方法:用载有人白介素24cdna 的新型重组腺病毒(ad5f35-il24)及对照病毒ad5f35-egfp感染人宫颈癌细胞hela, 用蛋白质印迹方法检测il-24的表达水平,用mtt法和台盼蓝染色观察ad5f35-il24对该细胞系生长的影响;用western blot分析半胱氨天冬蛋白酶-3(cysteinyl-aspartate-specific protease 3 caspase-3)和聚adp核糖聚合酶(poly adp ribose polymerase parp)的活化情况。
结果:ad5f35-il24感染宫颈癌细胞后il-24蛋白高表达,宫颈癌细胞的生长受到明显抑制,其凋亡率明显升高,cleaved caspase-3和cleaved parp明显升高。
结论:il-24具有抑制人宫颈癌细胞增殖和诱导凋亡作用,其作用机制与激活依赖caspase-3的凋亡途径有关。
【关键词】白细胞介素24;基因治疗;宫颈癌;腺病毒感染【中图分类号】r711 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484(2012)07-0018-02the inhibitory effect of il-24 on cell proliferation of human cervical carcinomawang yue-hong1, xu hong-yan1,hu hong-bo1, wang chao2 (1, department of gynecology of yue bei people’s hospital affiliated shantou university medical college; shaoguan,512026, china; 2, clinical research center of hebei general hospital, shijiazhuang, 050071, china)【abstract】 objective:to investigate the effect ofad-il-24 on proliferation of cervical carcinoma cells and explore its probable mechanism. methods:after interleukin 24 genes was transfected into human cervical carcinoma cell strain hela with new type proliferation-defect recombinant adenovirus, proliferation of hela cells was investigated with mtt and trypan blue. expression of interleukin 24(il-24)proteins were detected with western blot. their apoptosis were detected with flow cytometer. it was analyzed with western blot that activation status ofcysteinyl-aspartate-specific protease 3 (caspase-3) and poly adp ribose polymerase (parp) . results:expression of interleukin 24(il-24) proteins were expressed highly after inflection of ad5f35-il24. while the proliferation of hela cells was suppressed heavily, their apoptosis and expression of cleaved caspase-3 and cleaved parp were elevated significantly. conclusion:interleukin 24 induces the proliferation suppression and apoptosis in human cervical carcinoma cells hela. its effect has related to action of apoptosis pathway of depending caspase-3.【key words】il-24; gene therapy; cervical carcinoma; adenoviridae infections白细胞介素24(interleukin-24,il-24)是白细胞介素10细胞因子家族中的新成员,研究发现il-24对人多种肿瘤细胞均有抑制作用[1-2],因此成为基因治疗的候选基因。
IL-24选择性诱导肿瘤细胞凋亡机制
![IL-24选择性诱导肿瘤细胞凋亡机制](https://img.taocdn.com/s3/m/0ecd7149814d2b160b4e767f5acfa1c7aa0082ad.png)
IL-24选择性诱导肿瘤细胞凋亡机制中国生物工程杂志ChinaBiotechnology,2005,25(9):5~9IL-24选择性诱导肿瘤细胞凋亡机制木杨瑶,蔡绍皙邹全明(1重庆大学生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044)(2第三军医大学临床微生物教研室重庆400038)摘要白细胞介素24/MDA-7基因是在黑色素瘤分化过程中被分离得到的,具有抑制黑色素瘤增生和促进其终末分化的能力.IL-24作为细胞因子不仅具有免疫调节功能,而且能选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡.这种抑制作用不依赖p53,Rb和p16等抑癌基因,对正常细胞没有影响.白细胞介素24具有显着的选择性抗肿瘤特性,成为肿瘤治疗的研究新热点.关键词白细胞介素24凋亡机制肿瘤治疗1995年哥伦比亚大学FisherPB用活跃增生的人HO.1黑色素瘤细胞cDNA文库与B—IFN和MEZ处理过的HO一1细胞cDNA文库差减杂交发现一个新的与黑色素瘤分化相关基因,即mda-7(melanoma differentiation—associatedgene7),并初步试验证明了MDA-7具有抑制黑色素瘤增生特性和在黑色素瘤进程中促进终末分化的能力.随后MDA-7一直作为肿瘤抑制物被研究,直到2002年,Caudell等【j用一系列的实验证实了MDA-7的细胞因子属性,命名为白细胞介素24(interleukin-24,IL-24),归于IL—l0家族.IL-24的表达在人细胞中存在较高的组织特异性,主要在免疫细胞亚群和黑素细胞中表达.Ellerhorst等-2J意外地发现在黑色素瘤病人淋巴结生发中心的树突状细胞中有强烈的IL-24免疫活性,暗示IL-24是树突状细胞源.IL-24具有以下细胞因子的特性:第一,染色体位置,与IL—l0,IL—l9和IL-20均定位于1号染色体32区;第二,转录后调节,其mRNA的水平受到mRNA3端非翻译区中Au富含序列调节;第三,其同源分子——FIsP和C49a/Mob5分别在大鼠和小鼠两种物种上表达;第四,蛋白结构方面,具有信号肽序列,IL—l0的标签序列和典型4一螺旋细胞因子家族结构; 第五,为分泌蛋白,能结合IL-20R1/IL-20R2和IL-20收稿日期:2005-05-09修回日期:2005-06-20}国家"863"计划资助项目(2001AA215161)}}电子信箱:****************R2/IL-22受体复合物,激活STAT等信号途径;第六,具有前Till细胞因子的功能,且IL.I24的细胞因子活性被IL—l0抑制.IL-24有206个氨基酸,其中N端有48个氨基酸为信号肽.带信号肽的IL-24分子量为23.8kDa,成熟蛋白的分子量18.4kDa.IL-24肽链上第85,99,126位氨基酸处分别有3个N.糖基化位点,还具有3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和3个蛋白激酶c磷酸化位点. Chang等模拟了IL-24空间结构,提出两种IL-24可能的结构模型:即由一个亚单位Cys-59和另一个的亚单位Cys-59共价键形成二聚体,或由Cys-59和Cys一107 之间的二硫键形成单体.迄今为止已有许多实验证明IL-24具有显着的抑制肿瘤的作用,能选择性地抑制多种肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,包括黑色素瘤,神经胶质母细胞瘤,骨肉瘤,乳腺癌,宫颈癌,结肠癌,肺癌,胃癌,鼻咽癌,前列腺癌等.这种抑制作用不依赖p53,Rb和p16等抑癌基因,且对正常细胞没有影响.IL-24选择性抑制肿瘤机制尚未完全清楚,目前认为通过多种途径发挥抑制肿瘤的作用.IL-24抗肿瘤的效果十分显着,成为肿瘤特异治疗药物的研究开发热点.1几-24选择性肿瘤抑制机制1.1激活线粒体参与的细胞凋亡途径IL-24诱导肿瘤细胞凋亡与改变线粒体通透性.以6中国生物工程杂志ChinaBiotechnologyV o1.25No.92005 及线粒体相关凋亡调节因子的含量和比例有关.Saeki等【]报道用重组复制缺陷腺病毒IL-24(Ad.IL-24)转染人乳癌细胞和非小细胞肺癌(non—smallcelllung cancer,NSCLC)细胞,均可抑制肿瘤细胞生长和诱导其凋亡,并检测到Bax亚家族成员BAX和BAK含量增加,Bcl-2亚家族成员BCL一2和BCL—XL含量减少,并且Ad.IL-24诱导或提高BAX表达不依赖p53,说明IL-24诱导肿瘤细胞凋亡与改变线粒体相关凋亡调节因子的含量和比例有关.Cao等J用Ad.IL-24转染MPM后,发现大于50%的MPM细胞在5天内死亡,MPM凋亡伴随着caspase_3裂解和BAX表达增加.也有特殊肿瘤细胞没有改变,如DU一145前列腺癌细胞缺乏Bax基因和H1299非小细胞肺癌细胞J.说明IL-24诱导调亡可以是依赖BAX模式,也可不依赖BAX模式,进一步表明IL-24抑制肿瘤的途经很复杂,也保证了其广泛的抑癌效应.Lebedeva等J实验中发现Ad.IL-24能促进线粒体发生机能障碍和活性氧簇(ROS)产生,抗氧化剂(N乙酰半胱氨酸和钛试剂)和线粒体通透性转变抑制剂(环胞素A和米酵菌酸)能够抑制Ad.IL-24诱导的线粒体机能障碍和凋亡,相反ROS的产生促进Ad.IL-24诱导凋亡,说明线粒体通透性改变和Ad.IL一24活性存在联系.1.2抑制肿瘤血管生成活性Saeki等体内实验证实在p53野生型和p53缺陷型的NSCLC皮下肿瘤中,腺病毒介导的IL-24过表达引起显着的肿瘤生长抑制.与对照组肿瘤相比,Ad.IL-24或IL-24质粒转化的肿瘤组实体更小,血管生成更少,暗示IL-24具有抗血管形成活性.用Ad.IL-24转染不表达内源IL-24的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)显示完全抑制血管形成,而对照组Ad.p16和Ad.1uc无抑制.在肺癌模型中Ad.IL-24转染肿瘤的血管数量明显减少,凋亡数量增加.一数据显示血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子(TGF—B)下调.Ramesh等J报道体外实验发现分泌型IL-24抑制VEGF和TGF—B诱导的内皮细胞分化和移动,其抑制作用比内皮他丁(endostatin),IFN一^y和IP—l0还强l0~50倍,且不受IFN一^y或IP—l0介导.IL-22R介导这种抗血管生成活性,用IL一24与IL~2R结合的阻断抗体可以消除对内皮细胞分化的抑制.在鼠异种移植模型上IL_24能抑制肺肿瘤生长,肿瘤微血管密度和血红素含量减少,表明IL-24具有肿瘤血管生成抑制活性.1.3JAK/STAT3途径,PKR途径与p38MAPK途径IL-24可诱导p38MAPK,PKR和STAT3等多种信号转化途径,其中p38MAPK和PKR是IL-24介导凋亡必需的.Kotenko等JIL-24处理黑色素瘤细胞发现STAT3蛋白表达增加,磷酸化的STAT3移向核.利用抗IL一24抗体可以阻断STAT3磷酸化和向核运动.为排除其他细胞因子的影响,用抗IL-6或d—IFN抗体处理黑色素瘤细胞,IL-24同样诱导STAT3磷酸化和向核运动.说明在黑色素瘤细胞中IL-24能活化JAK/STAT3途径.Pataer等【加J报道Ad.IL-24诱导并激活PRK,引起真核翻译起始因子2(elf-2ct)的d亚基磷酸化,使elf-2ct活性下降,从而抑制蛋白质总体翻译水平,进而诱导肺癌细胞凋亡.此外,Ad.IL-24介导的PRK活化还会引起Tyk2,Statl,Stat3和p38MAPK等下游靶的磷酸化,并涉及死亡受体F~/FADD途径的活化,伴有caspase-8和Bid裂解进而导致后续的caspase_3和caspase_9活化.Sarkar等【¨J报道Ad.IL-24转染不同黑色素瘤后2~3d观察到GADD家族基因的mRNA和蛋白的表达呈时间和剂量依赖性增加,其中GADD153, GADIM5T,GADIM5a和GADD34较明显.用p38MAPK途径选择性抑制剂SB203580处理黑色素瘤细胞可有效抑制Ad.IL-24诱导的GADD家族基因的蛋白表达,阻止Ad.IL介导细胞死亡.证实了借助于p38MAPK途径Ad.IL-24诱导GADD家族基因表达增加,从而引起人黑色素瘤细胞选择性凋亡.Lebedeva等J用Ad.IL-24转染正常黑素细胞,FMS16无限黑素细胞系和FO—l黑素瘤细胞,均能表达IL-24蛋白并分泌到介质中.Ad.IL-24转染FMS16细胞没有引起p38MAPK的磷酸化和细胞凋亡,而转染FO一1黑素瘤细胞后p38MAPK发生磷酸化并诱导凋亡. 为什么Ad.IL-24不能诱导FMS16细胞凋亡?可能是相对于正常细胞,癌变细胞的p38MAPK途径被增大,因而对基因毒性刺激敏感;GADD家族中GADD34和GADD153都可以诱导凋亡,但在细胞中它们相互抑制平衡.FMS16细胞中GADD34的mRNA基础表达水平高于黑色素瘤细胞,而GADD34对GADD153的表达呈负调节,所以在FMS16细胞中GADD153表达受抑制,GADD34的高表达水平也可能是FMS16细胞耐受Ad. IL_24诱导凋亡的原因.1.4凋亡的基因调控Madireddi等rj_从人胎盘基因组文库中分离IL-24启动子区域.GCG序列分析鉴定多个AP.1和C/EBP2005.25(9)杨瑁等:IL选择性诱导肿瘤细胞凋亡机制7 转录因子识别位点,而AP-1/eJun或C/EBP的异位表达能显着提高黑色素瘤细胞IL-24启动子的表达. cJun缺失突变体(TAM67)就没有提高IL-24启动子的能力.cJun和C/EBP家族成员-C/EBP是生理上相关的转录因子,其表达与IL-24mRNA表达正相关.电泳迁移率变换法分析来自终末分化黑色素瘤细胞的核蛋白提取物,发现AP.1和C/EBP结合到II启动子区域,进一步证实IL-24基因调控机制.Aggarwal等[H]报道IL-24单独稳定或瞬时转染293细胞能显着增加TNF诱导的NF.KB活性,出现DNA粘稠,p65易位,以及NF.KB依赖性报告基因的表达.胞质IL-24 (不含分泌信号肽)也能有效使TNF受体相关死亡结构域和TNF受体相关因子-2诱导的NF-KB报告蛋白激活.IL-24的稳定表达可增加TNF诱导NF-KB调节基因产物表达,如细胞周期蛋白(D1)和环氧化酶2 (COX2).Mhashilkar等_l在乳腺癌和肺癌细胞中Ad.IL-24下调8-连环蛋白和PI3K信号途径.Ad-IL24 转染处理后,肿瘤抑制基因产物E-钙粘蛋白,APC, GSK-313和PTEN的表达增加,原癌基因产物8-连环蛋白减少.Ad.mda7还引起细胞内8一连环蛋白从核到质膜的重新分布,导致TCF/LEF转录活性和E.钙粘蛋白与-连环蛋白的复合物增加,-连环蛋白进一步减少.PI3K信号途径的成员包括p85PI3K,FAK,ILK-1,Akt和-PLC表达下调,PI3K拮抗物PTEN增加.1.5对iNOS表达的负调控NO在生理和病理过程中是一个重要的具有不同作用范畴的生物介质.NO是由一组一氧化氮合酶(NOS)分解精氨酸得来的.NOS有两种亚型,其中iNOS为非钙依赖型,产生较高的NO(nmo1)且持续时间延长.有研究表明在多种人恶性肿瘤包括黑色素瘤中存在NO和iNOS.Ekmekcioglu等【J报道iNOS内源表达增强促进黑色素瘤的发生,侵袭和转移.NO具有肿瘤促进和抑制双重效应,取决于局部的NO浓度, 以及NO与肿瘤中其它分子的交互作用,最重要的可能是肿瘤微环境中的细胞因子.Ad.IL-24转染到恶性黑素瘤后,IL-24表达将降低iNOS表达,而用重组人IL-24 蛋白处理的黑色素瘤细胞也引起iNOS表达下调,表明IL-24表达与肿瘤iNOS表达呈负相关.但对诱导iNOS 表达的分子信号机制尚未完全清楚.编码iNOS基因的启动子区含有TATA盒,为NF-Kb转录因子和干扰素调节因子(IRF)的共有序列.可能的机制之一是NF-KB广泛分布于多种细胞中,与其抑制分子IKBct结合,无转录激活活性.IL-24处理的黑色素瘤细胞中IKBct降解受到抑制,NF.KB活性进一步受到抑制,进而减少iNOS基因表达.可能的机制之二是IL-24处理的黑色素瘤细胞IRF-1表达下调,同时伴随IRF-2表达上调,竞争性抑制IRF-1活性,而IRF-1调节iNOS诱导表达.1.6干扰细胞周期Ekmekcioglu等["]报道被Ad.II-,转染的黑色素瘤细胞系和NSCLC细胞系中细胞周期中G2/M期细胞比例增加,而在正常黑色细胞和内皮细胞中没有细胞周期停滞,说明Ad.IL-24能阻滞肿瘤细胞周期的进行, 而对正常细胞的细胞周期没有影响.2结语综上所述,IL-24诱导肿瘤细胞特异性凋亡的机制尚不完全清楚,而且还相当复杂.诱导癌细胞凋亡的机制包括内部的(线粒体介导)和外部的(死亡受体介导)途径均在IL-24介导的凋亡中起作用,并依赖特殊细胞环境.其次,从上述文献分析IL-24能够通过不同的途径引起肿瘤细胞凋亡启动:IL-24通过结合细胞膜上已知的IL-20R1/IL-20R2与IL-22R1/IL-20R2受体复合物,激活JAK/STAT和Ras-MAPK等途径,引起多种信号蛋白和转录因子的磷酸化而发挥功能;在一些特殊细胞中(如癌细胞)可能还存在尚未发现的其它IL-24受体,IL-24与未知受体的结合激活JAK/sTAT途径或一种未知途径,诱导变异细胞选择性凋亡,而正常细胞中不存在这种受体,故不受影响;异常细胞内的IL-24可能经另一种未知途径诱导直接细胞凋亡. Sauanel等_l的试验证实了这点,他们用腺病毒携带无信号肽的IL-24转染前列腺癌细胞,由于缺失信号肽IL-24不能分泌到细胞外,其诱导细胞凋亡的效果与Ad.IL-24相当,也进一步证实IL-24可以不依赖受体发挥作用.Introgen公司与德克萨斯大学合作研制基因治疗制剂Ad.IL-24(商品名为INGN241)已经进入Ⅱ期临床试验.体内外试验和临床实验均证实了II-,显着的抗肿瘤效果,相信随着诱导肿瘤细胞凋亡机制的深入研究,IL-24的应用前景将更广阔.参考文献[1]CaudellEG,MummJB,PoindexterN,eta1.Theproteinproductofthetumorsuppressorgene,me|t~lOllladifferentiation.8中国生物工程杂志ChinaBiotechnologyV o1.25No.920O5 associatedgene-7,exhibitsimmunostimulatoryactivityandis dasigTmtedIL-24.JImmunol,2002,168(12):6041—6O46 [2]EllerhorstJA,PrietoVG,EkmekeingluS,eta1.LossofMDA-7expressionwithprogressionofmelanoma.JClinOneol, 2002,20(4):1069—1074[3]SunilC,BryanRS,SuhendanE,eta1.MDA-7/IL-24isa uniqueeytokine—tumorsuppressorintheIL-10family.Inter Immunopharmacology,2004,4(5):649—667[4]SaekiT,MhashilkarA,SwansonX,eta1.Inhibitionofhuman lungcancergrowthfollowingmda-7geneexpressionv/vo.Oneogene,2002,22(29):4558-4566[5]CaoX,MohuiddinI.Adenoviraltran~erofmda-7leadsto BAXup—regulationandapoptosisinmesothehomacells,andis abrogatedbyover-expressionofBCL-XL.MolMed,2002,12 (8):869~876[6]LebedevaIV,SuZZ,SarkarD,eta1.Melanoma differentiationassociatedgene-7,mda-7/interleukin-24, inducesapoptosisinprostatecancercellsbypromoting mitochondrialdysfunctionandinducingreactiveoxygenspecies. CancerRas,2003,63(23):8138—8144[7]SaekiT,MhashilkarA.ChadaS,eta1.Tumor-suppreasive effectsbycelllung~2057cancel"cellv/tromda-7genenan『erinnon—smallGeneTher,2000,7(23):2051[8]RamashR,MhashilkarA,TanakaF,eta1.MDA-7/IL-24isa novelligandthatregulatesangingenasisviatheIL-22receptor. CancerRes,2003,63(16):5105~5113[9]KotenkoSV,IzotovaLS,MiroclmitchenkoOV,eta1. Identificationofthefunctionalinterleukin-22(IL-22)receptor complex:theIL一10112chain(IL一10Rbota)isaconlinonchain ofboththeIL一10andIL-22(IL-10一relatedTcell-derived induciblefactorIL-TIF)receptorcomplexes.JBiolChem. 2001,276(4):2725—2732[10]PataerA,V orburgerSA,txail~erofthemelanonlagene-7 inducesapoptasisoflungcancercellsviaup-regulationthe TheMechanismofTumorCellsApo double—strandedRNA—dependentproteinkinase(PRK).Cancer Res,2002,62(8):2239~2243[11]SarkarD,SuZZ,LebedevaIV,eta1.mda-7/IL-24mediates selectiveapoptosisinhumanmelalionlacellsbyinducingthe coordinatedoverexpreasionoftheGADDfamilyofgenesby meansofp38MAPK.ProcNailAcadSciUSA,2002,99(15): 10054~10059[12]LebedevaIV,SuZZ,ChangY,eta1.Thecancergrowth suppressinggenemda-?inducesapoptosisselootivelyinhuman mel$fflOtl~cells.Onengene,2002,21(5):708-718[13]MadireddiMT,DentP,FisherPB.AP-1andC/EBP transcriptionfactorscontributetomda-7genepromoteractivity duringhumanmelaliomadifferentiation.JCellPhysiol,2000,185(1):36~46[14]AggarwalS,TakadaY,MhashilkarAM,eta1.Melanomagene-7/lL-24geneenhancesNF—kappa BactivationandsuppressesapoptosisinducedbyTNF.Jlmmunol,2004,173(7):4368~4376[15]MhashilkarAM,StewartAL,SiegerK,eta1.MDA-7 negativelyregulatesthebeta—cateninandPI3Ksignaling pathwaysinbreastandlungtunlorcells.MolTher,2003,8(2):207~219[16]EkmekeingluS,EllerhorstJ,MummJB,eta1.Negative associationofmelanonladifferentiationassociatedgene(mda-?) andinduciblenitricoxidesynthasc(iNOS)inhumanmelanoma:MDA-7regulatesiNOSexpressioninmelanomacells.MolCancerTher,2003,2(1):169~173[17]EkmekeingluS,EllerhorstJ,MhashilkarAM,eta1.Down—reSut~melanonladifferentiationassociatedgene(mda-7) expressioninhumanmelanomas.IntJCancer,2001,94(1):54—59[18]SauanelM,IrinaVL,SuZ.eta1.Melanomadifferentiationassociatedgene-7/lmerleukin-24promotestumorcell—specificapoptosisth~ushbothsecretoryandnonaseretorypathways.CancerResearch,2004,64(5):2988~2993SelectivelyInducedbyIL-24Y ANGJunCAIShao—xiZOUQuan—ming2(1KeyImJ~rat.ryofBiomechanies&TissueEngineering,ChongqingUmversityChon gqing4OOO44,Chi|la)(2DepartmentofChniealMicrobiology,ThirdMilitaryMedicalUniversityChongqing400 038,China)AbstractTheinterleukin-24/melanoinadifferentiationassoc1'atedgene-7(mda-7)genewasisolatedby2005,25(9)杨琚等:IL-24选择性诱导肿瘤细胞凋亡机制9 virtueofbeinginducedduringmelanomadifferentiation,itwasresultedingrowtharrestandte rminaldiferentiationinthemelanomacellline.ASacytokine,IL-24isauniquemuhifunctionalcytok ineintheIL一10 familyandmayhavepotentantitumorutilityinaclinicalsetting.IL-24notonlyhasthefunctio nofimmunestimulation.butalsoinducesselectivelyapoptosisinmosttumorcells.Theapoptoticeffectso fIL_24areindependentof053,Rb,p16,butnormalcellswereunaffectedbyit.Theapparentlyuniqueand intriguinganticancerpropertiesofIL-24.hasmadeittheresearchfocusofthecancertherapy.IL-24prote inincludeimmunestimulation,antiangiogenesis,regulatesiNOSexpression,G2/Mcellcyclearrestan dreceptor—mediatedcytotoxicity.ThenewresearchprogressiononthisfieldWasoutlinedhere. KeywordsInterleukin-24ApoptosismechanismCancertherapy科学出版社新书生物实验室管理手册AttheHelm:ALabortoryNavigator[美]K.巴克着黄伟达王维荣等译钟扬南蓬校ISBN7-03-015280—82005年9月出版定价38.0o元本书通过对众多科研管理人员的访问及相关资料的搜集,运用生动而丰富的例证,为实验室管理者组建,领导研究团队,管理人事和机构,申请科研经费,同时还要出科研成果以保持学术的领先地位提供了全面的指导,讨论了一系列管理中具有挑战性的问题以及可以促进成功的技巧,增强了实验室管理者的经营管理意识以及相应的知识储备.分子生物学实验室工作手册AttheBench:ALaboratoryNavigator[美]K.巴克着王维荣黄伟达等译2005年9月出版ISBN7—03—015277—8定价:48.0o元本书全面论述分子生物学实验室工作,内容涵盖实验室机构运作,软硬件配置以及实验操作过程,结果记录,数据提呈等方面,是实验室工作的指导性手册.为加强实验室的建设与管理,帮助实验室人员独立熟悉工作环境,更好地完成对实验室工作信息的收集,整理,统计与交流等方面发挥积极的作用.本书翻译忠实于原文,最大限度地反映了原书的风格与韵味.可作为高等院校高年级学生,研究生,实验室管理者以及分子生物学实验室工作人员的参考用书.经济全球化与生态安全戴星翼唐松江马涛着2005年9月出版ISBN7—03—015665一X定价:39.0o元本书阐述了经济全球化与生态安全的关系,将社会热点——生物入侵作为经济全球化过程中的生态安全案例,探讨了中国在全球经济分工和生态安全协作中的权利和义务.可作为环境科学,生态学,经济学和国际贸易等领域教研人员和学生的参考用书.生态服务的价值实现戴星翼俞厚未董梅着2005年9月出版ISBN7—03015666—8定价:40.0o元许多环境生态因子具有作为自然物品和生态服务提供者的复杂功能,这些功能在人类利用过程中会出现矛盾冲突,即相对稀缺,也会因为拥挤而使这些因子的稀缺程度同时上升,即绝对稀缺.由于种种原因,市场在应对自然物品的稀缺性时较为有效,而在生态服务问题上往往失灵,这是探讨生态服务价值实现的基本出发点.本书首先从自然科学的角度出发,系统梳理生态服务的性质,类型和意义,然后再基于价值实现的角度,对生态服务进行了重新分类,并探讨了各类生态服务要素价值实现的路径,书末分析了我国目前生态服务存在的两大问题,即大城市生态服务系统的构建和区域之间生态服务的关系.欢迎各界人士邮购科学出版社各类图书(免邮费).~b2:100717北京东黄城根北街16号科学出版社科学分社,联系人:阮芯联系电话:010—64034622(带传真).欢迎致电索要书目,010—64012501,更多精彩图书请登陆网站http://www.1ifescience,。
IL-24基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞促进宫颈癌CaSki细胞凋亡
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IL-24基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞促进宫颈癌CaSki细胞凋亡潘巍巍;曹利仙;徐营;沈忠飞;易发平;宋方洲【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2014(030)001【摘要】目的:探讨白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)基因重组腺病毒载体转染的树突状细胞(dendritic cells,DCs)是否在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocytes,CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应.方法:分离培养小鼠未成熟DCs,将已成功构建的带有IL-24基因的重组腺病毒感染体外培养的小鼠未成熟DCs,提取CaSki细胞裂解物负载DCs,制备DC疫苗,Western blotting 检测IL-24蛋白的表达;PE-Annexin V和Western blotting检测细胞凋亡及cleaved caspase-3表达;克隆形成实验检测克隆形成能力;裸鼠荷瘤模型体内研究带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs在体外诱导的CTLs对宫颈癌CaSki 细胞的杀伤效应.结果:Western blotting检测IL-24蛋白高表达;DCs疫苗诱导产生的CTLs后与CaSki细胞共培养,对CaSki细胞生长具有明显的抑制作用,DCs疫苗诱导产生的CTLs促进CaSki细胞凋亡,增加cleaved caspased-3蛋白表达,克隆形成实验检测该疫苗具有抑制CaSki细胞形成克隆的能力.裸鼠的成瘤实验表明,带有IL-24基因的重组腺病毒载体转染DCs可以抑制体内肿瘤的形成,促进肿瘤细胞凋亡.结论:IL-24基因重组腺病毒感染DCs制备的DCs疫苗可诱导CTLs,从而抑制宫颈癌CaSki细胞增殖,并促进其凋亡.【总页数】7页(P41-47)【作者】潘巍巍;曹利仙;徐营;沈忠飞;易发平;宋方洲【作者单位】嘉兴学院医学院生物教研室,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院生物教研室,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院生物教研室,浙江嘉兴314001;嘉兴学院医学院生物教研室,浙江嘉兴314001;重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室,重庆400016;重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室,重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R373.39【相关文献】1.含人AFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染树突状细胞瘤苗的制备 [J], 杨静悦;曹大勇;刘文超;斯小明2.重组腺病毒载体介导人DeltaNp73α转染对树突状细胞凋亡的抑制作用 [J], 胡义杰;范士志;蒋耀光;李志平;陈建明;何勇3.基因重组腺病毒载体与慢病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞的对比 [J], 李诗鹏;李强;石正松;蔡伟良;宁寅宽;陶旋;4.基因重组腺病毒载体与慢病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞的对比 [J], 李诗鹏;李强;石正松;蔡伟良;宁寅宽;陶旋5.小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 夏迪;钱倩;刘志成;谭鸣鸣;丁媛;苏欣;孙文逵;施毅因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
IL-24基因对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡作用的开题报告
![IL-24基因对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡作用的开题报告](https://img.taocdn.com/s3/m/57af2a83d4bbfd0a79563c1ec5da50e2524dd1fb.png)
腺病毒介导人MDA-7/IL-24基因对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡作用的开题报告一、研究背景与意义鼻咽癌是中国南方地区高发的一种恶性肿瘤,发病率远高于其他地区。
治疗鼻咽癌的主要手段为根治性手术和放疗,但这些治疗方式有一定的局限性,因为鼻咽癌常常难以早期发现,容易发生转移和复发,而且手术和放疗常常会导致患者的质量生活受到严重影响。
基因治疗是近年来兴起的一种新型治疗方法,利用基因载体将治疗基因导入肿瘤细胞内,从而达到控制肿瘤增长和扩散的目的。
人MAD-7/IL-24基因是一种新型肿瘤抑制因子,具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,可以作为一种基因治疗手段用于治疗鼻咽癌。
腺病毒是一种广泛应用于基因治疗中的基因载体,其具有高效透过细胞膜、在细胞内高效表达外源基因等优点,能够很好地满足基因治疗的要求。
因此,本研究将采用腺病毒作为基因载体,介导人MDA-7/IL-24基因对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡作用。
二、研究方法1. 细胞培养:使用CNE细胞并进行培养、传代。
2. 基因载体构建:构建腺病毒载体,将人MDA-7/IL-24基因插入载体中。
3. 病毒包装:将腺病毒载体转染至293T细胞中,将制得的病毒粒子纯化。
4. 病毒感染:将病毒粒子感染至CNE细胞中。
5. 细胞凋亡分析:采用Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡率。
三、预期结果本研究预期能够成功构建介导人MDA-7/IL-24基因的腺病毒载体,并将其导入CNE细胞中,从而诱导CNE细胞发生凋亡。
预计实验结果将反映出人MDA-7/IL-24基因对CNE细胞的凋亡作用,为鼻咽癌的基因治疗提供理论依据和实验基础。
IL-24诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的研究
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IL-24诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的研究摘要】目的探讨IL-24对鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的影响,为临床应用提供理论依据。
方法取鼻咽癌CNE-2Z细胞株,进行细胞培养;采用碘化丙锭染色、流式细胞仪分析和细胞核形态检测两种方法同时检测体外培养的CNE-2Z细胞株增殖、分化过程中的凋亡状况;观察IL-24对它们的影响,并进行了定量分析。
结果 IL-24可诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株的凋亡。
结论在培养的48小时,IL-24 50ng/m1实验组细胞凋亡程度较没加IL-24的对照组明显增加。
结论:IL-24可呈时间和剂量依赖性的诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞株的凋亡。
【关键词】白细胞介素24 鼻咽癌 CNE-2Z细胞株凋亡The role of interleukin-24 on apoptosis of human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell strain CNE-2Z【Abstract】 Objective:To investigate the effects of interleukin-24(IL-24)on apoptosis of human nasopharyngeal carcinoma(NPC) cell strain CNE-2Z.Methods:Apoptosis of CNE-2Z was assayed by propidium iodine staining and flow cytometric analysis.Results: :IL-24 partly induced apoptosis of CNE-2Z.At the cultured 48h,the apoptotic percentages of the experimental group (IL-24 50ng/ml) was substantially higher than that of the contrast group(0 ng/m1) .Conclusion: IL-24 can induce NPC cell strain CNE-2Z apoptosis in a dose-and time –dependent manner.【Key words】 interleukin-24 NPC CNE-2Z apoptosis不鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC) 是我国华南地区、东南亚其它国家和地中海盆地的高发性恶性肿瘤, 传统的放疗易出现局部复发及远处转移, 因此寻找更有效的鼻咽癌治疗药物具有深远意义。
PHA-767491抑制肝癌细胞生长的研究
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PHA-767491抑制肝癌细胞生长的研究李伟;尚世强;楼金吐;陈黎勤;李仲杰;魏旭斌【期刊名称】《浙江理工大学学报》【年(卷),期】2013(030)003【摘要】利用不同浓度的PHA-767491对多种肝癌细胞株进行杀伤研究,探讨PHA-767491对肝癌细胞的抑杀作用.MTT实验结果表明,PHA-767491能显著抑制多种肝癌细胞株的增殖.Hoechst 33342染色结果也表明PHA-767491可以诱导肝癌细胞进入凋亡.表明PHA-767491对肝癌细胞具有较高的杀伤作用,可能具有广阔的应用前景.【总页数】3页(P364-366)【作者】李伟;尚世强;楼金吐;陈黎勤;李仲杰;魏旭斌【作者单位】浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室,杭州310003;浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室,杭州310003;浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室,杭州310003;浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室,杭州310003;浙江大学医学院,杭州310052;浙江理工大学生命科学院,杭州310018【正文语种】中文【中图分类】Q279【相关文献】1.PHA-767491联合IL-24基因对肝癌细胞的杀伤研究 [J], 李伟;张静;骆菁菁;胡徐庞;杨耿兵;王刚;娄文加;钱程;刘立2.miR-144t通过对肝细胞生长因子的调控抑制肝癌细胞MHCC97H的增殖、迁移及延缓肝癌进展 [J], 樊赟;樊纪民;卞华3.脂肪酸酰胺水解酶抑制剂URB597对人肝癌细胞MHCC97H生长和侵袭的抑制作用及机制研究 [J], 杨锐;徐阿晶;刘艳;陆晓彤;张健;卜书红4.PHA-767491抑制CDC-7的表达在子宫内膜癌ishikawa细胞系中的作用研究[J], 王庆玮;丁锦;吕爰爰;罗贤臣;倪观太5.树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫抑制裸鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生与生长 [J], 李明松;袁爱力;张亚历因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
抑癌基因IL-24在乳腺癌细胞中的表达及意义
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抑癌基因IL-24在乳腺癌细胞中的表达及意义李正祎n;李艳;郭素红;孙可欣;李欣;袁忠海【摘要】Objective To explore the effect of IL-24 gene on proliferation of human breast cancer cell line MDA-MB-231. Methods The recombinant shuttle vector pDC316-hIL-24-EGFP was transiently transfected into human breast cancer cell line MDA-MB-231 with lipofectaminc. Both IL-24 mRNA and protein were detected by RT-PCR and Western blot respectively. The inhibition of cell proliferation was evaluated by crystal violet staining assay. The expression level of VEGF and Ang-1 gene were detected by ELISA. Results IL-24 was proved successfully transcribed and expressed in MDA-MB-231 cells. The IL-24 expression inhibited MDA-MB-231 cells proliferation. The mRNA expression of MMP-2 and MMP-9 reduced in IL-24 group compared with PBS+pDC316-EGFP group. The expression of VEGF and Ang-1 were down. Conclusion IL-24 gene ovcrcxprcsscd was able to effectively inhibit the proliferation,invasion, metastasis and angiogencsis of breast cancer cells.%目的研究hIL-24(人白细胞介素24)对MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长抑制作用.方法将pDC316-hIL-24-EGFP转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用RT-PCR法、Western blot法检测IL-24基因在肿瘤细胞中的表达.结晶紫染色法检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制.RT-PCR检测侵袭、转移相关基因的转录.ELISA法检测VEGF、Ang-1的分泌水平.结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞增殖有明显抑制作用.能明显下调MMP-2、MMP-9的转录.VEGF、Ang-1表达下降.结论 IL-24对乳腺癌细胞有明显的抑制生长、侵袭转移、血管生成的作用.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2013(017)002【总页数】4页(P287-290)【关键词】IL-24基因;乳腺癌;基因转染【作者】李正祎n;李艳;郭素红;孙可欣;李欣;袁忠海【作者单位】吉林医药学院,检验系,吉林,吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R737.9随着我国生活水平的不断提高,近年来乳腺癌增长趋势明显,并且出现了低龄化趋势[1]。
IL-24基因联合去甲斑蝥素对A549人肺癌细胞凋亡的影响
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IL-24基因联合去甲斑蝥素对A549人肺癌细胞凋亡的影响李正祎;李红;郭素红;姜晓明;李妍【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2016(32)21【摘要】目的:研究IL-24基因与NCTD联合作用对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法:IL-24和(或)NCTD干预A549细胞24 h后,MTT法检测A549细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;Western blot法检测Bax、Bcl-2、VEGF和HSP-70蛋白表达水平.结果:IL-24联合NCTD作用24 h对A549细胞增殖抑制率为60.3%,与NCTD/IL-24组比较差异有显著性;IL-24联合NCTD作用对A549细胞凋亡率为32.5%;IL-24和(或)NCTD作用A549细胞后Sub-G1期细胞增多;NCTD/IL-24作用24 h后Bax表达上调,Bcl-2、VEGF表达下调,联合组Bax 蛋白表达上调,Bcl-2、VEGF、HSP-70表达下调,尤其VEGF、HSP-70表达下调明显.结论:IL-24联合NCTD对A549细胞有协同抑制作用.【总页数】5页(P3467-3471)【作者】李正祎;李红;郭素红;姜晓明;李妍【作者单位】132013 吉林医药学院检验学院;132013 北华大学第二附属医院急诊科;132013 吉林医药学院检验学院;132013 吉林医药学院检验学院;132013 吉林医药学院检验学院【正文语种】中文【相关文献】1.热疗联合依托泊苷对非小细胞肺癌A549细胞凋亡相关基因的影响 [J], 刘鑫;汪伟;王晓东;杨阳2.人骨髓间充质干细胞表达外源性IL-24基因对肺癌细胞A549增殖的影响 [J], 祁秋干;周清华;李印;陈霏;秦建军3.槐耳清膏联合顺铂对人肺癌A549细胞和A549/DDP细胞Bax、Bcl-2及Survivin基因表达的影响 [J], 沈云飞;詹建伟4.COX2抑制剂联合KDM1A基因对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用研究 [J], WU Jun;WANG Xiuli;ZUO Xuejiao;LEI Xingyun;LIU Wen5.白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响 [J], 涂硕;韦星;赵小曼;余乐涵;万福生因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
小分子化合物PHA-767491对白血病K562细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用
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小分子化合物PHA-767491对白血病K562细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用汪珊珊;彭朝阳;张宁波;陈丽芳;张丽沙;李伟【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2015(0)3【摘要】目的探讨PHA-767491对白血病细胞K562的抑制能力及分子机制。
方法采用不同浓度的PHA-767491作用于K562细胞,利用MTT法在不同的时间点检测细胞存活率,RT-PCR及Western blot检测PHA-767491诱导的凋亡信号途径,hochest染色及流式细胞术检测K562的凋亡水平。
结果PHA-767491显著抑制K562细胞的增殖,进一步结果表明PHA-767491可以显著下调抗凋亡蛋白Xiap和Mcl-1蛋白的表达水平,诱导K562细胞通过Caspase途径进入凋亡。
结论 PHA-767491可以通过诱导K562细胞凋亡而显著抑制其增殖,为今后的白血病治疗提供了一种新的备选药物。
【总页数】4页(P238-241)【关键词】Cdc7激酶;PHA-767491;K562;凋亡【作者】汪珊珊;彭朝阳;张宁波;陈丽芳;张丽沙;李伟【作者单位】浙江萧山医院肿瘤放疗科;浙江大学医学院附属儿童医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R733.7【相关文献】1.复方君子汤对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的作用 [J], 郑大斌;李东鸿2.桔梗皂苷D抑制人白血病细胞株K562的增殖和诱导凋亡的作用 [J], 代群;葛宇清;王海兵;刘培3.β-七叶皂甙钠对K562白血病细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用 [J], 牛泱平;钱俊青4.右旋柠烯抑制入白血病K562细胞增殖及诱导凋亡作用的研究 [J], 路晴;郭晓铭;王玉川;刘正娟;冯秉安5.蝙蝠葛活性成分对人白血病K562细胞株具有抑制增殖和诱导凋亡作用的分析[J], 姜峰玉;孙抒;李冰;辛悦因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
靶向肿瘤腺病毒介导IL-24抑制人胃癌细胞增殖
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靶向肿瘤腺病毒介导IL-24抑制人胃癌细胞增殖曹亚玲;黄茂涛;黄一;季代金;冯早明;李学成;陈陵【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2014(024)001【摘要】目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子特异驱动IL-24的重组腺病毒(Ad-phTERT-IL-24)对人胃癌SGC-7901细胞增殖及侵袭能力的影响.方法将Ad-phTERT-IL-24感染人胃癌SGC-7901细胞,采用荧光实时定量PCR及Western blot检测IL-24表达;采用CCK-8方法检测细胞生长曲线;采用Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果与以PBS代替病毒液处理的SGC-7901细胞相比,感染Ad-phTERT-IL-24的SGC-7901细胞内IL-24 表达明显升高(P<0.01),于第5、6 d吸光度明显下降(P<0.05),细胞侵袭能力亦显著降低(P<0.05).结论 Ad-phTERT-IL-24可有效上调人胃癌SGC-7901细胞IL-24表达,进而抑制细胞增殖及侵袭能力.【总页数】4页(P9-12)【作者】曹亚玲;黄茂涛;黄一;季代金;冯早明;李学成;陈陵【作者单位】610021,成都,解放军452医院消化内科;610021,成都,解放军452医院消化内科;解放军324医院消化内科;610021,成都,解放军452医院消化内科;610021,成都,解放军452医院消化内科;成都军区峨眉疗养院;解放军324医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R739【相关文献】1.RGD修饰的腺病毒介导LIF和IL-24双基因共表达对MEG01白血病细胞的抑制作用∗ [J], 李帅;郁心;何峰;朱霞霞;杨吉成;盛伟华;缪竞诚2.腺病毒介导的IL-24基因抑制人脑胶质瘤细胞增殖的机制研究 [J], 张铁军;金洁;邵根宝;彭琬昕;龚爱华;袁志诚;张严;赵婷婷;王青;叶思思;李巧玉;湛利平;杨勇3.腺病毒介导IL-24联合化疗药物增强对肝癌细胞PLC/PRF/5增殖的抑制 [J], 温莹浩;殷正丰;康晓燕;李瑾;钱海华;陈玮4.腺病毒介导的MDA-7/IL-24基因对裸鼠胆囊癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用[J], 贾建光;郭晨旭;李靖;张立功;王益民;全志伟;钱军5.腺病毒介导的IL-24对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的体外抑制效应 [J], 李畅;梁光辉;赵军;谭启秀;谢宇锋;盛伟华;杨吉成因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
人白细胞介素-24治疗人宫颈癌荷瘤裸鼠的实验研究
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人白细胞介素-24治疗人宫颈癌荷瘤裸鼠的实验研究张婧;李莉【期刊名称】《中国药物与临床》【年(卷),期】2010(010)002【摘要】目的探讨人白细胞介素(hIL)-24基因重组质粒对人宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其作用机制.方法建立荷官颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤模型,15只裸鼠随机分为3组:白细胞介素(IL)-24重组质粒组,空质粒组,磷酸盐缓冲液(PBS)组,根据肿瘤体积的生长情况绘制肿瘤生长曲线;处死裸鼠后切取瘤体并称质量,计算肿瘤抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期.结果体内实验表明,IL-24重组质粒能够抑制肿瘤的生长,IL-24重组质粒组移植瘤的体积明显小于空质粒组和PBs组(P<0.05),空质粒组和PBS组移植瘤体积则差异无统计学意义(P>0.05).IL-24重组质粒组抑瘤效果显著,其抑瘤率为56.5%,差异有统计学意义(P<0.05),空质粒组抑瘤率为1.3%,差异无统计学意义(P>0.05).经流式细胞术检测,与空质粒组和PBS组比较,IL-24重组质粒组G0/G1期细胞增多(P<0.05),S期细胞减少,G2/M期细胞减少(P<0.05),细胞被阻滞在G0/G1期,空质粒组和PBS组则差异无统计学意义(尸>0.05).结论于荷瘤裸鼠的瘤内注射IL-24重组质粒可抑制肿瘤生长,提示IL-24具有明显的体内抗肿瘤作用.【总页数】3页(P147-149)【作者】张婧;李莉【作者单位】030001,太原,山西医科大学第一医院妇产科;030001,太原,山西医科大学第一医院妇产科【正文语种】中文【相关文献】1.光动力治疗人胆管癌细胞荷瘤裸鼠的实验研究 [J], 邵志坚;薛平;卢海武;张长丹2.白细胞介素24对裸鼠人宫颈癌Hela细胞移植瘤抑制作用的探讨 [J], 王朝霞;李莉3.开普拓对人宫颈癌荷瘤裸鼠放射增敏作用的实验研究 [J], 唐丽萍;徐向英;娄阁;马荣;王晶4.索拉非尼对人肾癌荷瘤裸鼠血清IL-2及TNF-α水平影响的实验研究 [J], 杨政兴;严伟;陈忠铭;刘美宝;李炤5.鼠抗人肝癌单抗Hab_(18)—葡聚糖—阿霉素结合物在荷瘤裸鼠体内的放免定位及导向治疗的实验研究 [J], 何志龙;刘彦仿;隋延仿;陈志南;郭瑶因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
hIL-24真核表达载体构建及鉴定的开题报告
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hIL-24真核表达载体构建及鉴定的开题报告
1. 研究背景
IL-24 (Interleukin-24)是一种细胞因子,属于IL-10家族。
该蛋白在高浓度下可诱导细胞凋亡,具有抗肿瘤和免疫调节等作用。
IL-24在许多肿瘤细胞系和肿瘤组织中表达受限,因此被认为是治疗肿瘤的潜在靶点。
目前已有一些研究表明,IL-24基因治疗可以抑制肿瘤生长并提高患者生存率,因此该治疗方式具有很大的临床应用前景。
2. 研究目的
本研究的目的是构建hIL-24真核表达载体并进行鉴定,为后续的基因治疗研究提供支持。
具体研究内容包括:
1)构建hIL-24真核表达载体;
2)对载体进行序列分析和限制酶切鉴定;
3)对载体进行转染和免疫荧光染色实验;
4)评估载体的表达和功能。
3. 研究方法
1)hIL-24真核表达载体的构建
通过PCR扩增得到hIL-24基因,并克隆到真核表达载体pCDNA3.1中,利用限制酶的双酶切和连接技术构建hIL-24真核表达载体。
2)载体的鉴定
将构建好的载体进行序列鉴定和限制酶切鉴定,验证载体是否与文
献报道的一致。
3)转染和免疫荧光染色实验
将构建好的载体转染到293T细胞中,并进行免疫荧光染色实验,观察hIL-24的表达情况。
4)载体表达和功能的评估
利用Western blot和ELISA等技术检测hIL-24的表达水平和效能,并通过MTT实验评估其对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。
4. 研究意义
本研究的成功将为开发hIL-24的基因治疗提供支持,并为进一步研究hIL-24的功能、机制及临床应用提供一定的理论和实验基础。
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P A 7 7 9 联 合 I.4基 因 对 肝 癌 细 胞 的 杀 伤 研 究 H .6 4 1 2 L
李 伟, 张 静, 骆菁菁 , 胡徐庞 , 杨耿兵 , 王 刚, 娄文加 , 钱 程, 刘 立
( 浙江理 工大学生命 科学学院 , 州 3 0 1 ) 杭 1 08
摘
要 :利用最新发现 的抗癌新药 P HA_6 4 1联 合肿瘤 基 因治疗 中最常用 的杀伤基 因 I -4共 同处理肝 癌 779 L2
作者简介 : 李 通讯作者 : 刘
伟 (9 6 , , 1 8 ~) 男 安徽六安人 , 硕士研 究生 , 主要从事肿瘤基 因病毒治疗方面 的研究 。 立, 电子邮箱 :ui0 1 ao .OT a l l 0 @y h o C1 c i 7 L
62 4
浙
江
理Leabharlann 工大学学
报
21年 00
第2 7卷
关 键 词 : HA-64 1 I『 4 e 70 P 7 7 9 ; I2 ;B l 4 4 一
中 图 分 类 号 :Q 8 76
文献标识 码 : A
0 引 言
癌症 一直 都是 威胁 人类 健康 的一类 恶性 疾病 , 直 以来 人们 就 不 断在探 究 能 彻 底治 疗 恶 性肿 瘤 的药物 一 和方 法 。最新发 表在 《 自然 》 子刊上 的 一篇 文 章 报 道指 出他 们发 现 了一 种新 型 抗癌 药物 P HA-64 1该 药 77 9 , 物作 为 AT P的类似 物 可以抑 制多 种细 胞周期 激 酶 的磷 酸 化能力 如 C c、 D d7C K9等而 抑制 肿 瘤 细胞 的增 殖 , 同时其 也 可 以激 活 csae aps3途径 促进 肿瘤 细胞 的 凋亡 而杀 伤肿瘤 , 表现 出 了较 强 的抗肿 瘤能 力 [] 其 1。 I-4作为广 泛抗 癌 的细胞 因子 , 方 面可 以通过 抑制 肿 瘤细 胞 微血 管 的形 成来 抑 制 肿 瘤 的生 长 _ , L2 一 3 另 ]
浙江理 工大 学 学报 , 2 第 7卷 , 4期 , 0 0年 7月 第 21
J un 1 f h a gS i eh Unv ri o r a o @ n c T c ies y Z — t
Vo . 7 12 ,No 4, u.2 1 . J1 00
文章编号 :17 - 8 1(0 0 O —6 卜O 6 33 5 2 1 ) 4 04 4
达水平 , 已在肿 瘤 的基 因治疗研 究 中取 得较 好 的疗 效 [ 。 并 6 ]
虽 然 抗癌 药 物 P HA-6 4 1和 AdI_4在 肿 瘤 治疗 中都 表 现 出 良好 的疗 效 , 目前 临 床治 疗 证 明对 779 _L2 但 恶 性肿 瘤 单 纯 靠放 化 疗 以及 单 纯 的基 因治 疗 其疗 效 均 不 理想 。 因此 , 研 究 就 尝 试 结 合 上述 两种 肿 瘤 治 本 疗 药 物 的优 势来 进 一 步 提 高对 肿 瘤 细胞 的杀 伤 能力 , 首次 利用 P 即 HA-6 4 l联 合 非 复 制腺 病 毒 系统 携 779 带 的 I-4 因开 展对 肝 癌 细胞 B l 4 4的杀 伤效 果 进 行研 究 , L2 基 e 70 - 以期 为 临 床 治 疗 肿 瘤 寻 找 出 一种 新 的治
疗方法。
1 材 料 与 方 法
1 1 材料 .
P HA-64 1 自美 国 Tors 司 , 甲基 偶 氮 唑 蓝 ( 7 79 购 ci公 四 MTT) 自美 国 Sg 购 ima公 司 , 甲基 亚 砜 ( 二 DM
收 稿 日期 :2 O —0 —2 09 9 2 基 金 项 目 :9 3 划 (O 4 B 1 8 4 7计 20C 58O)
细胞 B l 4 4 采 用 2 MO 携 带 I -4基 因的非 复制 型病毒 AdI -4联合 不 同浓度 的 P -64 1对肝 癌 细胞 e 70 , - 0 I L2 _L2 HA 7 7 9 Bl 44 e 70 进行 治疗研 究 。w senbo 一 etr lt实验 结果表 明 : HA 77 9 P -6 4 1对 I-4的表 达无 明显抑 制作 用 ; v L2 M1r和 Ho — cat3 4 es3 3 2染 色实验表 明二 者联 合对 B l 4 4细胞表现 出了较 高协 同杀伤作 用。 e 70 -
S 购 自无 锡 展望化 工试 剂有 限公 司 , 牛血 清 、 ME 购 自 Gic 公 司 , eh t 亡 检 测试 剂 盒 购 自碧 O) 胎 D M bo Ho c s 凋 云天公 司 , 带 I -4的非 复制 型腺病 毒 AdI -4为本 实 验 室所 有 , 肝癌 细 胞株 B l 4 4购 自上海 生 命 携 I2 . ~L 2 人 e 70 ~ 科学 院细胞 生物研 究所 ,I 2 1. 4一抗 购 自 Ge h ne 公 司 ,-ci 抗购 自碧 云天 公司 。 _ - n u tr  ̄a t n一
1 2 细胞增 殖实 验 .
将 B l 4 4 胞用 含 1 %胎 牛血 清 的 DME 按 1 接种 到 9 L 中 , P e 70 细 一 O M O个 6孑 板 设 HA一6 4 1组和 P 一 77 9 HA
77 9 联合 AdI 4组 , 中 P 64 1 —D2 其 HA-64 1 设 置 15 1 M , 7 79 组 、、0 每个 浓度 设 6 复孔 , 个 另设 细胞 对 照 、 白 空 对照 。P HA-64 1 合 AdI-4组设 立 P 779 联 -L2 HA-64 1为 0 1 51 , 共 4个浓 度 , 别加 入 2MO 的 77 9 、、 、0/ M 分 0 I
一
方 面也可 以通 过 多个信 号通 路引 起肿 瘤细 胞凋 亡[ , 4 因而对 多 种癌 细 胞都 具 有 特 异性 杀 伤 抑制 效 果 。在 ]
此基 础上 , 我们还 利用 非复 制腺 病毒 系统 携带 I-4基 因 ( —L2 ) 提 高 I-4蛋 白在 肿 瘤 细胞 中 的表 L2 AdI-4 来 L2