ST传代细胞源猪伪狂犬病毒活疫苗(Bartha-K61株)超剂量免疫的安全性实验
Bartha-K61株净化猪伪狂犬病应用试验
Bartha-K61株净化猪伪狂犬病应用试验顾玉美;周先建;朱琳;何东旭【期刊名称】《中国畜牧业》【年(卷),期】2018(000)023【总页数】1页(P54)【作者】顾玉美;周先建;朱琳;何东旭【作者单位】南京天邦生物科技有限公司;南京天邦生物科技有限公司;南京天邦生物科技有限公司;南京天邦生物科技有限公司【正文语种】中文一、猪场信息福建某规模化种猪场，基础母猪800头，自2014年以来一直使用某疫苗厂家生产的猪伪狂犬病（PR）弱毒活疫苗（Bartha-K61株），猪群生产成绩稳定，健康状况良好，连续抽样监测显示种猪群gE抗体阳性率低于10%，并于2016年正式展开猪群伪狂犬病野毒免疫净化工作，2018年顺利通过国家相关部门验收工作。
二、净化技术路线1.监测。
按照种母猪群10%、种公猪群100%数量采血，检测PRV-gE抗体，根据gE抗体阳性率高低，判定种猪群伪狂犬野毒感染状态，确定进入何种净化阶段。
（1）如果抽检样本gE抗体全阴性，则种猪全群采血检测，进入“检测淘汰”阶段。
（2）如果抽检样本gE抗体阳性率≤10%，为轻度感染，进入“检测淘汰”阶段。
（3）如果抽检样本gE抗体阳性率＞10%，为中度以上感染，进入“强化免疫”阶段。
2.强化免疫。
（1）选用猪伪狂犬病弱毒活疫苗（Bartha-K61株），进行免疫。
（2）免疫程序：种猪每年普免4次；仔猪出生后12小时滴鼻，35日龄、70日龄分别进行一次免疫；后备猪配种前30天完成两次免疫，两次免疫间隔30天。
（3）每半年按照种母猪群10%、种公猪群100%数量采血，检测PRV-gE抗体，坚决淘汰gE抗体阳性种公猪，对所产仔猪健康不佳、高胎次、有流产症状的阳性母猪选择淘汰，用阴性后备猪替换，直到抽检样本gE抗体阳性率≤10%。
3.检测淘汰。
每季度对种猪群全群检测，gE抗体阳性种猪一次性淘汰，用阴性后备猪替换。
4.监测与认证。
（1）检测淘汰一年以后，设立非免疫母猪哨兵猪（gE和gB抗体均为阴性），占母猪数的2%～3%或最少10头，1个月以后采血检测，gE抗体全阴性，即可判定为阴性种猪场。
利用高效价Bartha-K61株疫苗防控净化猪伪狂犬病的研究与实践
收稿日期：2020-03-30基金项目：佛山市科技创新项目（FS0AA-KJ419-4401-0087）；广东省重点领域研发技术项目（2019B020217002）作者简介：陈耀（1991-），男，福建三明人，博士，主要从事家畜传染病的科研工作，E-mail：*****************通讯作者：马春全（1962-），男，教授，主要从事家畜传染病的教学、科研和临床工作，E-mail：*****************利用高效价Bartha-K61株疫苗防控净化猪伪狂犬病的研究与实践陈耀1杨傲冰2白挨泉1林德锐1马春全1(1佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东佛山528200;2广东永顺生物制药股份有限公司,广东广州510700)摘要:自2011年以来,我国猪场陆续发现PRV 变异毒株感染导致的疫情,对我国养猪业造成了巨大的威胁,引起了行业的高度关注。
目前,疫苗仍然是防控PRV 的最主要手段,本文总结了2个规模种猪场通过高效价Bartha-K61株疫苗免疫防控、净化PRV 的相关案例,为猪场防控PRV 提供参考。
关键词:猪伪狂犬病;Bartha-K61株;疫苗;净化中图分类号:S828;S852.65文献标识码:A文章编号:1673-4645(2020)03-0054-03开放科学(资源服务)标识码(OSID ),扫一扫,了解文章更多内容伪狂犬病（PR ）是由伪狂犬病毒（PRV ）引起的猪和其他多种动物共患的一种以发热、奇痒及脑脊髓炎为主要症状的急性传染病[1]。
2011年底以来，猪伪狂犬病在我国猪场流行明显增多，发病猪群主要表现为母猪流产、产死胎、产木乃伊胎增多，同时引起大量初生仔猪、生长育肥猪死亡，给养猪场带来严重的经济损失[2]。
部分规模猪场虽然注重伪狂犬疫苗免疫，但仍然发生猪伪狂犬病，给养猪业造成巨大损失。
血清学检测调查显示许多猪场伪狂犬gE 抗体由阴性转为阳性，甚至较大一部分种猪场也成为野毒阳性猪场[3,4]。
猪伪狂犬病疫苗有哪几种？怎么使用？.doc
猪伪狂犬病疫苗有哪几种？怎么使用？概述：猪伪狂犬疫苗是我国主要的猪免疫疫苗之一，目前，我国对伪狂犬病活疫苗实行自愿接种免疫政策，种猪每年免疫两次伪狂犬病活疫苗。
那么如今可以使用的猪伪狂犬疫苗有哪几种?都怎么使用?下面我们一起来看看吧。
猪伪狂犬病疫苗有哪几种?当前已有4种商品化疫苗，由32家企业生产，国内市场上销售的厂家有28家(截止到2017年7月24号，有批签发的生产厂家)。
其中有3种活疫苗：猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)、猪伪狂犬病活疫苗(Bucharest株)及猪伪狂犬病活疫苗(HB-98株);1种灭活疫苗：猪伪狂犬病灭活疫苗(鄂A株)。
目前猪场常用的伪狂犬疫苗主要是基因缺失苗，基因缺失苗也是当前猪场根除、净化伪狂犬病的主要手段。
猪伪狂犬病灭活疫苗、弱毒疫苗、基因缺失弱毒疫苗已经相对成熟，而病毒载体重组疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗尚处于实验室研究阶段。
1、灭活疫苗灭活疫苗是将猪伪狂犬病毒接种于鸡胚或细胞，当病毒滴度达到要求时收获病毒，灭活后加入相应佐剂制成的灭活疫苗。
2、自然缺失弱毒疫苗(活苗)弱毒活疫苗是将分离到的野毒株经非猪源细胞反复传代，或适应鸡胚，或加入致突变剂在高于一般的培养温度条件下，在细胞上反复传代而获得的疫苗，如目前使用较多的Bartha、Buk毒株。
我国目前广泛使用的PR弱毒冻干疫苗(Bartha-k61)是一种gI/gE 双基因缺失弱毒疫苗，由于该基因缺失而进一步阻断弱毒株回复毒力的可能性，所以大大提高了这种弱毒苗的安全性。
3、基因工程疫苗随着分子生物学的发展，猪伪狂犬基因工程疫苗的研究也获得了极大的进步，猪伪狂犬基因工程疫苗包括基因工程缺失弱毒活疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗、重组病毒疫苗。
猪场如何选择猪伪狂犬病疫苗?现在使用的猪伪狂犬病疫苗有普通弱毒苗、灭活苗和基因缺失苗3大类。
1.普通弱毒苗的优点：成本低、免疫源性好;其缺点：安全性差，即有毒力返强的可能。
2.灭活苗的优点：安全性好;其缺点：成本高，注射的次数多;3.基因缺失苗的优点：免疫应答性好，比较安全;缺点：成本高。
猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株和变异株主要免疫原性基因分析
中图分类号 ：￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ９ ． １
文献标志码 ：Ｂ
文章编号 ：１ ６ ７ ４ — ６ ４ ２ ２（ ２ ０ １ ７）０ ４ — ０ ０ ５ ０ — ０ ６
ＡＮＡＬＹＳ Ｉ Ｓ ０ Ｆ Ｍ ＡＪ ｏ Ｒ Ｉ Ｍ Ｍ ＵＮｏ Ｇ ＥＮＩ Ｃ ＧＥＮ ＥＳ ｏＦ ＰＳ ＥＵＤ ｏＲＡ ＢＩ ＥＳ ＶＩ ＲＵ Ｓ ＢＡＲＴＨ Ａ． Ｋ６ １ ＶＡＣＣＩ ＮＥ ＡＮＤ ＶＡＲＩ ＡＮＴ ＳＴＲＡＩ ＮＳ
ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎ ｔ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｄ ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｃ ｏ ｄ ｉ ｎ ｇ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｊ ｏ ｒ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ． Ａｓ
猪 伪狂 犬病病毒 变异株 ，在 主要 免疫原性 蛋 白之 间的差异 ，选取 了４ 个厂 家的活疫苗Ｂ ａ ｒ ｔ ｈ ａ — Ｋ６ １ 株 ，通过 二代测序 方法进行测 序 ，对Ｂ ａ ￣ ｈ ａ ． Ｋ６ １ 株ｇ Ｂ、ｇ ｃ 和ｇ Ｄ这３ 种主要免疫原性基 因以及推导 出的氨 基酸序列与 变异株之 间进行 同源性分析。结果显示 ， Ｂ ａ ￣ ｈ ａ — Ｋ６ １ 疫苗株与 变异株ｇ Ｂ 蛋 白序列 中有２ ３ 处特征 性的差异 ，同源性为９ ６ － ３ ％ ～９ ６ ． ９ ％；ｇ Ｃ 蛋 白序 列中有２ ５ 处特征性 的差异 ，
ａ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ． ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｂａ ｒ ｔ ｈ ａ — Ｋ６ １ ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎ ｅ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ａ ｎ ｄ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎ ｔ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗａ ｓ ９ ６ ＿ ３ ％ ～９ ６ ． ９ ％ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｂ ｕ ｔ ２ ３ ｄ ｉ ｆｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｂ， ９ ２ ． ７ ％ ～９ ３ ． １ ％ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｂ ｕ ｔ ２ ５ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｃ ａ ｎ ｄ ９ ６ ． ８ ％ ～９ ７ － ３ ％ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｂ ｕ ｔ １ ０ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｉ ｎ ｇ Ｄ， ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ． Ｐ ｈ ｙ ｌ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｄ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ｏ ｆ ｇ Ｂ， ｇ Ｃ ａ ｎ ｄ ｂ ｅ ｌ ｏ ｎ ｇ ｅ ｄ ｔ ｏ ｔ ｗｏ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｅ ｖ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ ｂ ｒ ａ ｎ ｃ ｈ ｅ ｓ ．
经典Bartha-K61株猪伪狂犬病疫苗临床应用效果研究
经典Bartha-K61株猪伪狂犬病疫苗临床应用效果研究作者：周先建何东旭等来源：《兽医导刊》 2018年第7期猪伪狂犬病是危害养猪业的一种重要传染病，它严重危害着国内养猪业的发展。
自2011 年以来，该病在我国多个地区大面积流行，伪狂犬病毒株变异，经典Bartha 株的使用效果让很多养殖户怀疑，本研究以连续使用经典伪狂犬疫苗一年以后的规模养猪场为研究对象，采集不同阶段猪群的血清样本，进行血清学检测，以评估经典毒株伪狂犬疫苗的临床应用效果。
一、材料与方法1. 研究对象。
福建某农牧有限公司，存栏母猪500头，连续使用该南京厂家猪伪狂犬疫苗（Bartha-K61 株）一年以上，猪场生产成绩稳定，猪群健康度良好。
2. 伪狂犬疫苗。
经典Bartha-K61 株猪伪狂犬活疫苗“威必宁”，gE 基因自然缺失，由南京某厂家生产，每头份疫苗含抗原高达106.3TCID50。
3. 检测试剂盒。
海博莱猪伪狂犬病毒gE 抗体检测试剂盒，海博莱猪伪狂犬gb 抗体检测试剂盒。
4. 采集血清。
分阶段随机采样，详情见表1，前腔静脉采血，静置析出血清，待检。
5. 免疫程序。
仔猪1 日龄滴鼻1 头份/ 头，二免45 日龄，2 头份/ 头，三免90 日龄，2 头份/ 头；种猪4 次普免/ 年，2 头份/ 次/ 头。
二、结果与分析1. 猪伪狂犬抗体.伪狂犬gE 抗体结果分析，从图4、图5 可以看出，各阶段猪群送检样品血清伪狂犬gE 抗体水平检出率极低，基本可确定野毒控制良好，只有1 头50 日龄仔猪血清伪狂犬gE 抗体检测为阳性，其它猪群均为阴性状态，建议加强生物安全管理，启动伪狂犬净化程序。
伪狂犬gB 抗体结果分析，从图1、图2、图3 可看出，各胎次母猪群、后备猪的阳性率均为100%，且伪狂犬gB 抗体均值处于较高水平，在伪狂犬gE 未检出情况下，说明疫苗免疫效果很好；29 日龄仔猪群、50 日龄仔猪、90 日龄仔猪、150 日龄肥猪群抗体阳性率为100%、100%、90%、100%，血清伪狂犬gB 抗体均值处于较高水平，说明疫苗免疫效果很好，继续维持。
猪场伪狂犬病疫苗的最佳免疫时机应该是什么时间
猪场伪狂⽝病疫苗的最佳免疫时机应该是什么时间猪伪狂⽝病是由伪狂⽝病病毒(Pseudrabies virus, PRV)所引起的猪的⼀种病毒性传染病。
猪伪狂⽝病毒被确认为猪甲型疱疹病毒，为双链DNA病毒。
1902年匈⽛利奥杰斯基Aujeszky⾸次报道⽽命名，⼜称奥杰斯基病病毒。
迄今从世界各地分离的毒株虽然毒⼒有强弱之分，毒株的致病性有差异，但均呈现⼀致的⾎清学反应，即只有⼀个⾎清型。
我国有多个研究团队分离到⾄少4个不同的变异毒株，对出现的变异毒株进⾏了研究，并获得⼀些新毒株的全基因组序列。
这些变异株虽然基因有变化，但是并没有出现新的⾎清型。
不过多个变异毒株的毒⼒明显地增强。
近⼏年来，猪伪狂⽝病的流⾏⾮常普遍，导致包括母猪繁殖障碍、仔猪神经症状伴随⾼死亡率和育肥猪呼吸道症状等引起⽣产阻滞的严重问题。
分析发病的原因，从外因来说，当前较多的⼈认为是环境的感染压⼒⼤，出现了超强毒的变异株所导致。
从内因来说，猪场没有阻断病毒的循环，表现为整体猪场伪狂⽝野毒(gE)抗体的阳性率⽐较⾼。
还有引种把关不严，把阳性猪引⼊猪场。
使猪群⾯临考验；消毒﹑隔离等⽣物安全措施不到位；多数猪场只采取⼀般控制措施，未采取坚决的清除策略，猪场内野毒有循环传播的机会，使野毒（gE）抗体阳性率居⾼不下，从防疫来讲，主要是免疫不合理，造成免疫空⽩：免疫程序与疫苗特性不匹配，商品猪或者不免疫，或者免疫时机不能正确把握，免疫剂量不⾜（疫苗效价低）。
在临床实践中，虽然多数猪场是根据母猪流产、仔猪神经症状来确定伪狂⽝发病，但⾎清学检测显⽰往往是育肥猪gE转阳在先。
由于仔猪免疫的不完整或程序的偏差，或免疫量的不⾜，在⾼感染压⼒或强毒攻击下，育肥期猪群临床上出现咳嗽并⼤量排毒，同时⾎清gE抗体转阳。
⼤量野毒的扩散造成的病毒⾼压⼀旦突破母猪原有抗⼒，则引起母猪流产，继⽽仔猪发病死亡。
临床案例显⽰，有些猪场母猪即使在gB抗体⾼且⼀致的状况下，也有出现较多流产并伴随仔猪神经症状的现象。
猪瘟和伪狂犬活疫苗 几种免疫方式的免疫效果评价
猪瘟和伪狂犬活疫苗几种免疫方式的免疫效果评价作者：林德锐皇培刚罗文琼常晗蕾来源：《中国动物保健》2014年第05期摘要：为了评价猪瘟和伪狂犬活疫苗的免疫效果，采用猪瘟活疫苗（传代细胞源）和伪狂犬活疫苗（Bartha-K61株）对35～40日龄猪瘟和伪狂犬母源抗体阴性的健康仔猪分为4组，分别进行单独注射、分点同时注射与混合注射，观察各组注射后的副反应，并对不同时期的抗体用ELISA试验检测血清抗体效价来评价其免疫效果。
试验结果表明，两种疫苗同时分点注射和混合注射，相互间的干扰很小，两种疫苗同时注射不影响各自免疫抗体的产生，原因可能是两疫苗共同刺激动物的免疫器官后有提高动物产生免疫抗体的作用[1]。
关键词：猪瘟；伪狂犬；注射；免疫效果；疫苗猪瘟和猪伪狂犬病是目前危害养猪业的主要传染病，给养猪业带来巨大的经济损失[2],特别是近几年，猪伪狂犬病在国内有扩大流行的势头，一旦猪瘟和伪狂犬病同时爆发，将给猪场带来毁灭性的打击。
本试验用猪瘟活疫苗（传代细胞源）、伪狂犬活疫苗（Bartha-K61株）单独注射、分点同时注射和混合注射健康易感仔猪，了解抗体产生的时间和抗体水平，从而评价几种免疫方式的免疫效果差异。
1材料与方法1.1材料1.1.1 疫苗及稀释液猪瘟活疫苗（传代细胞源）：云南生物制药有限公司生产，批号：2013021，病毒效价：18 000 RID/头份，生产日期：2013年7月15日。
伪狂犬活疫苗（Bartha-K61株）：云南生物制药有限公司生产，批号：2013001，病毒效价：106.0TCID50/头份，生产日期：2013年4月19日。
猪用活疫苗专用稀释液：云南生物制药有限公司生产，批号：20130516，生产日期：2013年5月16日。
1.1.2试验地点昆明市嵩明杨林青石山猪场，猪场疫病预防控制较好，具备试验条件。
1.1.3试验动物从90头35～40日龄仔猪中用猪瘟抗体ELISA检测试剂盒（IDEXX）及伪狂犬抗体ELISA检测试剂盒（IDEXX）检测，选择出52头猪瘟母源抗体、伪狂犬母源抗体均为阴性的健康仔猪。
伪狂犬Bartha-K61株弱毒疫苗临床应用效果研究
伪狂犬Bartha-K61株弱毒疫苗临床应用效果研究文I石淼王云周先建(南京天邦技术服务部)猪伪狂犬病毒属于双链DNA病毒，相对稳定，只有一个血清型，目前为止还未发现抗原性不同的伪狂犬病毒毒株。
2011年以来猪伪狂犬病有所抬头，多个地区猪场、实验室检测分离出变异的PRV毒株，它们对易感猪的致病力增强，免疫猪的保护力也相应减弱。
尽管人们对新毒株的危害存在各种担忧，但在生产中许多规模猪场利用经典Bartha-K61株活疫苗仍能有效地控制了猪伪狂犬病。
Bartha-K61株是一个临床应用历史较长、范围较广、数H：较多的经典猪伪狂犬病疫苗毒株，并在多个国家实现了猪伪狂犬病的净化。
当前形势下，通过Bartha-K61株临床免疫密度的增大、仔猪早期接种和强化免疫，猪伪狂犬病的感染率明显下降。
本研究面对连续使用经典伪狂犬疫苗一年以后的规模养猪场，针对猪场需要，以加强免疫后后备母猪和商品猪为主要研究对象，采集各个阶段猪群的血清样本，进行血清学伪狂犬gE抗体的检测，以评估经典毒株在新型PRV毒株压力下的临床应用效果。
1材料与方法1.1研究对象浙江某规模化猪场，存栏母猪800头,连续使用猪伪狂犬病Bartha-K61株弱毒活疫苗•年以上，猪场生产成绩稳定，猪群健康度良好。
1.2伪狂犬疫苗猪伪狂犬病弱毒活疫苗(Bartha-K61株)，由南京天邦生物科技有限公司生产。
1.3检测试剂盒海博莱猪伪狂犬病毒gE抗体检测试剂盒；西班牙CIVTEST猪伪狂犬病毒gE抗体检测试剂盒ELSIAo1.4采集血清分阶段随机采样，详情见表1,前腔静脉采血，静置析出血清，待检。
广告表1样品采集信息表3浙江某规模化猪场PR-gE 抗体检测结果(2018/06/08)3胎采样时间2017/12/14采样时间2018/06/08检测试剂盒海博莱gE 抗体检测试刑盒检测试剂盒西班牙CIVTESTgE 抗体检测试剂愈总头数208总头数66后备母猪167后备母猪14公豬11公猪117周龄7讶山2胎620周龄23荣昌•批5荣昌二批54胎55胎56胎5注：猪伪狂犬gE( SS )(SffiK) IN%值>0.45为PRV-gE (野畫)抗体阳性)检出阳性比例阳性率軸1N%均值厉备母猪0/1400.0710.070公猪0/110-0.0340.029青山2胎0/60-0.0170.019荣昌一批0/50-0.()060.036荣昌二批0/50-0.0120.0303胎0/500.0060.0174胎0/500.0680.0905胎0/500.0380.0796胎0/500.0460.0427胎0/50.0140.0187胎51.5免疫程序a:仔猪1日龄滴鼻1头份/头，8周龄和15周龄，肌注各2头份/头；b:后备母猪5月龄和6.5月龄加强免疫，2头份/次; c:种猪4次普免/年，2头份/次/头。
2020年猪伪狂犬病检测分析与防控建议
362020年齐鲁动保第三方检测数据显示：猪伪狂犬病病毒抗原检出率为4.1%，且呈逐年下降趋势；而猪伪狂犬病gB抗体平均合格率为92.2%，gE野毒带毒率为26.2%，猪伪狂犬病问题依然严重。
高强度免疫是降低猪伪狂犬病感染率的有效方案，但猪伪狂犬病野毒净化是彻底解决问题的出路。
1 材料与方法1.1 样品来源及分布血清来源：样品来源于全国18个省市，360个猪场，3673份血清（表1）。
组织样品来源：样品来源于全国14个省市，165个猪场，497份组织样品（表2）。
1.2 方法抗原检测采用齐鲁动保全国合作的第三方实验室自建方法，荧光定量PCR/PCR/RT-PCR 方法检测。
伪狂犬病gB-ELISA与伪狂犬病gE-ELISA抗体检测采用美国IDEXX ELISA抗体检测试剂盒，均按照说明书操作及标准判定。
2 结果与分析2.1 送检样品猪场规模分析从送检样品的猪场规模看，1000～2000头基文 ⊙ 李相钊1，张广1，周忠涛1，李秀娟1， 陈方园1，2 1.齐鲁动物保健品有限公司 2.碧迪医疗器械（上海）有限公司2020年猪伪狂犬病的控制比2019年有了明显的进步，但问题依然严重，更困难的是种猪野毒污染的问题，也就意味着伪狂犬病的净化还有很长的路要走。
在复产保供作为第一要务的前提下，需要通过高强度免疫，把伪狂犬病的群体野毒带毒率控制在最低范围。
2020年猪伪狂犬病检测分析与防控建议表1 PRV（猪伪狂犬病病毒）抗体样本送检情况37础母猪的猪场占比26.5%，这类猪场数量最多；1～100头基础母猪的猪场占比23.3%；100～500头基础母猪的猪场占比19.6%；500～1000头基础母猪的猪场占比19.1%；≥2000头基础母猪的猪场占比11.5%（表3、图1）。
基本涵盖了各种类型的猪场，样本的代表性比较强。
2.2 猪伪狂犬病疫苗免疫调查分析假定每头猪免疫伪狂犬病疫苗2次/年，每次免疫1头份为完全免疫，按照此标准采用农业部数据分析看，猪伪狂犬病的免疫率并不高：2018年免疫率为57%，2019年免疫率仅为35%，2020年免疫率为88%（表4）。
为什么伪狂犬活疫苗抗原效价需要1000000TCID50
为什么伪狂犬活疫苗抗原效价需要1000000TCID50什么是TCID50或CCID50？TCID50或CCID50,Tissue culture infective dose,半数组织培养感染剂量,又称50%组织细胞感染量,腺病毒感染性滴度，即指能在半数细胞培养板孔或试管内引起细胞病变(cytopathic effect, CPE)的病毒量。
猪伪狂犬活疫苗的质量标准演变历程伪狂犬属于孢疹病毒，具有良好的免疫原性，抗原效价在103.0~104.0TCID50就可以对伪狂犬经典毒株具有良好的保护力。
因此，我国伪狂犬活疫苗（Bartha-K61株）的质量标准一直≥5000TCID50。
随着进口伪狂犬疫苗的引进，不同品牌的伪狂犬活疫苗抗原效价也从最早进口的扑伪佳（104.3TICD50）提高到最晚梅里亚公司的伪狂犬疫苗（106.3TCID50）。
武汉中博和创宏生物联合研发的猪伪狂犬耐热保护剂活疫苗（C株），在申报注册时，应农业部要求，补充提供经典毒株和变异毒株的伪狂犬野毒攻毒保护试验数据，验证了猪伪狂犬活疫苗（C株）抗原含量≥106.0TCID50时，对变异株和经典株均有保护。
见图1.图1.审评中心对猪伪狂犬耐热保护剂活疫苗（C株）提出补充不同变异株攻毒保护试验数据的意见函。
补充农业部要求的双重保护试验：1. 材料：1.1 猪伪狂犬C株抗原液，由武汉中博生物股份有限公司提供。
1.2 伪狂犬经典强毒株HB-J株，由武汉中博生物股份有限公司提供。
1.3 伪狂犬变异强毒株HB-11株，由农业部动物传染病重点实验室提供。
1.4 试验用猪伪狂犬抗原抗体双阴性，3~4周龄断奶仔猪，65头。
2. 方法：2.1 将猪伪狂犬C株抗原液稀释成103.0、104.0、105.0、106.0、107.0TCID50/ml不同稀释度。
每个稀释液免疫10头伪狂犬阴性断奶仔猪，1毫升/头，颈部肌肉注射。
同时设置攻毒对照组10头仔猪，空白对照组5头断奶仔猪。
浙江省某猪场猪伪狂犬病的净化案例
China Swine IndustryDOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.06.024收稿日期：2023-03-07作者简介：洪波（1983-），男，浙江余姚人，本科，兽医师，主要从事动物疫病防疫检疫方面的工作浙江省某猪场猪伪狂犬病的净化案例洪波马燕强刘益钱(杭州市种猪试验场,浙江杭州311115)摘要:猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒引起的多种家畜和野生动物共患的急性传染病。
猪是本病毒的自然宿主,感染后,母猪发生繁殖障碍,公猪精液质量下降,仔猪出现死亡,育肥猪发生呼吸困难,对养猪业危害巨大。
本文通过对浙江省杭州市某二元种猪场开展的猪伪狂犬病净化过程进行详细阐述和分析,希望可以为其他猪场开展猪伪狂犬病净化提供参考。
关键词:猪;伪狂犬病;疫苗;检测;净化中图分类号:S828;S852.65文献标识码:A文章编号:1673-4645(2023)06-0110-03开放科学(资源服务)标识码(OSID ),扫一扫,了解文章更多内容猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR ）是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV ）感染猪而引起的一种急性传染性疾病，是危害生猪健康养殖的重要疫病之一[1,2]。
PRV 属于疱疹病毒科（Herpesviridae ）α-疱疹病毒亚科，毒力是由几种基因协同调控，主要有胸苷激酶（TK ）基因、gE、gD、gI 基因等调控，缺失一种或几种毒力基因，可使伪狂犬病毒的毒力下降，但仍保持免疫原性[3]，这使得伪狂犬病基因工程苗对该病的预防发挥了非常重要的作用，同时伪狂犬病病毒基因缺失蛋白抗体的ELISA 检测方法可以准确区分免疫抗体和野毒感染抗体，这为猪场伪狂犬病的净化提供了理论基础[4]。
浙江省杭州市某二元种猪场有长白母猪487头，公猪12头，为了进一步提高种猪质量和生产成绩，利用近3年时间对公猪、母猪、哺乳猪、保育猪、生长猪、后备种猪实施采血检测、隔离淘汰、调整免疫程序等技术，同时严控生物安全体系，完成了对该场猪伪狂犬病的净化任务。
漫谈伪狂犬病病毒Bartha-K61株
漫谈伪狂犬病病毒Bartha-K61株猪伪狂犬病是危害养猪业的主要疫病之一，被世界各国所重视，近年来，欧洲的伪狂犬病根除计划开展的如火如荼，主要采取应用伪狂犬病基因缺失疫苗和配套的检测方法及淘汰野毒感染猪等综合防制措施。
说到基因缺失疫苗，不得不提的就是伪狂犬病病毒Bartha-K61自然基因缺失弱毒株，这株来自遥远匈牙利的弱毒疫苗株被世界许多国家引进应用，免疫效果好，受到一致好评。
匈牙利学者Bartha在1961年从具有神经症状死亡的猪脑分离一株强毒株，命名为K61株，进而将K61强毒株在猪肾细胞培养传代，在37℃的条件下传了50代，接着又在32℃的条件下传20代。
用琼脂覆盖培养的病毒，2-3天即可产生蚀斑，直径为2-3毫米的蚀斑约占90%，1-2毫米的蚀斑仅占10%左右。
经观察证明，产生小蚀斑的病毒经传代还是形成小蚀斑，而产生大蚀斑的病毒，则继续分离形成大蚀斑和小蚀斑。
在病毒传代过程中挑选小蚀斑病毒培养传代，从而培育成了K61弱毒疫苗，用以预防伪狂犬病，为了纪念这位学者，就以他的名字命名为Bartha-K61株。
伪狂犬病强毒株和K61弱毒株特性形成了鲜明的对比，K61弱毒株培养形成小蚀斑，而强毒株则形成大蚀斑；K61弱毒株对胰蛋白酶和热有抵抗性，而强毒株则较敏感；从病原性来看，K61弱毒株对4个月以上的猪(包括新生仔猪)、牛、绵羊和犬没有病原性，而对不足4个月龄的猫和犬，毛皮兽和2公斤左右的家兔具有病原性，其他动物则能抵抗感染，而强毒株则引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒（猪除外）及脑脊髓炎为特征的急性传染病，对猪的危害最大，常引起妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎和产弱仔，新生仔猪大量死亡，育肥猪发生严重的呼吸症状和增重迟缓，种猪不育，给养猪业造成巨大的经济损失。
对于Bartha-K61自然基因缺失弱毒株这一优良的特性，配套合理的检测方法，就能区别疫苗免疫猪和野毒感染猪，对清除伪狂犬病具有天然的优势。
猪伪狂犬病活疫苗(Bathar-K61株)免疫佐剂的筛选
猪伪狂犬病活疫苗(Bathar-K61株)免疫佐剂的筛选赖志;章伟建;漆世华;高俊锋;马晶晶;吴碧清【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2013(047)007【摘要】为筛选到一种适合猪伪狂犬病活疫苗的免疫佐剂,本研究通过稳定性试验、病毒效价测定、安全性试验、效力试验对5种不同类型免疫佐剂(AD01、AD02、AD03、AD04和AD05)进行了比较筛选.稳定性试验结果表明,AD01、AD03、AD04和AD05 4种佐剂稀释疫苗后6h不分层,表现出良好的稳定性,而AD02佐剂稀释疫苗1h后出现分层；病毒效价测定结果表明,AD01、AD03、AD04 3种佐剂稀释后疫苗病毒滴度为106.25-6.50TCID50/100 μL,与对照组病毒滴度无差异,而AD05佐剂稀释疫苗后,测得的病毒滴度低于对照组,仅为103.5～5.17TCID50/100 μL,对病毒效价有干扰；安全性试验表明,用AD01佐剂稀释疫苗免疫猪群后,猪只体温升高,平均体温为(40.3±0.2)℃,20％(2/10)的猪只出现呕吐,40％(4/10)的猪只出现食欲下降和精神不振的临床症状,AD03、AD04佐剂稀释疫苗免疫猪群后,临床表现无异常,与对照组一致；效力试验结果表明,剩余的AD03、AD04两种佐剂稀释疫苗后在第7天均可检测到中和抗体,第60天抗体中和效价平均值达到高峰,分别为69.8±3.3和69.5±2.8,高于对照组的57.8±7.0.筛选结果说明,AD03、AD04两种佐剂均适用于猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株),此研究为提高猪伪狂犬病活疫苗(Bathar-K61株)的使用效果进行了有益的探索.【总页数】4页(P5-8)【作者】赖志;章伟建;漆世华;高俊锋;马晶晶;吴碧清【作者单位】上海创宏生物科技有限公司,上海201619;上海奉南动物尸体无害化处理站,上海201719;武汉中博生物股份有限公司,武汉430079;上海创宏生物科技有限公司,上海201619;上海创宏生物科技有限公司,上海201619;上海创宏生物科技有限公司,上海201619【正文语种】中文【中图分类】S859.797【相关文献】1.猪伪狂犬病活疫苗(SA215株,扑伪优)对新流行伪狂犬病病毒具有良好的免疫保护力 [J], 周远成;张冰;李碧2.猪伪狂犬病"活疫苗+流行株灭活疫苗"免疫试验报告 [J], 施栽飞;章红兵3.鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选 [J], 田宇杰;王梦瑶;李银;嵇辛勤;章丽娇;刘青涛;韩凯凯;杨婧;刘宇卓;赵冬敏;刘娜4.猪伪狂犬病灭活疫苗(PRVSX-gE株)对怀孕母猪安全性及繁殖性能的影响 [J], 何锡忠;林鸷;朱永军;彭丽英5.猪伪狂犬病灭活疫苗(PRV_(SX)-gE株)对新生仔猪安全性的初步研究 [J], 何锡忠;林鸷;彭丽英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪伪狂犬病活疫苗
猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）说明书和标签（一）猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）说明书【兽药名称】通用名猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）商品名喜可净英文名Swine Pseudorabies Vaccine, Live（Strain Bartha K-61）汉语拼音Zhu Weikuangquanbing Huoyimiao（Bartha K-61 Zhu）【主要成分与含量】每头份疫苗中含猪伪狂犬病病毒Bartha K-61株至少105.5TCID50。
【性状】黄白色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】用于预防猪伪狂犬病。
【用法与用量】可采用颈部肌肉注射或滴鼻途径进行接种。
所有年龄、体重和性别的猪均接种2ml（含1头份）。
采用肌肉注射途径进行接种时，可以用红色稀释液（W）或白色稀释液（A3）稀释后进行接种；采用滴鼻途径进行接种时，用红色稀释液稀释后，每个鼻孔接种1ml。
推荐的接种程序：育肥猪：在一般地区使用时，每头猪于12～13周龄时接种1头份（2ml）；在流行地区使用时，每头猪于10～11周龄时接种1头份，13～14周龄时再接种1头份。
种猪：以3～4周的时间间隔接种2次，此后，每隔4个月再接种1次，或在每次分娩前4～6周再接种1次。
在进行紧急接种时，对所有猪（包括母猪、公猪和仔猪）均接种1头份。
【不良反应】一般无可见的不良反应。
【注意事项】（1）仅用于接种健康猪。
（2）疫苗应避光保存，不要冷冻。
（3）使用前应使疫苗充分溶解。
（4）疫苗稀释后，应在1小时内用完。
（5）注射时，应使用灭菌注射器和针头，并采用常规无菌操作方法。
（6）用过的疫苗瓶器具和或未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】（1）10头份/瓶（2）25头份/瓶（3）50头份/瓶（4）100头份/瓶【包装】10瓶/盒【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为30个月。
【《进口兽药注册证书》证号】【生产企业】西班牙海博莱生物大药厂（LABORATORIOS HIPRA, S.A.）地址：Avda. La Selva, 135. 17170—Amer (Girona) Spain电话：0034972430660 传真：0034972430061仅在兽医指导下使用（二）猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）内包装标签喜可净猪伪狂犬病活疫苗（Bartha K-61株）10（25、50、100）头份/瓶《进口兽药注册证书》证号：批号：有效期至：【作用与用途】用于预防猪伪狂犬病。
猪伪狂犬病灭活疫苗(Bartha K61株)说明书和内包装标签2020版
猪伪狂犬病灭活疫苗（Bartha K61株）说明书和内包装标签（一）猪伪狂犬病灭活疫苗（Bartha K61株）说明书【兽药名称】通用名猪伪狂犬病灭活疫苗（Bartha K61株）商品名无英文名Swine Pseudorabies Vaccine，Inactivated（Strain Bartha K61）汉语拼音Zhu Weikuangquanbing Miehuoyimiao（Bartha K61 Zhu）【主要成分与含量】含猪伪狂犬病病毒gE基因缺失Bartha K61株，灭活前病毒滴度至少为107.5TCID50/头份。
【性状】略带粉红色的均匀乳剂。
【作用与用途】用于预防猪伪狂犬病。
【用法与用量】颈部肌肉深部注射。
2月龄以上的猪，每头2ml（含1头份）。
种猪后备种猪进入猪舍时，进行一次免疫接种，间隔4～5周，进行第二次免疫接种；对于以前没有接种的种猪，也按同样的方法接种两次。
怀孕母猪在每次妊娠40～60日时进行接种。
种公猪，每隔6个月接种一次。
育肥猪在2月龄时免疫接种2ml（含1头份）的疫苗，3～4周后进行第二次免疫接种。
【不良反应】个别猪接种后可能会出现过敏现象，对出现过敏现象的猪应立即使用抗组胺药物进行脱敏治疗。
【注意事项】（1）使用前应先将疫苗恢复至室温。
（2）疫苗应避光保存，切勿冻结。
（3）使用前应充分摇匀。
（4）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】20头份（40ml）/瓶【包装】（1）1瓶/盒（2）2瓶/盒【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为18个月。
【《进口兽药注册证书》证号】【生产企业】西班牙海博莱生物大药厂（LABORATORIOS HIPRA,S.A.）地址Avda. La Selva, 135. 17170 Amer (Girona)- Spain仅在兽医指导下使用（二）猪伪狂犬病灭活疫苗（Bartha K61株）内包装标签猪伪狂犬病灭活疫苗（Bartha K61株）20头份（40ml）/瓶《进口兽药注册证书》证号：批号：有效期至：【作用与用途】用于预防猪伪狂犬病。
猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)最小免疫剂量的研究
猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株，传代细胞源）最小免疫剂量的研究吴文福，林德锐，黄秋雪，赖月辉，牛晓芸，牛贝贝，李宁，侯高伟，吉艺宽（广东永顺生物制药股份有限公司，广东广州511356）摘要：为了确定猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株，传代细胞源）的最小免疫剂量，本研究将3批猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株，传代细胞源）分别稀释成10TCID50/mL、102.0TCID50/ mL、103.0TCID50/mL，每批疫苗各个稀释度分别免疫仔猪1.0mL/头，并设攻毒对照组和阴性对照组。
免后10d连同攻毒对照组用伪狂犬病病毒GD1株进行攻毒保护试验，阴性对照组不攻毒。
结果表明，10TCID50/头和102.0TCID50/头的免疫剂量在免疫后10d依然无法提供完全的免疫保护，保护率为20%~80%（1/5~4/5）；103.0TCID50/头的免疫剂量能够保护仔猪抵抗PRV强毒的攻击，保护率为100%（5/5）；攻毒对照组发病率为100%（5/5），死亡率为80%（4/5）；阴性对照组全部健活。
由此确定猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61株，传代细胞源）最小免疫剂量为103.0TCID50/头。
关键词：伪狂犬病病毒；活疫苗；最小免疫剂量中图分类号：S852.65+1文献标识码：A文章编码：1005⁃8567（2018）05⁃0049⁃04Determination of the Minimum Immunical Dose of LiveVaccine aginst Swine Pseudorabies（Strain Bartha⁃K61，Cell Line Origin）WU Wen⁃fu，LIN Derui，HUANG Qiu⁃xue，LAI Yue⁃hui，NIU Xiao⁃yun，NIU Bei⁃bei，LI Ning，HOU Gao⁃wei，JI Yi⁃kuan（Guangdong Win⁃sun Pharmaceytical Stock Limited Company，Guangdong511356）Abstract：In order to determine the minimum immunical dose of Swine Pseudorabies Live Vaccine（Strain Bartha⁃K61，Cell Line Origin），three batches of swine Pseudorabies live vaccines were diluted to10TCID50，102.0TCID50，and103.0TCID50per dose，respectively.Each batch of vaccine was immunized with piglets at each dilution，and a challenged group and a unchallenged group were set up.After10days of immunization，the Pseudorabies virus GD1 strain was used for the challenge protection test，and the unchallenged group was not challenged.The results showed that10TCID50and102.0TCID50groups failed to provide complete protection，the protection rate was20%～80%.The 103.0TCID50groups could provide complete protection，the protection rate was100%.All challenged piglets were diseased and80%died.The unchallenged piglets were healthy.According to the above results，the minimal effective dose of vaccines against Pseudorabies virus was103.0TCID50per piglet.Keywords：Pseudorabies Virus；Live Vaccine；Minimum Immune Dose广东畜牧兽医科技2018年（第43卷）第5期试验研究收稿日期：2018⁃07⁃04项目来源：广州市科创委产学研合作专项“畜禽重要疫病新型疫苗和诊断技术研究及产业化”（2014Y2⁃00003）作者简介：吴文福（1960⁃），男，高级兽医师，从事兽用生物制品生产与研发工作。
Bartha K61株活疫苗对猪伪狂犬变异毒株和传统毒株的免疫保护效力分析
Chinese Journae of Veterinaa Medicine中国兽医杂志2020年（第56卷）第7期15 Bartha K61株活疫苗对猪伪狂K变异毒株和传统毒株的免疫保护效力分析严伟东1>2,李畅,于学祥"，何启盖"，杨汉春1（1.中国农业大学动物医学院，北京海淀100193； 2.华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉430070； 3.华中农业大学动物医学院，湖北武汉430070）摘要:为了分析猪伪狂犬病活疫苗Bartha K61株预防流行变异毒株的效力%以经典PRV-TA株和变异PRV-XT株为攻毒毒株，评价Baaha K61活对毒变异株的保护。
用Bartha K61株活4~5周断奶仔猪，28d后,分别用PRV-TA株和流行变异PRV-XT株攻毒，观察仔猪的临床症状和病理变化，检测鼻腔排毒情况％结果显示,Bartha K61活疫苗可对PRV-TA株攻毒提供良好的保护,但对变异毒株PRV-XT仅能提分保护％PRV-TA株攻毒组所有猪只未出现明显临床症状，而PRV-XT攻毒组出现较为明显的临床症状％表明Bartha K61株活疫苗对传统毒良好保护效果，而对行变异毒株不能提保护％关键词：猪伪狂犬病；Bartaa K61株活疫苗；PRV-TA株；变异强毒PRV-XT株；攻毒保护试验中图分类号：S852.65*1文献标志码：A文章编号：0529—6005(2020)07—0015—04 The Immunoprotection Efficacy of Bartha K61Strain Attenuated Vaccine againshPseudorabies Variani Strain and Traditional StrainsYAN Wei-dong1，2，LC Chang2,3，YU Xue-xiang2,3，HE Qi-gai2,3，YANG Han-chun1(1.Colleve of Veterinaa Medicine,China Agacueual University,Beijing100193,China；2.State Key Laboatoa of Agacueual Microbiolovy,Huazhong Agacueural University,Wuhan430070,China；3.Colleve of Veterinaa Medicine,Huazhong Agricueual University,Wuhan430070,China) Abstraci:To evaluate the actual eSect of the pseudoabies live vvccine(Bartaa K61strain)aaainst the highly virulent strains, the taditional PRV-TA strain and the popular vvriant PRV-XT strain wero used as the chdenge strains te assess the protective effect aaainst the pseudoabies virus mutant strain in the Bartha K61live vvccine immunized piglets.Bartha K61live vaccine was inoculated in4〜5weeks old weaned pigs.After28days of immuniza/on,the PRV-TA strain and the epidemic variant PRV-XT strain were used for chHengc.The clinicai symptoms and pathoOvical changes of the piglets after the chHengc were observed,and the nasae shedding was detected.The results showed that the Bartha K61vvccine provided good immuno-protection aaainst the classical PRV-EA strain,but only paaiaCy protected aaainst the popular variant strain PRV-XT.AH the pigs in the PRV-TA strain chdengc group showed no obvious clinicai symptoms；while the PRV-XT chaCenge group showed obvious clinicai symptoms.The above results indicate that the attenuated raccinc Bartha K61strain has a good protective effect on taditional strains,but not on the endangered strains.Key words:pseudorabics；Bartha K61live vaccine；PRV-TA strain；virulent strain PRV-XT；chdengc protection expeanient Corressonding authors:YANG Han-chun,E-mai:yanghanchunl@；HE Qi-gai,E-mai:he628@maiL hzau. 伪狂犬病（Pseudorabics,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabics vias,PRV"引起和羊等多种家畜收稿日期：2019-06—18基金项目:国家生猪产业技术体系资助项目（CARS-35）作者简介:严伟东（1979-）,,研究员,生，动物病毒分离鉴定、新型生物制品研制与应用工作,E-maC：yanwd2007 @163-com通讯作者:杨汉春,E-mait: yanghanchun1@；何启盖，E-mail:he628@maiC 的一种急性[1]o其征为发热，奇痒脊髓起母障碍、流产、和吸症状％新生出症状外还%PRV的天然宿主、贮存者和源％2070年代，我国利引进了活Bartha K61株，到了t控制[2]o自2011年以来，的行在全国范内势，目前为业较为严重的疾病之一'35（%多使用基因缺失活疫苗免疫的16中国兽医杂志2020年（第56卷）第7期Chinese Journai of Veterinara Medicine规模化猪场依然出现了猪伪狂犬病暴发。
猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株和变异株主要免疫原性基因分析
猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株和变异株主要免疫原性基因分析杨涛;张丹英;赵冉;陈琼【摘要】Swine pseudorabies has occurred in many provinces in China since the end of 2011 and PRV variant strains have been confirmed as the causative agents.In addition,some reports showed that the currently used vaccines did not provide complete protection.In the present study,the homology of gB,gC and gD genes and their deduced amino acid sequences of pseudorabies Bartha-K61 vaccine strain and variant strains were analyzed in order to compare the differences in these genes coding for major immunogenic proteins.As a result,the protein sequences of Bartha-K61 vaccine strains and variant strains was 96.3％～ 96.9％ identical but 23 differences in gB,92.7％～ 93.1％ identical but 25 differences in gC and 96.8％～ 97.3％ identical but 10 differences ingD,respectively.Phylogenetic analysis of deduced amino acid sequences ofgB,gC and gD genes showed that Bartha-K61 vaccine strains and variant PRV strains belonged to two different evolutionary branches.%自2011年底以来,我国多个省份暴发了猪伪狂犬病,一些研究院所证实当前猪伪狂犬病毒流行株发生了一定程度的变异,疫苗不能提供完全的保护.为了在分子生物学水平上比较不同厂家猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株,以及与当前流行的猪伪狂犬病病毒变异株,在主要免疫原性蛋白之间的差异,选取了4个厂家的活疫苗Bartha-K61株,通过二代测序方法进行测序,对Bartha-K61株gB、gC和gD这3种主要免疫原性基因以及推导出的氨基酸序列与变异株之间进行同源性分析.结果显示,Bartha-K61疫苗株与变异株gB蛋白序列中有23处特征性的差异,同源性为96.3％～96.9％;gC蛋白序列中有25处特征性的差异,同源性为92.7％～93.1％;gD蛋白序列中有10处特征性的差异,同源性为96.8％～97.3％;以gB、gC和gD氨基酸序列建立的进化分析结果显示,Bartha-K61疫苗株与变异株分属两个不同进化分支.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2017(025)004【总页数】6页(P50-55)【关键词】猪伪狂犬病;Bartha-K61株;免疫原性基因【作者】杨涛;张丹英;赵冉;陈琼【作者单位】厦门市动物疫病预防控制中心,厦门361009;厦门市动物疫病预防控制中心,厦门361009;厦门市动物疫病预防控制中心,厦门361009;厦门市动物疫病预防控制中心,厦门361009【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1Abstract:Swine pseudorabies has occurred in many provinces in China since the end of 2011 and PRV variant strains have been con fi rmed as the causative agents. In addition, some reports showed that the currently used vaccines did not provide complete protection.In the present study, the homology of gB, gC and gD genes and their deduced amino acid sequences of pseudorabies Bartha-K61 vaccine strain and variant strains were analyzed in order to compare the differences in these genes codingfor major immunogenic proteins. As a result, the protein sequences of Bartha-K61 vaccine strains and variant strains was 96.3% ～ 96.9% identical but 23 differences in gB,92.7% ～ 93.1% identical but 25 differences in gC and 96.8% ～ 97.3% identical but 10 differences in gD, respectively. Phylogenetic analysis of deduced amino acid sequences of gB, gC and gD genes showed that Bartha-K61 vaccine strains and variant PRV strains belonged to two different evolutionary branches.Key words:Pseudorabies; Bartha-K61 strain; immunogenic gene伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）属于疱疹病毒科、α疱疹病毒亚科、水痘病毒属，可以感染多种家畜及野生动物，对养猪业危害极大。
猪伪狂犬病的免疫及注意事项
猪伪狂犬病的免疫及注意事项
目前用于伪狂犬病免疫接种的疫苗有灭活疫苗、弱毒疫苗和基因缺失疫苗。
伪狂犬病灭活疫苗主要是鄂A株。
弱毒疫苗的毒株较多，国内使用的是匈牙利Barth-K61株。
猪伪狂犬基因缺失疫苗的优点是不仅安全有效，而且能够免疫接种猪和野毒感染猪，国际上通用较理想的是TK-/gE-双基因缺失疫苗，目前国内已有TK-/gE-/gl-三基因缺失疫苗。
参考免疫程序：
商品猪：3日龄时用伪狂犬基因缺失苗0.5头份滴鼻（伪狂犬母源抗体低的仔猪），25日龄时用伪狂犬基因缺失苗肌内注射。
后备母猪：配种前45天伪狂犬基因缺失疫苗肌内注射，3周后加强免疫1次。
经产母猪：产前4周及产后30天，用猪伪狂犬基因缺失疫苗各免疫1次。
种公猪：每年用伪狂犬基因缺失疫苗免疫3~4次。
注意事项：目前所有的伪狂犬疫苗只能抑制临床症状，而不能控制其传染和排毒。
因此，仅用疫苗免疫是不能完全消除病毒，需要采用试验检测的方法，对猪群进行检疫、隔离和淘汰阳性猪，净化猪群，建立无本病的健康猪群才能达到根除本病的目的。
（资料来源：中国养猪网）
李元格主讲：后备母猪的挑选及管理细节。
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ST 传代细胞源猪伪狂犬病毒活疫苗（Bartha⁃K61 株）超剂量免疫安全性实验⁃林德锐，等 试验研究 · 49 ·
有无肿大等病理变化的观察检查。
2 结果与分析 将试验用 3 批疫苗对 20~25 日龄、50~55 日龄
的健康猪和怀孕 82~94 日母猪进行超剂量免疫接 种。接种后观察 14 日，所有接种猪精神、食欲、体 温等均正常。详细结果见表 1~表 3。 各批次疫苗 超剂量肌肉注射不同日龄的试验猪免疫接种前 7 日及免疫接种后 14 日的体温监测结果（每天上、下 午各测温 1 次）详见图 1~图 12。
· 48 · 试验研究
广东畜牧兽医科技 2018 年（第 43 卷）第 2 期
ST 传代细胞源猪伪狂犬病毒活疫苗 （Bartha⁃K61 株）超剂量免疫的安全性实验
林德锐，吴文福*，黄秋雪，李宁，赖月辉，侯高伟 （广东永顺生物制药股份有限公司，广东 广州 511356）
摘 要：ST 传代细胞生产 3 批次伪狂犬病毒活疫苗（Bartha⁃K61 株）中试产品，检验合格后对 20~25 日龄、50~55 日龄健康猪以及妊娠后期的母猪，分别采用耳后颈部肌肉注射方式进行超 剂量免疫接种，同时设立相应对照组。超剂量免疫后各组猪只精神、食欲、体温、生产状况等 经持续观察记录，均表现为正常。结果表明，ST 传代细胞生产猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61 株）对不同日龄猪和妊娠后期母猪进行超剂量免疫接种均是安全的。
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10 精神、食欲、体温正常，无不良Байду номын сангаас应
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10 精神、食欲、体温正常，无不良反应
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0 精神、食欲、体温正常，无不良反应
图 5 试 ST01 批疫苗超剂量肌肉注射 50~55 日龄猪免前 7 日以及 免后 14 日的体温监测结果
图 1 试 ST01 批疫苗超剂量肌肉注射 20~25 日龄仔猪免前 7 日以及 免后 14 日的体温监测结果
广东永顺生物制药股份有限公司实验动物场 自繁自养的无 PRV、CSFV、PRRSV、PCV2、PPV 病史 以及伪狂犬病病毒中和抗体呈阴性（PRV 中和抗体 效价≤1∶4）的健康猪。 1.3 超剂量免疫接种的安全试验
选取 20~25 日龄、50~55 日龄的健康猪和怀孕 82~94 日的母猪，分别用 3 批疫苗以耳后颈部肌肉 注射方式进行免疫接种，每批疫苗免疫 5 头猪， 每头猪接种 10 头份疫苗，接种后每天上、下午各 测温并观察 1 次，连续 14 天，观察猪的精神、食 欲、体温状况并跟踪母猪的生产情况。各组分别设 立非免疫对照猪 5 头，与免疫猪在相同条件下饲 养并测温观察。
疫苗（Bartha⁃K61 株，传代细胞源）以超剂量对 20~ 25 日龄仔猪采用肌肉注射方式进行免疫接种，对 猪只是安全的。
表 2 超剂量肌肉注射 50~55 日龄猪的安全试验结果
组别
试 ST01 试 ST02 试 ST03 对照组
免疫数量 接种剂量 （头） （头份）
安全试验结果
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10 精神、食欲、体温正常，无不良反应
除了一般常规性安全检查以外，还对接种部 位在接种后直到试验结束前做有无皮肤发红颜色 变化、有无肿胀和硬块形成、接种部位附近淋巴结
收稿日期：2017⁃10⁃19 作者简介：林德锐（1978⁃），男，广东省阳春市人，学历本科，职称兽医师，主攻方向兽医生物制品生产经营管理 . E⁃mail: linderui@ *通讯作者：吴文福（1960⁃），男，高级兽医师，从事兽用生物制品生产与研发工作 . E⁃mail:wuwf18@
关键词：猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61 株，传代细胞源）； 超剂量免疫 中图分类号：S852.65+1 文献标识码：B 文章编码：1005⁃8567（2018）02⁃0048⁃04
猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由猪伪狂犬病 毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的以发热、脑脊髓 炎、奇痒、呼吸和神经系统障碍为主要特征一种急性、 热性、高度接触性传染病［1］。1902 年匈牙利兽医学家 Aladar Aujeszky 首次报道了该病［2］，1947年传入我国， 至今已有全国30 多个省份发生流行，是严重危害我 国养猪业的重要疫病之一［3］。
图 6 试 ST02 批疫苗超剂量肌肉注射 50~55 日龄猪免前 7 日以 及免后 14 日的体温监测结果
图 2 试 ST02 批疫苗超剂量肌肉注射 20~25 日龄仔猪免前 7 日以及 免后 14 日的体温监测结果
图 7 试 ST03 批疫苗超剂量肌肉注射 50~55 日龄猪免前 7 日以 及免后 14 日的体温监测结果
1 材料与方法
1.1 试验用疫苗 实验室研制的猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61
株，传代细胞源）3 批，分别为：试 ST01，病毒含 量 106.8 TCID50/头 份 ；试 ST02， 病 毒 含 量 106.6 TCID50/头份；试 ST03，病毒含量 107.0 TCID50/头份。 1.2 试验用动物
表 1 超剂量肌肉注射 20~25 日龄仔猪的安全试验结果
组别
试 ST01 试 ST02 试 ST03 对照组
免疫数量 接种剂量 （头） （头份）
安全试验结果
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10 精神、食欲、体温正常，无不良反应
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10 精神、食欲、体温正常，无不良反应
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10 精神、食欲、体温正常，无不良反应
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0 精神、食欲、体温正常，无不良反应
该病对不同年龄段的猪均有致病性，母猪发 病后可发生流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍，哺 乳仔猪患病后可出现神经症状，死亡率可达 100 %，育肥猪则出现呼吸道症状，增重迟缓，饲 料报酬率降低，极大的影响了我国养猪业的生产 效益［4⁃5］。
目前我国主要是通过疫苗接种方式预防猪伪狂 犬病的发生。PRV Bartha⁃k61 株是 gE 基因自然缺失 株［6⁃8］，毒力大大减弱的同时保留了良好的免疫原性， 从而被广泛作为疫苗毒株推广使用。本试验通过用 本公司试制的猪伪狂犬病活疫苗（Bartha⁃K61 株，传 代细胞源）以超剂量（10 头份）免疫不同日龄仔猪和怀 孕母猪，并对其安全性进行评价。