1.Petrifilm菌落总数测试片PAC(20070423)
Petrifilm肠杆菌科测试片法霉菌和酵母菌测试片法ppt课件
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
国家汽车产业政策的相继出台和落实 ，势必 对汽车 消费起 到了拉 动作用 ；而银 行汽车 消费信 贷的推 出和实 现，则 是汽车 消费市 场快速 成长和 发展不 可或缺 的重要 手段。
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Microbiology
国家汽车产业政策的相继出台和落实 ，势必 对汽车 消费起 到了拉 动作用 ；而银 行汽车 消费信 贷的推 出和实 现，则 是汽车 消费市 场快速 成长和 发展不 可或缺 的重要 手段。
什么是肠杆菌科？
好氧或兼性厌氧发酵型G-杆菌
氧化酶阴性
氧化酶阳性
肠杆菌科
乳糖发酵
非乳糖发酵
3M PetrfilmTM 肠杆菌科测试片法
检样 25g(ml)样品＋225ml 稀释，接种Petrifilm测试片
371°C, 24 2h
菌落计数
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结果报告
Microbiology
国家汽车产业政策的相继出台和落实 ，势必 对汽车 消费起 到了拉 动作用 ；而银 行汽车 消费信 贷的推 出和实 现，则 是汽车 消费市 场快速 成长和 发展不 可或缺 的重要 手段。
Microbiology
国家汽车产业政策的相继出台和落实 ，势必 对汽车 消费起 到了拉 动作用 ；而银 行汽车 消费信 贷的推 出和实 现，则 是汽车 消费市 场快速 成长和 发展不 可或缺 的重要 手段。
背景
1870年以来，大肠菌群检测一直用于 食品工业中卫生状况的监控
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国家汽车产业政策的相继出台和落实 ，势必 对汽车 消费起 到了拉 动作用 ；而银 行汽车 消费信 贷的推 出和实 现，则 是汽车 消费市 场快速 成长和 发展不 可或缺 的重要 手段。
菌落总数测定
菌落总数的检验程序图
检样 10倍系列稀释 选择2~3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养平皿内 每皿内加入适量培养基 (PCA) 36±１℃ 48±2h
方格设计，便于计数； 菌落分布特别均匀； 平行平板菌落结果一致性比较好，这与避 免了培养基对细菌热损伤有关； 菌落蔓延或半透明菌膜现象很少发生； 安全方面：不像玻璃平皿易碎、对人员造 成潜在的伤害，另外密封比较好，不容易 直接接触。
缺点： 某些有红色颗粒的，需要注意；粘稠的液 体样品，不易分散开；表面活性比较大， 易流出；泡沫比较丰富的样品等 颜色特别重的，如桔黄色，掩盖了菌落； 抑菌剂浓度比较高时；辣根及辣根粉、大 蒜及洋葱制品； 某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或 菌落模糊的现象，大部分是芽胞杆菌。
培养
琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养 48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。
菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数 器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落 计数以菌落形成单位（colony-forming units， cfu）表示。 选取菌落数在30cfu～300cfu之间、无蔓延菌 落生长的平板计数菌落总数。低于30cfu的平 板记录具体菌落数，大于300cfu的可记录为 多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个 平板的平均数。
菌落计数 报告
样品的稀释
固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均 质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1min～ 2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质 袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制 成1:10的样品匀液。 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛 有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无 菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠) 中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
菌落总数测试片环氧乙烷灭菌法研究
Ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ Ｅｔ ｈｙ ｌ ｅ ｎ ｅ Ｏｘ ｉ ｄ ｅ Ｓ ｔ ｅ ｒ ｉ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｅ ｒ ｏ ｂ ｉ ｃ Ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ Ｃ ｏ ｕ ｎ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｔ ｅ ｓ ｔ Ｐ ｉ ｅ ｃ ｅ
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２ ． Ａ ｎ ｘ ｉ ｎ Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｓ ｅ ｒ ｖ ｉ ｃ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｍｉ ｔ ｅ ｄ Ｌ ｉ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｙ ｔ Ｃ ｏ ｍ ｐ ｎｙ ａ ｉ ｎ Ｊ ｉ ｎ ｌ ｉ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ，Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｃ ｈ ｕ ｎ ，Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ １ ３ ０ ０ １ ２ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ｏ ｘ ｉ ｄ ｅ ｗ ｉ ｔ ｈ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ，ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｒａ ｔ ｉ ｔ ｏ ｎ， ｓ ｔ ｅ ｉｌ ｒ ｉ ｚ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｔ ｉ ｍｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｌ ａ ｉ ｔ ｖ ｅ ｈ ｕ ｍｉ ｄ ｉ ｔ ｙ ．Ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｅ ｎ ｅ ｏ ｘ ｉ ｄ ｅ ｓ ｔ ｅ ｉ ｒ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ
ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｒｅ ａ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍ ｉ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｈ ｅ ｏ ￣ ｅ ｎ ｔ ，ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ｌ ａ ｎｄ ａ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｉ ｇ ｃ ａ ｌ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｅ ｉ ｒ ｌ ｉ ｚ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ
霉菌和酵母菌检验测试片操作方法PetrifilmandMoldcount
心
菌落扁平
通常菌落中心颜色深暗
3
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Years and mold count=0
Yeast count=12
图 3 所示在 PYM 测试片上没有霉菌和 Mold count=4
酵母菌菌落.
图 4 所示在 PYM 测试片上有少数量的
图 7 所示,在测试片上霉菌菌落出现 图 8a 和图 8b 为同一样品的测试结果.
堆挤和彼此覆盖,为了方便计数,可将 图 8a 为 1:10 样品稀释液,菌落小、虚
测试片分成几个区域,计算每个有明 弱暗淡、数量多、计数困难。图 8b
显暗色中心的菌落.所划的方形区内 为 1：100 样品稀释液，生长菌落数
霉菌和酵母菌检验测试片 一、操作方法
Petrifilm and Mold count MoldTM 测试片为预先制备好的培养基系统,它含有 一种冷水可溶性的凝胶剂，营养基和一种指示染剂，可提供对比，利于菌落 计数。
[贮藏]
1、未开封时，冷藏于≤8 2、已开封的，将封口以 3、保存再封的袋于≤25
℃（≤46℉），并在保存期 胶带封紧。
积上，切勿扭转压板。
[培养]
[解释]
13、测试片的透明面朝上，14、可目视及用标准菌落
可堆叠至 20 片，于
计数器或其它的照明放大
21-25℃（70-77℉）培养 镜计数，并可参考判读卡
3-5 天。
计算菌落数。
大的或快速生长的霉菌在
培养 5 天后会呈现含混模
糊的菌落，应在培养 3 天
2
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菌落总数几种检测方法的介绍—苗丽
苗 丽
主要讲述以下几个问题
第一：澄清菌落总数概念 第二：国标(GB)和行标(SN)的差异 第三：实验操作中的一些注意事项 第四：菌落总数3M快速方法介绍
一、澄清菌落总数概念
菌落总数是指食品检样经过处理在一定条 件下培养后所得1ml（g）检样中所含菌落的总 件下培养后所得 （ ） 我们知道单个细菌我们肉眼是看不到的， 数。我们知道单个细菌我们肉眼是看不到的， 但在人为给它们提供一定条件如培养基， 但在人为给它们提供一定条件如培养基，适宜 的温度、时间、 、需氧条件等。 的温度、时间、PH、需氧条件等。在这样一 个环境中，单个细菌不断分裂、繁殖，最后发 个环境中，单个细菌不断分裂、繁殖， 展成为我们肉眼可见的菌落， 展成为我们肉眼可见的菌落，所以我们说菌落 总数可以作为判定食品被污染程度的标志， 总数可以作为判定食品被污染程度的标志，也 是对检样进行卫生学评价时的一个重要依据。 是对检样进行卫生学评价时的一个重要依据。
四、菌落总数3M快速检测法 四、菌落总数3M快速检测法
具体操作在下面实验中介绍。 3M的菌落总数测定时间也是48小时，但 是它可以省去我们很多的时间和精力， 测试片为一次性的，用过后即可高压处 理掉，省去我们刷洗和干烤培养皿以及 配制培养基的时间，效果也还不错。
实验如下： 快速 1# 118 2# 200 3# 10-1 103 10-2 12 10-3 2
3、吸取均质好的样品时，吸管插入液面 的深度要合适，插得太靠表面，如做肉 样时，吸入的可能是脂肪，太靠下，又 可能吸的是渣子，所以要插入一个合适 的深度，如行标中提到的插入液面下 2.5cm左右。
4、加过样品后倾倒培养基的时候，记着 将培养基倒入平皿后一定要立即旋转培 养基，让样品液和琼脂培养基充分混合， 尽可能使长出的菌落均匀，容易计数。
菌落测试片操作方法
菌落测试片操作方法
菌落测试片（Colony testing plate）是一种常用于菌落计数和鉴定微生物菌种的实验材料。
下面是一般的菌落测试片操作方法：
1. 准备所需材料和试剂：菌落测试片、无菌培养基、无菌盖玻片、无菌棉签、三聚氨酯酒精灯或酒精灯等。
2. 消毒工作台或无菌操作台，将其表面喷洒酒精并点燃，等待燃烧完全。
3. 取出菌落测试片，并在标签上标记上实验相关信息，如日期、菌株名称等。
4. 打开盖玻片包装袋，并取出无菌盖玻片，放在无菌操作台上。
5. 用棉签沾取待测的微生物样品，然后均匀地涂抹在盖玻片的一侧。
6. 取出一块菌落测试片，将其盖在盖玻片上，使其与微生物样品直接接触，并尽量压实。
7. 将菌落测试片放置在无菌培养基的培养皿或培养板上，轻轻按压一下，使其与培养基贴合。
8. 将盖玻片翻过来，使菌落测试片朝上，将其放在培养皿或培养板上。
9. 将培养皿或培养板密封好，然后置于适当的培养条件下进行培养，如温度、光照等。
10. 根据实验需要，培养一定时间后，观察菌落的生长情况，可以进行计数和鉴定。
在操作过程中，注意尽量保持操作环境的无菌，并严格遵守相关的操作规范和安全规定。
项目实训手册-项目9-方便面菌落总数快速检验-3M试纸片概要
《食品微生物检验技术》课程实训指导手册项目九方便面菌落总数快速检验-3M试纸片（依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片操作说明书）一、实训目的以3M试纸片进行样品中菌落总数计数，熟练使用各类3M试纸片进行检验操作，明确常用微生物快速检验方法的原理与优缺点与注意事项。
二、实训原理Petrifilm TM是3M公司专利发明，将传统的琼脂平板或试管的培养方法浓缩在小小的一张测试片上，现阶段共有十余种测试片，比较常用的有：菌落总数测试片、大肠菌群计数测试片、快速大肠菌群计数测试片、高灵敏度大肠菌群计数测试片、大肠杆菌/大肠菌群计数测试片、肠杆菌科测试片、霉菌和酵母菌计数测试片、快速金黄色葡萄球菌计数测试片、环境李斯特菌测试片三、实训要求本项目3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片说明书进行检验操作，标准与操作说明书规定了3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验的基本要求、操作程序和结果判定。
本项目全面考察学生依据标准与操作说明进行微生物快速检验的能力。
本项目实施过程可分为样品准备、接种、培养、计数4个步骤。
本项目按2人/组为单位进行操作，要求在实验室完整使用3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验。
四、实验材料和设备1试剂和溶液无菌生理盐水、75%乙醇。
2 仪器和设备除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料包括冰箱、天平、剪刀、镊子、移液管、锥形瓶、试管、恒温培养箱、均质器及耗材、达到精度要求的pH计，超净工作台或百级洁净实验室。
五、实训任务（包含结果计算）1、样品制备以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。
如有包装，用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
a）固体和半固体样品：无菌操作，称取25 g样品置盛225 mL生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
Petrifilm测试片使食品微生物检测更高效更准确
24 hr @ 36°C 总用时88-128HRS
将阳性可疑菌落接 种到TSI和LIA斜面，
判读生化鉴定结果，并 进行进一步的血清学鉴 定。
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(低菌量样品）
测试时间: 40-44 HRS
菌落总数测试片说明书
菌落总数快速检测纸片说明书1 产品介绍菌落总数测试片为预先制备好的培养基系统，它是一种预先制备好的一次性快速检测产品，含有细菌生长所需的基本培养基、冷水可溶性凝胶剂及指示剂，利于菌落计数。
与传统检测方法相比较，省去了培养基的配置、培养器皿的清洗和灭菌处理等大量辅助性工作，操作简单，大大缩短了检测时间。
本产品适合于各类食品、食品原料、水果及饮用水中菌落总数的检测，也可用于食品加工厂及设备表面的卫生检查。
执行标准：GB 4789.2-2010《食品安全国家标准、食品微生物学检测、菌落总数测定》。
2 操作步骤●样品处理取样品25mL(g)放入225mL无菌稀释液（磷酸盐缓冲液或生理盐水）的取样器或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1mL的灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL 稀释液的试管内，摇匀后得到1:100的样品稀释液，依次往下稀释，制备10倍系列稀释样品匀液。
●接种一般样品选1~2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品可直接吸取原液进行检测。
将测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液缓慢滴加到测试片中间，将上层膜由内到外缓慢盖下。
每个稀释度接种两片，同时取1mL无菌稀释液接种另一测试片作空白对照。
●培养将接种好的测试片（可叠放）正置放入36±1℃培养箱中培养24h±2h，堆叠片数不超过12片；水产品30±1℃培养48±2h。
●结果判读细菌在测试片上呈现红色斑点，选取菌落数在10~300CFU之间的测试片进行计数。
3 计数原则及报告方式●如只有一个稀释度测试片上的菌落数在适宜计数范围内，计算该稀释度两个测试片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，计数为每克（或每毫升）中菌落总数。
●若两个连续的稀释度的测试片菌落数在适宜计数范围内时，按式（1）计算：式中：N▁样品中菌落数；ΣC▁测试片上（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1▁第一个适宜稀释度测试片数；n2▁第二个适宜稀释度测试片数；d▁稀释因子（第一个稀释度）上述数据经“四舍五入”后，表示为25000或2.5×104。
微生物新手培训教材(菌落总数)
培养基成分
PCA（平板计数琼脂培养基）
胰蛋白胨
5.0g
酵母浸膏
2.5g
葡萄糖
1.0g
琼脂
15.0g
蒸馏水
1000mL
注：胰蛋白胨提供碳源和氮源；酵 母浸粉提供B族维生素；葡萄糖提 供能源；琼脂是培养基的凝固剂。
还有一个方法：观察菌落的形态特征，老前辈们基本靠这个去区分的。
• 5、菌落总数计数包括霉菌吗？
• 答：菌落总数的概念是这么规定的，食品检样经过处理，在一 定条件下（如培养基、培养温度、培养时间等）培养后，所得 每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。所以也包括在PCA 上生长的霉菌和酵母等微生物。
计数（标准上有）
• 1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两 个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每 g ( mL )样品中菌落总数结果。
• 2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式 ( 1 )计算:
• 3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300CFU ,则对 稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可 计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
菌落总数的问题（是一些新手问的平板去问别人这是什么菌？
•
答：这是看不出来的，菌落总数只能检测出样品卫生情况，一个样品的 细菌数量，不能验证出什么菌。这是一个不应该犯的误区。
• 2.若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU~300CFU 之间,其中一部分小 于 30CFU 或大于300CFU 时。就会有人不知道怎么去判定那个梯度更接近 30-300。
Petrifilm测试片法检测环节表面菌落总数的效果评价
Ｐｅｔｒｉｆｉｌｍ测试片法检测环节表面菌落总数的效果评价传统的菌落总数国标检测方法已经使用多年，且广为大家接受，其准确性毋庸置疑。
其主要缺点为：需要专门的实验室和专业检验人员，配制专门的培养基，消毒、清洗工作量大，出具检验结果的时间较长，很难适应现代食品行业的自检自控和和食品卫生的现场监管，世界各先进国家无不致力于发展微生物便捷检测技术。
本研究是对美国3M公司生产用于检测环节标明菌落总数的测试片进行实验室效果验证。
1 材料和方法1．1 材料1.1．1 测试片测试片是美国3M公司发明的一种用于细菌计数的可再生水合物的干膜，它由上下两层薄膜组成，下层的聚乙烯薄膜上印有网格并且覆盖有细菌生长所需的培养基，上层是聚丙烯薄膜。
使用时只需接种1ml待测样品的稀释液在下层的培养基上，盖上上层的聚丙烯薄膜，此时聚乙烯层上的培养基由于水的作用生成水合物，适合普通细菌生长。
测试片中含有的红色指示染色剂可以使菌落着色而便于判读。
1．2 标准菌株金黄色葡萄球菌(标准菌株号：ATCCl2600)和大肠杆菌(标准菌株号：ATCC8095)，由复旦大学公共卫生学院微生物教研室提供。
1．3 人工污染标准菌株的不锈钢平板实验室人工配置含有上述标准菌株菌壤液，按一定比例混合培养后，得到2种高低浓度不同的混合菌壤液，其菌落总数的准确浓度用GB4789．2—2003营养琼脂平板浇注法得出，分别为2 680efu／ml和740cfu／ral，每种浓度菌壤液每隔5 min吸取2份0．3ml菌壤液，依次平行涂布到2块(1对)8cmx10cm无菌不锈钢平板上，共涂抹24对(高低浓度组分别相当于1005 cfu／100cm2和278cfu ／100em2)，用L型玻璃棒在其表面涂沫均匀，然后将不锈钢平板放至层流通风橱干燥10mia作为采样对象，依干燥时间顺序随机化配对编号后立即由2名实验员分别用3M测试片和国标法对同组不锈钢表面进行菌落总数检测。
菌落总数测试片安全操作及保养规程
菌落总数测试片安全操作及保养规程前言菌落总数测试片是在食品、饮料、制药等行业中广泛应用的一种实验室用品，用于检测样品中的微生物数量。
正确的操作和保养，不仅能够保证测试数据的准确性，还能延长设备的使用寿命。
本文档旨在为使用菌落总数测试片的实验室人员提供安全操作及保养规程，以便正确且有效地使用该设备。
安全操作规程1.检测前准备工作在进行菌落总数测试前，需要进行一些准备工作。
•首先，检查试剂盒是否完整、完好。
•其次，需要对实验室进行清洁，确保试样不会受到外来污染。
•最后，检查检测设备是否工作正常。
2.操作步骤具体的菌落总数测试操作步骤如下：1.将手持菌落计瓶插入加热设备中，加热到80℃左右（不要超过90℃）。
2.准备好待测样品，并使用消毒液将样品平台擦拭消毒。
待样品平台干燥后，打开试剂盒，取出测试片。
3.拿起测试片，用过滤棉球沾取少量样品，涂在测试片的圆形区域上，记得不要涂满，要注意对称，以避免对测试结果的影响。
4.将测试片放入一个透明的塑料袋里，将原袋弯角45°折叠，收紧口部，放置在加热设备中，加热时间为30min ± 1min。
5.取出加热设备中的透明袋，打开袋口，拿起测试片，将其反转在富营养液培养皿中，培养时间为48小时± 4小时。
6.在培养后的菌落数量区域，数清菌落数量，并将结果记录在实验记录簿上。
3. 注意事项在使用菌落总数测试片过程中，还需要注意以下事项：1.尽量避免使用过期的试剂盒和菌落计瓶。
2.操作过程中需要佩戴手套和口罩。
3.遵循操作规程，严禁进行任何私自操作或修改设备设置。
4.由专人负责使用和保养设备，不得擅自借用或转移使用。
5.每次操作后，要及时清洗设备以保证设备的清洁度和准确性。
保养规程菌落总数测试片是一种高精度、高灵敏度的实验室设备，因此需要进行专业的保养和维修。
1.日常保养日常保养是延长菌落总数测试片使用寿命和保证测试结果准确性不可缺少的一部分。
Petrifilm测试片法在药品微生物检验中的应用研究
图 3 金黄色葡萄球菌 Fig 3 Staphylococcus aureus
4 结论 欧洲药典、美国药典及中国药典 2010 年版中都
收录了微生物检验替代方法验证的指导原则。各检 验机构可以根据自身条件和产品特点选用其它非药 典收录的方法替代药典方法进行药品检验，使用前 必须在有产品存在的情况下进行方法验证，以证实 该方法等同于或优于药典规定的检验方法。本文通 过在 20 中药品品种中加入 4 种菌液进行回收比较， 证明平皿法与 Petrifilm 测试片法回收率未有显著性
WANG Lu － hua，LIU Ting － ting，LU Jing － guang，SUN Zhen － ping
（ Qingdao Institute of Drug Control，Qingdao 266071，China ）
Abstract Objective： To discuss the application of petrifilm paper disk method in microbial limit tests of drugs． Methods： Working strains were inoculated in the tests in which results of petrifilm paper disk method for 20 species were compared with those of petri dish method． Results： There were no significant differences between the two methods when them have been applied in drug inspection． Conclusion： Petrifilm paper disk method is simple and easy to handle which can be applied in microbial tests for certain varieties of drugs． Key words： drug inspection； microbioassay； working strains； petri dish method； petrifilm paper disk method； nbspcounting method
菌落总数测试片定量检测的方法验证
菌落总数测试片定量检测的方法验证
苏妙仪;严家俊;张娟
【期刊名称】《食品安全导刊》
【年(卷),期】2022()34
【摘要】本试验应用菌落总数测试片方法,探究其在奶及奶制品、饮料、冷冻食品、肉制品、方便食品和宠物食品这6类食品中快速测定大肠埃希氏菌总数的可行性,
并与国家标准检测方法《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》(GB 4789.28—2013)比较,进行定量检测结果符合率、相关性和差异性的分析,验证菌落总数测试片测定结果的准确性。
结果显示,菌落总数测试片法与国标检
测方法测定结果的符合率达100%;不同类型样品菌落测试片法与国标检测方法的
测定结果均为强相关,R^(2)值均达0.999以上;F值均小于F crit,且P值大于0.05。
两种方法检测结果无显著性差异。
菌落测试片法具有快速、简便、能抑制菌落蔓延且易于观察等优点,相比国标检测方法菌落计数时长缩短1/2。
在实际应用中,既可
确保检测的准确性,又可提高检测效率。
【总页数】4页(P102-105)
【作者】苏妙仪;严家俊;张娟
【作者单位】广东产品质量监督检验研究院
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
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大肠杆菌的检测(MPN计数法)
食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测（MPN计数法）院系：食品科学与药学学院班级：食科114姓名: 张花学号: 114031431组长: 张军玲成员：张花赵晶郁朱娟娟大肠杆菌Petrifilm测试片计数法摘要食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段,而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一.根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。
Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。
该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。
关键词大肠杆菌Petrifilm测试法1设备和材料1。
1恒温培养箱:36±1℃。
1.2冰箱2～5℃。
1.3恒温水浴箱 :44。
5±0。
2℃。
1.4天平:感量0。
1g.1.5均质器1.6振荡器。
1.7无菌吸管：lmL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0。
1mL刻度）或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶：容量500mL。
1。
9 玻璃珠:直径约5mm。
1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸1。
11试管架.2. 培养基和试剂2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。
2.2EC肉汤.2。
3蛋白胨水.2。
4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP—VP实验用）。
2。
5磷酸盐缓冲液。
2。
6无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
2。
71mol/L氢氧化钠（NaOH ）：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。
2.81mol/L 盐酸（HCI ）：移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml。
3检验程序4.样品稀释4。
1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
测试片使用说明环境李斯特
3PetrifilmTMEnvironmental Listeria Plate该手册能指导你掌握3M TM Petrifilm TM 环境李斯特菌检验测试片的使用。
如需更多信息，请与3M 微生物产品代理联系。
3M TM Petrifilm TM Environmental Listeria (EL) 测试片是一种预先制备好的培养基，含有选择性试剂，营养成分，冷水可溶性的凝胶和有助于菌落检测的显色指示剂。
Petrifilm EL 测试片可用于检测或计数环境样本中的李斯特菌数。
Petrifilm EL 测试片检测的李斯特菌包括单核增生李斯特菌(L.monocytogenes ) 英诺克李斯特菌 (L.innocua )，格氏/墨氏李斯特菌(L.grayi/murrayi )，威尔李斯特菌(L.welshimeri )，但不能区分各种菌。
环境条件和消毒剂可能会抑制或损伤微生物。
缓冲蛋白胨缓冲液(Buffered Peptone Water, BPW) 能用作修复肉汤和Petrifilm EL 测试片结合使用。
但李斯特菌在缓存蛋白胨缓冲液中的修复过程不是增菌步骤。
Petrifilm EL 测试片可用于定性，半定量，定量检测。
需要进一步的指导，请参考使用部分的提示。
1. 图1 为长有李斯特菌的典型Petrifilm EL 测试片。
判读或计数所有的紫红色菌落为李斯特菌。
如果在26-29 小时，有灰色或淡粉红色菌落存在，需继续培养。
在培养时间内，由灰色或淡粉红色加深为紫红色的菌落应判定为李斯特菌。
在最大培养时间(30小时)仍保持灰色或淡粉红色的菌落不应判读为李斯特菌。
不考虑或计数圆形轮廓上的菌落，因为它们不受选择性培养基的作用。
定性判读：测试片检出李斯特菌。
半定量判读：李斯特菌的含量应记录为对采样区域和企业标准有指导意义的形式(如低，中，高，或可接受和不可接受)。
3MTM Petrifilm TM Environmental Listeria Plate2. 该Petrifilm EL 测试片在培养30小时后没有菌落生长，实验结束。