CTAB抽提液(RNase free)
CTAB法提取RNA
9.重复8 10.取上清，加入1∕3体积的3M NaAc(pH5.2) 和2.5倍体积的无水乙醇（预冷），-70℃放置
30min
11.样品从-70℃移出后自然解冻℃ ，4℃、
13000rpm、15min离心 12. 弃上清，每管加300-1000ul75%乙醇（预
• • •
6.弃上清，沉淀用600ulTrizol溶解，混匀， 室温静置5min，加入120ul2M Na Ac (pH4.8), 混匀后加入600ul的酸性酚：氯仿：异戊醇 （25：24：1），涡旋混匀，水浴10min， 4℃、12000rpm、15min离心
7.取上清，加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25： 24：1），涡旋混匀，冰浴10min，4℃、 12000rpm、15min离心
3.冰盒上，每管加入900ul氯仿：异戊醇（24：1）， 涡旋混匀，冰浴10min。4℃、12000rpm 、10min 离心
4.移上清至新2ml RNase-free管，加入1∕3体积的 8M LiCl和25ul β-巯基乙醇，-20℃沉淀过夜
5.样品从-20℃移至-70℃，30min后自然解冻4℃、 13000rpm、30min离心
准备工作
1.检查液氮、研钵 2.CTAB预热，离心机4℃预冷，水 浴锅65℃，无水乙醇、75%乙醇预 冷
试剂
1.8M Licl 25ml:称Licl8.478g,用ddH2O定容至25ml 2.2M NaAc（PH4.8）50ml:称NaAc 8.203g,用ddH2O定
容至50ml,用冰醋酸调PH 3.3M NaAc （PH5.2） 50ml:称NaAc 12.305g,用ddH2O
CTAB抽提液配置
一CTAB抽提缓冲液的配制：要准备母液：1mol/L Tris-cl (PH8.0) ，0.5mol/L EDTA (PH8.0) 以及10%CTAB母液配制方法1、1M Tris-HCl 1L配制量配制方法称量121.1g Tris 置于1L烧杯中。
加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值浓盐酸7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml将溶液定容到1L。
高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却后加调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、5M NaCl 配制量1L配制方法称取292.2gNaCl置于1L 烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解加去离子水将溶液定容到1L 后，适量分成小份高温高压灭菌后，4℃保存。
3、0.5M EDTA 配制量1L配制方法称取186.1g Na2EDTA.2H2O，置于1L 烧杯中。
加入约800mL的去离子水，充分搅拌。
用NaOH调节pH值至8.0（约20g NaOH）（注意：pH值至8.0时EDTA才能完全溶解）加去离子水将溶液定容至1L。
适量分成小份后，高温高压灭菌。
室温保存。
CTAB缓冲液配制方法CTAB缓冲液 1000mL 终浓度Tris-HCl （1mol/L PH8.0） 100ml 100m mol/LNaCl （5mol/L) 280ml 1.4mol/LEDTA （0.5mol/L PH8.0）40ml 20m mol/LCTAB 20g 2% (w/v)加去离子水将溶液定容至1L。
高温高压灭菌后，室温保存。
CTAB抽提缓冲液室温保持，用前加0.3mg/ml蛋白酶K，1%（v/v）β-琉基乙醇，1%PVPPVP 10gβ-巯基乙醇10ml(PVP（化学名称：聚乙烯吡咯烷酮）是一种水溶性的乙烯基吡咯烷酮线性均聚物，主要成份为N-乙烯吡咯烷酮。
CTAB提取液配方
CTAB法DNA提取液
2%CTAB 2000ml配方
CTAB 40g
Nacl 163.64g
1M/L Tris-Hcl 200ml
0.5M/L EDTA 80ml
----------------- 定容至2000ml
1M/L Tris-Hcl 500ml配方
Tris 60.6g
加400ml水搅拌溶解
冷却后加浓盐酸调PH至8.0
定容至500ml
0.5M/L EDTA 500ml配方
EDTA 93.06g
加NAOH调PH至8.0
定容至500ml
注：1M/L Tris-Hcl和0.5M/L EDTA配方跟你配TPS一样。
2%CTAB配方可以到Takara或者其他生物公司目录上查询。
提取步骤
该法提取叶片DNA和TPS法稍有不同，简略如下：
1.提取液加800ul，当然也可以修改；
2.水浴温度改为650C，30min；
3.加500ml氯仿，上下震荡几下即可。
不过你的材料可能要死命震荡几分钟看看咋样，最好再重新用氯仿抽提一遍;
4.12000r/min离心10min,吸取上清液(比如200ml);
5.加2.5倍体积的无水酒精（比如500ml）；
6.其他步骤就一样啦。
7.如果你想提取更高质量的DNA，可以在倒掉酒精之后，用75%酒精把DNA 再洗几遍。
8.如果以上步骤还不行，那就baidu或者小木虫吧。
CTAB法提取植物DNA和RNA
1)取0.1~0.2 g幼叶片放入液氮预冷的研钵液氮种研磨成粉。
加入含有65℃预热的1 000 μl CTAB裂解液和20 μlβ-巯基乙醇的2 ml离心管中，65℃水浴裂解40~60 min，每隔10min颠倒混匀一次。
然后常温12 000 r/min离心10 min。
2)取上清，加入2 ml离心管中，加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀，4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
重复这一步骤至界面清晰。
3)取上清，加入到1. 5 ml离心管, 加入两倍体积-20℃预冷的无水乙醇和1/10体积3M的NaAc(pH=5.2), 小心颠倒均匀，-20℃沉淀10~30 min。
4)4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
弃上清，用70%的乙醇洗2~3次。
室温干燥30 min。
5)加入1μl 10 mg/ml RNase，37℃温浴30-60 min去除RNA。
6)溶于40μl灭菌的ddH2O，琼脂糖凝胶检测。
注：无水乙醇、NaAc、70%的乙醇预冷7)取0.1~0.2 g植物材料放入液氮预冷的研钵液氮种研磨成粉。
加入含有65℃预热的1 000 μl CTAB裂解液和20 μlβ-巯基乙醇的2 ml 离心管中，65℃水浴裂解40~60 min，每隔10min颠倒混匀一次。
8)加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀静置3 min，4℃, 12 000r/min, 离心10 min。
9)取上清800 μl于2 ml离心管中，加入等体积氯仿：异戊醇(24：1), 旋涡混匀冰上静置3 min，4℃, 12 000 r/min, 离心10 min。
10)取上清600μl，加入1/30体积的NaAc（3M，pH=5.2）和1/10体积的无水乙醇（均预冷），混匀，在冰上静置10 min，再加入等体积氯仿：异戊醇(24：1)，4℃，12 000 r/min, 离心10 min。
CTAB法提取RNA
CTAB法提取植物总RNA一、操作步骤：1.先在65o C水浴中预热适量的CTAB提取液（加入2% B-巯基乙醇）；2.液氮中迅速研磨新鲜的（或-70o C保存的）植物组织样品，充分研磨成均匀的粉末后取0.05-0.1g置于1.5mL离心管中（离心管中预先加入1mL CTAB 提取液）, 迅速涡旋混匀30-60s, 然后65o C水浴4-5min;3.加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1) 涡旋混匀，10000x g 离心15min沉淀蛋白质；4.将上清液转移至新的离心管，重复抽提一次，沉淀蛋白质；5.将上清液转移至新的离心管，加入等体积的4mol/L LiCl，4o C条件下沉淀2 h以上使RNA变性。
6.4o C, 12000x g离心10min沉淀RNA，弃上清去除DNA，然后分别用500 uL 70%和100%的乙醇洗涤沉淀除去杂质；7.倒掉乙醇，瞬时离心，吸干离心管中的液体，超净工作台晾干沉淀，10 min。
Tips：缓缓倒掉乙醇，避免倒掉沉淀。
尽量吸干残留液体，适当调整晾干沉淀的时间，确保乙醇完全挥发。
晾干沉淀的时间不宜过长，否则不利于RNA的溶解。
8.加入50 μL mixture（44 μL DEPC-H2O，5 μL 10 × DNaseⅠbuffer，1 μL DNaseⅠ），37 °C孵育30 min。
Tips：配置mixture时应先加DEPC-H2O，再加buffer，最后加DNaseⅠ，配制好的mixture应充分混匀后再分装。
样品较多时，应计算好mixture的需求量，并适当增加配制量，因为分装mixture时会有损耗。
9.加入500 μL DEPC-H2O稀释RNA样品，加入200 μL氯仿/异戊醇（24/1），缓慢摇匀10 min。
Tips：需稀释RNA样品，以利于在氯仿/异戊醇抽提后转移上清液。
10.4 °C，12000 × g，离心10 min。
杜鹃花叶片总RNA的改良CTAB法提取
杜鹃花叶片总RNA的改良 CTAB 法提取前言随着现代分子生物学与基因研究的不断发展，RNA 的多样性和生物学重要性显然愈加突出。
随之而来的是针对 RNA 的提取、纯化、测序等方面的技术的不断创新与优化。
其中，RNA 的提取与纯化是科研人员在 RNA 研究中需要解决的首要问题。
在植物的 RNA 提取与纯化方面，最传统的方法是 TRIzol 方法。
但由于 TRIzol法在耗时、分离效率和纯化质量方面的局限，科研人员们需要不断进行改进和优化。
本文就是以此为背景，介绍了在杜鹃花的 RNA 提取与纯化中采用的改良 CTAB 方法。
1. 实验方法1.1 实验材料•杜鹃花叶片样品•低盐 CTAB 提取液（含 2% CTAB）•PVP（聚乙烯吡咯烷酮）•氢氧化钾•高盐 CTAB 溶液（含 2% CTAB）•氯仿•异丙醇•乙酸钠•蒸馏水•甲醛•RNase AWAY1.2 RNA 提取1.将杜鹃花叶片样品切碎，并在冰上捣碎，注意不要使样品受热。
2.取 100 mg 样品加入600 μL 低盐 CTAB 提取液中，150 μL PVP（10%w/v）和5 μL β-mercaptoethanol，混匀后将样品在 65 °C 水浴中振荡30 min。
3.加入500 μL 氯仿，并快速摇匀 10-15 秒，待其自然分层，收集上层液体。
4.加入等体积的以异丙醇和 CHCl3 三种体积比例为 1：24：1 的混合液，以破坏有机物-有机物自然分层带来的影响，快速摇匀 10-15 秒，待其自然分层，收集上层液体。
5.加入等体积的高盐 CTAB 溶液，反复混匀后放置冰上 5min，混匀后60 °C 水浴提取 30 min。
6.加入等体积氯仿：异丙醇混合液，与高盐 CTAB 化学混合物快速摇匀10-15 秒，并待其自然分层，取上层十分慢慢地加入等体积异丙醇，并缓慢转动离心管以促进 RNA 的沉淀。
沉淀时间应在 -20 ~ -70°C 之间为宜。
RNA的提取方法
CTAB法提取RNA试剂的配置及其实验具体操作：使用试剂的配置：配置母液：1 M Tris-HCl（pH 6.8)，分子量：121.14；配置200 mL的量，称取Tris 24.228 g，用HCl调节pH配置0.5 M EDTA（pH 8.0），分子量：292.24；配置200 mL的量，称取29.224 g，用NaOH调节pH配置100 mL提取液：称取CTAB 2 g；NaCl 8.1816 g；用DEPC水定量到80 mL，加入1 M Tris-HCl（pH 6.8)，10 mL；0.5 M EDTA（pH 8.0），5 mL。
进行高压灭菌，使用前加入5% β-巯基乙醇。
配置水饱和酚：配置2 M乙酸钠（pH 4.0），分子量136.08，称取27.216 g，用HCl调节。
65 ℃水浴将纯苯酚进行溶化，，65 ℃ DEPC水里加入苯酚直至完全饱和，静置30 min，轻取出上清部分；称取0.07 g硫氰酸胍，加入2 M乙酸钠（pH 4.0）5 mL，用DEPC水定量至50 mL，4 ℃避光保存。
1. 利用液氮研磨样品成粉末状的。
2. 将提取液置于50 mL离心管提前65 ℃预热15 min左右，液氮研磨的样品加入提前预热好的提取液内，涡旋混匀后3. 再次置于65 ℃水浴锅内恒温15 min，取出室温静置至呈现均质状态4. 将上清转移到2 mL离心管中，然后加入0.7 mL的氯仿-异戊醇（CIA；24:1），用手大力摇匀，在4 ℃，12,000×g离心5-10 min5. 将0.6-0.7 mL上清液转移到1.5 mL离心管里6. 然后加入1倍体积的苯酚混合液，室温孵育5 min。
4 ℃，12,000×g离心2 min。
将上清转移到2 mL离心管7. 将0.7-0.8 mL的上清转移到1.5 mL离心管中，加入0.7体积的异戊醇。
混匀之后室温孵育10 min，再温度4 ℃，≥12,000×g离心15 min收集RNA8. 去掉上清液，用75%（v/v）乙醇400 uL洗离心管底的小颗粒。
CTAB法提取棉花总RNA及DNase I消化
CT AB法提取棉花总RNA及DNase I消化一、CTAB-酸酚法：1.取棉花材料，加液氮充分研磨至粉状，转至2.0离心管中，加1毫升（5倍体积）RNA提取液，20微升β-巯基乙醇，振荡混匀，匀浆仪匀浆1分钟，65°水浴锅20分钟，中途颠倒混匀2-3次。
2.加800微升（0.6倍体积）氯仿，混匀，冰浴20分钟。
3.9000转离心20分钟，将上清液转移到一个新的离心管中。
（180微升|次）4.加三分之一体积的8M Licl溶液，-70°1-2小时5.10000转离心20分钟，弃上清液，用70%乙醇（500微升）洗涤沉淀6.10000转离心10分钟，再用70%乙醇洗涤沉淀7.10000转离心10分钟，弃去乙醇溶液，将沉淀真空抽干。
8.用50微升DEPC水溶解沉淀，待沉淀溶解后吸至第二管，依次进行直至同一样品的沉淀全部溶于50微升DEPC水中。
可以电泳（2微升）二、DNase I消化：在50微升RNA体系中，加入：1微升（10U）DNase I，5微升10ΧDNase I buffer，1微升（40U）RNaseIInhibtor抑制剂，37°温育30分钟，补250微升DEPC水，加等体积的氯仿振荡20-30次，9000转离心20分钟。
将上清液移入另一管中，加十分之一体积的NaAc（ph 5.2）和2倍体积的无水乙醇，-70°沉淀1-2小时。
12000转离心20分钟，收集RNA沉淀，用70%乙醇洗涤两次后真空干燥并溶解于20微升的DEPC水中。
三、反转：DEPC水22.5微升RNA10微升Primer（Y287）1微升将上述混样在70°水浴5-10分钟，然后快速的冰浴2-3分钟，再加入一下试剂MM-LV 5*reaction buffer10微升dNTP 2.5微升RNase（抑制剂）2微升MM-LV RT（20U/ul）2微升在42°水浴1.5小时，然后70°消化10分钟，最后保存在-20°中。
CTAB抽提液(RNase free)
CTAB 抽提液(RNase free)简介：从植物组织中制备基因组DNA 较常采用的方法有氯化离心法、CTAB 抽提法等。
CTAB 抽提法是经典的植物DNA 提取法，也可用于多种不同类型植物样品RNA 的提取，获得的量很高，但是纯度一般，但是足够用于大多数分子生物学实验。
Leagene CTAB 抽提液(RNase free)的有效成分为CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)，经RNase free 处理，临用前加入2-ME ，使其更有效，更稳定。
组成：自备材料：1、 液氮\研钵或匀浆器2、 离心管3、 恒温箱或水浴锅4、 离心机5、 DEPC 处理水操作步骤(仅供参考)：1、 取5ml 或适量的CTAB 抽提液，按CTAB 抽提液：2-ME=的比例混匀，置于15ml 或其他规格的离心管中，60℃预热。
2、 称取或适量新鲜植物组织或叶片，用预冷的液氮或干冰冷却研钵或匀浆器，将新鲜植物组织或叶片粉碎成细粉末，将冷冻的组织转移至离心管中。
3、 向粉碎后的组织中按加入预热的CTAB 抽提液，充分混匀，温育，并不时混匀。
4、 加入等体积24:1氯仿/异戊醇，颠倒充分混匀，离心，回收上层水相(即上清液，该上清液中含有所需DNA/RNA)。
5、 转移上清液至新的离心管中，加入体积预冷的异丙醇，轻轻混匀，室温静置使核酸沉至管底。
如果观察不到沉淀，可在室温下静置数小时至过夜。
6、 2000g 离心2min ，轻轻弃上清液。
7、 在松散的DNA./RNA 沉淀物上加入乙醇，室温静置，轻轻弃上清液。
编号 名称 NE0012 500ml Storage 试剂(A): CTAB 抽提液(RNase free) 500ml RT 试剂(B): 2-ME 10ml RT 避光 使用说明书 1份8、自然干燥DNA，加入适量DEPC处理水水或TE缓冲液，低温保存。
注意事项：1、如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
ctab法提取植物基因组dna资料
ctab法提取植物基因组dna资料一、实验原理CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在高离子强度（0.7mol/L）的溶液里是可溶的，通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。
在酚仿变性的条件下，去除残留的CTAB和蛋白质等杂质，然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分子从上清溶液中沉淀出来，最后用TE溶解DNA，并加入RNA酶以去除基因组中的RNA，置于-20℃备用。
因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体中提取核酸，例如：植物的叶片组织。
二、实验材料及试剂实验材料：新鲜植物叶片。
试剂与溶液：CTAB提取缓冲液，Tris-饱和酚，氯仿-异戊醇（24:1），异丙醇，70%乙醇，含RNase的TE溶液。
CTAB提取缓冲液：2%（M/V）CTAB，1.4MNaCl，100mMTris-Cl （pH8.0），20mMEDTA，pH8.0，2%（V/V）β-巯基乙醇（使用前加入）。
三、实验步骤取0.5g新鲜植物叶片置于研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成均匀粉末。
将粉末移入1.5mL离心管，加入800μLCTAB分离缓冲液，上下颠倒离心管，混合均匀。
将盛有样品的离心管置于65℃水浴中保温30min，其间每隔3-4min轻摇混匀。
低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入等体积的Tris-酚和氯仿异戊醇，上下颠倒离心管，混合均匀；低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入等体积的氯仿异戊醇上下颠倒离心管，混合均匀；低温12000rpm离心5min，将上层水相转移至新的离心管中。
加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混匀，置于-20℃沉淀30min。
低温12000rpm离心5min去上清，加入500μL70%乙醇洗涤沉淀，常温12000rpm2min，去上清，沉淀尽量干燥。
加入适量含有RNase的TE（20μL）溶解沉淀，37℃水浴30min，消化RNA。
DNA提取试剂的作用
DNA提取试剂的作用1. CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)：是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来. 注:CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃.2．Tris-HCl ：提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;3. EDTA：螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;4. NaCl：提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中;5. β-巯基乙醇：抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除。
6. PVP(聚乙烯吡咯烷酮)：酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖.7.氯仿：使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开8.异戊醇的作用是消除抽提过程中出现的泡沫。
氯仿是强蛋白质变性剂，抑制RNA酶的活性，除去蛋白质污染。
9.溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，10. SDS：SDS是离子型表面活性剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，解聚细胞中的核蛋白，使蛋白质变性而沉淀下来。
11. 3mol／L NaAc：有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。
12.无水乙醇：乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合13.蛋白质的去除: 酚/氯仿抽提；使用变性剂变性(SDS,异硫氰酸胍等)多糖的去除: 高盐法: 用乙醇沉淀时,在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M NaCl,高盐可溶解多糖.多酚的去除: 在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂:β-巯基乙醇,抗坏血酸,半胱氨酸,二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂:如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇),它们与酚类有较强的亲和力,可防止酚类与DNA的结合盐离子的去除: 70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸,4．为什么用无水乙醇沉淀DNA？用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
CTAB法提取DNA药品配制
1.抽提液
2%CTAB
100mmTris-HCl PH8.01m/L
20 mmEDTA PH8.00.5m/L
1.4m/L NaCl
如1L中，20g CTAB + 100ml Tris-HCl + 40ml EDTA + 81.816gNaCl定容
200ml,4gCTAB + 20ml Tris-HCl + 8ml EDTA + 16.363gNaCTE中，2ml Tris-HCl + 0.4 mlEDTA
ctab法提取dna药品配制2ctab100mmtrishclph801ml20mmedtaph8005ml14mlnacl如1l中20gctab100mltrishcl40mledta200ml4gctab20mltrishcl8mledtatrishcl配制ph801ml如1l中1211gtris800ml蒸馏水冷却调ph80定容灭菌200ml2422gtris160ml蒸馏水冷却调ph80定容灭菌edta05mollph801l中1861gedtana2h2o800ml蒸馏水用naoh调ph8约20gnaoh定容灭菌200ml3722gedtana2h2o160ml蒸馏水用naoh调ph8约4gnaoh定容灭菌注意
200ml,37.22g(EDTA-Na.2H2O), 160ml蒸馏水,用NaOH调PH=8(约4gNaOH)定容，灭菌
（注意：EDTA-Na需加入NaOH，将PH调至8.0时才会溶解）
2.CTAB沉淀液
1％CTAB
50 mmTris-HCl PH8.01m/L
10 mmEDTA PH8.00.5m/L
①Tris-HCl配制ph8.0 1m/L
CTAB法所需溶液配置
CTAB法所需溶液配置一、提取液的配置1、1M Tris-Hcl（PH 7.5-8.0）10ml称121.1g Tris（三羟甲基氨基甲烷分子量121.1）溶于800ml水中，搅拌条件下加入浓盐酸（PH调至7.5）。
待接近所需PH时，用稀Hcl准确调PH值至所需值，加入重蒸水至总体积1L，分装，高压灭菌（温度为121℃，时间为30分钟）。
注：如调PH 7.4则大约加浓盐酸70ml，PH 7.6加60ml，PH8.0加42ml2、5M Nacl 14ml称292.2g Nacl，溶于800ml蒸馏水中，此时已接近饱和，所以溶解较慢，完全溶解后用蒸馏水定容至1L，分装，高压灭菌。
3、0.5M EDTA（PH 8.0）溶液10ml称186.1g EDTA-Na2∙2H2O（冰乙二胺四乙酸二钠盐）加入800ml重蒸水，用磁力搅拌器搅拌，加入NaOH（10M）调PH至8.0（只有PH值约等于8.0时EDTA-Na2∙2H2O才能完全溶解，待EDTA-Na2∙2H2O完全溶解后，再用稀NaOH准确调PH=8.0），重蒸水定容至1L，灭菌。
调PH值：①用固体NaOH约20g左右②用10mol/L的NaOH溶液约70ml10M NaOH的配置：称取40gNaOH溶于蒸馏水后定容至100ml4、CTAB 1g5、ddH2O 65ml6、2M β-巯基乙醇 4℃保存1ml方法：1 、2、 3、4、 5加热溶解后加入6（即2M β-巯基乙醇）二、氯仿/异戊醇（V/V=24：1）：贮于棕色瓶中取氯仿480ml（即从一瓶中取出20ml），再在瓶中加入异戊醇20ml，摇匀注：最好现配现用三、RNase （10mg/ml）1）称取100mg RNase溶于10ml 10mmol/LTris-cl（PH 7.5），15mmol/L Nacl中，于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装后于-20℃保存。
2）25mg加2.5ml TE缓冲液，于100℃水浴，加热15min，缓慢冷却至室温，不要贴底，否则会产生絮状沉淀。
ctab提取方法
ctab提取方法CTAB提取法在生物实验里可算是个小明星呢 。
CTAB是十六烷基三甲基溴化铵的简称啦。
这个提取方法主要是用来提取植物或者微生物的DNA。
一般来说，我们得先把要提取的材料准备好。
比如说植物的叶片，要选那种新鲜的、没有病虫害的。
要是微生物呢，就得让它们处在合适的生长状态。
然后就开始提取的步骤啦。
先把材料弄碎，可以用研磨棒或者小粉碎机之类的。
就像把它们变成小渣渣一样，这样才能让细胞都破裂，把里面的DNA释放出来呀。
接着呢，把弄碎的材料放到含有CTAB的提取缓冲液里。
这个缓冲液就像一个魔法药水 ，CTAB在里面就开始发挥它的神奇作用啦。
它可以把细胞里的各种成分分开，让DNA乖乖地和其他东西分开来。
在这个过程中呢，温度也很重要哦。
一般要在60 - 65℃的水浴锅里放一会儿。
这个温度就像是给这个魔法反应加把火，让CTAB更好地工作。
等从水浴锅里拿出来后，就可以进行离心啦。
离心就像是一场小旋风，把不同的成分按照重量的不同分离开来。
之后呢，取上清液，再加入一些有机溶剂，像氯仿 - 异戊醇之类的。
这一步就像是再给那些杂质来一次大扫除，让DNA变得更纯净。
再离心一次，又取上清液。
最后呢，加入异丙醇或者乙醇，DNA就会像小雪花一样慢慢析出来啦。
然后用小玻璃棒把DNA挑出来或者离心收集起来就好啦。
不过要注意哦，这个过程中的每一步都要很小心呢。
就像照顾小宝贝一样，稍微有点差错，可能提取出来的DNA质量就不好啦。
CTAB提取法虽然有点小复杂，但是只要按照步骤来，就能顺利得到我们想要的DNA啦。
。
CTAB提取RNA和TRIzol提取RNA方法
TRIzol法提取RNA
实验步骤
实验步骤
1、向研磨好的样品中，加入1ml TRIzol，涡旋30-60s，室温下放置5min（样品的 量不要超过TRIzol体积的10%）。 2、每管加0.2ml氯仿，剧烈颠倒混匀15s，室温放置2-3min，4℃，12000g，15min。 3、将上清液(约600ul)吸入新的1.5ml离心管中，加等体积异丙醇，颠倒混匀（动 作要缓和），-20℃冰箱中放置30min（过夜则沉淀更加充分）。 4、4℃，12000g，15min离心，弃上清，再加1ml 75%乙醇洗涤沉淀1-2次，4℃， 12000g，15min离心，弃上清，收集RNA沉淀。 5、沉淀在室温下干燥5-10min（不能完全干燥，否则RNA沉淀很难溶解）。 6、溶于适量30-50ulRNase-free water中，储存在-80℃的超低温冰箱中备用。 跑胶结果示图
RNA提取
CTAB法提取RNA
实验准备
溶液配制
（所需母液）
注：1、6M与10M Licl区别，沉降步骤最终浓度都为2M/L，故6M 体积的1/2，同理，10M Licl加入上清体积的1/4。 2、1M Tris-Hcl与DEPC反应，故不能用DEPC处理。 3、EDTA与Tris-Hcl溶液配制时，要调节PH到8.0。 4、0.1%DEPC处理的灭菌水配制1M Tris-Hcl。
（可以将RNA保存到此步骤）。 3、将上清液(约600ul)吸入新的1. 1、向研磨好的样品中，加入600ul的65℃预热的CTAB提取液。 7、然后向沉淀中加入预热的SSTE溶液（常温或者4℃情况下，溶液会有沉淀），
CTAB提取液配方
CTABxxDNA提取液
2%CTAB 2000ml配方
CTAB40g
Nacl163.64g
1M/L Tris-Hcl200ml
0.5M/L EDTA80ml
-----------------定容至2000ml
1M/L Tris-Hcl 500ml配方
Tris60.6g
加400ml水搅拌溶解
冷却后加浓盐酸调PH至8.0
定容至500ml
0.5M/L EDTA 500ml配方
EDTA93.06g
加NAOH调PH至8.0
定容至500ml
注：1M/L Tris-Hcl和0.5M/L EDTA配方跟你配TPS一样。
2%CTAB配方可以到Takara或者其他生物公司目录上查询。
提取步骤
该法提取叶片DNA和TPS法稍有不同，简略如下：
1.提取液加800ul，当然也可以修改；
2.水浴温度改为650C，30min；
3.加500ml氯仿，上下震荡几下即可。
不过你的材料可能要死命震荡几分钟看看咋样，最好再重新用氯仿抽提一遍;
4.12000r/min离心10min,吸取上清液(比如200ml);
5.加2.5倍体积的无水酒精（比如500ml）；
6.其他步骤就一样啦。
7.如果你想提取更高质量的DNA，可以在倒掉酒精之后，用75%酒精把DNA再洗几遍。
8.如果以上步骤还不行，那就baidu或者小木虫吧。
CTAB法提取RNA
CTAB法提取植物总RNA一、操作步骤：1.先在65o C水浴中预热适量的CTAB提取液（加入2% B—巯基乙醇）;2.液氮中迅速研磨新鲜的（或—70o C保存的）植物组织样品,充分研磨成均匀的粉末后取0.05-0。
1g置于1。
5mL离心管中（离心管中预先加入1mL CTAB 提取液), 迅速涡旋混匀30-60s, 然后65o C水浴4—5min；3.加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1）涡旋混匀,10000x g 离心15min沉淀蛋白质；4.将上清液转移至新的离心管，重复抽提一次，沉淀蛋白质;5.将上清液转移至新的离心管，加入等体积的4mol/L LiCl，4o C条件下沉淀2 h以上使RNA变性.6.4o C， 12000x g离心10min沉淀RNA，弃上清去除DNA，然后分别用500 uL 70％和100％的乙醇洗涤沉淀除去杂质;7.倒掉乙醇，瞬时离心，吸干离心管中的液体,超净工作台晾干沉淀,10 min。
Tips:缓缓倒掉乙醇，避免倒掉沉淀.尽量吸干残留液体，适当调整晾干沉淀的时间，确保乙醇完全挥发.晾干沉淀的时间不宜过长，否则不利于RNA的溶解.8.加入50 μL mixture(44 μL DEPC—H2O，5 μL 10 × DNaseⅠbuffer，1 μLDNaseⅠ）,37 °C孵育30 min。
Tips：配置mixture时应先加DEPC—H2O，再加buffer，最后加DNaseⅠ，配制好的mixture应充分混匀后再分装。
样品较多时，应计算好mixture的需求量,并适当增加配制量，因为分装mixture时会有损耗。
9.加入500 μL DEPC—H2O稀释RNA样品,加入200 μL氯仿/异戊醇（24/1）,缓慢摇匀10min。
Tips:需稀释RNA样品，以利于在氯仿/异戊醇抽提后转移上清液。
10.4 °C，12000 × g,离心10 min。
CTAB法提取植物总RNA
CTAB法提取植物样本RNA一．实验原理CTAB是阳离子去污剂，低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖，高离子（7MNaCl）强度溶液中沉淀蛋白、多聚糖。
破碎裂解细胞后，去除与RNA结合的蛋白质以及多糖，DNA等大分子，沉淀RNA,去除盐类及有机溶剂，溶解得到纯化的RNA。
二．实验试剂2% CTAB：CTAB 10g+NaCl 40.91g+1M Tris-HCl PH8.0 50ml+0.5M EDTAPH8.0 20ml，先用200ml水溶解，然后定容至500ml灭菌。
巯基乙醇, 氯仿：异戊醇=24:1，异丙醇，75%乙醇（-20℃预冷），RNaseFree ddH2O，DNaseI三．实验仪器及耗材移液器，水浴锅（或金属浴），振荡器，高速微量离心机，制冰机，2mL无RNA酶离心管，研钵，石英砂，液氮，吸水纸四．实验步骤1）2mL无RNA酶离心管中，加入980uL CTAB和20uL巯基乙醇，混匀65℃预热。
2）样品处理：样品取200mg（不超过），置于研钵中，加入少量石英砂，液氮研磨成粉，快速将粉末转移至上述液体1)中。
混匀，此时溶液为粘稠状。
3）65℃水浴10-30min，期间颠倒混匀几次。
4）加入等体积即1ml氯仿：异戊醇=24:1，混匀，12000rpm离心10min，取上清约900uL 至新离心管中5）重复4）2次6）加入等体积的异丙醇900uL，置于冰上10min或在冰箱中-20℃15min7）4℃离心20min 弃去上清，留沉淀8）75%乙醇（-20℃预冷）900ul漂洗1次，12000rpm离心5min8）移液枪吸去上清，离心管倒置在吸水纸上，干燥约20min9）用RNaseFree ddH2O 100uL溶解除去基因组DNA的步骤20uL体系：18ul RNA，1ul DNA酶，1ul buffer，0.25ul DNA酶抑制剂。
用PCR仪设置37℃30min，85℃5min。
CTAB法提RNA
CTAB法提RNA1.水浴锅调至65℃，离心机4℃预冷。
2.配CTAB提取液，取4 mL加入DEPC处理过的10 mL离心管，65℃水浴预热。
3.液氮中研磨样品0.5~1.0 g，勿让组织解冻，研磨至面粉状。
4.将研磨好的样品迅速转移入预热过的10 mL离心管，剧烈振荡、涡旋。
65℃水浴5 min。
5.在冰架上冷却至室温，加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1）并涡旋混合，配平，10000 rpm，4℃，20 min。
6.上清液（约3.5 mL）转移至新离心管，重复5。
7.将上清液转至新离心管，加入1/3体积的LiCL（8M 4℃预冷）4℃沉淀过夜，最多不超过16 h。
8. 4 ℃，10000 rpm，30 min，弃上清。
（应能看到沉淀）9.用500ul SSTE溶解沉淀，常温转移至1.5 mL离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇，用枪吸打混匀，10000 rpm，10min（抽提后上层应为澄清状态，若为乳白色，应继续离心）10.取上清，转移至新1.5mL离心管（冰浴预冷），加入两体积无水乙醇，混匀，在-70℃沉淀30min或-20℃沉淀2h。
11.4℃，12000 rpm，20min，沉淀RNA，弃上清。
（应能看到沉淀）12.先用400 uL 70%乙醇洗涤沉淀，再用400 uL无水乙醇洗涤一次，冰浴上晾干后，用20uL DEPC水溶解RNA。
13.-80℃保存。
药品配置1. 5mol/L Nacl: 29.22g Nacl +80ml水至100ml加热，搅拌。
2. 0.5mol EDTA：18.61g EDT A﹒Na2H2O+ 70ml 水至100ml加热溶解(加NaOH 调PH 8.0)。
3. 1mol/L Tris-HCL 12.11g Tris+ 50ml H2O至100ml (加HCL调PH 8.0)。
4. 10%CTAB，10g CTAB，加H2O 至100ml。
加热溶解。
5. 10%PVP，10g PVP加H2O 至100ml高压灭菌后呈黄色。
2×CTAB提取液使用说明书
2×CTAB提取液使用说明书产品编号：SL2071储存条件：常温保存，保质期2年。
产品内容：产品内容SL20712×CTAB提取液500mLβ－巯基乙醇1mL说明书1份产品说明：CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
在高离子强度的溶液中(0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
使用方法：一、试剂准备1、氯仿-异戊醇混合液(24:1)。
96mL氯仿加4mL异戊醇混匀。
2、65℃预热CTAB溶液后将1mLβ－巯基乙醇加入CTAB溶液中。
二、操作步骤1、液氮研磨1ｇ左右植物组织，转移到1.5mL离心管中，加入700uL2×CTAB提取液（已加入β－巯基乙醇）。
或者液氮研磨之后，在研钵中加入700uL2×CTAB提取液，然后吸取到1.5mL的离心管中(建议总体积不要超过1mL)。
2、将离心管置于65℃水浴30min-1h，期间每隔10min左右轻轻晃动离心管。
3、水浴完成后冷却2min，加入0.5mL的氯仿-异戊醇混合液，剧烈震荡混匀。
10000-12000rmp离心5-10min。
4、取上步离心管中上清液到新的离心管中。
注意：上步离心后应该会分三层：上层为水相，中间为蛋白和植物碎片，下层为有机相。
吸取时避免触及蛋白和有机相。
如不小心吸取到中下层，或者中间层较厚，建议少吸取水相，或吸取之后再加入500uL氯仿-异戊醇混合液，重新混匀离心取上清。
5、在上清中加入等体积的异丙醇，颠倒混匀。
(或加入2倍体积的无水乙醇和1/10体积的3M pH5.2的乙酸钠)。
置于-20℃沉淀30min以上，12000rmp离心10min，弃上清。
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CTAB 抽提液(RNase free)
简介：
从植物组织中制备基因组DNA 较常采用的方法有氯化离心法、CTAB 抽提法等。
CTAB 抽提法是经典的植物DNA 提取法，也可用于多种不同类型植物样品RNA 的提取，获得的量很高，但是纯度一般，但是足够用于大多数分子生物学实验。
Leagene CTAB 抽提液(RNase free)的有效成分为CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)，经RNase free 处理，临用前加入2-ME ，使其更有效，更稳定。
组成：
自备材料：
1、 液氮\研钵或匀浆器
2、 离心管
3、 恒温箱或水浴锅
4、 离心机
5、 DEPC 处理水
6、 氯仿/异戊醇*24:1)
7、 75%乙醇（由DEPC 处理水配制）
操作步骤(仅供参考)：
1、 取适量的CTAB 抽提液，按CTAB 抽提液：2-ME 的比例混匀，置于15ml 或其他规格的离心管中，预热。
2、 称取1.0～1.5g 或适量新鲜植物组织或叶片，用预冷的液氮或干冰冷却研钵或匀浆器，将新鲜植物组织或叶片粉碎成细粉末，将冷冻的组织转移至离心管中。
3、 向粉碎后的组织中按4～5ml/g 加入预热的CTAB 抽提液，充分混匀，温育15～60min ，并不时混匀。
4、 加入等体积24:1氯仿/异戊醇，颠倒充分混匀，8000g 离心5～10min ，回收上层水相(即上清液，该上清液中含有所需DNA/RNA)。
5、 转移上清液至新的离心管中，加入1/2～2/3体积预冷的异丙醇，轻轻混匀，室温静置 编号 名称 NE0012 500ml Storage 试剂(A): CTAB 抽提液(RNase free) 500ml RT 试剂(B): 2-ME 10ml RT 避光 使用说明书 1份
使核酸沉至管底。
如果观察不到沉淀，可在室温下静置数小时至过夜。
6、2000g离心2min，轻轻弃上清液。
7、在松散的DNA./RNA沉淀物上加入75%乙醇，室温静置20min，4000g离心10min，
轻轻弃上清液。
8、自然干燥DNA，加入适量DEPC处理水水或TE缓冲液，低温保存。
注意事项：
1、如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
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编号名称
CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁)
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
IH0305 柠檬酸钠抗原修复液(50×)
IH0340 免疫染色一抗稀释液
NR0003 Lezol(总RNA提取试剂)
PE0103 Acr-Bis(30%,29:1)
PW0082 丽春红S染色液(1×Ponceau S)
TC0699 葡植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法)。