人参皂苷Rg1与CpG+DNA佐剂对细胞免疫功能的影响
天然药化形成性考核答案全解
天然药物化学课程形成性考核册作业 1 第一章绪论一、名词解释1. 有效成分：(P2 页)又称活性成分，指天然药物中体现药物疗效或生物活性，并能够用分子式或结构式表示，具有确定的物理常数和理化性质的单体化合物。
2. 有效部位： (P2 页)天然药物相应的有效成分为混合物称为有效部位。
二、简答题1. 简述天然药物化学的研究目的和内容。
(P2 页)目的：1. 增强疗效，研发新药；2. 控制质量，保证疗效；3. 探索天然药物治病防病的机制，追踪有效成分。
内容：主要研究天然药物中活性成分的理化性质、提取分离、化学结构特征及鉴定、生物合成途径及新药开发等基本理论及相关实验技术。
重点研究天然活性成分的提取、分离、药理作用。
2. 天然药物的开发与利用有哪几个方面？1) 用现代科学技术方法对传统药物的效能评价，使相关产品的质量得到保障，并推进质量的标准化和生物活性的“指纹”化。
2) 进行生物源动物、植物、矿物等化学成分的深入研究，探讨其生物活性的差异，开发新的药用原料，使资源可持续利用。
3) 依据研究者的经验和药物生物活性特征，寻找创新药物研究的备选化合物或先导物。
4) 以天然药物化合物效能为出发点，探讨生物活性作用的靶点，建立新的天然药物筛选模型。
5) 进一步探讨天然药物对预防及治疗疾病的生物化学机制。
6) 寻找天然药物活性成分的提取、分离、纯化方法。
7) 依据天然化合物的亲缘性和生物合成途径，结合模拟生物酶催化机制进行仿生物药合成路线设计。
8) 根据化学物种的进化特征，从分子水平探讨生物物种进化趋势。
9) 研究天然药物在有机体的分布、吸收、代谢等生物有效性及毒性，设计合成创新型药物。
10) 充分利用天然药物手性化合物的资源，开展手性药物的研究。
第二章天然药物化学成分一、单项选择题1C 2E 3C 4C 5B 6D 7C 8B 9A 10B 二、简答题1. 比较A B化合物的酸性强弱，并简述理由。
(P3页)A大黄酚B大黄素酸性：B> A。
DNA疫苗免疫佐剂的研究进展
DNA疫苗免疫佐剂的研究进展摘要: DNA疫苗是一种很有希望的免疫方法，经多途径接种质粒DNA能引起有效的免疫应答，重复给予不会产生抗载体免疫。
然而，质粒DNA疫苗在小型实验动物中诱导的免疫应答远强于在人类和其他非人灵长类动物中。
已设计多种佐剂通过直接刺激免疫系统或增强DNA表达来提高疫苗的免疫原性，这些佐剂包括细胞因子、免疫协同刺激分子、补体分子、脂质体、核酸、聚合物佐剂等。
此文对DNA疫苗佐剂的研究进展作一综述。
关键词:疫苗；DNA；佐剂；免疫；细胞因子；聚合物20世纪90年代以来，DNA疫苗的快速发展给疫苗研究带来了新的变革，已逐步显示出巨大的应用潜力。
然而，DNA疫苗也存在着明显的不足，即DNA疫苗刺激机体产生免疫应答的能力往往比常规疫苗接种引起的免疫反应弱，这就给DNA疫苗的研究提出了新的挑战。
因此，新型疫苗佐剂已成为当今倍受关注的研究热点。
免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用，能促进、延长或增强对疫苗抗原特异性免疫应答的物质。
DNA疫苗又称基因疫苗或核酸疫苗，是将编码某种抗原蛋白的基因置于真核表达元件的控制之下，构成重组DNA质粒，当将重组DNA质粒直接导入受者体内后，宿主细胞通过自身转录翻译系统合成抗原蛋白，进而刺激机体产生特异性体液和细胞免疫应答。
DNA疫苗常见的接种途径为肌肉注射，在小动物模型中质粒DNA经静脉、腹腔、舌下、阴道和鼻内接种均能诱导抗原特异性免疫应答；口服能耐受降解的质粒DNA也可引起免疫应答；DNA 疫苗经淋巴组织内接种显示安全，且诱导的免疫应答明显强于肌肉注射。
基因枪可增强质粒DNA导人皮肤，已应用于AIDS、麻疹等多种疫苗接种系统。
与肌肉注射相比，基因枪接种诱导的免疫应答有所提高。
DNA疫苗在小型实验动物中可诱导有效的细胞免疫应答，但在人体临床试验中效却不明显[1]。
DNA疫苗的免疫原性受到接种途径的限制，因吸收差、表达效率低和降解快，质粒DNA只能诱导有限的体液和细胞免疫反应[2]。
天然来源免疫佐剂的研究进展
• 454 •国际生物医学工程杂志2020年丨2月第43卷第6期丨nt J Biome(丨Eng. December 2020. Vo丨.43. No.6天然来源免疫佐剂的研究进展马兵邓博刘丹冷希岗刘兰霞中国医学科学院生物医学工程研究所，天津300192通信作者：冷希岗，Email:lengxgyky@;刘兰霞，Email:liulanxiabme@163.c.o m•综述.【摘要】随着人们对疫苗的不断研究和创新，免疫佐剂在疫苗的研发和制造中占据着越来越重要的地位：人们可从自然界中获取一些能增强机体免疫应答的物质，并制成佐剂应用于疫苗中，以此来提高疫苗的免疫效力这些天然来源的免疫佐剂往往具有毒性低、稳定性高、价格低廉等优点，为疫苗的研发提供了更多的可能性：对一些已被发现和使用的天然来源的免疫佐剂进行综述，主要包括植物来源(皂苷、多糖、蜂胶）、动物来源(细胞因子、树突状细胞)和微生物来源(病毒、细菌)的免疫佐剂，论述它们的作用与临床应用进展【关键词】佐剂，免疫；疫苗；天然来源基金项目：国家自然科学基金面上项目（31870920 );中国医学科学院医学与健康科技创新工程健康长寿先导科技专项(青年奖掖项目）(2019-RC-HL-015);中国医学科学院医学与健康科技创新X程项目（CAMS-I2M-3-004)D0I： 10.3760/ 121382-20200604-00606Research progress in natural source immune adjuvant Ma Bing, Deng Bo. Liu Dan, Leng Xigang, Liu LanxiaInstitute oj Biomedical Engineering, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College; TianjinKey Laboratory of Biomedical Materials, Tianjin 300192, ChinaCorrespondingauthors:LengXigang,Email:******************:Liu Lanxia, Email:********************【Abstract】With the contiiuious research an(l innovation of vaccines, imn仙adjuvants haveand more important in the development and manufacture of vaccines. Researchers ran oi)tain some substances thatcan enhance the body^s immune response from nature, and use them as adju\ants in vaccines, so as to improvethe immune efficacy of vaccines. These natural-derived immune adjuvants often have the advantages of low toxicity,high stability, and low price, which provide more possibilities for vaccine development. In this paper, some natural-derived immune adjuvants that have been discovered and used were reviewed, including plant sources (saponins, polysaccharides, propolis), animal sources (cytokines, dendritic cells) and mitT〇l)ial sources (vimses, bacteria). The roleand clinical application progress of these immune adjuvants were discussed.【Keywords】Adjuvants, immunologic; Vaccine; Natural sourceFund programs：National Natural Science Foundation of China (31870920); Chinese Academy of MedicalSciences Innovation Fund for Health and Longevity Pilot Project (Youth Award Program) (2019-RC-HL-015); ChineseAcademy of Medical Sciences Innovation Fund for Medical Sciences (CAMS-I2M-3-004)DOI: 10.3760/ 121382-20200604-00606〇引言为阻止病原菌对机体的侵害，人们将病原微生 物及其代谢产物经人工减毒、灭活或利用基因T程 等方法，制成用于预防传染病的自动免疫制剂，并 称之为疫苗。
人参皂苷Rg1的药效学和药代动力学研究进展
284
学 报 Journal of China Pharmaceutical University
第 38 卷
1 人参皂苷 Rg1 的主要药理作用
111 Rg1 对中枢神经系统的作用 Rg1 对中枢神经系统的药理作用主要集中在对神经元
的营养 、保护[2] ,延缓神经元的凋亡 ,故用于治疗脑部疾病 的研究 。研究主要采用细胞模型 ,通过生化分析和分子生 物学手段进行检测 。 11111 治疗帕金森病 ( Parkinson′s Disease , PD) 多巴胺能 神经元的退化丢失是 PD 的发病机制之一 。为了模拟这一 机制 ,目前以 12甲基242苯基21 ,2 ,3 ,62四氢吡啶 (12methyl242 phenyl21 ,2 ,3 ,62tetrahydropyridine ,MPTP) 、多巴胺 、谷氨酸等 作为诱导物建立了多种 PD 病理模型[3- 5] 。在对上述病理 模型的研究中发现 ,Rg1 可以减少 、延缓神经元的凋亡 。其 机理主要是 Rg1 通过增强超氧化物歧化酶的活性和 Bcl22 基因的表达 (Bcl22 蛋白可以去除活性氧基团 、阻断 caspase2 3 的产生和活化) ,以去除活性氧 ,从而达到抗氧化 、阻断 c2 Jun 氨基末端激酶 (c2jun N2terminal kinase ,JNK) 信号通路 、阻 断活化的 caspase23 的产生 ,以及阻断 Ca2 + 内流 ,最终延缓 神经元的凋亡 ,达到保护神经的作用[3 ,5- 7] 。 11112 治疗阿尔茨海默病 (Alzheirmer′s Disease ,AD) AD 是常见的脑部疾病之一 ,在其众多的发病机制中 ,最被广泛 接受的是β淀粉样蛋白 (β2amyloid ,Aβ) 的大量沉淀聚集导 致了 AD。而 Rg1 可 降 低 脑 内 Aβ 含 量[8] , 这 可 能 是 由 于 Rg1 可以提高脑啡肽酶的表达 ,脑啡肽酶是脑内 Aβ的主要 降解酶 ,AD 病人脑内脑啡肽酶含量降低 ,因此该酶是治疗 AD 的靶点 ,对治疗 AD 有积极意义[9] 。在活体小鼠病理模 型上研究发现 ,Rg1 还可以提高胆碱合成所需的胆碱乙酰 转移酶的活性 ,并抑制胆碱灭活所需的乙酰胆碱酯酶的活 性 ,提高脑内胆碱含量 ,从另一角度治疗 AD[10] 。
CpG—DNA免疫佐剂作用研究进展
果 Ｃ Ｇ缺失或胞嘧啶发生甲基化 ，则其活性丧失。Ｋ ｉ ｐ ｒｇ ｅ 等认为有最强免疫刺激作用的 Ｃ Ｇ序列，至少应有 ８ ｐ 个 碱基 ，且其碱基序列大多有一定的规律 ： ｐ Ｃ Ｇ两侧序列需
为 ２ ５嘌呤 和 ２ ３嘧啶 ， 个 ’ 个 ’ 且当 ５端为 Ｇ Ａ ３端 为 ’ ｐ 、’
景 作 一 简要 介 绍 。 关键 词 ： ｐ － ＮＡ ； 疫 佐 荆 ＣＧ Ｄ 免 中图 分 类 号 ：８ ２ ＊ ￥ ５． ３ ４ 文献标识码 ： Ａ
பைடு நூலகம்
Ｒ ｓａ ｃ ｒ ｇ ｅｓ ｆ ｐ Ｄ Ａ Ａ ｊａ ｔ ｅｅｒｈＰ ｏ ｒｓ ｏ Ｇ－ Ｎ ｄｖ ｎｓ Ｃ
ＬＩ ｎ～ｈ ａ Ｕ Ｙａ ｕ ｎ， Ｍ Ｉ ＡＯ —ｇ ａ ｇ， ＡＮ Ｇ ｉ ａ ｇ Ｌｉ ｕ ｎ Ｗ Ｚｈ —ｇ ｎ
些含有 １ 个或多个回文序列的 Ｏ ＤＮ才具有免疫学活性 。 通过对 ＯＤ 的进一步检测发现 ，只有含有非甲基化的 Ｎ
Ｃ ＧＯＤ ｐ Ｎ才具有免疫刺激作用 ， 而甲基化的 Ｃ Ｇ ＯＤ ｐ Ｎ
或将 Ｃ Ｇ替换成 Ｇ ｐ Ｃ或其它序列 ， 则丧失其免疫活性 。 因
Ｔ Ｃ或 Ｔ Ｔ时活性最强日 Ｃ Ｇ Ｄ ｐ ｐ 。 ｐ － ＮＡ的骨架修饰也 与其
Ｃ Ｇ— Ｎ ｐ Ｄ Ａ免 疫 佐 剂 作 用 研 究 进 展
刘艳 环， 苗利 光 ， 王志 刚
（ 中国农业科学院特产研究所 ， 吉林 吉林 １２ ０ ） ３ １９
摘 要 ： ｐ — Ｃ Ｇ ＤＮＡ是一些具 有免疫激 活功能的 以未甲基 化的 Ｃ Ｇ￣， （ ｐ 为核 心 的 ＤＮＡ序列 ， 包括含 Ｃ Ｇ基 ｐ ｑ Ｃ Ｇ ｍｏ － 它 ｐ 序的人工合成 的寡 聚脱 氧核苷酸（ｈ ｏ ｅｘ ｎ ｃ ｏｉｅ， ０ ｇ ｄｏ ｙ ｕｌ ｔ ｓＯＤＮ） 自然界 中细菌、 ｅ ｄ ￣ 病毒 、 无脊椎动物 等低等 生物 的基 因组 ＤＮＡ。
人参皂苷研究分析
摘要人参皂苷主要有原人参二醇(Protopanaxadiol, PPD) 型、原人参三醇( Protopanaxatriol, PPT) 型、齐墩果酸(Oleanic Acid, OA)型三种类型，其具有广泛的生物学活性，包括免疫调节、抗肿瘤、提高学习记忆、抗衰老、抗炎、抗痴呆、抗疲劳和促进造血等。
但是人参皂苷本身不易被吸收，生物利用度较低。
大量研究表明,人参皂苷在胃肠道去糖代谢后形成苷元或次苷，这些成分更容易被胃肠道吸收，且活性较皂苷增强。
人参皂苷元混合物DS-1226系采用专有技术从人参茎叶中提取、水解、精制而成的一种类似人参皂苷肠代谢组合物的新型中药有效组份,该产品及技术已获得中国、美国、加拿大、欧盟、台湾等8个国家或地区的授权专利,其主要成分为PPT(33 %)和PPD (16 %)。
行为学实验表明DS-1226对睡眠干扰所致的学习记忆障碍具有改善作用，此外其还对化疗所致的骨髓抑制有保护作用。
人参是五加科(Araliaceae) 人参属植物人参Panax ginseng C.A.Meyer的干燥根，是珍贵的中药材，始载于《神农本草经》，在我国药用历史悠久。
人参主产于我国吉林的长白山等地区，具有大补元气、补脾益肺、生津、安神益智等功效-4。
人参中含有多种类型的化学成分，如皂苷类、挥发油类、多糖类、氨基酸和多肽类、微量元素等，其中人参皂苷是主要的活性成分15]。
人参皂苷属于三萜类皂苷，目前可分为三类6:-类为原人参二醇( Protopanaxadiol, PPD) 型，主要有人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rh2等;另一类为原人参三醇( Protopanaxatriol, PPT) 型，有人参皂苷Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh1等;还有一类为齐墩果酸(Oleanic Acid, 0A)型，有人参皂苷Ro、Rh3、Ri、F4等。
近年来，对于人参皂苷以及其代谢产物的药理作用、药动学特性的研究成为热点，并且发现人参皂苷的代谢产物，即次苷及其苷元，相对于天然皂苷更容易吸收入血，且具有更好的药理活性。
人参皂苷rg1结构式
人参皂苷rg1结构式人参皂苷RG1（Ginsenoside RG1）是从人参（scientific name: Panax ginseng）中提取的一种主要有效成分。
它是一种三萜类化合物，具有丰富的药理活性和广泛的药用价值，被广泛应用于中医药领域。
人参是中国传统药材中的珍贵宝藏，被誉为“健身之王”。
其根部富含人参皂苷RG1，具有抗疲劳、提神醒脑的功效。
人参皂苷RG1能够改善人体的氧耗量和供氧能力，改善机体的耐缺氧能力，增强人体免疫功能。
因此，长期服用人参皂苷RG1可以增强身体的抵抗力，提高免疫力，从而预防和治疗一些慢性疾病。
除了提高免疫力之外，人参皂苷RG1还具有抗衰老的功效。
现代人生活节奏加快，工作压力大，容易导致心脑血管疾病的发生。
而人参皂苷RG1可以通过调节神经系统、心血管系统和内分泌系统的功能，改善血液循环，降低胆固醇和血压，延缓衰老过程，保护心脑血管健康。
因此，适量摄入人参皂苷RG1可以帮助人们延缓衰老，提高生活质量。
此外，人参皂苷RG1还具有抗肿瘤的作用。
研究发现，人参皂苷RG1能够抑制肿瘤细胞的生长和扩散，促进肿瘤细胞的凋亡。
它通过调节免疫系统，增强肿瘤细胞的免疫识别能力，提高放疗和化疗对肿瘤的疗效。
因此，在肿瘤的综合治疗中加入人参皂苷RG1可以提高治疗的有效性，减轻化疗的副作用。
然而，需要注意的是，人参皂苷RG1的使用应该在合理的剂量下进行。
高剂量的人参皂苷RG1可能导致胃肠道不适、失眠等副作用。
因此，在使用前应该咨询医生，在医生的指导下进行合理用药。
总之，人参皂苷RG1作为人参的主要活性成分，具有丰富的药理活性和广泛的药用价值。
它可以增强免疫力，延缓衰老，抗肿瘤，为我们的健康保驾护航。
但是，在使用时需要注意合理剂量，遵循医生的指导。
相信随着科学技术的不断发展，人参皂苷RG1的应用将会得到更广泛的推广和应用。
免疫佐剂的作用和发展
免疫佐剂的作用和发展免疫佐剂（Adjuvants）是指能够增强疫苗免疫效果的物质。
疫苗是预防疾病的有效手段，但有些病原体或疫苗成分自身不足以激发充分的免疫反应，这时需要通过加入免疫佐剂来提高疫苗的效果。
下面将详细介绍免疫佐剂的作用和发展。
1.增强免疫原性：免疫佐剂能够增强疫苗的免疫原性，提高人体对疫苗中免疫原的免疫反应。
免疫佐剂可以通过多种方式增强免疫原性，如促进抗原递呈细胞的摄取和处理、增强抗原的稳定性和持续性释放、刺激免疫细胞的活化和增殖等。
2.调节免疫反应类型：不同的免疫佐剂可以调节免疫反应的类型和程度。
免疫佐剂可以使体内产生更多的特异性细胞免疫或体液免疫反应，对于不同类型的疾病和不同人群的免疫需求，可以选择不同的免疫佐剂来达到最佳的免疫效果。
3.延长免疫保护：免疫佐剂可以延长疫苗对疾病的免疫保护时间。
疫苗免疫效果的持续时间是一个重要的指标，免疫佐剂可以通过增强免疫记忆细胞的产生和存活，延长疫苗的免疫保护效果。
4.提高免疫强度：免疫佐剂可以提高疫苗接种后的抗体水平和免疫强度。
对于不易激发强免疫反应的人群，例如老年人和免疫功能低下者，免疫佐剂的使用可以提高疫苗的免疫效果。
免疫佐剂的发展历程可以追溯到19世纪。
最早的免疫佐剂使用的是表皮刺激剂，例如用火烫伤的方法来增强疫苗效果。
20世纪初，世界各国开始研究和开发化学免疫佐剂，如氢氧化铝（aluminum hydroxide）和石墨烯（graphene）等。
这些化学免疫佐剂主要通过吸附抗原，增加其免疫原性。
近年来，随着免疫学和生物技术的不断发展，越来越多的新型免疫佐剂被研发出来。
例如，油乳剂佐剂（例如MF59）和脂质体佐剂（例如liposomes）等，可以提高疫苗的免疫原性和免疫强度。
肽佐剂（例如TLR agonists）和核酸佐剂（例如CpG oligodeoxynucleotides）等，可以调节免疫反应类型和持续时间。
纳米技术佐剂（例如nanoparticles）可以提高抗原递呈效率和稳定性。
CpG_DNA疫苗佐剂研究进展及其应用前景
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人参皂苷分型
人参皂苷分型
人参皂苷是一种天然药物成分，被广泛应用于中医药领域。
它是从人参中提取的一种有效成分，具有多种药理作用，被广泛应用于改善人体健康和治疗疾病。
人参皂苷分为Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2等多个不同的分型。
每一种分型都具有不同的药理作用和临床应用价值。
Rb1是人参皂苷中的一种重要成分，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等多种作用。
研究发现，Rb1可以抑制炎症反应，减轻炎症症状。
它还可以调节免疫系统，增强机体免疫力，提高抗病能力。
此外，Rb1还具有抗肿瘤作用，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，从而达到治疗肿瘤的目的。
Rg1是另一种重要的人参皂苷分型，具有抗氧化、抗炎、抗衰老、保护心脑血管等作用。
研究发现，Rg1可以清除自由基，减轻氧化应激反应，保护细胞免受损伤。
它还可以抑制炎症反应，减轻炎症症状，起到抗炎作用。
此外，Rg1还可以保护心脑血管，促进心脑血管的健康。
除了Rb1和Rg1，人参皂苷的其他分型也具有重要的药理作用和临床应用价值。
每一种分型都有其独特的作用机制和临床应用领域。
研究表明，不同的分型可以相互协同作用，增强药效，提高治疗效果。
人参皂苷作为一种重要的中药成分，已经被广泛应用于临床医学和保健领域。
它具有多种药理作用，可以改善人体健康，提高免疫力，抑制炎症反应，保护心脑血管，抗衰老等。
随着科学技术的不断发展，人参皂苷的药理作用和临床应用将会得到更深入的研究和应用。
相信通过不断的努力，人参皂苷将会为人类健康事业做出更大的贡献。
免疫佐剂的作用和发展
免疫佐剂的作用和发展佐剂（Adjuvants）是先于抗原或与抗原同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质，又称免疫佐剂或抗原佐剂。
佐剂可选择性地改变免疫应答的类型，产生体液和\或细胞免疫。
改变体液抗体的种类IgG亚类和抗体的亲和性。
佐剂可改变抗原的构型，使疫苗诱导T辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞(CHL)反应。
佐剂可改变免疫反应为MHCⅠ型或MHC Ⅱ型。
佐剂还能改变T辅助细胞(Th1和Th2)的免疫反应。
随着生物技术的发展，新一代疫苗，如合成肽疫苗、基因工程疫苗等的研究已取得了初步成果，但现代疫苗研究过程所遇到的一个关键问题是其免疫原性较弱，往往需要佐剂来克服。
对适合于推广应用的新疫苗的研制，佐剂的研究显得至关重要。
因此，近年来免疫佐剂的研究进展更为迅速。
本文就各种免疫佐剂的研究现状和应用前景进行简要的讨论。
1 矿物质矿物质佐剂是传统佐剂中的一类，包括AL(OH)3和磷酸铝等。
1926年Glenny首先应用铝盐吸附白喉类毒素，至今已有70多年了，但它还是唯一被FDA批准用于人用疫苗的佐剂。
常用佐剂中效果较好的是AL(OH)3和磷酸铝佐剂，其次磷酸钙较常用。
铝佐剂主要诱导体液免疫应答,抗体以IgG1类为主,刺激产生Th2型反应，还可刺激机体迅速产生持久的高抗体水平,也比较安全,对于胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原是良好的疫苗佐剂。
它虽是人医和兽医均获批准的佐剂，广泛应用于兽医疫苗，特别是各种细菌苗，但其仍存在缺点：如有轻度局部反应，可以形成肉芽肿，极个别发生局部无菌性脓肿；铝胶疫苗怕冻；可能对神经系统有影响；不能明显地诱导细胞介导的免疫应答。
疫苗中加入磷酸三钙[Ca3(PO4)2]作佐剂，与铝胶一样具有吸附沉淀作用，但使用更加简便。
其缺点是：含盐量高；贮存日久有结晶沉淀。
皮下注射时偶有肿胀或结块,抗原免疫原性弱时,不足以提高其免疫原性,特别是保护性免疫机制要求活性介导的免疫参加时,应使用其他佐剂。
佐剂的生物学功能
佐剂的⽣物学功能
佐剂的⽣物功能
⽬前在⽩⽻⾁鸡养殖过程中，依据免疫程序进⾏疫苗免疫，⼤多数的灭活疫苗都是乳化⽩油制成，通过注射进⼊机体之后，能够帮助疫苗起到更好的免疫效果，那么佐剂的⽣物功能是如何的呢？今天我们探讨⼀下佐剂的⽣物学功能。
1. 抗原物质混合佐剂注⼊机体后，改变了抗原的物理性状，可使抗原物质缓慢地释放，延长了抗原的作⽤时间；
2. 佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表⾯积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；
3. 佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理；
4. 佐剂可促进淋巴细胞之间的接触，增强辅助T细胞的作⽤；
5. 可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产⽣抗体。
故免疫佐剂的作⽤可使⽆免疫原性物质变成有效的免疫原；
6. 可提⾼机体初次和再次免疫应答的抗体滴变；
7. 改变抗体的产⽣类型以及产⽣迟发型变态反应，并使其增强。
尽管⽩油佐剂有如此⼤的作⽤，但是由于⽩油佐剂进⼊机体之后，不能给予完全吸收，在⼀定程度上给⾷品安全带来了⼀定的隐患。
那么研制新型⽆油佐剂在⽣物制品⾏业是⼀个趋势。
⽬前市场上没有运⽤⽩油制成的可注射型疫苗有北京华夏兴洋的抗原佐剂复合物疫苗，北京华都诗华的抗原抗体复合物疫苗，其中主要的原理在于疫苗佐剂的缓释作⽤，从⽽能不断的刺激机体产⽣免疫反应。
分子佐剂CpG DNA的研究进展及应用概况
分子佐剂CpG DNA的研究进展及应用概况摘要免疫佐剂的主要作用是提高抗原（免疫原）的免疫原性和免疫反应的可持续性，它能诱导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应。
近年来，免疫佐剂的研究越来越受到人们的关注，该文着重介绍分子佐剂CpG DNA 的研究进展及应用概况，以为开发研制高效、低毒、结构新颖的免疫佐剂提供参考。
关键词分子佐剂；CpG DNA；研究进展；应用作为一种非特异性免疫增强剂，当佐剂与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。
同时，既减少了抗原的使用量，增加了机体抗体的产生量，又可以减轻免疫耐受。
近年来，佐剂发展较快，多种新型佐剂不断涌现，黏膜佐剂、纳米佐剂、天然佐剂及分子佐剂等是目前研究的热点。
用分子佐剂来提高基因疫苗的免疫效率是基因疫苗研究的关键，很多分子佐剂如CpG DNA、细胞因子、共刺激分子、趋化因子、C3d、免疫刺激调节分子等成为当前研究的热点。
1 CpG DNA的研究进展CpG DNA是一种DNA序列，其核心是一些未甲基化的CpG基序，具有免疫激活功能，它包括ODN（oligodeoxynucl-eotides，含CpG基序）和细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA，其碱基普遍遵循5-嘌呤-嘌呤-嘧啶-嘧啶-3的排列规律[1]。
研究表明，这种排列可激活多种免疫效应细胞，又称为免疫刺激DNA序列，其在细菌和病毒基因组中出现的频率至少是脊椎动物基因组的20倍，使入侵的外来细菌和病毒能够轻易地被脊椎动物的免疫系统所识别，从而激活相应的免疫应答机制。
CpG DNA的免疫激活机制可通过模式识别理论来解释，该理论是2000年由美国免疫学家Janeway et al提出的，病原相关分子模式（PAMP）是指天然免疫针对主要靶分子信号，模式识别受体（PRR）是指相对应的识别受体。
天然免疫中TLR家族成员识别PAMP后，从而在抗感染天然免疫中发挥重要作用。
CpG ODN纳米佐剂的免疫效应及应用进展
CpG ODN纳米佐剂的免疫效应及应用进展作者：王征帆万曾培高小鹏来源：《湖北农业科学》2020年第13期摘要：CpG ODN是人工合成的具有非特异性免疫刺激的DNA序列，模拟细菌DNA在体内的应答过程，诱发细胞和体液免疫。
CpG ODN作为新型免疫增强剂在兽医临床上的应用展现出了巨大的潜力，并在免疫学、药物学和药效学等领域备受关注。
然而CpG ODN并不稳定且易被核酸酶酶解，其自身带负电荷，不易结合到细胞表面。
因此，CpG ODN如何高效传递并能有效摄取成了新的挑战。
纳米传递系统的研究使CpG ODN单独或协同疫苗免疫取得显著疗效，为改善CpG ODN在疫苗研究中的应用拓宽了思路。
从CpG ODN纳米佐剂的作用机制、免疫活性、安全性及临床应用等方面进行综述，并对该领域未来的研究方向进行展望，为后续工作提供有益参考。
关键词：CpG ODN;纳米佐剂;作用机制;免疫活性;安全性Abstract： CpG ODN is a synthetic DNA sequence with non-specific immunostimulation which simulates the response process of bacterial DNA in vivo， inducing cellular and humoral immunity. CpG ODN has shown great potential as a novel immunopotentiator in veterinary clinical applications， and has attracted much attention in the fields of immunology， pharmacology and pharmacodynamics. However， CpG ODN is unstable and easily digested by nucleases， which are negatively charged and do not easily bind to the cell surface. Therefore， how to efficiently transfer CpG ODN and effectively ingest it becomes a new challenge. The study of nano-transmission system has achieved significant efficacy for CpG ODN alone or in combination with vaccine immunization，and broadened the thinking for improving the application of CpG ODN in vaccine research. The mechanism of action， immunological activity， safety and clinical application of CpG ODN nanoadjuvant were summarized， and future research directions in this field was prospected， to provide useful reference for follow-up work.Key words： CpG ODN; nano adjuvant; mechanism of action; immunological activity; safetyCpG ODN是人工合成的具有免疫刺激活性的非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸的DNA重复序列，能诱导强烈的细胞免疫和体液免疫，增强机体免疫应答。
基于网络药理学及分子对接的人参皂苷调控肿瘤免疫物质基础
基于网络药理学及分子对接的人参皂苷调控肿瘤免疫物质基础1. 内容简述本研究旨在通过网络药理学和分子对接方法，探讨人参皂苷对肿瘤免疫物质基础的调控机制。
通过对肿瘤相关基因进行网络分析，筛选出与人参皂苷作用相关的靶点。
利用计算机辅助药物设计软件进行分子对接模拟，预测人参皂苷与目标蛋白的结合模式。
通过实验验证分子对接结果，探讨人参皂苷对肿瘤免疫物质基础的影响，为进一步研究人参皂苷的抗肿瘤作用提供理论依据。
1.1 研究背景随着肿瘤发病率的逐年上升，肿瘤免疫治疗作为一种新兴的治疗方法，受到了越来越多的关注。
肿瘤免疫治疗的核心策略是通过激活患者自身的免疫系统，识别并攻击癌细胞。
人参皂苷作为一类具有抗肿瘤、抗炎和免疫调节作用的天然药物，已经在多种肿瘤模型中显示出良好的抗肿瘤活性。
目前关于人参皂苷调控肿瘤免疫物质的基础研究仍相对有限，尤其是在分子层面上的机制尚不明确。
深入研究人参皂苷调控肿瘤免疫物质的分子机制，对于揭示其抗肿瘤作用的内在机制具有重要意义。
网络药理学作为一种新兴的药物发现方法，通过模拟生物体内复杂的药物靶点信号传导网络，可以有效地预测药物与靶点的相互作用以及潜在的药效团。
网络药理学在中药及天然产物的研究中取得了显著的成果，本研究拟运用网络药理学方法，结合分子对接技术，探讨人参皂苷与肿瘤免疫相关分子之间的相互作用关系，为进一步揭示人参皂苷抗肿瘤作用的分子机制提供理论依据。
1.2 研究目的本研究旨在通过网络药理学方法和分子对接技术，探讨人参皂苷对肿瘤免疫物质的影响机制。
通过对肿瘤免疫相关靶点进行筛选，确定与人参皂苷作用密切的靶点。
利用网络药理学方法对这些靶点进行分析，揭示人参皂苷在调控肿瘤免疫过程中的作用途径。
通过分子对接模拟实验，验证人参皂苷与目标靶点的相互作用关系，为进一步研究人参皂苷的抗肿瘤作用提供理论依据。
1.3 研究意义人参皂苷(ginsenosides)是人参的主要活性成分，具有广泛的药理作用，包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗衰老等。
新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用分析
新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用分析发表时间：2019-09-06T15:27:25.743Z 来源：《医药前沿》2019年20期作者：孙英慧[导读] CPG-DNA对HBsAg具有较强的免疫原性，可诱导机体产生较强的免疫作用，其为一种潜能较大的免疫佐剂。
（北部战区总医院辽宁沈阳 110016）【摘要】目的：探讨新型免疫佐剂CpG-DNA的性能和初步应用。
方法：取BALB/c小鼠（SPF）30只为研究对象。
按照随机数字表法，分为两组，分别给予HBsAg为HBsAg组与HBsAg+CpG-DNA为HBsAg+CpG-DNA组，每组15只。
CpG-DNA与抗原取混合后，对小鼠进行皮下、背部注射。
于加强免疫一周进行细胞毒T细胞功能检测。
结果：在强化免疫后，HBsAg组显著升高（P＜0.05）。
结论：CPG-DNA对HBsAg具有较强的免疫原性，可诱导机体产生较强的免疫作用，其为一种潜能较大的免疫佐剂。
【关键词】新型免疫佐剂；CpG-DNA；HBsAg【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）20-0024-02 Performance and preliminary application analysis of novel immunoadjuvant CpG DNA Sun YinghuiGeneral Hospital of Northern War Zone,Shenyang,Liaoning 110016,China 【Abstract】Objective To investigate the performance and preliminary application of a novel immunological adjuvant CpG DNA. Methods Sixty BALB/c mice (SPF) were used as subjects.According to the random number table method,they were divided into two groups, namely HBsAg+CpG-DNA group in HBsAg group.After the CpG-DNA was mixed with the antigen,the mice were injected subcutaneously and dorsum.Cytotoxic T cell function tests were performed one week after booster immunization.Results After booster immunization at week 4 and week 12, the number of CD8+CTL secreted by HBsAg+CpG-DNA group was significantly higher than that of HBsAg (P＜0.05). Conclusion CPG-DNA has strong immunogenicity to HBsAg and can induce strong immunity in the body.It is a potential immunoadjuvant.【Key words】Novel immunoadjuvant;CpG DNA;HBsAg相关研究表明，DNA是一种较强的免疫反应刺激物，不仅激活免疫细胞使其进行增殖分化，亦可以对免疫应答进行调节[1]。
免疫佐剂对丙肝核酸疫苗免疫效果的影响
免疫佐剂对丙肝核酸疫苗免疫效果的影响金博;Richard Yan-Hui Wang ;程留芳;裘奇;史维国【期刊名称】《现代中西医结合杂志》【年(卷),期】2005(014)016【摘要】目的观察不同佐剂对HCVDNA疫苗效果的影响.方法雌性Balb/c小鼠分别用脂质体DDAB/EPC和DC-Chol/DOPE、Montanide ISA 720和Imject Alum为佐剂的HCV DNA疫苗免疫3次,ELISPOT法观察脾淋巴细胞受HCV核心、E2、E1/E2、NS3和NS5b蛋白刺激后细胞因子的产生.结果DDAB/EPC组产生IFN-γ较多,用核心或E2刺激,显著高于其他4组(P<0.01);用E1/E2刺激,显著高于裸DNA、Imject Alum和DC-Chol/DOPE组(P<005);用NS3刺激,显著高于Montanide和DC-Chol/DOPE组(P<0.05);用NS5b刺激,显著高于Montanide组(P<0.05).除用NS5b刺激与裸DNA组无显著性差异外,DDAB/EPC组IL-2的产生也显著高于其他4组(P<0.05).该组IL-4的产生,E1/E2刺激时显著高于其他4组(P<0.05),用核心、E2和NS3刺激时显著高于裸DNA组(P<0.05).用NS5b刺激,Imject Alum组IL-4的产生显著高于其他4组(P<0 05).裸DNA和2种脂质体组IFN-γ的产生高于IL-4,而Montanide和Imject Alum组IL-4高于IFN-γ.结论在4种佐剂中,DDAB/EPC效果最好,Montanide和Imject Alum可将DNA疫苗Th1为主的免疫特性转换为以Th2为主.【总页数】4页(P2103-2106)【作者】金博;Richard Yan-Hui Wang ;程留芳;裘奇;史维国【作者单位】解放军总医院,北京,100853;Department of Transfusion Medicine, Warren G. Magnuson Clinical Center, National Institutes of Health,USA;Department of Transfusion Medicine, Warren G. Magnuson Clinical Center, National Institutes of Health, USA;解放军总医院,北京,100853;Department of Transfusion Medicine, Warren G. Magnuson Clinical Center, National Institutes of Health, USA;Department of Transfusion Medicine, Warren G. Magnuson Clinical Center, National Institutes of Health, USA【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.不同免疫佐剂对丙肝核酸疫苗效果的影响 [J], 金博;Richard Yan-Hui Wang;程留芳;裘奇;史维国2.野生动物用狂犬病口服疫苗复合免疫佐剂与诱饵的筛选及其对免疫效果的影响[J], 程瑶;毛丽萍;文兆海;古丽麦拉·卡日;简子健;翟少华3.影响核酸疫苗免疫效果的因素及提高核酸疫苗免疫效果的方法 [J], 张以芳;王生奎4.免疫佐剂对不同剂量丙肝核酸疫苗效果的影响 [J], 金博;Richard Y.-H.Wang;程留芳;裘奇;史维国5.Al(OH)3和CpG ODN免疫佐剂对丙型肝炎病毒多表位抗原PCX3疫苗免疫效果的影响 [J], 祁淑红;杨桂梅;谢匡成;刘龙丁;任大明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
cpg佐剂结构
cpg佐剂结构一、引言在疫苗研发和生物技术领域中，佐剂（Adjuvant）作为一种辅助物质，可以增强疫苗的免疫原性和免疫学效应。
其中CPG佐剂（CpG Adjuvant）作为一种新型佐剂，具有广泛的应用前景。
本文将深入探讨CPG佐剂的结构特点以及其在疫苗研发中的应用。
二、CPG佐剂的结构特点1. 核苷酸结构CPG佐剂指的是富含CpG结构的核苷酸序列。
CpG结构是指DNA或RNA的一种序列，其中Cytosine（C）和Guanine（G）通过一个磷酸二酯桥连结。
其结构特点决定了CPG佐剂的生物活性和免疫调节效果。
2. 结构模式CPG佐剂可分为三种结构模式：全CpG、不完全CpG和类CpG佐剂。
全CpG模式是指核苷酸序列中的所有CpG位点都富含CpG结构；不完全CpG模式允许CpG位点之间有缺失，形成局部间隔；类CpG佐剂则是通过人为设计，使得核苷酸序列在某些位置模拟CpG结构。
不同结构模式的CPG佐剂在激活免疫反应和诱导免疫记忆方面表现出差异。
三、CPG佐剂的作用机制1. 免疫识别CPG佐剂作为外源DNA或RNA的一部分，可以被免疫系统中的Toll样受体（TLR）识别。
其中，TLR9是一种能够识别CpG-DNA的受体，其在免疫细胞中广泛表达。
免疫细胞通过与CPG佐剂结合，诱导TLR9活化，从而启动免疫反应。
2. 免疫活化CPG佐剂结合TLR9后，可激活多种免疫细胞，如树突状细胞、单核细胞和B细胞等。
激活后的免疫细胞可产生促炎性细胞因子和趋化因子，引导其他免疫细胞的迁移和活化，促进免疫系统的免疫记忆建立。
3. 免疫调节CPG佐剂通过与TLR9结合，不仅能够激活免疫反应，还可以调节免疫系统的平衡。
具体来说，CPG佐剂可增强Th1型细胞免疫应答，增加炎症因子产生；同时，还可抑制Th2型细胞免疫应答，降低过度的抗体产生。
这种免疫调节作用对于疫苗的设计和治疗某些免疫相关疾病具有重要意义。
四、CPG佐剂在疫苗研发中的应用1. 疫苗增强效果添加CPG佐剂可以显著增强疫苗的免疫原性，提高疫苗的免疫学效应。
2021年天然药物化学试题库
中药化学试题库一、单项选取题1.由乙酸-丙二酸途径生成化合物是（）A.脂肪酸类B.蛋白质C.生物碱D.皂苷E.糖类2.用石油醚作为溶剂，核心提取出中药化学成分是（）A.糖类B.氨基酸C.苷类D.油脂E.蛋白质3.运用分子筛作用进行化合物分离色谱是（）A.硅胶柱色谱B.离子互换色谱C.凝胶过滤色谱D.大孔树脂色谱E.纸色谱4.能提供分子中有关氢及碳原子类型、数目、互相连接办法、周边化学环境，和构型、构象构造信息波谱技术是（）A.红外光谱B.紫外光谱C.质谱D.核磁共振光谱E.旋光光谱5.可以研究母离子和子离子关系，获得裂解过程信息，用以拟定前体离子和产物离子构造质谱技术（）A.电子轰击质谱B.快原子轰击质谱C.电喷雾电离质谱D.串联质谱E.场解吸质谱6.在提取原生苷时，一方面要设法破坏或抑制酶活性，为保持原生苷完整性，常用提取溶剂是（）A.乙醇B.酸性乙醇C.水D.酸水E.碱水7.纸色谱检识：葡萄糖（a），鼠李糖（b），葡萄糖醛酸（c），果糖（d），麦芽糖（e）,R值排列顺序为（）以BAW (4：1：5，上层)展开，其fA.a＞b＞c＞d＞eB.b＞c＞d＞e＞aC.c＞d＞e＞a＞bD.d＞b＞a＞c＞eE.b＞d＞a＞c＞e8.大黄素型蒽醌母核上烃基分布状况是（）A.在一种苯环β位B.在两个苯环β位C.在一种苯环α或β位D.在两个苯环α或β位E.在醌环上9.下列蒽醌类化合物中，酸性强弱顺序是（）A.大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄酚B.大黄素＞芦荟大黄素＞大黄酸＞大黄酚C.大黄酸＞芦荟大黄素＞大黄素＞大黄酚D.大黄酚＞芦荟大黄素＞大黄素＞大黄酸E.大黄酸＞大黄素＞大黄酚＞芦荟大黄素10.用葡萄糖凝胶分离下列化合物，最先洗脱下来是（）A.紫草素B.丹参新醌甲C.大黄素D.番泻苷E.茜草素11.下列反映中用于鉴别羟基蒽醌类化合物是（）A.无色亚甲蓝反映B.Bornträger反映C.Kesting-CravenD.Molish反映E.对亚硝基二甲苯胺反映12.无色亚甲蓝显色反映可用于检识（）A.蒽醌B.香豆素C.黄酮类D.萘醌E.生物碱13.可和异羟肟酸铁反映生成紫红色是（）A.羟基蒽醌类B.查耳酮类C.香豆素类D.二氢黄酮类E.生物碱14.鉴定香豆素6位与否有替代基团可用反映是（）A.异羟肟酸铁反映B.Gibb’s 反映C.三氯化铁反映D.盐酸-镁粉反映bat反映15.为保护黄酮母核中邻二酚羟基，在提取时可加入（）A.AlCCl3B.Ca(OH)2C.H3BO3D.NaBH4E.NH3•H2O16.非苷类萜室温下析出结晶有易至难顺序为（）A.单萜＞倍单萜＞二萜＞二倍单萜B.倍单萜＞单萜＞二萜＞二倍单萜C.二萜＞倍单萜＞单萜＞二倍单萜D.二倍单萜＞二萜＞倍单萜＞单萜E.单萜＞二倍单萜＞二萜＞倍单萜17.下列有关单萜类化合物挥发性论述错误是（）A.所有非苷类单萜及倍半萜具挥发性B.所有单萜苷及倍半萜苷不具挥发性C.所有非苷类二萜不具挥发性D.所有二萜苷不具挥发性E.所有三萜不具挥发性18.单萜及倍单萜和小分子简朴香豆素理化性质不同样点有（）A.挥发油B.脂溶性C.水溶性D.共水蒸馏性E.旋光性19.萜类化合物在提取分离及贮存时，若和光、热、酸及碱长时间接触，常会产生构造变化，这是由于其（）A.连醇羟基B.连醛基C.具酮基D.具芳香性E.具脂烷烃构造，不稳定20.单萜及倍单萜和小分子简朴香豆素理化性质不同样点有（）A.挥发油B.脂溶性C.水溶性D.共水蒸馏性E.旋光性21.莪术醇属于（）A.单环倍半萜内酯B.愈创木烷型双环倍半萜C.䓬酚酮类D.杜松烷型双环倍半萜E.双环二萜22.萜类化合物在提取分离及贮存时，若和光、热、酸及碱长时间接触，常会产生构造变化，这是由于其（）A.连醇羟基B.连醛基C.具酮基D.具芳香性E.具脂烷烃构造，不稳定23.萜类化合物以非色谱法分离时，其构造中难被运用基团是（）A.羧基B.酯键C.酚羟基D.双键E.碱性氧原子24.以色谱法去除萜苷粗提物中水溶性杂质，首选固定相是（）A.氧化铝B.硅胶C.阳离子互换树脂D.阴离子互换树脂E.大孔吸附树脂25.色谱法分离萜类化合物，最常用吸附剂是（）A.硅胶B.酸性氧化铝C.碱性氧化铝D.葡聚糖凝胶E.聚酰胺26.分离三萜皂苷优良溶剂为（）A.热甲醇B.热乙醇C.丙酮D.乙醚E.含水正丁醇27.三萜皂苷在进行Rosen-Heimer（三氯乙酸）反映时，若要观测阳性成果需加热到（）A.60℃B.80℃C.100℃D.120℃E.140℃28.当前对皂苷分离效能最高色谱是（）A.吸附色谱B.分派色谱C.大孔树脂色谱D.高效液相色谱E.凝胶色谱29.应用C 13-NMR 谱鉴别齐墩果酸和乌苏酸可根据两者构造中（ ）A.季碳数不同样B.双键数不同样C.角甲基数不同样D.羟基数不同样E.羧基数不同样30.在苷分类中，被分类为强心苷根据是（ ）A.苷元构造B.苷键构型C.苷原子种类D.分子构造和生理活性E.具有α-去氧苷31.属Ⅰ型强心苷是（ ）A.苷元-（2,6-二去氧糖）x -（D-葡萄糖）yB.苷元-（6-去氧糖）x -（D-葡萄糖）yC.苷元-（D-葡萄糖）x -（6-去氧糖）yD.苷元-（D-葡萄糖）x -（2,6-二去氧糖）yE.苷元-D -葡萄糖32.可用于区别甲型和乙型强心苷反映是（ ）A.Kedde 反映B.乙酐-浓硫酸反映C.三氯化锑反映D.K-K 反映E.Salkowski 反映33.甾体皂苷元基本母核是（ ）A.孕甾烷B.螺甾烷C.羊毛脂甾烷D.α-香树脂醇E.β-香树脂醇34.合成甾体激素类药物和避孕药核心原料薯蓣皂苷元属于（ ）A.螺甾烷醇型B.异螺甾烷醇型C.呋甾烷醇型D.变形螺甾烷醇型E.齐墩果烷型35.区别甾体皂苷和三萜类皂苷反映是（ ）A.三氯化锑反映B.K-K 反映C.10%H 2SO 4反映D.碱性苦味酸反映E.三氯乙酸反映36.自药材水提取液中萃取甾体皂苷常用溶剂是（ ）A.乙醚B.丙酮C.含水正丁醇D.乙酸乙酯E.氯仿37.用于甾体皂苷沉淀分离溶剂是（ ）A.乙醇B.正丁醇C.丙酮D.乙酸乙酯E.氯仿38.由螺甾烷衍生F 环裂环是（ ）A.螺甾烷醇型甾体皂苷B.C 21甾体化合物C.植物甾醇D.胆汁酸类E.呋甾烷醇型甾体皂苷39.用TLC分离某酸性皂苷时，为得到良好分离效果，展开时应使用（）A.氯仿-甲醇-水（65:35:10，下层）B.乙酸乙酯-乙酸-水（8:2:1）C.氯仿-丙酮（95:5）D.环己烷-乙酸乙酯（1:1）E.苯-丙酮（1:1）40.和强心苷共存酶（）A.只能使α-去氧糖之间苷键断裂B.可使葡萄糖苷键断裂C.能使所有苷键断裂D.可使苷元和α-去氧糖之间苷键断裂E.不能使各种苷键断裂41.用于三萜皂苷构造研究办法中，由于皂苷难挥发性而受到限制是（）A.EI-MSB.FD-MSC.FAB-MSD.ESI-MSE.LD-MS42.提取强心苷常用溶剂为（）A.水B.乙醇C.70%-80%乙醇D.含水氯仿E.含醇氯仿43.维生素D前体是（）A.麦角甾醇B.β-谷甾醇C.胡萝卜苷D.葡萄糖E.豆甾醇44.可用于鉴定甾体皂苷螺缩酮构造是（）A.D-葡萄糖B.L-鼠李糖C.D-洋地黄糖D.D-洋地黄毒糖E.D-加拿大麻糖.45.以孕甾烷为基本骨架是（）A.螺甾烷醇型甾体皂苷B.C21载体化合物C.植物甾醇D.胆汁酸类E.呋甾烷醇型甾体皂苷46.生物碱碱性表达办法多用（）A.KbB.pKBC.KaD.pKaE.pH47.下列生物碱碱性最强是（）A.莨菪碱B.东莨菪碱C.山莨菪碱D.N-去甲莨菪碱E.樟柳碱48.可异构成季铵碱是（）A.黄连碱B.甲基黄连碱C.小檗胺D.醛式小檗碱E.醇式小檗碱49.生物碱沉淀反映条件是（）A.酸性水溶液B.碱性水溶液C.中性水溶液D.盐水溶液E.醇溶液50.碘化铋钾反映生成沉淀颜色为（）A.白色B.黑色C.棕色D.橘红色E.蓝色51.有一定碱性生物碱提取可用（）A.pH11水B.pH10水C.pH9水D.pH8水E.pH1水52.吸附柱色谱法分离生物碱常用吸附剂是（）A.硅胶B.氧化铝C.聚酰胺D.活性炭E.硅藻土53.在水中溶解度最小小檗碱盐是（）A.硫酸盐B.酸性硫酸盐C.磷酸盐D.盐酸盐E.枸橼酸盐54.既不溶于酸又不溶于碱化合物是（）A.棕榈酸B.大黄酸C.山莨菪碱D.南瓜子氨酸E.蔊菜素55.碱性最强生物碱类型为（）A.酰胺生物碱B.叔胺生物碱C.仲胺生物碱D.季胺生物碱E.两性生物碱56.以硅胶为吸附剂进行薄层色谱分离生物碱时，常用解决办法是（）A.以碱水为展开剂B.以酸水为展开剂C.展开剂中加入少量氨水D. 展开剂中加入少量酸水E.以氯仿为展开剂57.其共轭酸分子内氢键稳定是（）A.小檗碱B.麻黄碱C.伪麻黄碱D.东莨菪碱E.山莨菪碱58.下列生物碱毒性较小是（）A.马钱子碱B.番木鳖碱C.士宁D.乌头碱E.苦参碱59.从化学构造角度，鞣质是天然界植物中广泛存在一类（）A.糖苷类B.多元酚类C.黄烷醇类D.酯糖苷类E.黄烷醇多聚物类60.五倍子鞣质从构造上看属于（）A.没食子鞣质B.逆没食子鞣质C.可水解鞣质低聚体D.咖啡鞣质E.缩合鞣质61.木麻黄宁属于（）A.咖啡鞣质B.缩合鞣质C.复合鞣质D.C-苷鞣质E.逆没食子鞣质62.逆没食子鞣质在酸存在下加热后可形成（）A.没食子酸和葡萄糖B.黄烷-3-醇或黄烷-3,4-二醇和葡萄糖C.逆没食子酸和葡萄糖D.咖啡酸和葡萄糖E.咖啡酸和奎宁酸63.用酸、碱、酶解决后核心产生逆没食子酸，同步还也许有少量没食子酸鞣质为（）A.咖啡鞣质B.缩合鞣质C.复合鞣质D.C-苷鞣质E.逆没食子鞣质64.从植物材料中迅速提取鞣质类成分，为避免成分破坏常采用提取办法是（）A.回流提取法B.煎煮法C.渗漏法D.浸渍法E.组织破碎提取法65.鞣质和下列物质中不能产生沉淀是（）A.生物碱B.金属碱C.蛋白质D.石灰水E.铁氰化钾氨溶液66.从植物药材中提取鞣质类成分最常用溶剂是（）A.乙醚B.丙酮C.含水丙酮D.水E.甲醇67.构造中同步具有可水解鞣质和黄烷醇构造片段是（）A.咖啡鞣质B.缩合鞣质C.复合鞣质D.C-苷鞣质E.逆没食子鞣质68.化学成分中具有砷元素矿物药是（）A.雄黄B.紫石英C.炉甘石D.白矾E.滑石69.被称为人体必须脂肪酸是（）A.α-亚麻酸B.油酸C.棕榈酸D.硬脂酸E.棕榈油酸70.不含硫元素化合物是（）A.大蒜辣素B.蔊菜素C.大蒜新素D.三七素E.黑芥子素71.大蒜新素是（）A.易导致重金属中毒药物B.可采用水提醇沉法获得成分C.具有极强杀菌作用成分D.在空气中久置会发生酸败成分E.由6个氨基酸构成抗癌成分72.芥子苷是（）A.具有亲水性胶体特性B.采用二乙基二硫代氨基甲酸银法定量C.指由酰胺键或肽键形成环状肽D.以硫原子为苷键原子苷类化合物E.可采用典型尿素结晶法提纯73.天花粉蛋白是（）A.易导致重金属中毒药物B.可采用水提醇沉法获得成分C.具有极强杀菌作用成分D.在空气中久置会发生酸败成分E.由6个氨基酸构成抗癌成分74.化学成分中具有汞元素矿物药是（）A.金礞石B.滑石C.朱砂D.芒硝E.硫磺75.由20个碳原子构成脂肪酸是（）A.亚油酸B.棕榈酸C.α-亚麻酸D.油酸E.花生四烯酸76.茚三酮反映呈阴性是（）A.天门冬素B.茜草科环肽C.二十碳五烯酸D.苦杏仁酶E.南瓜子氨酸二、简答题1.举例阐明有效成分和无效成分关系。
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２．４诱生干扰素的效价通过观察免疫佐剂在淋巴细胞诱导培养过程中的细胞上清对ＶＳＶ引起细胞
病变的抑制作用，测定的培养上清中干扰素抗ＶＳＶ的效价。结果显示：第１组为２８；第２组为２６； 第３组为妒；第４组为２５；第５组为２’：鸡ｒ＿干扰素阳性组为ｌＯ’。 ３讨论
ｕ ｇ／ｍＬ
的ＲＮａｓｅ，于３７℃水浴作用３０ｒａｉｎ，置冰浴终止反应，加入ＰＩ染色液（ＮａｚＥＤＴＡ０．１ｎｕｎ０１／Ｌ，Ｔｒｉｔｏｎ－ｘ１００
０．１％，ＲＮＲｓｅ ５０１，１９／ｍＬ，ＰＩ ５０ｕ
ｇ／ｍＬ，用ＰＢＳ溶液配制，４＂Ｃ保存）１ ｍＬ，避光４＂Ｃ染色３０ｍｉｎ，
于ＢＤＦＡＣＳＡｒｌａ流式细胞仪上检测，采用ＦＡＣＳ４２０流式细胞仪软件多正态拟定程序，分析各细胞周
外诱导培养中的活性，使细胞培养上清中干扰素抗ＶＳＶ的效价分别达到了２８和２９，与ＰＨＡ对照组 的２５相比，差异显著：表明ＲｇＩ佐剂和Ｒ自ｃｐＧ联合佐剂在提高淋巴细胞活性的同时，促进了淋巴
细胞合成、分泌干扰索的能力。 综上所述，Ｒｇｌ ２５
ｕ
ｇ＋ＣｐＧ １２．５
ｕ
ｇ／ｍＬ的联合免疫佐剂既能显著提高ＰＨＡ诱导淋巴细胞的
ａ
ｃｐＧ
ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ
ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｅ－ｌａｎｔｉｄｅ
ｆｏｒ
ａｅ６ｖａｄｎｇｐｉｉｍａｔｅｉ／ｌｌｆｉｌｌｌｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｖｉｔｒｏ ａｎｄｖｉｖｏ．■Ｉｎｌｍｔｍ０１．。２０００．１６４：１６１７－１６２４
【５】Ｂ Ｌ Ｐｒｅｉｄａｇ，Ｇ
Ｂ
Ｍｅｌｔｏｎ，Ｆ Ｃｏｌｌｉｎｓ，ｅｔ ａ１．ｃｐＧ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｌｄｎ．１２ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｌｅａｅｙ ｏｆ
联合免疫佐剂具有明显促进鸡外周血淋巴细胞免疫功能的作用。 关键词：人参皂苷Ｒ９１；ＣｐＧ ＤＮＡ；免疫佐剂：细胞免疫
人参皂苷Ｒｇｌ与菌体ＣｐＧ ＤＮＡ联合作为重组质粒ｐｃＤＮＡ－ＶＰ２基因疫苗的免疫佐剂，经动物免
疫实验证实，既能提高基因疫苗免疫的血清抗体效价，又能提高免疫鸡抗超强毒攻击的保护率（另文 报道）。现有的研究表明：人参皂苷Ｒ舶主要是促进血清中自蛋白、ｒ．球蛋白、脾脏中蛋白质的合成， 又通过促进巨噬细胞的吞噬能力、增加抗原提呈，以提高抗原刺激机体产生抗体的效率”捌；ｃｐｏＤＮＡ 是一种含胞嘧啶、鸟嘌呤二核苷酸（ｃｐＧ）的ＤＮＡ片段，主要是通过与细胞表面的一种核苷酸非特异 性受体结合，直接激活Ｂ淋巴细胞、巨噬细胞和树突状细胞，诱导他们分泌儿．６、ＩＬ－１２和ＴＮＦ－ｄ、 ＩＦＮ－ｒ等细胞因子，从而激活整个免疫系统ｏⅣ】。为了探索二者联合应用提高重组质粒基因疫苗免疫 效果的机理，本文采用鸡外周血淋巴细胞诱导实验，通过细胞形态学观察、ＭＴＴ测定法、流式细胞 仪测定法和抗病毒性细胞病变抑制实验等，分别观察Ｒｇｌ、ＣｐＧ和Ｒ９１．ＣｐＧ对鸡外周血淋巴细胞的
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｅｍｌｎ Ｉｍｍｔｍｏｐａｔｈｏｌ，２０００，２２（１－２）：３５－４３ ｏｆ ＮＫ ｃｅｌｌ
０ａｕｍａｎ
ａｎｄ
ｉｌｌＯＵ∞１ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｕｌａｔｏｒｙ ＤＮＡ ｓｅｑｕｃａｃｅ，
【４】Ｈａｒｔｍａｎｎ １３，Ｗｅｅｒａｍａ
Ｒ
Ｄ＇Ｂａｌｌａｓ ｚ Ｋ
ｅｔ
ａ１．Ｄｅｌｉｎｅａｔｉｏｎ ｏｆ
转化率、增殖率，又增加淋巴细胞活性及培养上清中的干扰素效价，说明具有明显增强鸡外周血淋
华东区第十七次中兽医科研协作与学术研讨会论文汇编
巴细胞免疫的作用，但实验都是在体外细胞培养中完成的，是否与其作为免疫佐剂，促进重组质粒
基因疫苗免疫效果的体内机制相一致，尚有待做进一步的探索。
参考文献
［１】刘斋，张均田，孙｝内，等．人参皂苷Ｒｇｌ对老年大鼠免疫调节作用的机制分析．药物学报，１９９６，３１（２）：９５．１００ 【２】任杰红・陈林芳．张路晗．等．人参皂苷Ｒｇｌ的免疫促进作用．中药新药与临床药理，２００２，１３（２）：９２．９３ 【３】Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｓ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｔ＇１１１０．ｅｔ ａ１．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
ｇ；
Ｂ组：ＰＨＡ５０ｉｔ ｇ＋Ｒｇｌ ２５ｕｇ＋Ｃｐ９１２．５Ｉ－ｔ ｇ；Ｃ组：ＰＨＡ５０ｕ ｇ；Ｄ组：为仅加生长液的空白对照。 于３７℃５％Ｃ０２培养箱诱导培养７２ ｈ，１５００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｒａｉｎ，取沉淀加入一２０℃预冷的７０％乙醇， 轻轻混匀，于４＂Ｃ固定ｌ ｈ。１０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃上清，用ＰＢＳ洗３遍，加入浓度为５０
Ｄｉｐ０２：７．５９％ＤｉｐＧ２：４ ５６％ Ｄｉｐ ｓ：１７．９１％ Ｄｉｐ Ｓ：２．３４％
图１流式细胞仪观察结果
Ｆｉ９１ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ
２．２淋巴细胞增殖将诱导培养的四组鸡外周血淋巴细胞，在流式细胞仪上．每组观察１００００个单 淋巴细胞的Ｈ荧光强度，经ＥＡｃｓ４２０流式细胞仪软件多正态拟定程序分析，并根据“增殖指数 ＝（Ｓ＋Ｇ２）／（ＧＩ＋Ｓ＋Ｇ２）×１００％”计算淋巴细胞的增殖指数。结果见图１。
期的百分比。
１．４对淋巴细胞活性的影响
分离鸡外周血液淋巴细胞，用１６４０生长液调整细胞数为５×１０６，玎：ｌＬ个，再按１００ⅡＬ吼细胞悬
液上９６孔细胞板，并按１．３．１分组及添加药物，于３ＴＣ ５％Ｃ０２诱导培养６８ ｈ，每孔加入３０ｕ
Ｌ
ｌｍｇ／ｍＬ的ＭＴＦｌ６４０溶液，继续培养４ｈ，快速倒去培养液，每孔加入１５０ｕＬＤＭＳＯ，于３０℃６０—８０
性细胞病变抑制实验等，分别观察Ｒｇ．－ＣｐＧ联合免疫佐剂对鸡外周血淋巴细胞的转化、增殖、活性及诱生干扰素效 价的影响。结果显示：联合免疫佐荆按Ｒｇｌ２５峙＋ＣｐＧ １２．５ｐｇ／ｍＬ的添加量．能使ＰＨＡ诱导的淋巴细胞转化率由７４．３％
显著增加到９３．５％；细胞增殖率由４．８８％显著增加到２２．４％：抗ＶＳＶ的干扰素效价由２５显著增加到２９。表明Ｒｇｌ－ＣｐＧ
ｕ ｕ
ｇ／ｍＬ或Ｒ９１ ２５
ｇ＋ＣｐＧ １２．５
１１
ｇ／ｍＬ时，能明显提高ＰＨＡ诱导淋巴细胞转化的作用，其转化率分别达到了８４．２％
和９３．５％，这是否与Ｒｇｌ在体内主要是通过促进血清中自蛋白、脾脏中蛋白质的合成和增加脾脏指 数ｉｔ，２］等作用相类似，尚有待进一步研究。此外，本次实验证实ＣｐＧ与Ｒｇｌ联合应用可进一步提高
ｕ
ｇ／ｍＬ；第３组为ＰＨＡ５０ｐｇ＋Ｒ９１ ２５Ｉｔｇ＋ＣｐＧｌ２．５Ｉｔｇ／ｍＬ；第４组为ＰＨＡ 空白对照组。分别加入各种免疫佐剂药物后，于３ＴＣ、５％Ｃ０２培养箱中诱导培养， 每天轻轻摇动２次。经７２ ｈ培养后，１５００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，分别收取各组淋巴细胞培养上清．于一
３．１ ＰＨＡ
５０ｕｇ／ｍＬ的添加量在体外可以诱导７４．３％的鸡外周血液淋巴细胞转化为淋巴母细胞或过渡
型淋巴细胞。当加入ＣｐＧｌ２．５ｐ ｇ／ｍＬ时，对ＰＨＡ的诱导则没有明显的协同作用。因ＰＨＡ诱导的淋
巴细胞转化是以Ｔ淋巴细胞为主，ｃｐＧ是直接激活Ｂ淋巴细胞和巨噬细胞等，所以，在体外细胞实
验中，ＣｐＯ单独使用对外周血淋巴细胞的免疫活性没有明显的作用。当加入Ｒ勘２５
１．３淋巴细胞转化实验
１．３．１形态学观察无菌采取３５日龄ＳＰＦ白来航鸡血液３ｍｌ，肝素钠抗凝，加等量的ＲＰＭＩ
１６４０
培养液，轻轻颠倒混匀，用淋巴细胞分离液，经水平离心机１５００ｒ／ｒａｉｎ离心１５ｒａｉｎ，分离淋巴细胞， 用含５％小牛血清的１６４０生长液配制成５×１０６／ｍＬ个淋巴细胞悬液，装瓶分组，每组重复５瓶。各 组添加的药物及其浓度分别是；第１组为ＰＨＡ５０ｕｇ＋Ｒｇｌ ２５ｕｇ／ｍＬ；第２组为ＰＨＡ５０１１９＋ｃｐＧｌ２．５
Ｒｇｌ的作用。 ３．２淋巴细胞增殖实验结果显示，单独使用ＰＨＡ诱导淋巴细胞的增值指数仅为４．８８％；当再加入Ｒｇｌ 或Ｒ９１－ＣｐＧ佐剂时，其增殖指数分别达Ｎ－Ｊ＂９．９３％和２２．４７％。表明Ｒ勘的活性效应与其在体内通过 增加脾脏指数和脾脏蛋白合成是十分一致的。 ３．３淋巴细胞活性检测结果显示，Ｒｇｌ佐剂和Ｒ９１．ＣｐＧ联台佐剂具有显著提高鸡外周血淋巴细胞在体
转化、增殖、活性以及诱导淋巴细胞产生干扰素效价的影响。
１材料与方法
１．１材料 ３５日龄ＳＰＦ自来航鸡、ＳＰＦ鸡种蛋，均购自中牧实业股分有限公司南京药械厂ＳＰＦ鸡繁殖场。
水泡性口炎病毒（ＶＳＶ）由南京农业大学陈溥言教授惠赠；禽源高致病性大肠杆菌（０３７ 株），由扬州大学畜禽传染病农业部重点开放实验室分离鉴定。
用ＤＭＥＭ细胞维持液按１：２倍比稀释的各组淋巴细胞培养上清，同时设按１：１０倍比稀释的鸡ｒ－干扰 素阳性组和不用药的阴性对照组，于３７℃作用２ ｈ；再无菌甩去培养液，用ＰＢＳ洗涤两次，每孔接 种１００ＴＣＩＤｓｏ的ＶＳＶ－ＣＥＦ细胞悬液，继续培养至阴性对照组ｌＯＯ％出现病变时，观察各孔细胞病变，
以能抑制５０％细胞病变的淋巴细胞培养上清的最高稀释倍数确定为上清中所含干扰素的效价。 ２结果 ２．１淋巴细胞转化鸡外周血液淋巴细胞，经７２ｈ诱导培养、推片、染色、光镜观察，结果见表１。
为Ｓｉｇｍａ公司产品。其它常规试剂均为国产分析纯级产品。
１．２Ｃ扣ＧＤＮＡ制各
常规方法培养禽大肠杆菌（０３７株），按文献（６】方法提取菌体ＤＮＡ，经一２０℃和３７＂（２反复冻融５ 次后，于使用前煮沸１０ｒａｉｎ，然后冰浴中冷却３０ｒａｉｎ，制成２ｍｇ／ｍＬ溶液备用。
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组别一
表１；淋巴细胞转化率
旦！堕！卫！竺塑业生婴堕堕！！堡望！！！坐
Ｍｅａｎ 转化率％
Ｓｔｄ．Ｅｒｒｏｒ
表２：淋巴细胞ＯＤ５７０值统计结果
旦！！丝堡Ｑ望塑！墅竺堕堡婴！婴塑
组别
Ｎ