液相色谱-user
液相色谱操作范文
液相色谱操作范文液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，主要用于化学分析、药物分析、食品分析和环境监测等领域。
液相色谱的基本原理是将待分离物质溶解在流动相中，通过与固定相的相互作用来实现分离。
一、液相色谱的基本原理液相色谱的分离原理是利用固定相与流动相中成分的相互作用来实现的。
固定相可以是多种材料，如吸附剂、离子交换剂和分子筛等。
流动相可以是有机溶剂、水或它们的混合物。
待分离物质在流动相中溶解后，通过与固定相的相互作用来实现分离，不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离。
液相色谱通常包含以下几个基本部分：进样系统、柱子、检测器和数据分析系统。
进样系统负责将待分离物质注入到流动相中；柱子是液相色谱的核心部件，其中填充有固定相，用于分离待分离物质；检测器可以通过测量吸收度、荧光强度或电导率等来监测待分离物质的浓度；数据分析系统用于处理和分析检测到的信号，得到定量或定性结果。
二、液相色谱的操作步骤1.准备工作：首先检查液相色谱仪是否正常工作，确认流动相和固定相的可用性和质量。
根据实验要求准备样品，并将其溶解在适当的溶剂中。
2.预洗柱子：将柱子连接到液相色谱仪上，用一些纯溶剂通过柱子预洗，以去除柱子中的杂质和残留物。
3.进样：将待分离的样品通过自动或手动进样系统注入流动相中，控制样品的进样量和进样速度。
4.运行液相色谱：首先进行梯度洗脱或等温洗脱，根据实验要求调整流动相的组成和流速。
在色谱柱柱头位置，质谱柱附近安装检测器，以实时监测待分离物质的浓度。
5.数据分析：通过检测器获得的信号，使用数据分析系统处理和分析数据，得到待分离物质的浓度和组成。
6.清洗柱子：运行完液相色谱之后，将柱子从系统中取下，并用适当的溶剂清洗柱子，以去除附着在柱子上的待分离物质和杂质。
三、液相色谱的常见应用1.化学分析：液相色谱在药物、农药、生物学和材料科学等领域中被广泛应用，可以分析和鉴定待分离物质的成分和结构。
检验科 液相色谱
液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种常用的分离技术和分析方法，用于分离和测定混合物中的化合物。
它是基于溶液中分离物质的相互作用力，通过样品溶液在固定相上的流动来实现分离的。
液相色谱是在液相中进行的，相对于气相色谱（Gas Chromatography，简称GC）来说，液相色谱的固定相是固定在柱子中的，而样品溶液则通过固定相之间的间隙进行流动。
液相色谱的分离机制主要有吸附色谱、反相色谱、离子交换色谱、凝胶色谱等。
不同的分离机制适用于不同类型的化合物，并可以选择不同类型的固定相和溶剂来达到理想的分离效果。
在液相色谱中，样品溶液经过固定相进行分离后，可以通过检测器进行检测和定量分析。
常见的检测器有紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等，可以根据化合物的性质和需求选择相应的检测器。
液相色谱广泛应用于各个领域，例如药物分析、环境监测、食品检测等。
它可以分离和测定复杂样品中的多个成分，提供准确和可靠的分析结果。
液相色谱技术在检验科中常用于药物分析、毒物分析以及一些重金属、有机污染物的分析等。
通过液相色谱的分离和测定，可以快速、准确地得到样品中目标物质的含量和结构信息，提供科学依据和参考价值。
Waters高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱系统操作规程一. 准备1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制）。
2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。
二. 操作步骤1.更换流动相。
2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。
若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。
3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。
单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。
4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。
点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。
单击“Save Method”按钮保存设置方法。
5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。
单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。
打开泵的参考阀，点击“Next”。
Purge结束后关闭参考阀。
6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。
7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。
液相色谱知识总结
• :电源电压为220±10V，频率为
50±0.5Hz·最佳配置稳压器(2kw以上)
• 最佳 试验室有专线，同一线路上不可有大
旳用电机械干扰
• 电源为三相电源，接地必须良好(此条非常
主要)，泵，检测器，工作站，电
• 脑接在同一种合格旳接线板上 (温分每台
仪器带一专用接线板)
示差折光检测器
• 示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率
来进行组分检测旳。但凡具有与流动相折射率不 同旳组分，均能够使用这种 检测器。假如流动相 选择合适，能够检测全部旳样品组分。示差折光 检测器旳优点是通用性强，操作简便；缺陷是敏 捷度低，最小检出限约为10-7g/ml，不能做痕量 分析。另外，因为洗脱液构成旳变化会使折射率 变化很大，所以，这种检测器也不合用于梯度洗 脱。
常见问题及处理
• 1 压力 • 2 基线不稳 • 3 谱图重现性不好 • 4 凝胶负峰旳产生
液相色谱知识总结
液相色谱旳工作原理
• 高效液相色谱（high performance liquid
chromatography ）是色谱法旳一种分 支， 分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中旳各组分经过固定相时，因为与 固定相(stationary phase)发生作用（吸附、 分配、离子吸引、排阻、亲和）旳大小、 强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从 而先后从固定相中流出。
荧光检测器
• 在其他条件一定旳情况下，荧光强度与物质旳浓度成正比。
许多有机化合物具有天然荧光活性，另外，有些化合物能 够利用柱后反应法或柱前反应法加入荧光化试剂，使其转 化为具有荧光活性旳衍生物。在紫外光激发下，荧光活性 物质产生荧光，由光电倍增管转变为电信号。荧光检测器 是一种选择性检测器，它适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、 维生素、蛋白质等荧光物质旳测定。这种检测器敏捷度非 常高，检出限达10-12—10-13g/ml，比紫外检测器高2—3 个数量级，适合于痕量分析。而且能够用于梯度洗脱。其 缺陷是合用范围有一定旳不足。
液相色谱教程-液相色谱基础知识2
YOU
拖尾峰(Tailing Peak):后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰(Leading Peak):前沿较后沿平缓的不对称峰
鬼峰(Ghost Peak):并非由试样所产生的峰,亦称假峰
色谱图名词术语
基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号 – 基线飘移(Baseline Drift):基线随时间定向的缓慢变化 – 基线噪声(N)(Baseline Noise):由各种因素所引起的基线波动 – 谱带扩展(Band Broadening):由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽 度增加的现象
-25%
液相色谱的应用
目的:得到数据-定性及定量分析
– 灵敏度的要求 – 样品的复杂性 – 样品量的要求 – 精度及准确度的要求 – 容易使用
LOGO | COMPANY
液相色谱的应用
制备型液相色谱 目的:得到纯品-分离及纯化 • – 化合物的稳定性 • – 样品的复杂性 • – 制备量的要求 • – 纯度的要求，及纯度的鉴定 • – 方法的安全性
半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通 过峰高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两 侧相交两点之间的距离
色谱图名词术语
– 峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积,又称响应值
标准偏差(σ)(Standard Error):0.607倍峰高对应峰宽的一 半
LOGO | COMPANY
色谱图名词术语
死时间(t0)(Dead time):不被固定相滞留 的组分,从进样到出现峰最大值所需的时 间 – 保留时间(tR)(Retention time):组分从 进样到出现峰最大值所需的时间
液相色谱法如何用于药物分析 液相色谱操作规程
液相色谱法如何用于药物分析液相色谱操作规程液相色谱法（High Performance Liquid ChromatographyHPLC）又称“高压液相色谱”“高速液相色谱”“高分别度液相色谱”“近代柱色谱”等。
液相色谱是色谱法的一个紧要分支，以液体为流动相，接受高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分别后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
如今，该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中紧要的分别分析技术应用。
尤其是在药物分析领域，有着广泛的应用。
液相色谱在药物分析中的应用，紧要考虑试样的预处理和分析柱、检测器的选择。
在试样的预处理上，日前兴起的固相（微）萃取使得很多含量低的成分得到精制提纯，从而适于液相色谱的测定。
中药中有些紫外吸取，或无特征紫外吸取的成分，直接用液相色谱测定，其灵敏度和分别度都不尽人意，利用柱前或柱后衍生化法可使这些成分较地测定出来。
对于极性大、脂溶性差物质，在YWGCl8柱上不易保留，用十二烷基磺酸钠作为离子对试剂，降低其极性，延长柱上的保留时间，取得较好的分别较果。
将液相色谱和质谱这两个强有力的分析技术在线连接在一起，经过三十年的进展已成为一项较为成熟的分析手段，但是它从形成伊始就存在着问题：从液相色谱流进质谱时，流动相的变化、溶剂的构成、高温高压离子化的问题制约着这种联用技术进展。
大气压离子化接口具有去除溶剂和离子化的双重功效，它的引入使得该技术在各个领域得到了广泛的应用。
电喷雾离子源是一种软电离技术，一般只生成（M H）和（M—H）—两种分子离子峰，选择性监测（mz）190的负分子离子峰，具有较高的灵敏度、精准度、专一性，充分了低浓度药物讨论的需求。
三维液相色谱法可以同步测定葛根素和阿魏酸两种指标。
通过试验证明：假如选择合适的柱温等色谱条件，乙醇作为反相液相色谱流动相，分析中药及中成药中有效成分，既安全又精准。
液相色谱流动相参数
液相色谱流动相参数液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，广泛应用于化学、药学、生物学、食品科学等领域。
液相色谱主要通过样品溶液在固定填料上与流动相之间的相互作用，实现分离和分析的目的。
而流动相在液相色谱中起到非常重要的作用，它可以有效地影响液相色谱的分离效果。
本文将详细介绍液相色谱流动相的参数及其影响。
1.选择溶剂：流动相中的溶剂选择是液相色谱中非常重要的一个参数。
溶剂应具有较好的溶解性、低粘度、不易挥发、不产生尘埃，并且对样品具有适当的溶解度。
此外，还需考虑对填料和色谱柱的稳定性、运行效果以及对探测器的影响。
根据溶剂极性，可以将溶剂分为极性溶剂（如水、甲醇）和非极性溶剂（如乙酸乙酯、正己烷）。
在实际应用中，常常需要将不同极性的溶剂按一定比例混合，以得到适合的流动相。
2.流动相配比：在液相色谱实验中，不同样品可能需要不同的流动相配比。
流动相配比指的是极性溶剂与非极性溶剂的比例。
通过改变流动相配比，可以调整流动相的极性，从而影响样品的保留时间和分离效果。
通常情况下，流动相配比越偏向非极性溶剂，样品的保留时间越短，分离效果越差；而流动相配比越偏向极性溶剂，样品的保留时间越长，分离效果越好。
3.pH值调控：流动相中的pH值也是一个重要的参数，它可以影响样品的保留时间和分离效果。
pH值的改变会影响样品的电离状态和溶解度，从而影响样品与填料之间的相互作用。
在液相色谱实验中，通过调节流动相的pH值，可以使得一些酸性或碱性的化合物保持在不同的电离状态，实现它们的分离和分析。
4.缓冲剂的使用：为了稳定流动相的pH值，在液相色谱实验中通常需要添加缓冲剂。
缓冲剂能够在一定范围内稳定流动相的pH值，保持分离效果的稳定性。
常用的缓冲剂包括醋酸盐缓冲液、磷酸缓冲液等。
在选择缓冲剂时，需要考虑其对流动相稳定性、填料和色谱柱的影响。
5.流速控制：液相色谱实验中，流速是一个重要的参数，它会影响样品的保留时间和分离效果。
液相色谱操作规程
液相色谱操作规程液相色谱是一种常用的分析与检测方法，广泛应用于生物、医药、环境、食品等领域。
为了确保操作的准确性和结果的可靠性，我们应该遵循一定的操作规程。
下面是关于液相色谱操作规程的详细说明。
一、实验前的准备工作1.根据实验需要，准备好所需的试剂、标准品和色谱柱等实验器材。
2.检查仪器设备是否正常运行，并进行必要的校准和调试。
3.检查色谱柱状态，确保柱头无损，无堵塞，检查流路是否通畅。
二、样品的准备1.根据实验目的和方法要求，准备好待测样品。
样品可以是复杂的混合物，也可以是单一的化合物。
2.根据样品特性和目的，选择合适的提取、净化和浓缩方法，将样品准备好。
三、仪器的准备1.打开仪器电源，并设置合适的工作参数，如流速、温度等。
2.根据实验方法要求，选择合适的检测波长和检测器灵敏度等参数。
3.将色谱柱连接好，确保连接部分无漏气现象。
四、样品的进样1.根据实验要求，选择合适的进样方式，如自动进样器、手动进样等。
2.将待测样品注入到进样器中，并确保进样量准确。
3.进行进样前的冲洗和平衡处理，确保样品能够均匀地进入柱床。
五、仪器的运行1.启动仪器，并设置好合适的流速、梯度等参数。
2.开始实验运行，并记录相关的运行条件和时间等数据。
六、结果的处理1.实时观察和记录示波器或检测器的输出信号，并按照实验方法进行相关的数据处理和计算。
2.根据需要和目的，可以进行色谱峰的定性和定量分析。
七、实验后的处理1.关闭仪器设备，进行必要的清洗和维护工作。
2.处理和储存实验数据，确保实验结果可靠和完整。
八、实验安全注意事项1.操作过程中要注意个人安全和实验室安全，遵守相关的防护规定。
2.注意化学品的存放和处置，防止意外事故的发生。
3.操作过程中要保持仪器设备的整洁和操作区域的干净，及时清除实验废物。
液相色谱操作规程
液相色谱操作规程一、引言液相色谱（Liquid Chromatography）是一种广泛应用的分离和分析技术。
本文旨在介绍液相色谱的操作规程，包括仪器准备、样品处理、色谱条件设置以及数据分析等方面。
二、仪器准备在进行液相色谱实验之前，需要对仪器进行准备和检查。
首先，确认色谱柱状态和可用性。
检查色谱柱的状态，如是否有裂缝、堵塞或损坏。
接下来，准备并确认流动相溶液的浓度和pH值，并校准流速控制器。
最后，确认检测器和记录仪的正常工作状态。
三、样品处理在样品处理前，需要根据需要选择适当的样品前处理方法，如稀释、提取或净化。
确保样品处理步骤不会影响分析结果。
此外，还需检查样品的浓度、pH 值、溶剂性质和溶解度等因素，并选择合适的内标物。
四、色谱条件设置1. 流动相选择：根据分析物的特性选择合适的流动相。
常用的流动相包括纯水、有机溶剂或它们的混合物。
2. 色谱柱选择：根据分析物的极性和分离要求选择合适的色谱柱。
常见的色谱柱包括反相色谱柱、离子交换色谱柱、尺寸排阻色谱柱等。
3. 柱温选择：根据需要选择合适的柱温。
柱温的改变可以改善分离效果和峰形。
4. 流速控制：根据柱的尺寸和类型，选择适当的流速控制。
一般情况下，流速应控制在合适的范围内，以获得较好的分离效果。
五、样品进样在样品进样前，需尽可能减少或消除进样时的空气泡对结果的影响。
确保样品进入进样器之前，样品的溶液均匀混合并排除气泡。
另外，注意根据样品特性设置适当的进样量，并保证进样操作的准确性。
六、数据分析待分离完成后，根据所使用的检测器记录色谱峰的面积或高度，并进行相对峰面积或高度的计算。
在进行数据分析时，注意排除干扰和背景噪声，并根据需要进行峰的识别和定性。
七、结果解释和汇报根据数据分析的结果，进行结果的解释和整理。
在解释结果时，考虑样品的浓度、相对保留时间、峰面积、高度等因素。
同时，遵循实验要求和规范，撰写实验报告或形成结果汇报。
八、实验操作注意事项1. 安全注意事项：操作过程中需要注意安全规范，如佩戴手套和安全眼镜，避免化学品直接接触皮肤或眼睛。
液相色谱液质简易操作规程
液相色谱液质简易操作规程一、实验目的液相色谱是一种广泛应用于化学分析领域的分离和检测技术，本实验旨在通过液相色谱液质的简易操作规程，熟悉和掌握液相色谱仪的基本操作方法，以及液相色谱分析的操作流程和技巧。
二、实验仪器和试剂1.实验仪器：液相色谱仪、注射器、样品进样器、柱温箱、检测器等。
2.实验试剂：样品溶液、色谱级溶剂、标准品溶液等。
三、实验步骤1.准备工作（1）检查液相色谱仪的电源、气源以及其他连接装置，确保正常工作。
（2）检查注射器、样品进样器、柱温箱等装置是否安装正确，是否连通。
（3）准备好实验所需的试剂和标准品溶液，根据需求调配好溶液浓度和pH值。
2.调试液相色谱仪（1）打开液相色谱仪电源，启动液相色谱仪，等待系统初始化结束。
（2）调试检测器灵敏度和零点，根据所选择的检测器类型和检测波长进行设置。
（3）设置进样器操作参数，包括进样量、进样速度等，根据需要进行调整。
（4）根据样品特性，选择合适的柱和流动相，设置柱温箱的温度。
3.样品进样（1）将样品溶液加入注射器或样品进样器中，注意避免气泡的产生。
（2）调节进样器的操作参数，如进样量、进样速度等。
（3）将进样器连接到液相色谱仪的样品进口处。
4.液相色谱分析（1）启动液相色谱仪，开始分析。
（2）设置流动相的流速和梯度条件，根据柱型和样品特性进行设置。
（3）记录实验过程中的所需数据，如进样时间、流程时间、流速等。
（4）观察检测器信号的变化，记录检测结果。
5.数据处理（1）根据实验需求，选择合适的数据处理方法，如峰面积计算、峰高计算等。
（2）对实验数据进行统计分析，绘制实验结果的曲线或图表。
（3）比对样品的检测结果和标准品的检测结果，判断样品中目标物质的含量或浓度。
四、实验注意事项1.操作前应仔细阅读液相色谱仪的操作手册，并按照规程操作。
2.注意检查液相色谱仪的连接装置是否牢固，避免发生泄漏或松动。
3.在加样时，应注意避免产生气泡，避免对实验结果的影响。
液相色谱操作规程
液相色谱操作规程一.开机按以下次序打开色谱仪各部分电源。
泵→检测器→计算机主机→显示器→打印机二. 打开色谱工作站软件用鼠标双击“色谱工作站”图标，然后输入密码“SAGE”，选OK。
然后选“Alltech-426”图标。
三．设定色谱分析条件1. 设定色谱泵流量按箭头输入所需的流速，按RUN/STOP键开始运行。
2. 设定检测器条件检测器自检通过后，调整到检测所需波长数。
按ZREO键回零四. 准备分析1. 配置流动相，按体积比配置所需的流动相。
混合均匀，过滤、在超声波清洗器中超声20分钟。
2.将过滤头放入流动相中，打开泵上的旁通阀，按PURG键，冲洗并用注射器抽取一定量的流动相，直到塑料管中无气泡为止。
再按一下则停止。
3.按“RUN/STOP”键，开泵。
五.进样分析1.在计算机上，选择蓝色的“RUN/SINGLE”图标，在数据文件名的左侧，将chrom\后的文件名改为你设定的名称，如SAM01.001，然后选择OK。
将进样阀扳到LOAD位置，用微量注射器抽取所需量微升的样品，注入到进样阀中，按检测器的调零键“ZERO”，然后将进样阀扳到INJECT位置，敲键盘上的空格键这时，色谱系统开始工作。
2.色谱图采集完毕，系统自动停止计时。
此时选择“Analyze”图标，对谱图进行计算，然后选择“Reports”图标，选择“面积％”，即可在屏幕上观察分析结果。
如需将分析结果打印出来，选择打印机图标，选择“打印报告P→选择“定制C”，打印机即开始打印分析结果。
3.分析下一个样品，重复1步和2步。
每个样品之间间隔5分钟左右。
六.关机关机前，用流动相冲洗色谱柱20~30分钟，如色谱柱长期不用，再用纯乙腈冲洗20~30分钟，然后，先关闭计算机软件，按以下次序切断各部分电源：计算机主机→显示器→泵→检测器注意事项：1. 计算机一定要先退出操作软件后，才能切断电源。
2. 色谱泵流量一般情况下不能超过1.5ml/min。
液相色谱工作原理
液相色谱工作原理
液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种基于样品在液相中在固定相上进行分离的色谱分析方法。
其工作原理基于样品在流动的液相中与固定相发生相互作用，通过不同成分在固定相上的吸附和解吸过程的差异来实现成分的分离。
在液相色谱中，固定相通常是固定在柱子中的吸附剂，它可以是多种类型的物质，如硅胶、羟基磷灰石和氨基磺酸树脂等。
液相则是通过泵将流动相（溶剂）不断地通过柱子送入，以保持样品在柱子中的流动。
在样品分析中，先将待测样品中的分离物溶于溶剂，称为流动相。
流动相通过柱子时，样品中的不同成分会因为其与固定相的相互作用而在固定相上发生吸附和解吸。
吸附作用使得不同成分在固定相上停留的时间不同，从而实现分离。
分离程度的好坏取决于液相和固定相的选择，以及流动相的性质。
液相色谱的选择性可以通过改变固定相的选择和液相的组成来调节。
液相色谱有多种模式，如正相液相色谱（Normal Phase Chromatography）和反相液相色谱（Reversed Phase Chromatography）。
在正相液相色谱中，固定相是亲水性的，而流动相是非极性溶剂，例如正己烷。
而在反相液相色谱中，固定相是疏水性的，而流动相是极性溶剂，例如水和有机溶剂的混合物。
液相色谱在化学、药物分析、环境监测等领域得到了广泛应用。
其工作原理的理论基础是物质在固定相和流动相之间相互分配的平衡过程，根据不同成分在平衡时的分配系数的差异，实现成分的分离和定量分析。
液相色谱法名词解释-概述说明以及解释
液相色谱法名词解释-概述说明以及解释1.引言1.1 概述液相色谱法是一种分离和分析化学物质的重要技术手段，广泛应用于各种领域，包括药物研发、食品安全、环境监测等。
它通过在固定相（填料）上溶解待测物质，利用流动的液相作为分离介质，在柱内或板内进行化学分离，最终通过检测器检测不同物质的保留时间或光谱特性，实现对化合物的分离和定量分析。
液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、高选择性和高效率的优点，能够分析复杂的混合物，并且通常能够达到微量甚至痕量水平的检测。
因此，液相色谱法已经成为现代化学分析中不可或缺的一部分。
本文将对液相色谱法的概述、原理及应用进行详细介绍，旨在帮助读者了解液相色谱法的基本概念和特点，进一步探讨其在科学研究和实际应用中的重要性和价值。
1.2 文章结构本文将分为三个主要部分：引言、正文和结论。
在引言部分，将对液相色谱法进行概述，介绍文章的结构和目的。
正文部分将包括液相色谱法的概述、原理和应用。
我们将详细解释液相色谱法是什么，它是如何工作的，以及在实际应用中的具体情况。
结论部分将对液相色谱法进行总结，强调其优势和未来发展方向。
我们将讨论液相色谱法在当今科学领域的重要性，并展望其在未来的应用前景。
1.3 目的本文旨在深入探讨液相色谱法，并对其进行全面解释和解析。
通过对液相色谱法的概述、原理和应用进行详细介绍，旨在帮助读者更好地了解和掌握这一重要的分析技术。
我们将介绍液相色谱法在不同领域的广泛应用，包括生物医药、环境监测、食品安全等方面的案例分析，以展示其在科学研究和工程实践中的重要性和实用性。
同时，我们还将总结液相色谱法的优势，探讨其未来发展的趋势和前景，为读者提供关于这一分析技术的全面了解和展望。
通过本文的阐述，希望读者可以加深对液相色谱法的理解，并在相关领域的研究和实践中更好地运用和应用液相色谱法。
2.正文2.1 液相色谱法概述液相色谱法是一种利用液相作为固定相，通过溶质在流动液相和固定相之间的分配作用实现样品分离的方法。
液相色谱操作规程
液相色谱操作规程《液相色谱操作规程》一、前言液相色谱是一种常用的色谱分析方法，主要用于分离和检测化合物。
正确操作液相色谱仪器对于保证分析结果的准确性和可靠性至关重要。
本规程旨在规范液相色谱操作流程，保证实验的顺利进行。
二、实验前准备1. 检查液相色谱仪器：确保色谱柱、进样器、检测器等器件正常工作。
2. 准备样品溶液：样品溶液应该经过过滤并且符合实验要求。
3. 校准仪器：校准流速、波长、进样量等参数。
三、操作步骤1. 开机：打开液相色谱仪器，等待系统初始化完成。
2. 设置条件：设置流速、波长、进样量等参数。
3. 平衡系统：启动溶剂梯度，平衡色谱柱，直到基线稳定。
4. 进样：用微量注射器将样品溶液导入进样器，确保不产生气泡。
5. 运行色谱仪：开始运行色谱仪，记录检测器输出的数据。
6. 数据处理：对检测到的峰进行积分，分析峰面积等数据。
四、实验结束1. 停止色谱仪器：停止色谱运行，关闭液相色谱仪器。
2. 清洗设备：用适当的方法清洗色谱柱、进样器等设备。
3. 记录数据：将数据存档并进行数据处理。
4. 恢复试剂：将未使用完的试剂储存妥善，清理操作台面。
五、注意事项1. 液相色谱仪器使用过程中，需遵守仪器操作规程，避免人为损坏。
2. 使用化学试剂时需注意安全，避免触及皮肤和呼吸系统。
3. 在操作过程中出现异常情况需要及时停止实验，并查找原因排除故障。
六、结语本规程详细介绍了液相色谱仪器的操作步骤和注意事项，希望能够为实验人员提供参考。
正确操作液相色谱仪器是保证实验结果准确、可靠的重要条件之一。
希期每位实验人员严格按照规程进行操作，正确使用液相色谱仪器，确保实验结果的准确性和可靠性。
液相色谱;计量置换;保留模型;表征参数
液相色谱;计量置换;保留模型;表征参数1.引言1.1 概述液相色谱（Liquid chromatography, LC）是一种广泛应用于化学分析领域的分离技术，它通过采用液体作为移动相，物质在固定相上发生相互作用而进行分离。
液相色谱具有高效率、高灵敏度、高选择性和广泛适用性等优点，逐渐成为分离和分析领域的重要手段。
计量置换（Quantitative displacement）是液相色谱中一种常用的分析方法，它通过将待分离的样品与内标物质一起注入色谱系统，并利用内标物质在色谱过程中产生的峰高或峰面积与样品中目标物质的浓度成正比的关系，实现对目标物质的定量分析。
计量置换法不仅能够提高目标物质的检测灵敏度，还可以减小来自样品矩阵的影响，提高分析结果的准确性。
保留模型（Retention model）是液相色谱中描述物质在固定相上相互作用的理论模型。
通过建立合适的保留模型，可以预测目标物质在色谱柱上的保留时间，从而对样品中的目标物质进行分离和分析。
常见的保留模型包括经典的理论模型（如分配模型、球形化学模型）以及更为复杂的手性识别模型、扩散模型等。
通过选择适合的保留模型，可以提高分离效果，优化分析条件。
在本文中，我们将对液相色谱、计量置换和保留模型进行综合分析和探讨。
首先，我们会介绍液相色谱的原理和分类，包括正相色谱和反相色谱等。
接着，我们会详细讨论计量置换的原理和应用，以及内标物质的选择和优化方法。
最后，我们将对保留模型进行深入研究，比较不同模型的优缺点，并探讨其在液相色谱分析中的应用前景。
通过本文的研究和总结，我们旨在提供液相色谱、计量置换和保留模型方面的基础知识和研究进展，为科研工作者和分析化学领域的从业人员提供参考和借鉴。
我们期望能够深入理解液相色谱技术及其相关的分析方法，并为相关领域的研究和应用带来新的突破和发展。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以描述整篇文章的组织结构，包括各个章节的内容概要和主要观点。
液相色谱仪的使用方法
液相色谱仪的使用方法液相色谱仪的使用方法液相色谱（HPLC）是一种高效分离和分析化合物的技术，已广泛应用于生化、药学、环保、食品、化学等领域。
液相色谱仪是进行HPLC分析的主要设备之一，本文将介绍液相色谱仪的使用方法。
一、设备准备1.检查仪器和附件：检查液相色谱仪及其附件是否处于工作状态，消除故障。
2.校准波长：使用标准物质校准检测器波长，确保波长稳定。
3.检查移液器和试剂：检查移液器是否清洁，并将需要的“移液器校正板”放入游动相移液器的吸头中以检验准确性。
检查试剂的质量和储存条件。
二、试剂和溶剂的准备1.制备液流体：制备必需的液相流体可以是水或有机溶剂，通常配制成水性或有机性混合物来达到特定的分离目的。
2.准备样品：根据要求将样品溶于适当的溶剂中，检查溶液的清洁和浓度。
三、进样器使用1.进样器堵塞检查：需要确定样品分子在样品锥内的稀释程度，并检查进样器是否堵塞。
2.冲洗进样器：冲洗进样器的吸头以清除样品遗留物，并确保样品残留在吸头上。
如果样品已经在进样器中持续存在，通常需要清洗流路。
3.设置进样器参数：设置进样器参数，如进样器容量、进样方式、稀释系数等。
确保进样器在自动、手动和双針模式下正常工作。
四、色谱柱使用1.色谱柱类型：根据分离模式和待分离化合物的性质选择合适的色谱柱类型。
2.柱温控制：柱温控制可在恒温条件下产生更为可靠的结果。
正确控制柱温，有助于降低HPLC结果的变异性。
3.设置流速：每个色谱柱都有推荐的流速，确保使用适当的流速以获得最佳分离效果。
五、检测器使用1.检测器的选择：不同的检测器适用于不同的化合物和方法。
在选择检测器时应注意检测方法的灵敏度、特异性和选择性。
2.波长选择：根据样品化合物的吸收特性选择合适的波长。
应用标准物质，校正检测器波长，确保波长测量的精度。
六、质量控制1.系统稳定性：根据不同的检测方法，对检测系统和流程进行质量控制和验证。
在整个测试运行之前应进行系统稳定性测试。
液相色谱操作规程
液相色谱操作规程液相色谱是一种常见的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、环保、制药等领域。
正确的操作规程能够有效保证实验结果的准确性和可靠性。
下面是关于液相色谱操作规程的详细说明，以确保实验的成功进行。
一、实验前准备1.验证仪器设备：确保液相色谱仪和附件的正常工作，并及时进行维护和校准。
2.准备样品：准备待测样品溶液，并根据实验要求选择适当的提取和预处理方法。
3.准备试剂：按照实验要求准备色谱柱填料、移液器、标准品溶液、溶剂、缓冲液等。
4.清洁工作台和仪器：清洁工作台、色谱柱、移液器、皮囊等，确保干净的工作环境。
二、仪器准备1.打开液相色谱仪电源，打开冷却系统并设置温度。
2.打开液相色谱软件，进行仪器联机和参数设置。
3.检查液相色谱仪气路：确认气源和浮动比色液的连接，确保气源阀门和浮动比色液阀门处于正确的位置。
三、试剂调配1.缓冲液的配置：按照实验方法准确称取所需的缓冲液配方，使用去离子水溶解调节至所需pH值。
2.流动相的配置：根据实验要求配制流动相，避免使用气泡和空气进入流动相中。
四、样品处理1.样品预处理：根据实验要求进行样品的提取、浓缩、纯化等处理，确保样品的纯度和浓度。
2.样品溶解：将经过预处理的样品溶解于适当的溶剂中并进行充分混匀。
五、柱装填和调整1.选用适当的色谱柱和填料：根据样品性质和分析目的选择合适的色谱柱和填料。
2.柱装填：使用专用仪器将色谱填料装填至色谱柱中，并根据填料的特性进行柱床调整。
3.柱对焦：打开柱对焦仪器，按照仪器操作方法进行调整，使柱床保持水平并达到理想高度。
六、系统稳定和优化1.液相色谱仪稳定：打开液相色谱软件，进行系统检测和稳定化处理，确保仪器系统稳定。
2.流速调节：调节液相色谱仪的流速，并根据实验要求进行优化，以提高分离效果和分析速度。
3.检测器优化：调节检测器的增益、灵敏度和基线噪音，使信号稳定且峰形对称。
七、样品进样1.样品进样：根据实验要求，将样品进样器插入进样口并设置相应的参数，确保样品定量进入色谱系统。
液相色谱法基本知识
第二节 高效液相色谱仪
合，再输至柱系统。 梯度洗脱旳实质是经过不断地变化流动相旳强度，来调
整混合样品中各组分旳k值，使全部谱带都以最佳平均k值经 过色谱柱。它在液相色谱中所起旳作用相当于气相色谱中旳 程序升温，所不同旳是，在梯度洗脱中溶质k值旳变化是经 过溶质旳极性、pH值和离子强度来实现旳，而不是借变化温 度（温度程序）来到达。
14
第三节 高效液相色谱旳固定相 和流动相
一、固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚 性固体和硬胶两大类。
刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0108~1.0109Pa 旳高压，可制成直径、形状、孔隙度不同旳颗粒。假如在二 氧化硅表面键合多种官能团，可扩大应用范围，它是目前最 广泛使用旳一种固定相。
出物进行连续检测。所以，高效液相色谱具有分析速度快、 分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、 高效或当代液相色谱法。
二、液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相——固定
相和流动相构成。液相色谱旳固定相能够是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子互换树 脂或多孔性凝胶；流动相是多种溶剂。被分离混合物由流动 相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中旳 吸附能力、分配系数、离子互换作用或分子尺寸大小旳差别 进行分离。色谱分离旳实质是样品分子（下列称溶质）与溶
硬胶主要用于离子互换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙 烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5108Pa。固 定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相
15
第三节 高效液相色谱旳固定相 和流动相
两类。 1. 表面多孔型固定相
它旳基体是实心玻璃球，在玻璃球外面覆盖一层多孔活 性材料，如硅胶、氧化硅、离子互换剂、分子筛、聚酰胺等。 此类固定相旳多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅 速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱轻易，梯度淋洗 时能迅速到达平衡，较适合做常规分析。因为多孔层厚度薄， 最大允许量受到限制。 2. 全多孔型固定相
液相色谱仪
液相色谱仪概述液相色谱仪是一种高效地分离和定量各种复杂的混合物的分析仪器。
液相色谱法是一种利用流动液体相和固定相之间相互作用的分离技术，且对于分离的分子量范围比较广泛，从低至数十的小分子到高达上百万的蛋白质大分子均可。
液相色谱法广泛应用于化学、环保、制药等领域，在工业生产和科学研究中都具有重要地位。
组成及原理液相色谱仪主要由高压恒流泵、进样器、柱箱、检测器及计算机控制系统几部分组成。
液相色谱法在样品制备后，会通过一个进样器将进样进入流动的溶液中，经泵送送入柱内。
柱内通常填充着化学性质稳定、粒度均匀、孔径均匀的固定相床，样品在固定相床中与逆流的流动相作用下进行分离和传递，最终被带出柱底。
在柱底下方接有检测器，如紫外光谱检测器等，采集到的分离物质强度按一定的电子信号转化为数码信号输出后，可由计算机进行分析处理。
液相色谱仪通过定量分析出每种组成部分，从而达到分离、检定和分析每种组分的目的。
应用制药业对于药物的检测和纯化提取需要使用液相色谱法。
因为液相色谱法可以帮助剔除可能存在的杂质和不必要的成分，保证药片符合药品要求，更直观和科学地提高治愈疾病的效果，为药企带来更多的资金收益。
食品安全液相色谱法在食品测试上也有着广泛的应用，为国人食品安全作出了巨大的贡献。
可以快速、高效地检测食品中的残留农药、添加剂等化学品，大部分食品厂都不会在进货后进行所有的检测，而是在出售前采取定点检测，使用液相色谱仪检测证实这些食品是否符合食品安全事宜。
环保液相色谱在环境监测中也有着重要的应用。
如在监测水环境时，可以使用液相色谱法检测水质中各种污染物，帮助人们保障水资源的质量及保护环境，为提高人民生活水平作出了努力。
总结液相色谱法作为高效、准确的分离技术，广泛应用于不同的领域。
从食品安全到环保，从制药到科研，液相色谱法都有着重要的地位。
液相色谱仪具有分析速度快、分离效果好、化合物检出灵敏度高、保真度高等优点。
相信在未来的发展中，液相色谱依然将扮演着重要的角色。
液相色谱的使用流程
液相色谱的使用流程1. 前言液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种广泛应用于分离和分析物质的技术。
本文将介绍液相色谱的使用流程，包括实验准备、仪器设置、样品制备和结果分析等。
2. 实验准备在进行液相色谱实验之前，需要准备以下材料和设备： - 液相色谱仪器：包括色谱柱、色谱仪和检测器等。
- 移液器和容量瓶：用于准确制备样品和溶液。
- 样品和溶剂：需进行分析的样品和相应的溶剂。
- 色谱柱：根据分析的目标选择合适的色谱柱。
- 标准品：用于建立标准曲线以及校准仪器。
3. 仪器设置在进行液相色谱实验之前，需要对仪器进行设置，以确保实验的准确性和可靠性。
具体设置步骤如下： 1. 打开液相色谱仪器的电源，并待仪器自检完毕后进行下一步操作。
2. 设置流动相：根据分析目标和样品特性，选择合适的流动相，并使用移液器将流动相加入液相柱中。
3. 设置检测器：根据所需信号类型（如紫外、荧光或电化学检测），选择相应的检测器，并进行相关的参数设置。
4. 样品制备样品制备是液相色谱分析的重要步骤之一，它直接影响到分析结果的准确性和灵敏度。
以下是常用的样品制备步骤： 1. 样品预处理：根据样品的性质，进行必要的前处理步骤，如浓缩、稀释、萃取等。
2. 样品溶解：将样品加入适当的溶剂中，并进行充分的溶解，以确保样品能够顺利进入色谱柱进行分离和分析。
3. 样品过滤：使用0.22微米的微孔过滤膜过滤样品，以去除其中的杂质和颗粒物。
5. 色谱条件设置在进行液相色谱实验之前，需要对色谱条件进行设置。
具体步骤如下： 1. 选择合适的色谱柱：根据分析的目标和样品特性，选择合适的色谱柱材质和尺寸。
2.设置流速：根据分析目标和样品特性，选择适当的流速，以保证分析的准确性和分离效果。
3. 设置检测波长：对于紫外检测器，选择合适的波长进行检测，以提高检测灵敏度和选择性。
4. 设置进样体积：根据样品特性和分析的目的，选择合适的进样体积，以确保分析结果的准确性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
岛津液相色谱培训班---基础知识岛津国际贸易（上海）有限公司分析中心第一部分色谱基础知识色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素混合物色谱分离组分0.00.51.01.52.02.53.0min0100200300400500mV M e t h y l P a r a b e nE t h y l P a r a b e nP r o p y l P a r a b e nB u t y l P a r a b e n•色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术•流动相：携带样品流过整个系统的流体•固定相：静止不动的一相，色谱柱色谱是一种分离技术.色谱的主要目的是对混合物中的目标物分离和定量高效液相色谱High Performance Liquid Chromatography (HPLC) 气相色谱Gas Chromatography (GC)薄层色谱Thin-Layer Chromatography (TLC)毛细管电泳Capillary Electrophoresis(CE)色谱优点•同时分析•分离性能好•灵敏度高(ppm-ppb)•进样量小(1-100uL)HPLC vs GC液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法)适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析)流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法)适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析)流动相只起运载样品分子的能力HPLC分类正相模式(NP-LC)反相模式(RP-LC)反相离子对色谱(IPC)离子交换色谱(IEC)尺寸排阻(GPC / GFC)反相模式(RP)•C18 (ODS)•C8 (octyl)•C4 (butyl)•苯基•TMS •氰基-Si-C18H37 Si非极性相互作用力是什么?OH OHC18 (ODS) 强弱疏水性Si疏水性•如果样品有–CH3CH2CH2---: 碳链–: 芳香基•如果样品有–-COOH: 羧基–-NH2: 氨基–-OH: 羟基作用力强作用力弱反相模式下流动相的选择优化水相（缓冲液）和有机相的比例非常重要甲醇，乙腈和THF是常用的有机溶剂在有缓冲液的情况下, 缓冲液的浓度和pH值非常重要溶剂极性变化对分离的影响20 % H2O30 % H2O40% / H2O1 :对羟基苯甲酸甲酯2 :对羟基苯甲酸乙酯3 :对羟基苯甲酸丙酯4 :对羟基苯甲酸丁酯有机相: MeOHC18 (ODS)强样品SiC8样品一般Si样品C4弱SiODS C8 TMS分析条件柱: Shim-pack CLC-ODS流动相: MeOH : H2O = 7 :3流速: 1.0 mL/min温度: 40 C进样体积: 10 uL检测器: UV-254 nm峰1. 苯甲酸甲脂2. 苯甲酸乙脂3. n-苯甲酸丙酯4. n-苯甲酸丁酯离子对色谱离子对试剂•阴离子化合物–氢氧化四丁基铵(TBA)–溴化四丁基铵•阳离子化合物–丁烷基磺酸钠(C4)–戊烷基磺酸钠(C5)–己烷基磺酸钠(C6)–庚烷基磺酸钠(C7)–辛烷基磺酸钠(C8)–癸烷基磺酸钠(C10)–十二烷基磺酸钠(SDS)离子对色谱影响因素•离子对试剂的类型•离子对试剂的浓度•流动相的pH正相色谱•硅胶柱:常用•氰基柱: 常用•氨基柱: 分析糖•二醇基柱: 分析蛋白质硅胶Si Si-Si-CH2CH2CH2CN-Si-CH2CH2CH2NH2-Si-CH2CH2CH2OCH (OH)-CH2(OH)化学键合相相互作用力是什么?OHHOSiOHSiOH强弱非常弱氢键氢键力•如果样品有–-COOH: 羧基–-NH2: 氨基–-OH: 羟基氢键力强.•如果样品没有任何官能团，象碳水化合物•如果样品有大的基团, 由于空间障碍氢键力弱.正相模式下流动相的选择•主要试剂–烷烃(戊烷, 己烷, 庚烷, 辛烷)–芳香烃(苯, 甲苯, 二甲苯)–亚甲基氯化物–氯仿–四氯化碳•辅助溶剂–甲基-t-丁基醚(MTBE), 二乙醚, 四氢呋喃(THF), 二氧杂环乙烷, 嘧啶, 乙酸乙酯, 乙腈, 丙酮, 异丙醇, 乙醇, 甲醇为了调整保留时间，可以选择一种主要试剂然后再加入辅助试剂。
没有紫外吸收的溶剂更容易被检测出来。
增加溶剂极性0 % MeOH 2 % MeOH5% / MeOH1 :邻苯二甲酸二辛酯主要试剂: 己烷2 :邻苯二甲酸二丁酯3 :邻苯二甲酸二乙酯4 : 邻苯二甲酸二甲酯反相色谱与正相色谱的对比•反相色谱流动相极性大于固定相极性能溶于水/有机混合物的中性或非离子化合物•正相色谱流动相极性小于固定相极性不溶于水/有机混合液的亲脂样品、异构体混合物和制备HPLC反相色谱与正相色谱的对比•反相–保留时间重复性好–固定相耐用•正相–对立体异构体有很好的分离(Vitamin E等)–保留时间重复性稍差离子交换色谱N +R RR 样品SO3-样品+++++++++++++离子吸引力离子交换色谱应用•生物领域(蛋白质, 农药, 氨基酸分析)•离子分析–阳离子交换剂•强阳离子交换剂(SCX)(R-SO3-)•弱阳离子交换剂(WCX)(R-COO -)–阴离子交换剂•强阴离子交换剂(SAX)(R 4N +)•弱阴离子交换剂(WAX)(DEAE)第二部分柱子基本性能参数表征色谱柱的参数硅胶纯度填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度色谱柱尺寸填料床的长度和内径颗粒形状球型或不规则型粒径平均颗粒直径,通常3-10µm表面积颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/g表示孔径颗粒的孔或腔的平均尺寸,范围80-300Å碳百分率与基体物质相连的键合相的量封尾用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来如何消除拖尾流动相中加入辅助剂三乙胺高氯酸钠(NaClO)4在流动相中加入胺修饰剂和高氯酸钠有助于减少拖尾，因为这些添加物可以对硅羟基产生屏蔽效应.表征色谱柱性能的参数•容量因子•理论塔板数•理论塔板高度•分离度•拖尾因子容量因子, k’t 1 =组分峰的保留时间t 0= 死时间(非保留时间)t 0t 1k’=t 0t 1-t 0理论塔板数, N中国/日本药典:N = 5.54 x ( Rt / W 1/2 )2美国药典:N = 16 x ( Rt / W )2WW 1/2H 1/2HRt Area理论塔板高度, H H=L/NL：色谱柱长N：理论塔板数分离度, Resolution 相邻两峰完全分离其分离度Rs≥1.5.完全分离时的分离度Rs= 1.0Rs= 1.5峰形不是三角形，而是高斯分布拖尾因子，T/2d•T=W0.05第三部分•HPLC硬件基础知识•日常注意点液相色谱简易流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理流动相的选择采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配水的等级•水的等级–纯化水–蒸馏水–去离子水波长(nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率HPLC用水可以通过以下几个方法得到：专门的纯水机或超纯水机:理想的HPLC用水应为18.2MΩ的超纯水，并通过0.22μm的滤膜，除去热源、有机物、无机离子等。
去离子水重蒸；二次或三次重蒸水；不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水。
♦未注入样品时空白梯度的色谱图水中不纯物的出峰水中的不纯物保留在柱中，随之被乙腈洗脱.•有机溶剂的等级–HPLC 级–优级纯–分析纯都经过蒸馏和0.45u 的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒)优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC 级经过0.2u 的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱有机溶剂的等级有机溶剂的等级分析纯级和HPLC 级溶剂的吸光度比较图甲醇乙腈正己烷选择缓冲液的步骤1 .确定最佳分离状态时的流动相pH2 .选择具有与流动相pH相近的pKa的缓冲液（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）12.327.212.16磷酸6.404.763.13柠檬酸 4.87醋酸pK3pK2pK1常用代表性的弱酸的pKa值缓冲液的使用µ使用前必须过滤µ使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用含5%甲醇的水溶液冲洗30min（1ml/min），再用甲醇冲洗30minµ用纯水冲洗泵头清洗管路µ易受到细菌和霉菌的影响不能直接用有机溶剂冲洗缓冲盐溶液-乙腈黏度低在相同流速时有较低的柱压-当和水混合时黏度有变化柱压也相应有变化♦乙腈和甲醇…黏度溶剂的黏度Water/methanol Water/methanolWater/acetonitrileWater/acetonitrileP r e s s u r e (M P a )Water (100%)Organic solvent (100%)Water/Organic solvent 1:1过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液时。
滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。
醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。
尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。
再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形3）检测器中的气泡产生基线波动。