8-羟基脱氧鸟苷在胰岛素抵抗大鼠骨骼肌的表达及运动、吡格列酮的干预作用

酮干 预 组 ， 组 各 １ 每 Ｏ只 ， 继 予 原 饲 料喂 养 。从 实 并
验第 ９ 开 始 ， 动 干 预 组 大 鼠参 照 Ｐ ｏ ｇ等 ｌ 介 周 运 ｌｕ ＿ ３
绍 的训练 方法 进行 为期 ８周 的游 泳 训 练 ， 周 训 练 每 ５天 ， ２ 每 天训 练 ４ ｍｉ ， 前 周 ０ ｎ 之后 每天 训 练 ６ ｍｉ ， ０ ｎ 游 泳池水 深 ５ ｃ 水 温 ３ ℃， 只 大 鼠活 动 面 积 约 ０ｍ， ５ 每
×Ｆ ＮＳ ２ ． ） ， 照 喂饲 高 脂 高糖 饮 食 大 鼠 ＨＯ Ｉ ／２ ５ ］ 按 — ＭＡ—Ｒ大于 基础 饲 料 组 大 鼠 ＨＯＭＡ Ｉ 均 数 ＋１ Ｉ —Ｒ ． ９ ６个 标准 差者 为 Ｉ Ｒ大 鼠 的标 准 ， 选 出 Ｉ 筛 Ｒ模 型 大
鼠。经对 照 Ｉ 模 型 标 准 ， ０只大 鼠均 成 模 。再 将 Ｒ ３ 模 型组 大 鼠 随 机 分 成 １ 组 、 动 干 预 组 和 吡 格 列 Ｒ 运
２ ０ ｍ 吡 格列 酮干 预 组 大 鼠给 予 吡 格 列 酮 ２ ｍｇ ０ｃ ； ０ ／ ｋ ／ （ 理盐 水 稀 释 ） 胃 ， 持 续 ８周 。实 验 期 ｇ天 生 灌 共 间对 照组 和吡格 列酮 干预 组 各有 ２只 大 鼠死亡 。
１２ 主 要仪 器及 试 剂 ．
１ 材 料 与方 法 １ １ 动 物及分 组 处理 ．
表 １ 各组 大 鼠实 验 第 ｌ ６周 末 Ｂ 、 Ｂ Ｆ Ｎ 、 ＯＭＡ Ｉ Ｓ Ｄ 水 平 比 较 （ Ｗ Ｆ Ｇ、 Ｉ Ｓ Ｈ －Ｒ、Ｏ 士 ）
注： 与对 照 组 比较 ， ”Ｐ＜ ０ ０ ， Ｐ ０ ０ ； Ｉ ． ５ ＜ ． １ 与 Ｒ组 比较 ， Ｐ＜ ０ ０ ， ＜ ０ ０ ． ５ ”Ｐ ．１
二 甲苯 透 明 ， 中性 树 胶 封 片 。采 用 ＨＰ ＡＳ ０ ０图 Ｉ ２０
色， 较 Ｉ 但 Ｒ组表 达 明显 减 弱 （ １ 图 １ 。各 组 图 Ｃ、 Ｄ） 大 鼠 ８ＯＨｄ 平均 积分光 密 度值 结 果 分 析表 明 ，Ｒ 一 Ｇ Ｉ 组 明显 高 于对 照组 （ Ｐ＜ ０ ０ ） 运 动 干预 和 吡格 列 ． １，
义。
Ｉ Ｒ＝（ Ｐ Ｆ Ｇ×Ｆ ＮＳ ／ ｚ ５２进行 计算 。 １ ）２．【
１ ３ ３ 骨 骼 肌 ８（Ｈｄ 含 量 检 测 ： 用 免 疫 组 织 ．． 一） Ｇ 采 化 学染 色法 （ Ｐ法 ） Ｓ 。取 甲醛 固定 的 骨 骼肌 进 行 常
２ 结 果
２ １ 各组 间检 测指标 比较 ． 实验 第 １ ６周 末 ，Ｒ 组 大 鼠 Ｂ 、 Ｂ Ｆ ＮＳ Ｉ Ｗ Ｆ Ｇ、 Ｉ 、 ＨＯＭＡ— Ｉ Ｒ均 高 于 对 照组 （ Ｐ＜ ０ ０ ） 骨骼 肌 Ｓ ． １， ＯＤ
强 阳性 表 达 （ １ ） 运 动 干预组 和 吡格 列 酮干 预组 图 Ｂ ； 骨骼 肌 细 胞 核 和 细 胞 浆 中虽 可 见 ８０Ｈｄ 阳性 染 — Ｇ
鲜配 制 的 ＤＡＢ溶 液 ， 微 镜 下 观 察 ； 显 自来 水 冲洗 ， 苏木 素复 染 ， 自来 水 冲洗 返 蓝 ； 度 酒 精 脱 水 干燥 ， 梯
箱保 存备 用 。
用盲 法进行 。
１４ 统计 学处 理 ． 本实 验数 据 以均数 ±标 准 差 （ ｓ 表示 ， 用 ± ） 选
Ｓ Ｓ ７ ０统计 学软 件包进 行 数据 分析 。组 间计 量 Ｐ Ｓ１．
１３ ２ 生化指 标检 测 ： 用强 生 血 糖仪 检 测 Ｆ Ｇ； ．． 采 Ｐ 采用 放射 免疫 法检 测 Ｆ ＮＳ 采用 黄嘌 呤氧化 酶法 测 Ｉ ；
甜蛆环学 杂 志
２ １ 年第 ２ 卷第 １ ０２ ２ 期
对 各 组 大 鼠 Ｈ０ＭＡ Ｉ 和 骨 骼 肌 Ｓ —Ｒ ＯＤ、 一 ８
ＯＨｄ Ｇ进行 相关性 分 析 ， 现 ＨｏＭＡ—Ｒ与 骨骼 肌 发 Ｉ
水合 氯醛麻 醉 后 ， 脏 采血 ， ０ ｒｍｉ 心 ｌｍｉ， 心 ３０ ０／ ｎ离 Ｏ ｎ
蕾曩扭亨 杂 志
２ １ 年 第 ２ 卷第 １ ０２ ２ 期
基础与实验
２ ８
陈
忆， 张黎 军
取上 清置 一２ ℃冰箱 保存 备用 ； Ｏ 迅速 取骨 骼肌 组织 ， 部分 置于 ４ 多 聚 甲醛 中 固定 ， 分 放 于 一 ７ ℃ 冰 部 ０
定骨 骼肌 Ｓ ＯＤ活性 ； 用考 马斯亮 兰法 测定 骨骼 肌 采 组织 匀浆 蛋 白含 量 。ＨＯ ＭＡ— 按 照公 式 ＨＯＭＡ Ｉ Ｒ —
资料 比较 采用 单 因素方 差分 析 ， 关分 析采 用 Ｐ ａ— 相 ｅｒ
ｓ ｎ相关 系数 （ ） ｏ ｒ 法 Ｐ＜ ０ ０ ． ５表 示 差 异有 统 计 学 意
活性 低 于对 照 组 （ Ｐ＜ ０ ０ ） 运 动干 预 组 和 吡格 列 ． １； 酮 干预 组 Ｆ Ｇ、 Ｉ 、 Ｂ Ｆ ＮＳ ＨＯＭＡ Ｉ 较 １ 组 下 降 （ —Ｒ Ｒ Ｐ
＜Ｏ ０ ） 骨骼 肌 Ｓ Ｄ 活性 较 Ｉ ．１， Ｏ Ｒ组 升 高 （ Ｐ＜０ ０ ．５
或 Ｐ＜Ｏ ０ ） ． １ 。见表 １ 。 ２ ２ 骨骼肌 ８ＯＨｄ Ｐ法 显示 ． 一 ＧＳ Ｓ Ｐ法显 示 ８ＯＨｄ 阳性 染 色 呈 棕 黄 色 ， 达 一 Ｇ 表 于大 鼠骨骼 肌细 胞 核 和细 胞 浆 中， 照 组 骨骼 肌 细 对
有 限公 司 ， 品编号 ： ｓ１ ７ Ｒ） 产 ｂ －２ ８ 。 １３ 标 本 采集 和检 测方 法 ． １３ １ 标本 采集 ： ．． 实验第 １ ６周末禁 食 １ ｈ后 ， ２ 测定
各 组 大 鼠体重 （ｏ ｙＷｅ ｈ ，Ｗ）腹腔 注射 ３０ ｇ Ｋ Ｂ ｄ ｉ ｔＢ ， ｇ ０ｍ ／ ｇ
ｂｔＡｎｉ 一 ｄ １：１ ０ ， ℃ 过 夜 ， Ｂ ｉ ｔ ８Ｏｈ Ｇ（ 一 ０ ）４ Ｐ Ｓ冲 洗 ３ 次， 每次 ３ ｎ 除去 Ｐ Ｓ液 ， 张 切 片 加 ５ 生 物 ｍｉ ； Ｂ 每 Ｏｌ 素 标记 的二 抗 ，７ ３ ℃孵 育 １ ｍｉ， Ｂ ５ ｎ Ｐ Ｓ冲 洗 ３次 ， 每
ＰａｍａＧｌｃｓ ， Ｐ 及 空 腹 胰 岛 素 （ ａ ｔ ｇ Ｉ— ｌｓ ｕ ｏ ｅ Ｆ Ｇ） Ｆ ｓｉ ｎ ｎ ｓ ｌ ，Ｆ ＮＳ 水 平 ， 计算 胰 岛素 抵 抗指 数 ［ ｍｅ ｕｉ Ｉ ） ｎ 并 Ｈｏ —
ｏｓ ａ ｉ ｏｄ ｌＡｓ ｅ ｓ ｎｔＩ ｔ ｓｓ Ｍ ｅ ｓ ｓ ｍｅ — Ｒ， Ｈ ＯＭ Ａ— Ｒ （ ＦＰＧ Ｉ ＝
证叠孤字 杂 。０ ２。２ １ ：７－ ９ ３ 志 ２ １ ２ （ ） ２ ＂ ２ ，２ －
◎ ２ １ Ｃ Ｉ Ｅ Ｅ Ｊ Ｕ Ｎ Ｌ Ｏ Ｃ Ｏ Ｉ Ｃ Ｌ Ｔ Ｏ ０ ２ Ｈ Ｎ Ｓ Ｏ Ｒ Ａ ＦＭＩ Ｒ Ｃ Ｒ Ｕ Ａ Ｉ Ｎ
８羟基脱 氧鸟苷在胰 岛素抵抗大 鼠骨骼 肌 一 的 表 达 及 运 动 、 格 列 酮 的 干 预 作 用 吡
ＡＯ １ 、 ａ ｂｔ ｔ ８Ｏｈ Ｇ（ 京博 奥森 生 物 技 术 Ｏ ） Ｒ ｂ ｉ Ａｎ ｉ 一 ｄ 北 一
照组 给予 普通 饲 料 喂养 ， 型 组 给 予 高脂 高 糖 饲 料 模 喂养 （ 脂高 糖饲 料 为在 普 通饲 料 配 方 中 添加 ２ 高 Ｏ
［ 者 单 位 ］ 武 汉 大 学 人 民 医 院老 年 病 科 ， 政 编 码 武 汉 作 邮
４ ０ ６ ； 通 讯 作 者 ： 黎 军 ，— ｉ：ｈ ｎ ＿ｉ ｎ ８ ｙ ｈ ｏ ｃｒ．ｎ ３０ ０ 张 Ｅ ｍａ ｚａ ｇ ｌｕ ８ ＠ ａ ｏ ．ｏ ｃ ｌ ｊ ｎ 本文 ２１—１—０ ０ １ １ ８收 到 ，０ １ １ —１ ２ １ — ２ ３修 回 ，０ １ １ — ２ ２ １ — ２ ８接 受
主要 实 验仪 器 ： ｔｐ ｕ ｅ型血糖 仪 （ 国强 生公 Ｓｅ ｓ ｒ 美 司 ） ＨＰ ＡＳ Ｏ Ｏ型 图像 分析 软件 （ 、 Ｉ ２Ｏ 同济千 屏 影像 工
程公 司） 。主要 实验 试 剂 ： 酸 吡格 列 酮 片 （ 州 中 盐 杭
Ｓ Ｆ级 雄性 Ｗｉ ａ 大 鼠 ４ Ｐ ｓｒ ｔ Ｏ只 ， 于 湖 北 省 实 购 验 动 物 研 究 中心 ， 物 生 产 许 可 证 号 ： Ｃ Ｋ（ ） 动 ＳＸ 鄂 ２ ０ —０ ５ 使 用许 可证 号 ： ＹＸ 鄂 ） ０ ９０ ２ ， ０ ８０ ０ ； Ｓ Ｋ（ ２ ０ — ０ ７ 体
次 ３ ｎ 除去 Ｐ Ｓ液 ， 张切 片加 ５ １ 霉菌 抗生 ｍｉ ； Ｂ 每 Ｏ 链 物素一 过氧 化物 酶溶 液 ， ７ ３ ℃孵 育 １ ｍｉ ， Ｂ ５ ｎ Ｐ Ｓ冲洗
３ ， 次 ３ ｎ 除 去 Ｐ Ｓ液 ， 张 切 片加 １ ０ １ 次 每 ｍｉ ； Ｂ 每 ０ ￣ 新
胞核 和 细 胞 浆 中仅有 少许 ８ＯＨｄ 表 达 （ １ ； 一 Ｇ 图 Ａ） Ｉ Ｒ组 ８ＯＨｄ 分布 于骨骼 肌细 胞核 和细 胞浆 中， 一 Ｇ 呈
表 ２ 各 组 大 鼠 实验 第 １ ６周 末 ８ＯＨｄ 平 均 积 分 光 密 度值 比较 （ － Ｇ ± ）
注 ： 对照组比较， ＜００ ； Ｉ 与 ”Ｐ ． １ 与 Ｒ组 比较 。 Ｐ＜ ０ ０ ．５
２ ３ ＨＯＭＡ— 与 Ｓ ． Ｉ Ｒ ＯＤ、 一 ８ＯＨｄ 水 平 的 相 关 性 Ｇ 分 析
规石蜡 包埋 、 片脱蜡 和水 化 ； Ｐ Ｓ ｐ ． ） 切 用 Ｂ （ Ｈ７ ４ 冲洗
３次 ， 次 ３ ｎ ９ ℃微 波 １ ～ ２ ｍｉ 组 织 抗 原 每 ｍｉ ； ５ ５ ０ ｎ对
进行修 复 ； 每张 切 片加 ５ 过 氧化 物 酶 ， 温 下孵 Ｏ１ 室 育 １ ｍｉ ， Ｐ Ｓ冲 洗 ３次 ， 次 ３ ｎ 除去 Ｐ Ｓ ０ ｎ用 Ｂ 每 ｍｉ； Ｂ 液， 每张 切片加 ５ ｌ 常 非 免 疫 动 物血 清 ， 温 下 Ｏ 正 室 孵育 １ ｍｉ ； ０ ｎ 除去 血 清 ， 张切 片 加 ５ 一 抗 Ｒａ — 每 ０ｌ ｂ
陈 忆 张黎军
［ 图 分 类 号 ］ Ｒ ８ ． 中 ５７３ ［ 献标识码 ］ Ａ 文 ［ 章 编 号 ］ １ ０ — １ ４ （０ ２０ —０ ２ — ０ 文 ０ ５ ７ ０ ２ １ ）１ ０ ７ ４
圜
纛
蔗糖 、Ｏ 熟 猪 油 、 ． 胆 固醇 、 胆 酸 盐 ） ］ ８ １ ２ ５／ ９ ６ １， ９ ５ ＿ ｌ ， ２ 周后 ， 有 大 鼠 眼 眶 取 血 检 测 空 腹 血 糖 （ ａｔ ｇ 所 Ｆ ｓｉ ｎ
重 １ ０ ０ ｇ 随机 分 成对 照组 （ 一 １ ） 模 型组 （ ６ ￣２ ０ ， ” ０及 ， ２
美华 东 制药 有 限公 司 ， 国药准 字 Ｈ２ ０ ０ ６ ，０ ／ ｏ ６ ６ ４ ３ ｍｇ 片 ） 胰 岛素 放射 免 疫试 剂 盒 （ 子 高科 股 份 有 限公 、 原 司， 国药 准 字 Ｓ ０ ３ Ｏ １ 、 氧化 物 歧 化 酶 （ ｕ ｅ— １９Ｏ ４ ） 超 Ｓ ｐ ｒ
ｏ ｉｅＤｉ ｔｓ ，Ｓ ｘｄ ｓ ｍｕ ａｅ ＯＤ） 试 盒 和 考 马 斯 亮 兰 蛋 白 测
—３ ） ０ 。实验 期 间每 笼 饲养 ３ ４只大 鼠 ， 予正 常 ～ 给
节律 日光 照射 。所 有 大 鼠经 适 应 性 喂 养 １周 后 ， 对
测 定 试 剂 盒 （ 京 建 成 生 物工 程 研 究 所 ， 号 ： 南 货
酮 干预 后 明显 下 降（ Ｐ＜０ ０ ） ． ５ 。见表 ２ 。
像分 析 系统对 各组 染 色 标 本进 行 检 测 ， 标 准 灰 度 经
校 正后 ， 机 选 取 ５个 视 野 ， 定 ８ｏＨｄ 平 均 积 随 测 一 Ｇ 分 光密度 值 。上述 各组 大 鼠免疫 组化 检测 过程 均采