107例稽留流产胎儿绒毛染色体分析
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2. 方法: 无菌操作取 绒毛 组织, 置于 含肝 素生 理盐 水的 无菌容器中。取绒毛组织约 10m g, 眼科剪 剪碎, 置于 37 的 0 025% 胶原酶中消化 30m in, 离心, 生理盐水洗涤, 将经胰酶 消化的绒 毛组织加入 5m l am inoMAX - II培 养基 ( Inventr igen 公司生产 )于 37 CO2 培养箱中培养 4~ 6天后换液, 8天左 右收获。 G 显带后光学 显微 镜下 两人 双盲 分析, 计 数 30个 分裂 相, 分 析 3~ 5 个。根据人 类细胞 遗传学 国际命名 体制 ( ISCN 2005)对染色体核型进行命名。
另外在嵌合体中我们发现部分绒毛染色体嵌合体与已报道的产前诊断中发现嵌合体染色体2n2n或2n2n不同表现出核型中有多个染色体同时出现的嵌合这种构成混乱的嵌合体最终导致胚胎无法正常发等应用araaycgh技术对320500条染色体诊断无异常发现的绒毛进行检测发现流产胚胎除了上述的遗传学变化大约135的绒毛染色体还存在亚显微结构变异包括染色体的微缺失微重复等各种类型的拷贝数变化在人群中发生率相当高这也是导致流产胎儿异常发育的重要原因之一glokin等基因突变可导致胚胎水肿及死亡glokin基因发育过程中是不可替代的其突变必然会导致胚胎发育异常见因胎儿遗传物质异常而造成的流产比例要远远高于目前的报道而随着arraycgh微卫星标记全基因组测序全基因组甲基化芯片的应用这些流产胚胎的病因将会被进一步揭示
[ 3 ] 王淑 珍, 主 编. 实 用 妇 产 科 学 [ M ]. 北 京: 人 民 卫 生 出 版 社, 1990 172- 183.
[ 4 ] Zhang YX, et a.l G enetic analys is of first- trim esterm iscarriages w ith a comb inat ion of cytogenetic karyotyp ing, m icrosatell ite genotyp ing and arrayCGH [ J]. C lin G en et, 2009, 75( 2) : 133 - 40
对象与方法
1. 对象: 2007年 1月至 2008年 5月北京海淀区妇幼保健 院诊断为稽留 流产、要求进 行胚 胎细 胞遗传 学诊 断的 患者。 临床上排除夫妻双方染色体异常、生殖器器质性病变、支原体 和衣原体感染、免疫异常、内分泌疾病及以及明显的环境污染 等因素, 孕妇年龄 23~ 39岁, 平均 流产 1 61次, 分别于 妊娠 9 ~ 12周之间诊断为难免流产或胚胎、胎儿停止发育。
例, 另有 2例核型各多了两条染色体 )。 2. 染色体结构异 常 5 例, 包 含易 位 2例, 等 臂 染色 体 1
例, 未知来源染色体 2例。 表 1 异常绒毛染色体核型结构总结
数目异常
结构异常 合计
异常类型 例数 三倍体 3 四倍体 4 亚二倍体 6 超二倍体 36
嵌合体 10
易位染色体 2 等臂染色体 1 标记染色体 2
1 87
59 81
讨论
稽留流产是 自然流 产的 一种特 殊形 式。导致 自然 流产 的原因主要包括夫 妇双 方的遗 传、内分 泌、免疫 及母亲 宫腔 的解剖结构、环境等 因素。临 床医学 研究 表明 [3] , 胎儿 自身 的遗传学异常是导致早期流产的 最重要的因 素, 文献 报道约
60
中国优生与遗传杂志 2010年第 18卷第 4期
Abstrac:t Ob jective: T o investig ate the re la tionsh ips be tw een abno rm al karyotypes o f feta l chorionic v illus ce lls and m issed abortion. M ethods: 107 samp les o f feta l v illus tissue ce lls w ere de tected by the conventiona lG - banding chrom osom e analysis afte r uterine curettage. R esu lts: T he re were 64 cases o f abno rm al karyotypes in tota l 107 samp les, abno rm al rate ach ieve 59 8 % . O f wh ich, 58 cases w ere chrom osom e num ber abnorm a lity, 5 cases were chrom osom al structural abno rm ality. Conclusion: T he chrom osom a l abnorm ality is an im po rtan t reason for m issed abortion. Chrom osom e ana lys is o f feta l v illus tissue ce lls can prov ide re liab le ev idence for e tiolog ica l d iagnos is and nex t reproductiv e counselling.
[ 5 ] Lars Feuk, A ndrew R Carson, et a.l St ru ctural variat ion in the hum an gen om e[ J] . N atu re R ev iew s G enet ics, 2006, 7( 2 ): 85- 97.
参考文献
[ 1 ] 乐 杰, 主编. 妇 产 科学 [ M ]. 第 6 版. 北京: 人 民 卫 生 出版 社, 2004 99.
[ 2 ] Am erican C ollege of O b stetrics and G ynecology. Early Pregnancy Loss. Th e Am erican C ollege of O bstetrics and G yn eco logy[ M ]. Compend ium of S elected Pub lications. 1995.
结果
共收集 113例稽留流产胎儿绒毛, 6例绒毛培养失 败, 主 要原因是绒毛污染, 培 养成功 率为 94 69% 。在 成功培 养的
型, 异常率 59 81% , 其中 包含单 纯染色 体数 目异常、结 构异 常及数目 /结构混合异常, 见表 1。
1. 染色体 数目 异 常 60例, 包含 整 倍 体 7例 ( 三 倍 体 3 例, 四倍体 4例 ), 非 整倍体 53例 (亚 二倍体 有 6例 单体 型、 超二倍体 36例, 其中三体型 34例, 除 1、4、12号染色体外, 其 余染色体均 发 现 三体, 最多 见 为 16 号染 色 体 三 体型, 共 7
的报道, 而随着 A rray- CGH、微卫星 标记、全基因 组测序、全 基因组甲基化芯片的应用, 这些流产胚胎 的病因将 会被进一 步揭示。
绒毛的遗传学 检测表 明遗 传因素 是引 起胚 胎异常 发育
和稽留流产的主要原因。除了自 然界的 选择过程, 环 境因素 在遗传的异常传 递中 也是起 着不 可忽视 的作 用。一些 研究
关键词: 稽留流产; 染色体异常
中图分类号: R 714 21
文献标识码: B
文章编号: 1006- 9534 ( 2010) 04- 0059- 02
Ana lys is on ka ryo type o f v illus tissue ce lls from 107 m issed abo rtion fetus. GU Y ing, ZH AN G Yang, ZH U J ian - jiang, et al. ( C enter of P rena tal Scr ining, W omen & ChildrenH ea lth Care H osp ital, H aid ian D istrict, B eij ing, 100080)
中国优生与遗传杂志 2010年第 18卷第 4期
59
107例稽留流产胎儿绒毛染色体分析
顾 莹 1, 2, 张 旸 1, 祝建疆 1, 刘晓红 1, 李海波 2, 叶国玲 1 ( 1. 北京市海淀区妇幼保健院产前筛查中心 100080; 2. 江苏连云港市妇幼保健院产前诊断中心 )
摘 要: 目的 统计分 析胎儿染色体核型异常与稽留流产发生的关系。方法 对 107例稽留流产孕妇行清 宫术时, 取
已经明确报道补充叶酸可以降 低唐氏综合征 的发生, 相信环 境因素包括饮食习 惯、生活 习惯、环境 有害 因素 接触对 其他
胚胎异常染色体的发生也起着 重要作用, 而这需要 更深一步
的研究和探索。 综上所述, 绒毛染色体检查可对稽留 流产的原因 及时作
出遗传判断, 染色体数目和结构异常是早 期自然流产 的主要 原因, 由于自然流产是 异常 生命体 自然 淘汰 的过程, 因 此胚 胎绒毛的遗传学检查不仅能够对 自然流产进 行病因学诊 断, 同时为临床医生对 流产患 者进 行合理 治疗 和再 生育的 优生 指导有重要意义。
生流产。本研究在筛选病例的过程 中, 先 排除夫妇 遗传以及 其他病理因 素, 发现 稽 留流 产 胎儿 的染 色 体核 型异 常 率为 59 81% , 其中以三体型 最为 常见占 33 65% 、嵌合 体占 流产 的 9 35% 、亚二倍体占 5 61、整倍体 7例、单纯性的结构性变 异 4例。得关注的是所有 6例单体型的核型均表现 为 45, X, 提示除了 X 和 Y 染色体以外整条染色 体缺失的 胚胎及绒 毛是难以生存 的。另外, 在 嵌合 体中, 我们 发现部 分绒 毛染 色体嵌合体与已报道的产 前诊断 中发现 嵌合体 染色体 2n+ 1 /2n或 2n- 1 /2n不 同, 表现 出核型 中有多 个染 色体同 时出 现的嵌合, 这种构成混乱的嵌合体最终导 致胚胎无 法正常发 育。
Key words: M issed abortion; Chrom osom a l abno rm ality
稽留流 产 ( m issed abortion ), 是指 胚胎 在宫 腔内 停 止发 育或胎儿已经死亡但滞留在宫 腔内尚未自然 排除者, 医学上 亦称过期流产。典型表现是有正常 的早孕过 程, 或 有先兆流 产的 症状; 随 着停 经时 间延 长, 子 宫不 再增 大, 早孕 反 应消 失 [ 1] 。研究表明其发生 原因 与胎儿、母 体、环境 等诸多 因素 相关, 而胎儿的染色体异常为其发生的重要 因素 [ 2] 。为了了 解我院胚胎流产的病 因, 我 们对 2007年 1月至 2008年 8月 间 107例稽留流产胎儿进行了细胞 遗传学诊 断, 分析 胎儿染 色体核型异常与稽留 流产发生之间的关系, 报道如下。
64
部分异常核型描述 异常率 ( % )
69, XXX、69, XXY 92, XXXX、92, XXYY、
92, XXYY, inv( 6)
2 80 3 74
45, X 47, XX, + 16、48, XY, + 3, + 14、
48, XY, + 5, + 22 47, XY, + 18/47, XY, + 21、
张 圆喜 [ 4]等应用 a raay CGH 技术对 G 显带 ( 320- 500条 带 ) 染色体诊断无异常发 现的绒 毛进行 检测, 发 现流产 胚胎 除了上述的遗传学变 化, 大约 13 5% 的绒毛染色体还存在亚 显微结构变异, 包括染 色体 的微 缺失、微重 复等 各种类 型的 拷贝数变化在人群 中发 生率 相当高, 这 也是 导致流 产、胎儿 异常发育的重要原 因之 一 [5, 6] 。另 外研 究也发 现 a- g lokin 等基因突变可 导致胚 胎水 肿及 死亡, a - g lok in基 因发 育过 程中是不可替代的, 其突 变必 然会 导致胚 胎发 育异常 [ 7], 同 时胚胎基因组的异常甲基化也 同早期流产密切相关 [8, 9] 。可 见因胎儿遗传物质 异常而 造成 的流产 比例 要远 远高于 目前
胎儿绒毛组织, 按常规技术方 法制备绒毛细胞染色体, G 显带后 进行核 型分析。结 果 检 测分析 流产胎 儿绒毛 共 107 例,
核型异常 64例, 异常率为 59 81% 。其中数目异常 58例, 染色体结构 异常 5例。结论 染色体异 常是稽留 流产的 重要原
因, 对稽留胎儿绒毛进行染色 体分析可为病因诊断和再生育的优生指导提供可靠依据。
5 61 33 64
47, XY, + 16/47, XY, + 22、 47, XY, + 11/46, XY、
9 35
47, XX, + 6 /46, XX 46, XX, t( 1; 14) 、
45, XX, der( 13; 22)
1 87
46, X, i( X q)
0 93
47, XY, + m ar
另外在嵌合体中我们发现部分绒毛染色体嵌合体与已报道的产前诊断中发现嵌合体染色体2n2n或2n2n不同表现出核型中有多个染色体同时出现的嵌合这种构成混乱的嵌合体最终导致胚胎无法正常发等应用araaycgh技术对320500条染色体诊断无异常发现的绒毛进行检测发现流产胚胎除了上述的遗传学变化大约135的绒毛染色体还存在亚显微结构变异包括染色体的微缺失微重复等各种类型的拷贝数变化在人群中发生率相当高这也是导致流产胎儿异常发育的重要原因之一glokin等基因突变可导致胚胎水肿及死亡glokin基因发育过程中是不可替代的其突变必然会导致胚胎发育异常见因胎儿遗传物质异常而造成的流产比例要远远高于目前的报道而随着arraycgh微卫星标记全基因组测序全基因组甲基化芯片的应用这些流产胚胎的病因将会被进一步揭示
[ 3 ] 王淑 珍, 主 编. 实 用 妇 产 科 学 [ M ]. 北 京: 人 民 卫 生 出 版 社, 1990 172- 183.
[ 4 ] Zhang YX, et a.l G enetic analys is of first- trim esterm iscarriages w ith a comb inat ion of cytogenetic karyotyp ing, m icrosatell ite genotyp ing and arrayCGH [ J]. C lin G en et, 2009, 75( 2) : 133 - 40
对象与方法
1. 对象: 2007年 1月至 2008年 5月北京海淀区妇幼保健 院诊断为稽留 流产、要求进 行胚 胎细 胞遗传 学诊 断的 患者。 临床上排除夫妻双方染色体异常、生殖器器质性病变、支原体 和衣原体感染、免疫异常、内分泌疾病及以及明显的环境污染 等因素, 孕妇年龄 23~ 39岁, 平均 流产 1 61次, 分别于 妊娠 9 ~ 12周之间诊断为难免流产或胚胎、胎儿停止发育。
例, 另有 2例核型各多了两条染色体 )。 2. 染色体结构异 常 5 例, 包 含易 位 2例, 等 臂 染色 体 1
例, 未知来源染色体 2例。 表 1 异常绒毛染色体核型结构总结
数目异常
结构异常 合计
异常类型 例数 三倍体 3 四倍体 4 亚二倍体 6 超二倍体 36
嵌合体 10
易位染色体 2 等臂染色体 1 标记染色体 2
1 87
59 81
讨论
稽留流产是 自然流 产的 一种特 殊形 式。导致 自然 流产 的原因主要包括夫 妇双 方的遗 传、内分 泌、免疫 及母亲 宫腔 的解剖结构、环境等 因素。临 床医学 研究 表明 [3] , 胎儿 自身 的遗传学异常是导致早期流产的 最重要的因 素, 文献 报道约
60
中国优生与遗传杂志 2010年第 18卷第 4期
Abstrac:t Ob jective: T o investig ate the re la tionsh ips be tw een abno rm al karyotypes o f feta l chorionic v illus ce lls and m issed abortion. M ethods: 107 samp les o f feta l v illus tissue ce lls w ere de tected by the conventiona lG - banding chrom osom e analysis afte r uterine curettage. R esu lts: T he re were 64 cases o f abno rm al karyotypes in tota l 107 samp les, abno rm al rate ach ieve 59 8 % . O f wh ich, 58 cases w ere chrom osom e num ber abnorm a lity, 5 cases were chrom osom al structural abno rm ality. Conclusion: T he chrom osom a l abnorm ality is an im po rtan t reason for m issed abortion. Chrom osom e ana lys is o f feta l v illus tissue ce lls can prov ide re liab le ev idence for e tiolog ica l d iagnos is and nex t reproductiv e counselling.
[ 5 ] Lars Feuk, A ndrew R Carson, et a.l St ru ctural variat ion in the hum an gen om e[ J] . N atu re R ev iew s G enet ics, 2006, 7( 2 ): 85- 97.
参考文献
[ 1 ] 乐 杰, 主编. 妇 产 科学 [ M ]. 第 6 版. 北京: 人 民 卫 生 出版 社, 2004 99.
[ 2 ] Am erican C ollege of O b stetrics and G ynecology. Early Pregnancy Loss. Th e Am erican C ollege of O bstetrics and G yn eco logy[ M ]. Compend ium of S elected Pub lications. 1995.
结果
共收集 113例稽留流产胎儿绒毛, 6例绒毛培养失 败, 主 要原因是绒毛污染, 培 养成功 率为 94 69% 。在 成功培 养的
型, 异常率 59 81% , 其中 包含单 纯染色 体数 目异常、结 构异 常及数目 /结构混合异常, 见表 1。
1. 染色体 数目 异 常 60例, 包含 整 倍 体 7例 ( 三 倍 体 3 例, 四倍体 4例 ), 非 整倍体 53例 (亚 二倍体 有 6例 单体 型、 超二倍体 36例, 其中三体型 34例, 除 1、4、12号染色体外, 其 余染色体均 发 现 三体, 最多 见 为 16 号染 色 体 三 体型, 共 7
的报道, 而随着 A rray- CGH、微卫星 标记、全基因 组测序、全 基因组甲基化芯片的应用, 这些流产胚胎 的病因将 会被进一 步揭示。
绒毛的遗传学 检测表 明遗 传因素 是引 起胚 胎异常 发育
和稽留流产的主要原因。除了自 然界的 选择过程, 环 境因素 在遗传的异常传 递中 也是起 着不 可忽视 的作 用。一些 研究
关键词: 稽留流产; 染色体异常
中图分类号: R 714 21
文献标识码: B
文章编号: 1006- 9534 ( 2010) 04- 0059- 02
Ana lys is on ka ryo type o f v illus tissue ce lls from 107 m issed abo rtion fetus. GU Y ing, ZH AN G Yang, ZH U J ian - jiang, et al. ( C enter of P rena tal Scr ining, W omen & ChildrenH ea lth Care H osp ital, H aid ian D istrict, B eij ing, 100080)
中国优生与遗传杂志 2010年第 18卷第 4期
59
107例稽留流产胎儿绒毛染色体分析
顾 莹 1, 2, 张 旸 1, 祝建疆 1, 刘晓红 1, 李海波 2, 叶国玲 1 ( 1. 北京市海淀区妇幼保健院产前筛查中心 100080; 2. 江苏连云港市妇幼保健院产前诊断中心 )
摘 要: 目的 统计分 析胎儿染色体核型异常与稽留流产发生的关系。方法 对 107例稽留流产孕妇行清 宫术时, 取
已经明确报道补充叶酸可以降 低唐氏综合征 的发生, 相信环 境因素包括饮食习 惯、生活 习惯、环境 有害 因素 接触对 其他
胚胎异常染色体的发生也起着 重要作用, 而这需要 更深一步
的研究和探索。 综上所述, 绒毛染色体检查可对稽留 流产的原因 及时作
出遗传判断, 染色体数目和结构异常是早 期自然流产 的主要 原因, 由于自然流产是 异常 生命体 自然 淘汰 的过程, 因 此胚 胎绒毛的遗传学检查不仅能够对 自然流产进 行病因学诊 断, 同时为临床医生对 流产患 者进 行合理 治疗 和再 生育的 优生 指导有重要意义。
生流产。本研究在筛选病例的过程 中, 先 排除夫妇 遗传以及 其他病理因 素, 发现 稽 留流 产 胎儿 的染 色 体核 型异 常 率为 59 81% , 其中以三体型 最为 常见占 33 65% 、嵌合 体占 流产 的 9 35% 、亚二倍体占 5 61、整倍体 7例、单纯性的结构性变 异 4例。得关注的是所有 6例单体型的核型均表现 为 45, X, 提示除了 X 和 Y 染色体以外整条染色 体缺失的 胚胎及绒 毛是难以生存 的。另外, 在 嵌合 体中, 我们 发现部 分绒 毛染 色体嵌合体与已报道的产 前诊断 中发现 嵌合体 染色体 2n+ 1 /2n或 2n- 1 /2n不 同, 表现 出核型 中有多 个染 色体同 时出 现的嵌合, 这种构成混乱的嵌合体最终导 致胚胎无 法正常发 育。
Key words: M issed abortion; Chrom osom a l abno rm ality
稽留流 产 ( m issed abortion ), 是指 胚胎 在宫 腔内 停 止发 育或胎儿已经死亡但滞留在宫 腔内尚未自然 排除者, 医学上 亦称过期流产。典型表现是有正常 的早孕过 程, 或 有先兆流 产的 症状; 随 着停 经时 间延 长, 子 宫不 再增 大, 早孕 反 应消 失 [ 1] 。研究表明其发生 原因 与胎儿、母 体、环境 等诸多 因素 相关, 而胎儿的染色体异常为其发生的重要 因素 [ 2] 。为了了 解我院胚胎流产的病 因, 我 们对 2007年 1月至 2008年 8月 间 107例稽留流产胎儿进行了细胞 遗传学诊 断, 分析 胎儿染 色体核型异常与稽留 流产发生之间的关系, 报道如下。
64
部分异常核型描述 异常率 ( % )
69, XXX、69, XXY 92, XXXX、92, XXYY、
92, XXYY, inv( 6)
2 80 3 74
45, X 47, XX, + 16、48, XY, + 3, + 14、
48, XY, + 5, + 22 47, XY, + 18/47, XY, + 21、
张 圆喜 [ 4]等应用 a raay CGH 技术对 G 显带 ( 320- 500条 带 ) 染色体诊断无异常发 现的绒 毛进行 检测, 发 现流产 胚胎 除了上述的遗传学变 化, 大约 13 5% 的绒毛染色体还存在亚 显微结构变异, 包括染 色体 的微 缺失、微重 复等 各种类 型的 拷贝数变化在人群 中发 生率 相当高, 这 也是 导致流 产、胎儿 异常发育的重要原 因之 一 [5, 6] 。另 外研 究也发 现 a- g lokin 等基因突变可 导致胚 胎水 肿及 死亡, a - g lok in基 因发 育过 程中是不可替代的, 其突 变必 然会 导致胚 胎发 育异常 [ 7], 同 时胚胎基因组的异常甲基化也 同早期流产密切相关 [8, 9] 。可 见因胎儿遗传物质 异常而 造成 的流产 比例 要远 远高于 目前
胎儿绒毛组织, 按常规技术方 法制备绒毛细胞染色体, G 显带后 进行核 型分析。结 果 检 测分析 流产胎 儿绒毛 共 107 例,
核型异常 64例, 异常率为 59 81% 。其中数目异常 58例, 染色体结构 异常 5例。结论 染色体异 常是稽留 流产的 重要原
因, 对稽留胎儿绒毛进行染色 体分析可为病因诊断和再生育的优生指导提供可靠依据。
5 61 33 64
47, XY, + 16/47, XY, + 22、 47, XY, + 11/46, XY、
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47, XX, + 6 /46, XX 46, XX, t( 1; 14) 、
45, XX, der( 13; 22)
1 87
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0 93
47, XY, + m ar