染色体微阵列检测技术在NT增厚胎儿中的应用

ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．０５．０３·临床检验技术研究·
染色体微阵列检测技术在ＮＴ增厚胎儿中的应用
杨培峰ａ，单婉婉ａ，张琳琳ｂ，于海洋ｂ，聂付芳ａ，赵岚岚ａ（郑州大学第三附属医院ａ．产科，ｂ．检验科，郑州４５００５２）
摘要：目的　探讨染色体微阵列（ＣＭＡ）检测技术在颈项透明层（ＮＴ）增厚胎儿中检测基因组拷贝数变异（ＣＮＶｓ）的临床应用价值。

方法　收集２０１８年１月至１２月郑州大学第三附属医院妊娠早期ＮＴ筛查异常（≥２．５ｍｍ）并接受ＣＭＡ检查的胎儿３０５例，分析胎儿染色体数目异常及拷贝数异常发生情况；并根据ＮＴ值分为以下５组：２．５～２．９ｍｍ、３．０～３．４ｍｍ、３．５～３．９ｍｍ、
４．０～４．９ｍｍ、≥５ｍｍ组，分析各组胎儿染色体数目异常及微缺失、微重复发生情况；根据是否合并其他超声异常，分为合并超声异常组和单纯组，分析并比较两组染色体异常发生情况。

结果　ＮＴ值２．５～２．９ｍｍ、３．０～３．４ｍｍ、３．５～３．９ｍｍ、４．０～４．９ｍｍ、
≥５ｍｍ组染色体异常率分别为５．６％、１４．４％、２２．４％、２５．０％和４２．３％；３０５例ＮＴ增厚的胎儿采用ＣＭＡ技术共检出５９例（１９．３％）染色体异常；且与常规的染色体核型分析相比，ＣＭＡ多检出５例致病性ＣＮＶｓ（５／２４６）及１２例临床意义不明（ＶＯＵＳ）
变异；此外，合并超声异常的ＮＴ增厚胎儿和单纯ＮＴ增厚的胎儿染色体异常率分别为４４．２％和１７．２％。

结论　ＣＭＡ检测可检出常规的染色体核型分析无法检出的ＣＮＶｓ及临床意义不明的微缺失、微重复。

关键词：颈项透明层增厚；产前诊断；微阵列分析；ＤＮＡ拷贝数变异
中图分类号：Ｒ４４６；Ｒ７１４．５３ 文献标志码：Ａ
在妊娠早期进行颈项透明层（ｎｕｃｈａｌ
ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｃｙ，ＮＴ）的筛查，可以尽早发现染色体及结构异常的ＮＴ增厚胎儿［１］。

染色体微阵列（ｃｈｒｏｍｏ
ｓｏｍａｌｍｉｃｒｏａｒｒａｙ，ＣＭＡ）检测技术相比于常规核型分析具有更多的优势，如其可以检测＜１×１０５ｂｐ的基
因组拷贝数变异（ｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒｖａｒｉａｔｉｏｎｓ，ＣＮＶｓ），发现某些用染色体核型分析无法检测出的微缺失或微重复，故而被公认为是临床上首选的产前胎儿结构异常检测方法［２］。

本研究回顾性分析我院２０１８年
ＮＴ增厚胎儿的ＣＭＡ检测结果，并探讨ＮＴ增厚胎儿在合并有其他超声异常时染色体异常发生的风险
及其临床应用价值，以期为临床咨询提供实验依据。

１　对象与方法
１．１　研究对象　回顾性分析２０１８年１月至１２月就诊于郑州大学第三附属医院且经孕１１～１３＋６周超
声筛查诊断为胎儿ＮＴ增厚的孕妇３０５例，孕妇年龄（２９．９±５．０）岁，孕周１１～２４周，其中单胎３００例，双胎中１胎ＮＴ增厚５例。

纳入标准：（１）ＮＴ≥
２．５ｍｍ；（２）伴或不伴有其他超声结构的异常；（３）进行介入性产前诊断ＣＭＡ检测。

胎儿ＮＴ范围为
２．５～１２．８ｍｍ，其中２６２例为单纯ＮＴ增厚，４３例伴有其他异常（包括３４例淋巴水囊瘤，３例单脐动脉，
３例脉络丛囊肿，３例鼻骨缺失）。

本研究经郑州大学第三附属医院医学伦理学委员会批准，孕妇及其家属均知情同意。

１．２　主要仪器与试剂　ＶｏｌｕｓｏｎＥ８三维彩色多普勒超声诊断仪及腹部三维超声容积探头（４～８ＭＨｚ）购
自美国ＧＥ公司；Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度计（美国ＴｈｅｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司）。

高分辨率全基因组ＣｙｔｏＳｃａｎＨＤ芯片（美国Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｃ公司）；ＧｅｎｔｒａＰｕｒｅｇｅｎｅＣｅｌｌＫｉｔ＿ＤＮＡ提取试剂盒（美国Ｑｉａｇｅｎ公司）。

１．３　超声检查　超声检查由超声科医师采用
ＶｏｌｕｓｏｎＥ８三维彩色多普勒超声诊断仪及腹部三维超声容积探头（４～８ＭＨｚ）检测，检查孕周为孕１１～
１３＋６周，严格按照国际妇产科超声协会（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｏｃｉｅｔｙｏｆＵｌｔｒａｓｏｕｎｄｉｎＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，ＩＳＵＯＧ）发布的妊娠早期胎儿超声检查指南［３］中的
ＮＴ值质控标准进行结果判读，以ＮＴ≥２．５ｍｍ诊断为ＮＴ增厚。

１．４　介入性产前诊断　３０５例孕妇中，有１７７例孕妇于１１～１３＋６孕周接受经腹绒毛穿刺取材术，抽取
绒毛组织４～８ｍｇ；另外１２８例孕妇于１８～２４孕周接受羊膜腔穿刺术，采集羊水２０～３０ｍＬ。

所有穿刺均在超声引导下由具有产前诊断资质的医师操作。

１．５　实验室检查
１．５．１　实验分组　根据ＮＴ厚度的不同分为２．５～２．９ｍｍ、３．０～３．４ｍｍ、３．５～３．９ｍｍ、４．０～４．９ｍｍ、≥
基金项目：河南省医学科技公关计划联合共建项目（２０１８０２０２０７）。

作者简介：杨培峰，１９７６年生，女，副主任医师，硕士研究生导师，主要从事产前诊断、产前筛查及子痫前期相关研究。

通信作者：赵岚岚，主治医师，Ｅ ｍａｉｌ：７９９４１１７００＠ｑｑ．ｃｏｍ。

５ｍｍ５组，采用常规的染色体核型分析及ＣＭＡ检测技术分别比较不同组间胎儿染色体数目异常及拷
贝数异常发生情况。

根据是否合并其他超声异常（如淋巴水囊瘤、单脐动脉、脉络丛囊肿、鼻骨缺失等），分为合并超声异常组（４３例）和单纯组（２６２例），进一步比较两组染色体异常发生情况。

１．５．２　ＤＮＡ提取　按照ＧｅｎｔｒａＰｕｒｅｇｅｎｅＣｅｌｌＫｉｔ＿
ＤＮＡ提取试剂盒说明书提取羊水、绒毛或脐带组织基因组ＤＮＡ。

采用Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度计检测ＤＮＡ
质量及浓度，取吸光度（Ａ２６０／２８０ｎｍ）为１．８～２．０的样本，置－２０℃保存。

１．５．３　ＣＭＡ检测及结果判读　采用短串联重复序列（ＳＴＲ）位点比对法进行母血污染鉴定［３］，确认无
母血污染后进行ＣＭＡ检测。

按照高分辨率全基因组ＣｙｔｏＳｃａｎ７５０芯片说明书对孕妇的绒毛或羊水标本进行检测。

结果参照国际在线公开数据库（包括
ＤＧＶ数据库、Ｄｅｃｉｐｈｅｒ数据库、ＯＭＩＭ数据库等）比对后，ＣＮＶ判读为３种类型：致病性、良性以及临床
意义不明的ＣＮＶ（ｖａｒｉａｎｔｓｏｆｕｎｋｎｏｗｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ，
ＶＯＵＳ）。

ＣＮＶｓ致病性判读参照美国医学遗传学与基因组学学会（ＡＣＭＧ）判读指南［４］进行。

１．６　统计学分析　采用ＳＰＳＳ１７．０统计软件进行分析，计数资料用频数及百分率表示，两组二分类资料
及多组二分类变量资料的统计分析采用χ２检验。

以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

２　结果
２．１　常规的染色体核型分析及ＣＭＡ检测结果　
ＣＭＡ及常规的染色体核型分析均检出５９例（５９／３０５，１９．３％）染色体异常，分别为２１三体３１
例、１８三体１１例、Ｔｕｒｎｅｒ综合征（４５，ＸＯ）８例、１３三体２例、２２三体１例、其他性染色体异常６例（４７，
ＸＸＹ，３例；４７，ＸＸＸ，２例；４７，ＸＹＹ，１例）。

此外，与常规的染色体核型分析相比，ＣＭＡ多检出５例致病
性ＣＮＶｓ，同时还检测出１２例ＶＯＵＳ变异。

５例致病性ＣＮＶｓ的结果见表１。

其中１例染色体微重复经染色体核型分析证实为染色体不平衡易位所致，另有１例为ＤＭＤ基因变异经父母验证证实为母亲来源。

２．２　不同ＮＴ值的胎儿染色体异常结果的比较　随着ＮＴ厚度增加，２．５～２．９ｍｍ组、３．０～３．４ｍｍ组、
３．５～３．９ｍｍ组、４．０～４．９ｍｍ组、≥５．０ｍｍ组胎儿染色体异常发生率依次增加，差异有统计学意义。

见
表２。

表１　ＮＴ增厚孕妇ＣＭＡ检测致病性微缺失、微重复结果患者年龄（岁）ＮＴ（
ｍｍ）ＣＭＡ
结果
１４３７ａｒｒ３ｐ２１．３１ｐ２１．２（４７，４３０，７３８ ５０，６２８，８０２）
ｘ１
２３１４．７ａｒｒ２２ｑ１１．２１（１８，６４８，８５５ ２１，８００，４７１）ｘ１３２６３．４ａｒｒ９ｐ２４．３ｑ１３（２０８，４５４ ６８，２１６，５７７）ｘ３；
１８ｐ１１．３２ｐ１１．２１（１３６，２２７～１５，０９９，１１６）ｘ１ ４３２３．４ａｒｒ１ｑ２１．２（１４４，８８４，９５４～１４７，８３０，８３０）ｘ１５２７５．５ａｒｒ［ｈｇ１９］Ｘｐ２１．１（３２，６８２，８６１ ３２，９０８，７４９）
ｘ０＃
注： ，４６ＸＸ１８ｄｅｒ（１８）ｔ（９：１８）（ｑ１３：ｐ１１．２１）；＃，男性胎儿，ＤＭＤ；母亲为ＤＭＤ基因３～９号外显子杂合缺失突变携带者。

表２　ＮＴ厚度与胎儿染色体异常发生的关系
分组总例数
染色体
异常
例数
致病性
ＣＮＶｓ
例数
总异常
例数
（％）χ２Ｐ２．５～２．９ｍｍ５４３０３（５．６）２４．９８０．００３．０～３．４ｍｍ９０１１２１３（１４．４）３．５～３．９ｍｍ４９１１０１１（２２．４）４．０～４．９ｍｍ６０１４１１５（２５．０）
≥５．０ｍｍ５２２０２２２（４２．３）
合计３０５５９５６４（２１．０）
２．３　ＮＴ增厚合并超声异常孕妇胎儿染色体异常发生情况的比较　３０５例孕妇中单纯ＮＴ增厚胎儿染
色体异常发生率为１６．４％（４３／２６２），合并有其他异常（伴随有淋巴水囊瘤、单脐动脉、脉络丛囊肿、鼻骨缺失、脑室增宽等超声异常）的胎儿染色体异常发生率为４４．２％（１９／４３），两组间差异有统计学意义（χ２＝１６．２５，Ｐ＜０．０５）。

３　讨论
本研究对３０５例ＮＴ增厚的胎儿进行ＣＭＡ检测，共发现６４例染色体异常，包括２１三体者（３１
例）、１８三体者（１１例）、１３三体者（２例）、Ｔｕｒｎｅｒ综合征者（８例）、２２三体（１例）和其他性染色体异常（６例）；此外，还发现５例经常规染色体核型分析不能检出的致病性ＣＮＶｓ，与Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ等［５］研究结果较为一致。

既往的研究结果表明，随着ＮＴ的增厚，胎儿染色体异常比例逐渐增加［６ ７］。

本研究中ＮＴ值为２．５～２．９ｍｍ、３．０～３．４ｍｍ、３．５～３．９ｍｍ、
４．０～４．９ｍｍ、≥５．０ｍｍ时，胎儿染色体异常率分别为５．６％、１４．４％、２２．４％、２５．０％和４２．３％，亦符合上
述参考文献结果。

目前，国外众多学者将ＮＴ增厚的标准定为≥３．５ｍｍ，然而，在本研究中ＮＴ值为２．５～
３．５ｍｍ的胎儿染色体异常率为１２．３％（１４／１１４）。

而Ｍａｙａ等［８］也建议，在ＮＴ值超过３．０ｍｍ时就应进
行ＣＭＡ检查。

因此，对于ＮＴ增厚进行产前诊断的
临界值的判定标准仍需要更多的实验数据支持。

目前，ＣＭＡ检测越来越多地被用于妊娠早期的产前诊断。

本研究也发现，在妊娠早期ＮＴ增厚的胎儿中，采用ＣＭＡ可以检出约２．０％（５／２４６）的常规染色体核型分析无法检测出的致病性ＣＮＶｓ，略低于
Ｅｇｌｏｆｆ等［９］报道的２．７％。

Ｇｒａｎｄｅ等［１０］对１７项研究进行荟萃（ｍｅｔａ）分析后认为，采用ＣＭＡ技术可以
在染色体核型分析正常的胎儿中多检出４％（９５％
ＣＩ：２％～７％）的致病性ＣＮＶｓ，表明ＣＭＡ能明显提高染色体异常的检出率。

此外，本研究还检出３．９％
（１２／３０５）的ＶＯＵＳ，但由于数据库中具有完整临床资料的病例数有限，产生的ＶＯＵＳ可能会给临床医师的诊断带来新的挑战，因此，应做好检测前的咨询工作［１１］。

临床上对于ＮＴ增厚的胎儿多考虑进行综合征的筛查。

如Ｅｇｌｏｆｆ等［９］对１０７６例胎儿检测后发现
３６例ＣＮＶｓ，其中７例ＣＮＶｓ（５例微重复，２例微缺失）发生于２２ｑ１１．２１区域，此外还发现１例１ｑ２１．１
微缺失；麦明琴等［６］及杜柳等［７］亦在对妊娠早期
ＮＴ增厚胎儿研究时分别发现１例２２ｑ１１．２１区域的微缺失。

而本研究也发现１例２２ｑ１１微缺失的患儿
以及１例１ｑ２１．２区域２．９ＭＢ的微缺失（包含１ｑ２１．１微缺失综合征相关的区域）患儿，表明对ＮＴ增厚的胎儿进行综合征筛查至关重要。

此外，本研究还发现１例ＤＭＤ基因的半合子缺失，经染色体核型分析，患儿母亲为ＤＭＤ基因的杂合缺失携带者。

本研究中ＮＴ增厚的胎儿伴随的超声异常均为超声软指标的异常，但未发现合并严重的结构畸形，分析原因可能与ＮＴ筛查时孕妇的孕周较小，很多结构异常尚不能表现出来有关。

４　参考文献
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（收稿日期：２０１９ ０９ ０９）
（本文编辑：许晓蒙）。