T1083替换NtKRP尾部BD融合载体pGBKT7-TS的构建
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T1083替换NtKRP尾部BD融合载体pGBKT7-TS的构建纪耀坤; 张伟彬; 袁亮
【期刊名称】《《农业科学与技术（英文版）》》
【年(卷),期】2010(011)003
【摘要】[目的]扩增烟草NtKRP基因尾部含T1083替换的片段,将其克隆入pGBKT7载体中。
[方法]以pBI121KE质粒为模板进行PCR反应,将得到的PCR产物凝胶回收后等摩尔混合,取适量作为模板,得到含定点突变的尾部片段。
将该PCR 产物克隆入SmaI线性化的pUC19载体,构建含T1083替换的重组子pUC19Ts。
通过蓝白斑筛选得到的重组子进行BamHI -SmaI双酶切鉴定,将筛选出的正确重组子送交联合基因测序。
将pGBKT7和测序正确的pUC19Ts质粒均用BamHI -SmaI双酶切,分别回收1 320 bp的融合片段和7.3 kb的载体片段进行连接,转化并筛选得到重组子,任意挑取2个单菌培养后提取质粒进行BamHI -SmaI双酶切鉴定。
[结果]成功构建了NtKRP尾部含T1083替换的BD融合质粒载体pGBKT7-TS。
[结论]为进一步研究NtKRP尾部T替换对NtKRP与靶物质结合的影响奠定了实验基础。
【总页数】3页(P62-64)
【作者】纪耀坤; 张伟彬; 袁亮
【作者单位】商丘职业技术学院河南商丘 476100
【正文语种】中文
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