双环醇对肾间质纤维化大鼠的干预作用

双环醇对肾间质纤维化大鼠的干预作用
目的观察单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠在双环醇的干预下，肝细胞生长因子（HGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的动态变化，探讨双环醇延缓肾间质纤维化的可能机制。

方法将60只雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组、模型组、双环醇组，每组各20只，建立单侧输尿管梗阻模型。

双环醇组于术前2 d给予双环醇[200 mg/（kg·d）]灌胃，假手术组、模型组给予等量自来水灌胃。

每组分别在术后3、6、9、14 d时随机处死5只大鼠并取左侧肾组织，行HE染色观察肾组织病理变化，免疫组织化学染色观察HGF、TGF-β1蛋白的表达，RT-PCR法检测肾组织HGF mRNA的表达水平。

结果模型组中HGF蛋白及mRNA表达均呈现早期升高后期降低的趋势，在第6天表达量最高，随后逐渐下降，表达量在术后3、9、14 d与术后6 d比较差异有高度统计学意义（P 75%为4分[5]。

1.2.4 反转录PCR（RT-PCR）Trizol法提取各组肾组织总RNA，行纯度、含量、完整性的鉴定后逆转录扩增cDNA。

以cDNA为模板，根据Genebank提供的上下游引物，PCR扩增mRNA。

扩增条件：94℃ 5 min；94℃45 s、48℃30 s、72℃30 s，32个循环；72℃5 min，4℃保存。

PCR产物行琼脂糖凝胶电泳，并在紫外光下采集图像进行分析。

HGF的相对表达量为特定性扩增产物HGF电泳带与β-actin电泳带峰面积积分值之比。

1.3 统计学方法
应用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P 0.05）。

模型组HGF的表达位置与假手术组基本一致，表达量呈现早期升高、后期降低的趋势，术后3、9、14 d与术后6 d相比，差异有高度统计学意义（P 0.05）。

模型组表达量呈现早期升高后期降低的趋势，在第6天表达量最高，随后逐渐下降，表达量在术后3、9、14 d与术后6 d相比，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。

在相同的时间点，双环醇组与模型组相比，表达量有显著升高（P < 0.01）。

见表4、图4。

表4 各组大鼠肾组织HGF mRNA表达水平比较（x±s）
注：与假手术组比较，★P < 0.01；与模型组比较，▼P < 0.01；与同组术后6 d比较，▲P < 0.01
a：假手术组；b：模型组术后3 d；c：模型组术后6 d；d：模型组术后9 d；e：模型组术后14 d；f：双环醇组术后3 d；g：双环醇组术后6 d；h：双环醇组术后9 d；i：双环醇组术后14 d；M：Marker
图4 各组大鼠肾组织不同时间点HGF mRNA表达
3 讨论
大量的临床实践和实验表明，肾间质纤维化轻重程度是决定肾脏预后的重要因素[6-8]。

因此，防止、减缓、最终逆转肾间质纤维化的发生和发展，是一个全球性的难题。

许多因子及活性物质，均参与了肾脏损伤与修复过程的调控。

其中TGF-β是肾纤维化最关键的细胞因子，TGF-β1表达上调几乎是所有慢性肾脏疾病的共同特征[9-10]。

TGF-β1在肾间质纤维化中的作用主要表现为：①促进细胞外基质成分堆积[11]；②诱导肾间质成纤维细胞增殖，并活化为肌成纤维细胞[12]；③促进肾小管上皮细胞凋亡[13]；④诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化[14]。

致纤维化因子表达增强的同时，抗纤维化因子的丢失可能是肾组织损伤后纤维化的重要因素。

HGF具有强效抗纤维化作用。

HGF和TGF-β1之间存在相互制约、相互拮抗的作用，二者之间的比例决定了组织受损时是得到修复还是纤维化[5]。

HGF能抑制肾间质纤维化发生和发展过程中的多个病理过程，主要表现为：①通过活化P13K/Akt途径以及增加Bcl-xL表达的双重机制，防止肾小管上皮细胞凋亡[15]；②抑制静息状态下肾间质成纤维细胞的活化[16]，防止肾小球系膜细胞激活[17]，阻断肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化[18]；③拮抗肾脏炎性反应的发生和进展[19]；④促进细胞外基质的降解[20]。

双环醇是一种抗肝炎新药，已有研究发现，双环醇对不同类型的肝纤维化动物模型及临床患者的肝纤维化具有明显的抑制作用。

新乡医学院第一附属医院研究发现，双环醇可下调UUO大鼠肾间质中核转录因子-κB（NF-κB）[3、21]、细胞间黏附因子-1（ICAM-1）[21]、结缔组织生长因子（CTGF）[22]、基质金属蛋白酶组织抑制物（TIMP-1）[23]、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）[23]的表达，从而延缓间质纤维化的进程，对肾脏发挥保护作用。

目前应用最广的研究肾小管间质纤维化的动物模型是由单侧输尿管结扎建立的UUO动物模型[24]。

本试验观察到，在相同时间点，双环醇组与模型组相比病变面积显著降低（P < 0.01）。

模型组中HGF蛋白及mRNA的表达均呈现早期升高后期降低的趋势，在术后第6天表达量最高，随后逐渐下降（P < 0.01）。

而TGF-β1蛋白的表达量呈现随梗阻时间延长逐渐升高趋势（P < 0.01）。

在相同时间点，双环醇组与模型组相比，HGF蛋白及mRNA的表达量显著升高（P < 0.01），而TGF-β1蛋白表达量有显著降低（P < 0.01）。

综上所述，双环醇可以缓解UUO大鼠的肾间质纤维化，其可能机制是通过上调HGF及下调TGF-β1的表达而发挥肾脏保护作用。

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