微生物检验常规培养基的制作资料

? 增菌培养基 多为液体培养基，主要目的是增 加标本中目的菌数量，以提高目的菌检出率。
? 选择性培养基 在培养基中加入抑制物质，使 之具有选择性，有利于目的菌检出和识别，而 抑制其他非目的菌生长或者使其生长不佳。
加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基：分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生
1.1.3定容
? 待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所 需体积。
? 问：如某种药品用量太少如何称量？ ? 答：可先配置成较浓溶液，然后按比例吸收一
定体积溶液，加入到培养基中。
1.1.4调PH
? 一般用pH试纸测定培养基 pH。用剪刀剪出一 段pH纸，然后用镊子夹取此段 pH试纸，在培 养基中蘸一下，观察其 pH范围，如培养基偏 酸或偏碱时， 可用1mol/LNaOH 或1mol/LHCl 溶液进行调节 。调节pH时，应逐渐加入 NaOH 或HCl溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养 基中成分。边加边搅拌，并不时用 pH试纸测 试，直至达到所需 pH为止。
? 其中，有的需要量极微，如 Mn、Cu等。这些 无机离子除作为构成菌体的成分外，还是酶的 激活剂，并起维持一定渗透压的作用。
（2）水分
? 细菌细胞75%-80% 由水组成。水是细菌营养、 代谢过程中不可缺少的物质；水又是良好的溶 剂，培养基中许多营养物质均需溶于水才能被 细菌吸收。蒸馏水和离子交换水不含杂质，在 制备培养基时，一般需使用蒸馏水和离子交换 水。无蒸馏水可以用自来水代替，因其中含有 某些微量元素，有利于细菌生长，但应先煮沸 使部分盐类沉淀，过滤澄清后再使用。
培养基的分类
? 1.按用途分类： ? 基础培养基、营养培养基、增菌培养基 、选
择性培养基 、鉴别培养基 、显色培养基
? 基础培养基 含细菌所需最基本营养成分，可 供大多数细菌生长。常用的如含适量蛋白胨、 氯化钠、磷酸盐， pH7.2-7.6 的营养肉汤和营 养琼脂。
? 营养培养基 基础培养基再加入一些其他营养 成分，如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生 长因子等，以满足营养要求较高的细菌生长繁 殖所需要的营养。
? 肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的 培养基，属于半合成培养基。其主要成分是牛 肉膏、蛋白胨和 NaCl。它们分别提供微生物 生长繁殖所需要的碳源、氮源、能源、生长因 子和无机盐等。
? 培养基都是水溶液，这是因为一切生物细胞都 必须要有水的参与。
? 高氏一号培养基是一种用于培养放线菌的合成
缺点：营养成分难以控制、实验结果的重复性较
差。
? 天然培养基如培养细菌的牛肉膏蛋白胨培养基； 血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸 液）。
? 合成培养基 :
? 优点：化学成分及其含量明确、实验的可重复 性好；
? 缺点：配制繁琐、成本较高。
培养基的主要成分及其作用
? （1）营养物质：细菌在生长繁殖过程中所需 要的营养成分，因细菌种类不同而异，有的对 营养要求不高，仅需碳源、氮源即可；有的则 要求较高，除碳源、氮源外，还需要鸡蛋、血 清、血液等。
2）牛肉浸液
? 牛肉浸液是将新鲜不含脂肪、肌膜、肌腱等精 牛肉浸泡煮沸制成的肉汁。包括两类浸出物。 一类为含氮可溶性浸出物（如肌酸、尿酸、腺 苷酸、黄嘌呤、核苷酸、尿素、谷氨酸、肌肽 等），另一类为非含氮浸出物质（如肝糖、磷 酸己糖、乳糖、琥珀酸、肌醇、脂肪与无机盐 等）。牛肉浸液可作为细菌氮源和碳源，但因 含氮物质较少，尚不能满足细菌生长需要。
（3）凝固物质
? 配制固体培养基的凝固物质有琼脂、明胶和蛋 白、血清等，最常用琼脂，特殊目的也可用明 胶等。
? 琼脂是从石花菜等海藻中提取出来的一种胶状 物质，属多糖类，一般不被细菌分解利用，无 营养价值。琼脂在 98摄氏度以上融化，在低于 45摄氏度时则凝固成胶冻状态。用途不同的培 养基中琼脂含量不同，固体培养基含量为 2%2.5%，半固体培养基琼脂含量为 0.3%-0.5% 。
?如伊红美蓝培养基可鉴别大肠杆菌其代谢产物有机酸与伊红美蓝结合使菌落呈现绿色金属6微生物检验常规培养基的制作9152020大肠杆菌emb平板7微生物检验常规培养基的制作9152020沙门氏菌bs琼脂8微生物检验常规培养基的制作9152020沙门氏菌xld琼脂9微生物检验常规培养基的制作9152020?显色培养基细菌在生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性酶按酶的特性选用相应底物和指示剂将其配制在相关培养基中
? 蛋白胨是动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而 产生的中间产物。蛋白质消化越彻底，含氨基 酸越多，越有利于细菌生长繁殖。由于蛋白质 来源不同，消化程度不同，制成的胨质量相差 很大。通常的商品蛋白胨是由胃蛋白酶消化蛋 白质而制成的含胨、多肽及多种氨基酸的混合 物，可供大多数细菌生长需要。其缺点是含某 些氨基酸较少。胰蛋白胨是胰蛋白酶在碱性条 件下消化蛋白质所获得的分解产物，其中含有 很多氨基酸和多肽，特别是富含色氨酸，更适 合作靛基质试验用的蛋白胨水。
需的各种药品。先按培养基配方计算各成分的用量然 后进行准确称量。 ? 染料、指示剂、胆盐等物质何时加入？调整pH后。 ? 1.1.2溶化 将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量 水，然后加热溶解，并不断用玻璃棒搅动。 ? 含铜大于0.3mol/L时，细菌不易生长；含铁大于 0.14mol/L妨碍细菌产生毒素。
? 指示剂是为方便了解和观察细菌是否利用和分 解培养基中糖、醇类物质，而在培养基中加入 的成分。
? 常用指示剂多为酸碱指示剂，如酚红、溴甲酚 紫、溴麝香草酚蓝、中性红、甲基红、碱性复 红等，还有氧化还原指示剂，如亚甲蓝。
? 此外，一些新的氧化还原指示剂如四氮唑盐类 等，也已广泛用于细菌快速培养和鉴定以及快 速药敏试验方面。
固体培养基 :含1.5-2%琼脂，用于细菌的分离、 鉴定、菌种保存及细菌疫苗制备等多方面
液体培养基
固体培养基
半固体培养基
液体培养基： 主要用于工业生产；
固体培养基： 主要用于分离、鉴定等；
半固体培养基： 主要用于观察、保藏菌种。
3.按成分分类
? 合成培养基 由化学物质和成分已知的各种物 质所组成，可以是无机盐和有机物质等。
7）生长因子
? 在细菌生长繁殖过程中，需要一定的辅助生长 因子。生长因子根据化学结构及代谢功能不同菌对这些物质需要量不大，但如缺少，某些 细菌就不能生长。通常肝浸液、肉浸液、酵母 浸液和血液中含有大部分生长因子，但有时需 要另外加入。
8）无机盐类
? 制备培养基时常加入氯化钠和磷酸盐，这是因 为细菌生长繁殖需要无机盐类，如 K、Na、 Mg、Fe、磷酸盐、氯化物等。
? 天然培养基 由化学物质不完全清楚或各批物 质很难一致的天然物质所组成，如蛋白胨、牛 肉膏、血液、马铃薯等。
? 半合成培养基 由不明化学成分的天然物质和 已知化学成分的物质组成
天然培养基 化学成分不明确，主要用于工业生产；
合成培养基 化学成分明确，主要用于分类、鉴定。
? 天然培养基： 优点：取材便利、营养丰富、配制简便；
5）血液
? 培养基中加入血液，可增加蛋白质、多种氨基 酸、糖类、无机盐等营养成分，同时还能提供 辅酶、血红素等特殊生长因子，供某些对营养 要求高的细菌生长繁殖之用。此外，含血液的 培养基还可以用于观察细菌溶血反应，作为细 菌鉴定的一项指标。
血平板溶血现象
6）鸡蛋和动物血清
? 鸡蛋和动物血清对一部分细菌来说是必须营养 成分，可作为养料直接被细菌利用。常用于制 备特殊培养基，如培养结核杆菌的罗氏培养基 和白喉棒状杆菌的吕氏血清培养基等。此外鸡 蛋和血清还具有凝固剂作用，便于观察细菌菌 落形态和生长情况。
培养基。培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能
源，KNO3作为氮源， K2HPO4、MgSO4和 FeSO4作为无机盐等。
? 马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和 霉菌，为半合成培养基。食品检测国标使用虎 红培养基。
1.培养基的配制过程
? 1.1液体培养基的配制 ? 1.1.1称量 一般可用1/100粗天平称量配制培养基所
3）牛肉浸膏
? 为牛肉浸液经长时间加热，蒸发掉水分后浓缩 而成的膏状制品。牛肉浸液中的不耐热物质如 糖类等已被破坏，因而其营养价值不如肉浸液， 但其因不含糖和使用方便，故可作肠道细菌鉴 别培养基基础成分。
4）糖、醇类
? 糖类是细菌生长繁殖所需的碳源、能源的基本 成分。最常用的单糖是葡萄糖、阿拉伯糖等； 双糖是乳糖、蔗糖等；多糖有菊糖和淀粉；醇 类有甘露醇、卫矛醇等。其他的糖类和醇类主 要用于发酵反应以及鉴定细菌。糖不耐热，过 久的高热会被破坏，在碱性及与氮源一起高温 情况下，破坏更快，制备这类培养基时，通常 不用高温，并与培养基中其他成分分别灭菌。
?
真菌 pH为： 5.0-6.0 。
第二节 实验内容
一、实验目的
? 掌握在真菌、细菌、放线菌分离培养工作中常 用的合成和半合成培养基配制的一般原理、方 法、程序、环节及要求和注意事项。
二、实验原理
? 培养基的配制是进行微生物学实验工作的重要 基础。由于微生物种类及代谢类型的多样性， 因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它 们的配方组成及配制方法虽各有差异 ,但一般 培养基配制的常规程序却大致相同，例如器皿 的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作， 培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基 的无菌检查等基本环节。
? 注：一般将培养基 pH调整高出所需值的 0.10.2个pH单位，经高压灭菌后，其 pH要降低 0.1-0.2 个单位。
1.1.5过滤
? 用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要 求时，此步可省去。
1.2固体培养基的配制
培养基配制原则：
? （1）目的要明确：根据微生物的种类、培养 目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微 生物对培养物质的需求不同。
? （2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度
和比例。
? （3）pH要适宜：各种微生物适宜生长的 pH范 围不同。
?
细菌 pH为： 6.5-7.5 ；
?
放线菌 pH为： 7.5-8.5 ；
物 加入氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养
基：分离杂交瘤细胞
? 鉴别培养基 利用各种细菌分解糖类和蛋白质 的能力及其代谢产物的不同，即生化反应能力 不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示 剂，以此来区别各种细菌。主要用于检查各种 细菌的生化反应。
? 如伊红—美蓝培养基可鉴别大肠杆菌，其代谢 产物有机酸与伊红 —美蓝结合，使菌落呈现绿 色金属
（4）抑制剂和指示剂
? 抑制剂和指示剂是由于选择、鉴定和判断结果 的需要而加入到培养基中的物质，并不为细菌 生长繁殖所需。
? 抑制剂加入目的是抑制非检出菌生长或其少生 长，以利于检出菌生长。根据所要抑制选择不 同抑制剂。常用抑制剂有胆盐、煌绿、玫瑰红 酸、亚硫酸钠、四硫磺酸盐、叠氮钠及一些染 料和某些抗生素等。在选择抑制剂时需注意抑 制剂应具有选择性抑制作用。
大肠杆菌EMB平板
沙门氏菌BS琼脂
沙门氏菌XLD琼脂
? 显色培养基 细菌在生长繁殖过程中可合成和 释放某些特异性酶，按酶的特性，选用相应底 物和指示剂，将其配制在相关培养基中。根据 细菌反应后出现的菌落颜色变化，确定待分离 可疑菌株，有助于细菌快速诊断。
副溶血性弧菌
副溶API 20E
2.按物理性状分类
? 主要有蛋白胨、牛肉浸液、牛肉浸膏、糖醇类、 血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类 等。
? 1）蛋白胨： 蛋白胨是培养基中作为氮源应用 最广泛的基本成分 ，它用于合成菌体蛋白质、 酶类以及细菌生长繁殖。其特点是易溶于水， 吸水性强，故须干燥密封保存。此外，蛋白胨 受高热不凝固，遇酸不沉淀，在培养基中具缓 冲作用，并含有各种游离氨基酸，易被细菌所 利用。
常规培养基的制作
第一节 基本理论
? 培养基的定义： ? 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物
所需要的各种营养物质，由人工配制而成的营 养基质，它专供微生物培养、分离、鉴别、研 究和保存用。 ? 培养基的用途： ? 主要用于繁殖及分离纯化细菌、传代和保存菌 种、鉴别细菌种属、研究细菌生理及生化特性、 制造菌苗、疫苗和其他微生物制剂等。
液体培养基 流体培养基 半固体培养基 固体培养基
液体培养基 :不含凝固剂，利于菌体的 快速繁殖、 代谢和积累产物
流体培养基 :含0.05-0.07% 琼脂粉，可降低空气 中氧进入培养基的速度，利于一般厌氧菌的生 长繁殖
半固体培养基 :含0.2-0.8%琼脂粉，多用于细菌 的动力观察、菌种 传代保存 及贮运 细菌标本材 料；