可溶性Fas分子与反复自然流产及自身抗体的关系

文章编号：１００３－８５０７（２００８）１１－２１６０－０３中图分类号：Ｒ３９２．１１文献标识码：Ａ【临床与预防】可溶性Ｆａｓ分子与反复自然流产及自身抗体的关系
刘辉，余方流，董群，陈其御
摘要：［目的］探讨血清可溶性Ｆａｓ分子（ｓＦａｓ）与反复自然流产（ＲＳＡ）及抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）、抗宫内膜抗体（ＥｍＡｂ）的关系。

［方法］采用酶联免疫吸附法检测６２例ＲＳＡ组、３４例正常妊娠妇女组血清ｓＦａｓ及ＡＣＡ、ＥｍＡｂ。

［结果］（１）ＲＳＡ组ＡＣＡ与ＥｍＡｂ共同出现的阳性率为１４．５２％，明显高于正常妊娠妇女组（Ｐ﹤０．０５）；ＲＳＡ组ＡＣＡ与ＥｍＡｂ的出现呈正相关，Ｒｓ为０．５４２（Ｐ﹤０．０１）；（２）ＲＳＡ组ｓＦａｓ水平为（１０５１．４４±４２０．８７）ｐｇ／ｍｌ，明显高于正常妊娠妇女组的（５２０．１９±２５３．８２）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ﹤０．０１）；ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同阳性ＲＳＡ组ｓＦａｓ水平为（１３０７．７０±３５６．４５）ｐｇ／ｍｌ，明显高于非ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同阳性ＲＳＡ组（１００７．９２±４１８．２７）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ﹤０．０５）。

［结论］ＡＣＡ与ＥｍＡｂ的共同出现是ＲＳＡ发生的危险因素，两种抗体的产生呈正相关；血清ｓＦａｓ水平升高是ＲＳＡ发生以及两种自身抗体共同出现的可能原因。

关键词：自然流产；ｓＦａｓ；抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）；抗宫内膜抗体（ＥｍＡｂ）
ＴＨＥＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＢＥＴＷＥＥＮＳＯＬＵＢＬＥＦＡＳＲＥＣＥＰＴＯＲＡＮＤＲＥＣＵＲＲＥＮＴＳＰＯＮＴＡ－ＮＥＯＵＳＡＢＯＲＴＩＯＮＡＮＤＡＵＴＯＡＮＴＩＢＯＤＹＬＩＵＨｕｉ，ＹＵＦａｎｇ－ｌｉｕ，ＤＯＮＧＱｕｎ，ｅｔａｌ．（Ｄｅｐａｒｔ－ｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＷａｎｎａｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｗｕｈｕ２４１００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｓｏｌｕｂｌｅＦａｓ（ｓＦａｓ）ｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄｒｅｃｕｒｒｅｎｔｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｓＦａｓａｎｄＡＣＡａｎｄＥｍＡｂ．［Ｍｅｔｈｏｄｓ］６２ｃａｓｅｓｏｆＲＳＡｐａｔｉｅｎｔｓ（ａｓＲＳＡｇｒｏｕｐ）ａｎｄ３４ｃａｓｅｓｏｆｎｏｒｍａｌｐｒｅｇｎａｎｔｗｏｍｅｎ（ａｓｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ．ｓＦａｓ，ＡＣＡａｎｄＥｍＡｂｉｎｔｈｅｉｒｓｅｒａｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．［Ｒｅｓｕｌｔｓ］（１）ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆＡＣＡａｎｄＥｍＡｂｉｎＲＳＡｇｒｏｕｐｗａｓ１４．５２％，ｗｈｉｃｈｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｎｏｒｍａｌｐｒｅｇｎａｎｔｗｏｍｅｎｇｒｏｕｐ（Ｐ﹤０．０５）．ＴｈｅｒｅｗａｓａｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＡＣＡａｎｄＥｍＡｂｉｎＲＳＡｇｒｏｕｐ（Ｒｓ＝０．５４２，Ｐ﹤０．０１）．（２）ｓＦａｓｉｎＲＳＡｇｒｏｕｐｗａｓ（１０５１．４４±４２０．８７）ｐｇ／ｍｌ，ｗｈｉｃｈｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ（５２０．１９±２５３．８２）ｐｇ／ｍｌｉｎｎｏｒｍａｌｐｒｅｇｎａｎｔｇｒｏｕｐ（Ｐ﹤０．０１）．ＩｎｔｈｅＲＳＡｇｒｏｕｐｗｈｉｃｈＡＣＡａｎｄＥｍＡｂｗｅｒｅｉｎｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｐｌｕｓ，ｓＦａｓｌｅｖｅｌｗａｓ（１３０７．７０±３５６．４５）ｐｇ／ｍｌ．ＡｎｄｉｎｔｈｅＲＳＡｇｒｏｕｐｗｈｉｃｈＡＣＡａｎｄＥｍＡｂｗｅｒｅｎｏｔｉｎｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｐｌｕｓ，ｓＦａｓｌｅｖｅｌｗａｓ（１００７．９２±４１８．２７）ｐｇ／ｍｌ．Ｔｈｅｆｏｒｍｅｒｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｌａｔｅｒ（Ｐ﹤０．０５）．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］ＴｈｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｉｔｙｏｆＡＣＡａｎｄＥｍＡｂｈａｓｈｉｇｈｒｉｓｋｆｏｒＲＳＡｈａｐｐｅｎｉｎｇ．ＡｎｄｔｈｅｒｅｉｓａｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＡＣＡａｎｄＥｍＡｂ．ＴｈｅｒｉｓｅｏｆｓＦａｓｌｅｖｅｌｉｎｓｅｒｕｍｍａｙｂｅｏｎｅｏｆｔｈｅｃａｕｓｅｓｏｆＲＳＡｈａｐｐｅｎｉｎｇ．ＡｎｄｉｔｃａｕｓｅｓｔｈｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｉｔｙｏｆＡＣＡａｎｄＥｍＡｂｏｆＲＳＡ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎ；ｓＦａｓ；Ａｎｔｉｃａｒｄｉｏｌｉｐｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ（ＡＣＡ）；Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌａｎｔｉｂｏｄｙ（ＥｍＡｂ）
免疫学因素在反复自然流产（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒ－ｔｉｏｎｓ，ＲＳＡ）病因中占重要地位，其中３０％与自身抗体有关，被称为自身免疫型ＲＳＡ［１］。

包括ＡＣＡ、ＥｍＡｂ在内的多种自身抗体与ＲＳＡ的发生相关。

临床发现ＲＳＡ患者体内会同时出现多种自身抗体，其原因及自身抗体之间的相互关系目前尚不明确。

近年来Ｆａｓ／ＦａｓＬ与母胎免疫耐受及ＲＳＡ发生机制的关系逐渐被重视，如Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的ＡＩＣＤ（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ，ＡＩＣＤ）异常会导致母体对胚胎的免疫排斥增强［２］。

可溶性Ｆａｓ分子（ｓＦａｓ）作为Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的细胞凋亡的抑制因子是否造成了妊娠耐受的破坏，与ＲＳＡ的发生及ＲＳＡ自身抗体的产生有关呢？本研究试图探明ｓＦａｓ与ＲＳＡ的发生及ＲＳＡ患者体内抗心磷脂抗体、抗宫内膜抗体产生的关系，以进一步探讨ＲＳＡ的免疫学机制。

基金项目：安徽省教育厅自然科学研究基金资助项目（２００３ｋｊ３１１）
作者简介：刘辉（１９６８－），女，讲师，研究方向：生殖免疫
作者单位：皖南医学院免疫学教研室，芜湖，２４１００１１材料与方法
１．１研究对象
１．１．１ＲＳＡ组６２例，其中ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同阳性ＲＳＡ组９例，非ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同阳性ＲＳＡ组５３例。

为２００４年４月￣２００６年１０月就诊于本市妇幼保健院的末次流产２个月后的患者，年龄２３￣４０岁，连续２次或２次以上的自然流产，均为３个月以内的早期流产。

通过检测染色体、ＴＯＲＣＨ系列、激素水平等以及妇科检查，排除了遗传、感染、内分泌、子宫畸形等因素。

１．１．２对照组３４例，为同期选取的正常妊娠妇女，孕１２￣２０周，年龄２２￣３８岁，既往无不孕、自然流产等不良妊娠史，无免疫性疾病。

无阴道流血、腹痛等先兆流产的症状和体征，Ｂ超检查胚胎发育正常。

１．２实验方法
１．２．１标本采集采肘静脉血３ｍｌ，分离血清，－２０℃保存待测。

１．２．２试剂与操作ｓＦａｓ检测试剂盒购于晶美生物工程有限公司（ＧｅｎｅＭａｙ，Ｉｎｃ进口原装），采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法检测。

严格按操作说明进行。

检测ｓＦａｓ用１︰１０的血清，血清
标本用标本稀释液稀释，用５５０型酶联免疫检测仪（伯乐太平洋有限公司）测ＯＤ值（４５０ｎｍ波长），用标准品制备标准曲线。

ＡＣＡ、ＥｍＡｂ检测试剂盒购于南京军区总医院检测中心，采用ＥＬＩＳＡ间接法检测，用５５０型酶联免疫检测仪（伯乐太平洋有限公司）测ＯＤ值（４５０ｎｍ波长），以大于阴性对照孔ＯＤ值的２．１倍为阳性标准。

１．２．３方法学质控血清样本为同一批测定，以同一样本同一时间检测１０次计算批内差异。

批内变异系数为９．０％。

１．２．４统计学处理阳性率比较采用χ２检验及Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ精确概率法；两种抗体的关联采用Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析；计量资料采用ｔ检验。

２结果
２．１ＲＳＡ组与正常妊娠组血清ＡＣＡ、ＥｍＡｂ的阳性率见表１。

ＲＳＡ组ＡＣＡ、ＥｍＡｂ的阳性率较正常妊娠组明显增高（Ｐ﹤０．０５）；ＲＳＡ组ＡＣＡ与ＥｍＡｂ共同出现的阳性率为１４．５２％，较正常妊娠组明显增高（Ｐ﹤０．０５）。

２．２ＡＣＡ与ＥｍＡｂ之间的关系
见表２
采用Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析，Ｒｓ＝０．５４２，Ｐ﹤０．０１，ＡＣＡ与ＥｍＡｂ呈正相关。

２．３各ＲＳＡ组、正常妊娠组血清ｓＦａｓ水平比较
ＲＳＡ组ｓＦａｓ水平为（１０５１．４４±４２０．８７）ｐｇ／ｍｌ，明显高于正常妊娠组（５２０．１９±２５３．８２）ｐｇ／ｍｌ，两者比较差异有统计学意义（ｔ＝６．２５，Ｐ﹤０．０１）；ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同阳性ＲＳＡ组ｓＦａｓ水平为（１３０７．７０±３５６．４５）ｐｇ／ｍｌ，明显高于非ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同阳性ＲＳＡ组（１００７．９２±４１８．２７）ｐｇ／ｍｌ，两者比较差异有统计学意义（ｔ＝２．０２５，Ｐ﹤０．０５）。

３讨论
３．１ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同出现与ＲＳＡ
已有许多报道表明ＡＣＡ、ＥｍＡｂ是ＲＳＡ发生的可能原因，由表１知ＲＳＡ组ＡＣＡ、ＥｍＡｂ的阳性率较正常妊娠组明显增高，进一步支持这种观点，不再赘述。

但本研究发现，ＲＳＡ组ＡＣＡ与ＥｍＡｂ共同出现的阳性率与正常妊娠组比较，差异有显著性。

经相关性分析，两种抗体的出现呈正相关。

提示Ａ－ＣＡ与ＥｍＡｂ的共同出现是ＲＳＡ发生的危险因素，两种抗体的共同出现并非偶然。

ＡＣＡ是抗心磷脂抗体，而ＥｍＡｂ是抗子宫内膜抗体，局部组织的炎症、损伤可能是两种抗体各自产生的诱因［３］，可是ＡＣＡ和ＥｍＡｂ是针对两种不同自身成分的自身抗体，为什么常共同出现于ＲＳＡ患者血清中呢？由此可推测，两种自身抗体的异常出现必定存在某种共同的机制。

自身抗体产生的可能原因复杂，有包括基因缺陷的遗传因素，有外伤、感染等各种刺激引起的免疫系统功能异常的因素等等［４］。

我们认为，ＲＳＡ患者体内单一抗体的产生可能主要是由于外伤、感染等刺激致自身成分变性而诱导了自身免疫；而ＲＳＡ患者体内两种或两种以上自身抗体共同出现可能是因为基因缺陷等原因致免疫功能紊乱造成的自身免疫。

鉴于近年来的研究提示一些自身免疫病患者多种自身抗体的产生与ｓＦａｓ／ＦａｓＬ有关，那么ＲＳＡ患者共同出现ＡＣＡ、ＥｍＡｂ是否也与ｓＦａｓ／ＦａｓＬ有关？
３．２ｓＦａｓ升高与ＲＳＡ
近年研究发现，Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的细胞凋亡参与母胎免疫耐受机制的形成。

有报道孕早期和晚期的滋养细胞上有ＦａｓＬ的表达；ＦａｓＬ及其ｍＲＮＡ在滋养细胞上高表达，合体滋养细胞周围有凋亡白细胞的存在［５］。

正常妊娠滋养细胞表达ＦａｓＬ分子，使表达Ｆａｓ分子的免疫细胞凋亡，在胎盘或蜕膜界面赋于免疫豁免。

Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统发生异常，影响母胎免疫耐受。

反复自然流产患者滋养细胞ＦａｓＬ表达下降，推测ＦａｓＬ表达下降将不足以使外周血中Ｆａｓ＋淋巴细胞凋亡，滋养细胞易受到攻击，导致流产［６］。

ｓＦａｓ是一种因Ｆａｓ基因转录过程中ｍＲＮＡ剪切方式改变，编码合成跨膜区不完整或缺失而产生的可溶性Ｆａｓ（ＳｏｌｕｂｌｅＦａｓＲｅｃｅｐｔｏｒ，ｓＦａｓ）分子，存在于血清中，对凋亡具有调节作用［７］，ｓＦａｓ作为凋亡抑制因子，与ＦａｓＬ结合后，不能传递凋亡信号，可阻断ＦａｓＬ与活化的淋巴细胞膜上Ｆａｓ的结合［８］，血清中高水平的ｓＦａｓ抑制Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的细胞凋亡，导致母体免疫系统反应性升高，对胚胎的免疫排斥增强及免疫细胞的不适当激活。

如有报道，重度子痫前期患者血清ｓＦａｓ水平显著升高［９］。

ｓＦａｓ是否与母胎免疫耐受的打破、自然流产的发生有关呢？本研究结果显示，反复自然流产患者血清ｓＦａｓ水平高于正常妊娠妇女，差异有显著性。

提示ｓＦａｓ参与了ＲＳＡ的发生，正常妊娠过程中滋养层细胞高表达ＦａｓＬ，诱导局部浸润的Ｆａｓ＋淋巴细胞凋亡，以减少淋巴细胞对胚胎组织的攻击，维持妊娠耐受。

我们认为，如果血清中可溶性ｓＦａｓ水平升高，封闭了胎盘滋养层细胞上的ＦａｓＬ，即使胎盘滋养层细胞高表达ＦａｓＬ，
也不能使足够的局部浸润的淋巴细胞凋亡。

从而使绒毛
和蜕膜组织受到免疫攻击，导致母胎免疫耐受难以维持而发生免疫排斥，引起流产。

另外血清中可溶性ｓＦａｓ水平升高，过多的ｓＦａｓ与淋巴细胞膜表面Ｆａｓ分子竞争结合ＦａｓＬ，抑制了Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的ＡＩＣＤ，自身反应性外周淋巴细胞凋亡减少而打破外周免疫耐受。

目前认为母胎免疫耐受现象的本质是外周免疫耐受［１０］，外周免疫耐受的破坏，可能会打破妊娠耐受而导致流产。

３．３ｓＦａｓ升高与ＡＣＡ、ＥｍＡｂ的共同出现
既然ｓＦａｓ可以通过抑制Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的ＡＩＣＤ，使外周耐受机制破坏，从而打破妊娠耐受，参与了ＲＳＡ的发生，那么ＲＳＡ患者体内自身抗体ＡＣＡ、ＥｍＡｂ的产生是否为该外周耐受机制破坏的产物呢？本结果显示，ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同阳性ＲＳＡ组ｓＦａｓ水平明显高于非ＡＣＡ和ＥｍＡｂ共同阳性ＲＳＡ组，差异有显著性。

研究中还发现，ｓＦａｓ水平在抗体阳性ＲＳＡ组（包括双阳性与单阳性）与抗体阴性ＲＳＡ组之间比较并无显著性差异。

由此可推测，单一的ＡＣＡ或ＥｍＡｂ的产生可能与ｓＦａｓ没有关系，它们或许有各自产生的具体原因，如外伤、感染等刺激致自身成分变性而诱生了自身抗体。

不一定是Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的ＡＩＣＤ受到抑制，外周耐受机制破坏所造成的。

但ＡＣＡ和ＥｍＡｂ两种抗体共同出现的原因，可能与ｓＦａｓ的作用有关，正如前述，ｓＦａｓ通过抑制Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的ＡＩＣＤ，使外周耐受机制破坏，多种自身抗体由此产生。

我们认为，ＡＣＡ与ＥｍＡｂ的共同出现是ＲＳＡ发生的危险因素，两种抗体的产生呈正相关；血清ｓＦａｓ水平升高可能是ＲＳＡ发生的一个原因，并且与ＲＳＡ多种自身抗体共同出现有关。

ｓＦａｓ水平的升高导致ＲＳＡ的可能机制是通过破坏外周免疫耐受或者抑制胎盘局部浸润的淋巴细胞凋亡等，而ＡＣＡ和ＥｍＡｂ等多种自身抗体的共同出现可能是ｓＦａｓ水平升高、外周免疫耐受破坏的产物。

那么ｓＦａｓ水平的升高是否还影响到其他自身抗体的产生？又是什么原因引起了反复自然流产患者血清中ｓＦａｓ水平的升高？这种变化与反复自然流产的其他免疫学因素之间又有何种关系？这些问题有待进一步探索。

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（收稿日期：２００８－０１－１２）［１］
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