高产淀粉酶菌株的分离鉴定优秀PPT
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培养基：平板筛选培养基: 可溶性淀粉2 最2，适1生21长℃温灭度菌高15，m过in。高的温度抑制了其他细菌的生长。
形2%态可观溶察性淀粉，即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中， pH调至7.
掌菌握源土 及壤培样养品基中，微生物菌种分离和筛选技术的实验设计方法。
膏 0 .5 % 、琼脂粉1.5~2% 、121度灭 1初稀步释筛度选对：土将壤检细测菌试菌剂落（形路成戈的氏影碘响液）加入到平板中，涂布均匀，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株，记住其编号，以
3便，进即行不下同一菌步悬的液复稀筛释。度之间没有严格的比例关系，其原因可能是操作不当和本实验的精确度本来就不高。 形显态微观 镜察观察菌体特征:杆状 ,直或接近直 ,多数运动 ,有侧生鞭毛 ,芽孢中生 ,椭圆形。
菌源：选择含淀粉丰富的土壤为最佳。 将高菌产悬 淀液粉进酶行的加菌热一般10为0℃芽处孢理杆，菌然对后其按形常态规观方察法：作菌稀落释较和大培,中养央，有结皱果褶表,明圆：形加、热规可则显、著无降光低泽菌、悬灰液白中色的,不细透菌明数。量，但具有淀粉酶活性的
细菌菌源比 ：例选由择5含2淀％粉提丰高富到的74土％壤，为加最热佳处。理可显著提高菌悬液中淀粉酶活性细菌的比例说明淀粉酶活性细菌的最适生长温度比其他细菌的
% 、蛋白胨1 % 、NaCl 0 .5 % 、牛肉 3高，产即淀不粉同酶菌的悬菌液一稀般释为度芽之孢间杆没菌有对严其格形的态比观例察关：系菌，落其较原大因,可中能央是有操皱作褶不,圆当形和、本规实则验、的无精光确泽度、本灰来白就色不,不高透。明。
2观，察1结21果℃时灭要菌注15意m滴in。加药量和反应时间。
分离：取 1 ×10 ^5、1 ×10^6 、1 ×10^7 稀释液涂布于平板 筛选培养基表面，37℃培养72h。等长出菌落后，根据菌落不同 挑取菌落进行保存并编号。
初步筛选：将检测试剂（路戈氏碘液）加入到平板中，涂布均匀， 菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株ຫໍສະໝຸດ 记住其编号， 以便进行下一步的复筛。
分离培养基液体培养基：采用牛肉膏蛋 等长出菌落后，根据菌落不同挑取菌落进行保存并编号。 白胨固体培养基加0.2%可溶性淀粉，即 牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、可溶 性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中， pH调
实验步骤
样品稀释：称取土壤样品1g溶于9mL 无菌水中 ,或水样品 5mL 溶 于45mL无菌水中 ,分别用无菌水梯度稀释至 1 ×10 ^7倍。
连。
1 稀释度对土壤细菌菌落形 成的影响
用营养琼脂培养基分别培
养不同稀释度的土壤菌悬液， 结果表明（图1） ，10-2 10-3 10-4 10-5 10-6稀释度 中形成的菌落数分别为240 124 51 33 25，其相差的倍数 分别为1.9 2.4 1.5 1.3，即不 同菌悬液稀释度之间没有严 格的比例关系，其原因可能 是操作不当和本实验的精确 度本来就不高。
形态观察
高产淀粉酶的菌一般 为芽孢杆菌对其形态 观察：菌落较大 ,中 央有皱褶,圆形、规 则、无光泽、灰白 色 ,不透明。显微镜 观察菌体特征:杆状 , 直或接近直 ,多数运 动 ,有侧生鞭毛 ,芽 孢中生 ,椭圆形。
注意事项
要严格按照培养基配方配制培养基，防 止杂菌污染。
观察结果时要注意滴加药量和反应时间。 严格无菌操作，防止污染情况的发生。 分离菌株时，稀释度不够导致水解圈粘
菌20分钟. 将分在离淀 菌粉株培时养，基稀中释生度长不的够细导菌致菌水落解分圈别粘进连行。进一步的划线分离，挑取单个生长的菌落接种到试管中保存，然后在含淀粉培养基的培养
皿形中态加 观入察碘液，观察透明圈的大小，初步选定透明圈较大的细菌菌落为淀粉酶活性较高的菌株。 高4 产淀淀粉粉酶酶活菌性株细的菌分的离获鉴得定与初步筛选
实验原理
实验材料及器材
锥形瓶、移液管、试管、接种环、涂布棒、 培养皿、天平、灭菌锅、培养箱、摇床、离 心机等
菌源及培养基
在培养基中加入某种特殊化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学 为 物了质了发解 生土 特壤 定中 的含 化淀 学粉 反酶应菌 ，株 产的 生比 明例 显， 的选 特择 征了 性营 变养 化琼 ，脂 根培 据养 这基 种培 变养 化基 可由 将于 该淀 种粉 微培 生养 物基 与中 其只 他有 微淀 生粉 物为区唯 分一 开碳 来源 。，因此，在该培养基中能 生鉴长别良 培好养的基细是菌用一于般鉴均别具不淀同粉类酶型活微性生。物的培养基。 3 ，菌即悬不液同加菌热悬处液理稀对释淀度粉之酶间活没性有细严菌格比的例比的例影关响系，其原因可能是操作不当和本实验的精确度本来就不高。 初菌步源筛 及选培：养将基检测试剂（路戈氏碘液）加入到平板中，涂布均匀，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株，记住其编号，以 便实进验行 材下料一及步器的材复筛。
高产淀粉酶菌株的分离鉴定
实验目的
掌握土壤样品中，微生物菌种分离和筛 选技术的实验设计方法。
掌握富集、平板稀释涂布法、分离筛选 产淀粉酶菌株的基本原理。
初步掌握从土壤样品中分离筛选产淀粉 酶菌株的基本技术。
鉴别培养基是用于鉴别 不同类型微生物的培养 基。在培养基中加入某 种特殊化学物质，某种 微生物在培养基中生长 后能产生某种代谢产物， 而这种代谢产物可以与 培养基中的特殊化学物 质发生特定的化学反应， 产生明显的特征性变化， 根据这种变化可将该种 微生物与其他微生物区 分开来。
培养离心：在初筛中分离到的产淀粉酶的菌株活化后接入装有分 离培养基液体培养基的三角瓶中，对其于30℃摇床进行发酵培养 48h，对发酵液8000rpm离心5min，取上清液。
再次筛选：在检测培养基上面打孔后，将上清液加入到孔中后放 入恒温箱中静置8h后取出,把路戈氏碘液加入到平板中，涂布均匀， 水解圈大的其发酵液上清中的淀粉酶的活性就高，取活性最高的 菌株作为目的菌株，对其进行培养,即得到高产淀粉酶的菌株。
形2%态可观溶察性淀粉，即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中， pH调至7.
掌菌握源土 及壤培样养品基中，微生物菌种分离和筛选技术的实验设计方法。
膏 0 .5 % 、琼脂粉1.5~2% 、121度灭 1初稀步释筛度选对：土将壤检细测菌试菌剂落（形路成戈的氏影碘响液）加入到平板中，涂布均匀，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株，记住其编号，以
3便，进即行不下同一菌步悬的液复稀筛释。度之间没有严格的比例关系，其原因可能是操作不当和本实验的精确度本来就不高。 形显态微观 镜察观察菌体特征:杆状 ,直或接近直 ,多数运动 ,有侧生鞭毛 ,芽孢中生 ,椭圆形。
菌源：选择含淀粉丰富的土壤为最佳。 将高菌产悬 淀液粉进酶行的加菌热一般10为0℃芽处孢理杆，菌然对后其按形常态规观方察法：作菌稀落释较和大培,中养央，有结皱果褶表,明圆：形加、热规可则显、著无降光低泽菌、悬灰液白中色的,不细透菌明数。量，但具有淀粉酶活性的
细菌菌源比 ：例选由择5含2淀％粉提丰高富到的74土％壤，为加最热佳处。理可显著提高菌悬液中淀粉酶活性细菌的比例说明淀粉酶活性细菌的最适生长温度比其他细菌的
% 、蛋白胨1 % 、NaCl 0 .5 % 、牛肉 3高，产即淀不粉同酶菌的悬菌液一稀般释为度芽之孢间杆没菌有对严其格形的态比观例察关：系菌，落其较原大因,可中能央是有操皱作褶不,圆当形和、本规实则验、的无精光确泽度、本灰来白就色不,不高透。明。
2观，察1结21果℃时灭要菌注15意m滴in。加药量和反应时间。
分离：取 1 ×10 ^5、1 ×10^6 、1 ×10^7 稀释液涂布于平板 筛选培养基表面，37℃培养72h。等长出菌落后，根据菌落不同 挑取菌落进行保存并编号。
初步筛选：将检测试剂（路戈氏碘液）加入到平板中，涂布均匀， 菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株ຫໍສະໝຸດ 记住其编号， 以便进行下一步的复筛。
分离培养基液体培养基：采用牛肉膏蛋 等长出菌落后，根据菌落不同挑取菌落进行保存并编号。 白胨固体培养基加0.2%可溶性淀粉，即 牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、可溶 性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中， pH调
实验步骤
样品稀释：称取土壤样品1g溶于9mL 无菌水中 ,或水样品 5mL 溶 于45mL无菌水中 ,分别用无菌水梯度稀释至 1 ×10 ^7倍。
连。
1 稀释度对土壤细菌菌落形 成的影响
用营养琼脂培养基分别培
养不同稀释度的土壤菌悬液， 结果表明（图1） ，10-2 10-3 10-4 10-5 10-6稀释度 中形成的菌落数分别为240 124 51 33 25，其相差的倍数 分别为1.9 2.4 1.5 1.3，即不 同菌悬液稀释度之间没有严 格的比例关系，其原因可能 是操作不当和本实验的精确 度本来就不高。
形态观察
高产淀粉酶的菌一般 为芽孢杆菌对其形态 观察：菌落较大 ,中 央有皱褶,圆形、规 则、无光泽、灰白 色 ,不透明。显微镜 观察菌体特征:杆状 , 直或接近直 ,多数运 动 ,有侧生鞭毛 ,芽 孢中生 ,椭圆形。
注意事项
要严格按照培养基配方配制培养基，防 止杂菌污染。
观察结果时要注意滴加药量和反应时间。 严格无菌操作，防止污染情况的发生。 分离菌株时，稀释度不够导致水解圈粘
菌20分钟. 将分在离淀 菌粉株培时养，基稀中释生度长不的够细导菌致菌水落解分圈别粘进连行。进一步的划线分离，挑取单个生长的菌落接种到试管中保存，然后在含淀粉培养基的培养
皿形中态加 观入察碘液，观察透明圈的大小，初步选定透明圈较大的细菌菌落为淀粉酶活性较高的菌株。 高4 产淀淀粉粉酶酶活菌性株细的菌分的离获鉴得定与初步筛选
实验原理
实验材料及器材
锥形瓶、移液管、试管、接种环、涂布棒、 培养皿、天平、灭菌锅、培养箱、摇床、离 心机等
菌源及培养基
在培养基中加入某种特殊化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学 为 物了质了发解 生土 特壤 定中 的含 化淀 学粉 反酶应菌 ，株 产的 生比 明例 显， 的选 特择 征了 性营 变养 化琼 ，脂 根培 据养 这基 种培 变养 化基 可由 将于 该淀 种粉 微培 生养 物基 与中 其只 他有 微淀 生粉 物为区唯 分一 开碳 来源 。，因此，在该培养基中能 生鉴长别良 培好养的基细是菌用一于般鉴均别具不淀同粉类酶型活微性生。物的培养基。 3 ，菌即悬不液同加菌热悬处液理稀对释淀度粉之酶间活没性有细严菌格比的例比的例影关响系，其原因可能是操作不当和本实验的精确度本来就不高。 初菌步源筛 及选培：养将基检测试剂（路戈氏碘液）加入到平板中，涂布均匀，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株，记住其编号，以 便实进验行 材下料一及步器的材复筛。
高产淀粉酶菌株的分离鉴定
实验目的
掌握土壤样品中，微生物菌种分离和筛 选技术的实验设计方法。
掌握富集、平板稀释涂布法、分离筛选 产淀粉酶菌株的基本原理。
初步掌握从土壤样品中分离筛选产淀粉 酶菌株的基本技术。
鉴别培养基是用于鉴别 不同类型微生物的培养 基。在培养基中加入某 种特殊化学物质，某种 微生物在培养基中生长 后能产生某种代谢产物， 而这种代谢产物可以与 培养基中的特殊化学物 质发生特定的化学反应， 产生明显的特征性变化， 根据这种变化可将该种 微生物与其他微生物区 分开来。
培养离心：在初筛中分离到的产淀粉酶的菌株活化后接入装有分 离培养基液体培养基的三角瓶中，对其于30℃摇床进行发酵培养 48h，对发酵液8000rpm离心5min，取上清液。
再次筛选：在检测培养基上面打孔后，将上清液加入到孔中后放 入恒温箱中静置8h后取出,把路戈氏碘液加入到平板中，涂布均匀， 水解圈大的其发酵液上清中的淀粉酶的活性就高，取活性最高的 菌株作为目的菌株，对其进行培养,即得到高产淀粉酶的菌株。