1株新型小球藻病毒的分离

１ 材 料 与 方 法
１ １ 藻 种 与 培 养 条 件 ．
本研 究 所 用 的普 通 小 球 藻 ３ （ ｈｏｅｌ ｕ — １ Ｃ ｌｒｌ ｖ ｌ ａ ｇ ｒｓＢ ｉ 及 其 它 １ ａｉ ｅ） ｊ ０个 分属 于 绿 藻 门、 藻 门 和 硅 裸藻 门的真核淡 水藻 株 ， 购 自中 国科 学 院水 生生 均 物研 究所淡 水 藻种库 ． 所有 藻株参 考水 生生物 研究
行 超 滤 浓 缩 ， １：５ 按 ０体 积 比浓 缩 ， 终 获 取 约 最
２ 水样 浓缩 液 ， 个过 程在 冰浴 中进行 ． ０ｍＬ 整 １ ２ ３ 液体感 染与 藻 细胞 计数 取静 置 培养 ２星 ．． 期左右 的新鲜普 通小 球藻 培养 液 ， 细胞 浓度 约 为 藻 １ ×１ ｅ ｓｍ 与上述浓缩 病毒液按体 积 比１： ～２ ０ｃｌ／ Ｌ， ｌ ２ 感染 ， 设置 ３ 平行 和 １ 管 管对 照 ， 置光照 培养箱 静置
摘
要 ：以 常 见 淡水 普通 小球 藻 为 材料 ， 反 冲 超 滤 法 从 自然 水 体 中分 离 到 １ 能 裂 解 普 通 小 球 用 株
藻 的病 毒 ， 用 空斑 法 对 病 毒 进 行 了 纯 化 ， 名 为 Ｗ Ｈ一 并 命 １株 ． 镜 观 察 显 示 ， Ｈ一 病 毒 为 球 形 电 Ｗ １株 多 面体 结 构 ， 直径 约 为 ２ ｉ 噬 藻斑 显 示 ，４ｈ后 所 形 成 的 空 斑 直 径 约 为 ３ｍｍ． ｌｒ ｍ； ６ 由于 与 已报 道 的
１ ２ １ 采样 ．．
２０ ０ ７年 ６月 产 生 污染 ， 因此 搞 清楚 真 核 藻
类 与其 寄生物 真 核藻类 病毒 的关 系 ， 维持 藻类 对 的生态平 衡 ， 制利 用 藻 类 资源 意 义 重 大［ ． 对 控 ４针 ］
培 养 ， 匀 观 察 ； 有 感 染 现 象 ， 复 感 染 ５次 以 上 至 摇 如 重
国 已 经 对 小 球 藻 病 毒 株 Ｐ Ｃ Ｐ ｉ ＨＶＣ Ｂ Ｖ、 ＢＶ、 Ｖ、
ＡＴＣ 等 做 了充 分研 究 报道 ， ａ ｔ ｎ 等 已对 Ｖ Ｖ ｎＥｔ ｅ 小球 藻病 毒株 Ｐ Ｃ 一 做 了全基 因组 测序 ， Ｂ Ｖ１ 大小 为
文章 编 号 ：１ ０ — １ ０ ２ １ ） １０ ０ ４ ０ ０ １ ９ （ ０ ０ ０ — １ ５０
１ 株新型小球藻病毒的分离
吴 庆 喜 ，程 凯 ，许 丽娜 ，王媛 媛 ，赵 以军 ，许 敏
（ 中 师 范 大学 生 命 科 学 学 院 ，武 汉 ４ ０ ７ ） 华 ３ ０ ９
小 球 藻 病 毒 株 具 有 明显 的 差 异 ， 为 ＷＨ 株 是 一 种 新 型 的小 球 藻 病 毒 ． 认 １ 关 键 词 ： 球 藻 ；小 球 藻 病 毒 ； 离 小 分 中图 分 类 号 ： ３ ． Ｑ９ ８ ８ 文 献标 识 码 ：Ａ
藻类 是地球 上最 重要 的初级 生产 者 ， 生藻类 水
合 纤 维 微 孑 滤 膜 预 过 滤 后 ， Ｍｉｉ ｔ ”ＴＦ Ｌ 用 ｎｍａｅ Ｆ
Ｃ ｐ ｕｅ 滤 膜 包 经 小 型 反 冲超 滤 浓 缩＿ 装 置 进 ａｓｌ超 ８
小球 藻 ＮＣ ４ 的病 毒 ， ６Ａ 田波［ １ ９ ４ ９ ６年 又报 道 了小
球 藻 ＮＣ ４ 的 另 １株 病 毒． 国 、 国和 日本 等 ６Ａ 美 德
３ ０７ ４ｂ ， 对 Ｐ Ｃ 一 ３ ４ ｐ 并 Ｂ Ｖ １基 因组 ＿ 的 功 能 做 了 细 ７
致 的研究 ， 相对 而 言 ， 国在 小 球 藻病 毒 方 面 的 研 我
究还 相对欠 缺 ， 株新 型小球 藻病 毒株 的分 离可 以 此
进一 步充实 我 国在 该 领域 的研究 ．
小球 藻病 毒而 言 ， ｎＥ ｔｎ５１ ８ Ｖａ ｔ ［ ９ ８年 分离 出感 染 ｅ
生 物研 究所 武汉市 关 桥 养 殖 场用 有 机 玻璃 采 水 器
采 集水 样 ， 璃瓶 冰浴保 存 ， 玻 回实验 室后立 即处 理．
１ ２ ２ 切 向流超 滤浓缩 采 回水 样经 ０ ４ ｍ 混 ．． ．５
ｍ ・ 、 ２ｈ黑 暗 １ ｓ １ ２ｈ光 照 条 件 下 ， 相 应 的 用 培养基 在不 同 的温度 下培养 （ １． 表 ） １ ２ 藻 病 毒 的 分 离 ．
有希 望 成 为 人 类 新 的 食 物 来 源 和 经 济 动 物 的 饵
料来 源 ．
然 而 当水 体 富 营养 化后 就 可 能导 致 藻类 的过
第 ４ ４卷第 １ 期 ２１ Ｏ Ｏ年 ３月
华 中师 范大 学学 报 （ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ＯＵＲＮＡＩ ０Ｆ ＨＵＡＺＨ（ＮＧ ） Ｎ０ＲＭ ＡＬ ＵＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ（ ｔ Ｓ ｉ ） Ｉ Ｎａ ． ｃ．
Ｖｏ ． ４ Ｎｏ １ １４ ．
Ｍ ａ． ２ Ｏ ｒ Ｏｌ
也是 水生 生物食 物 链 中最 基础 的一 环 ， 一些 鱼 、 是 虾和 贝类 的直接 饵料 ， 对整个 水 生生态 系统平 衡 的 维持 有至 关重 要 的 作 用［ ． 球 藻 是 普 生 性 的 单 １ 小 ］ 细 胞绿 藻 ， 布 广 ， 物 量 大 ， 淡 水 生 态 系 统 的 分 生 是 主要 初 级 生产 力 之 一 ； 时小 球 藻 的 粗 蛋 白含 量 同
特别 高 ， 含 有丰 富 的生 物 活 性 物 质 和 微 量 元 素 并
及维 生 素 ］ 小 球 藻 无 论 是 作 为 轮 虫 饵料 或 是 贝 ， 类饵 料 ， 有 很 好 的投 喂 效 果 ［ ， 都 ３ 因此 小 球 藻 极 ］
所 提 供 的 培 养 资 料 ， 在 光 强 为 ２０ Ｅ ・ 均 ０
稳定感染 ， 每天 取样 １ ， 显微镜 计数 藻细胞数 量 次 用