非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A单克隆抗体的制备及其靶位点区域的鉴定

非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A单克隆抗体的制备及其靶位点区
域的鉴定
吴海珍;刘宁宁;张璐;吕军华;肖一红;周恩民
【期刊名称】《中国预防兽医学报》
【年(卷),期】2012(034)010
【摘要】To study the role of non-muscle moysin heavy chain Ⅱ A (NMHC-ⅡA) a in porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection, a monoclonal antibody (MAb) against NMHC-IIA was prepared. Recombinant plasmid containing the sequence encoding c-terminus of NMHC-ⅡA (aal,651-aal,960) was transformed into E. coli Rosseta competent cells and induced to express with IPTG. The purified recombinant protein was immunized into BALB/c mice. Cell fusion was carried out with induction of PEG 4000. The hybridomas secreting MAb were established and detected by ELISA. A MAb was obtained with IgGl subtype. The titers of supernatant and ascites were 1 :2 560 and 1.0 ×106 respectively. The MAb reacted specifically with NMHC-IIA and Marc-145 cells and the epitope domain located between aa 1,812-aa 1,894. The preparation of this MAb would facilitate the study of NMHC-Ⅱ A in PRRSV infection.%为制备非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHC-Ⅱ A)的单克隆抗体(MAb),本研究将编码NMHC-Ⅱ A羧基端1 651～1 960氨基酸的表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞Rosseta中诱导表达,重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG 4000介导融合.ELISA方法检测筛选阳性杂
交瘤细胞,制备腹水并纯化MAb,以间接免疫荧光和免疫沉淀方法鉴定MAb的特异性,western blot检测MAb靶位点区域.结果表明,通过筛选得到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其抗体亚型为IgG1,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶2560和1∶1.0×106;该MAb能够特异性结合相应抗原,并结合Marc- 145细胞；western blot结果显示该抗体与NMHC-Ⅱ A的1 812～1 894氨基酸位点结合.该抗体的制备为研究NMHC-Ⅱ A在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中的作用奠定了基础.
【总页数】4页(P815-818)
【作者】吴海珍;刘宁宁;张璐;吕军华;肖一红;周恩民
【作者单位】山东农业大学动物医学院,山东泰安271017;山东农业大学动物医学院,山东泰安271017;山东农业大学动物医学院,山东泰安271017;山东农业大学动物医学院,山东泰安271017;山东农业大学动物医学院,山东泰安271017;西北农林科技大学动物医学院兽医免疫学研究所,陕西杨凌712100
【正文语种】中文
【中图分类】S852.4
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