一种改良苏木素染液的配制方法

一种改良苏木素染液的配制方法

目的准确控制苏木素染液配制过程中所需试剂的量，提高染色能力，节约成本。方法准确称取苏木素2g，量取无水酒精150ml，用无水酒精彻底溶解苏木素，再依次加入碘酸钠240mg、硫酸铝钾20g、柠檬酸1g。结果新配苏木素染液着色能力明显提高且无氧化膜产生，使用时间周期长，无需过滤。结论染液配制简单，细胞核染色鲜艳，苏木素用量少，减少浪费。

标签：苏木精；氧化；方法苏木素-伊红染色法，也就是我们常说的HE染色技术。是各个医院实验室最常用的染色方法，也是各病理科最经典的染色技术。然而苏木精染液的配制是HE染色技术的核心，它决定染色质量的优劣。一般Harris苏木精染液的配制[1]时所需苏木素多，配制较为繁琐，也具有一定的危险。为了节约成本，减少浪费，我们摸索一套自己的配制方法。

1 资料与方法

1.1一般资料苏木素2g，无水酒精150ml，碘酸钠240mg，硫酸铝钾20g，柠檬酸1g，蒸馏水800ml。

1.2方法取一只2000ml烧杯，苏木素2g，无水酒精150ml，将酒精和苏木素倒入烧杯中，将烧杯置于磁力搅拌器进行搅拌10min，苏木素完全溶解后，加入800ml蒸馏水，搅拌5min后，加入碘酸钠240mg搅拌5min，再加入20g硫酸铝钾，搅拌40min。待苏木红也硫酸铝钾完全结合后，最后加入1g柠檬酸终止氧化，搅拌5min后加入甘油120ml，搅拌2h。棕色瓶盛装，放入阴暗地方室温保存2w后直接使用。

2 结果

苏木素染液无需过滤，无沉渣和氧化膜形成。染液着色能力强，切片染色蓝化后，细胞核着色清晰，細胞质清晰可见，呈鲜艳的蓝色。大大减少了试剂的消耗。

3 讨论

苏木精为一种无色或谈灰黄色粉末，分子式为C16H14O6，分子量302.288。它是一种天然染料，是由中南美洲等地产的一种称”洋苏木素树”（hematoxylon campechianum）的树芯中提取出来的。苏木素的配方很多，其原理是一样的，都是先氧化，使苏木素的分子结构失去两个氢原子，并使其中的一个苯环转化成具有醌型结构的苯环而成为苏木红（hematein）[2],并在媒染剂的作用下，与细胞核染色质结合。常用的氧化苏木素的方法有两种：一是自然氧化。但是氧化时间周期过长，而氧化的程度也难以掌握；所以现在实验室一般采用的是第二种方法，即人工氧化的方法，人工氧化就是在染液中加入氧化剂，达到快速氧化苏木素的目的。氧化剂的种类很多，如高锰酸钾、过氧化氢、氧化汞、碘酸钠等，现在大

多数实验室都基本选择氧化汞和碘酸钠。因为采用氧化汞氧化苏木素，存在以下问题：①需要煮沸；②苏木素用量大且易产生大量的氧化物漂浮在染液的表面，污染切片，不易洗净，以致影响镜检；③使用氧化汞对环境和人体都有一定的危害；④配制复杂，不易掌握氧化程度[3]，所以我们科室选用碘酸钠。它的优点是室温就可以氧化苏木素，氧化后产生的碘化钠也是无害的，染液的稳定性好。我们选用半氧化苏木素，这样染液中同时有苏木素、苏木红、苏木红的活性氧化产物和非活性的超氧化产物的存在，染液效果稳定，且使用时间长。通过四次配制，连续半年的使用，我们发现新配的苏木素在37℃染色更佳。并且染色时不需要分化，也不需要额外地加入冰醋酸。新配的苏木素经滴染滤纸法检测，色层环宽，呈深蓝色，色环内为大片暗橘黄色，染色力强、效果好[4]。在各种苏木素染液配制中，1g苏木素所使用的媒染剂极为悬殊，我们这里1g苏木素，使用媒染剂为10g，减少了染液在染色过程中硫酸铝钾结晶的析出，防止结晶析出，污染切片。无水乙醇能较快溶解苏木精。配制过程中加入2g柠檬酸，可抵消氧化剂的氧化，是苏木精和苏木红在溶液中保持平衡，同时又增加了细胞核的选择性，使细胞核染色清晰、细致，还可防止霉菌生长。甘油延缓了苏木精染液蒸发，防止苏木精过度氧化，延长了苏木精染液的使用时间。

参考文献：

[1]王伯沄，李玉松，黄高昇，等.编著.病理学技术[M].北京：人民卫生出版社，2000.133.

[2]梁英杰，凌启波，张威，编著.临床病理学技术[M].北京：人民卫生出版社，2011.68.

[3]李纪理《改良Harris苏木素液染色效果的观察[J].临床和实验医学杂志，2008，7（9）：151.

[4]王颖，薛世泉，张泽兵，等.测试苏木精和VG染液的滴染滤纸法[J].诊断病理学杂志2010.8：308.