微生物实验课PPT

芽胞（spore）
芽胞（spore）：是细菌躲避恶劣环境，维持生存而
处于代谢相对静止的休眠体，并非细菌的繁殖体，折 光性强，不易着色。能产生芽孢的细菌为G+菌。
菌毛（pilus）
菌毛(pilus)：菌体表面遍布，细、短、直、硬。分普通菌毛（粘附作 用、致病性）、性菌毛（传递DNA）。电镜可见。
细 菌 总 论（一）
革兰染色法：1884年Gram创建，是细菌学中 最为经典的染色法。
意义：
对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病 性等有重要意义。
原理：
与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。
细菌的基本形态
细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，
形体微小，一般以微米（µm）作为测量单位。
细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三
常用底物：邻苯二胺（OPD）,四甲基联苯胺（TMB）
用于测定抗体
ELISA：双抗体夹心法------用于测定抗原
ELISA：双抗体夹心法检测HCG（操作）
器材：1个小杯/1人，标本1、标本2
A、B、C液（H2O2、TMB、HRP标记抗HCG
二抗）
方法：小杯内加标本两滴 5min 甩干、水洗三次
加一滴C液（红色）5min 甩干、水洗三次 加A、B液各一滴 结果判断：蓝色为+ * 瓶盖不能盖错，小杯用后扔进杂物盆！！！ 置于白纸上，观察结果
示教：荧光标记技术
老鼠肝细胞印片+SLE病人血清（含有抗核抗 体，一抗）+荧光标记的抗人的抗核抗体的抗 体（二抗）
荧光显微镜（C-301）下观察：黄绿荧光标记 的老鼠肝脏细胞核
3. 革兰染色：方法、结果（图）
作图请注意大小比例
酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致
密物等。
免疫荧光技术（荧光抗体技术）
【原理】是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发
展起来的一项技术，具有特异、敏感、快速的特点。将荧 光色素（常用异硫氰基荧光黄，简称FITC）与特异性抗体
（或抗原）以共价键基团牢固结合，但不影响该血清抗体
的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物，可通过荧 光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光，而从荧光 显微镜加以观察。 【方法】主要有直接法和间接法。
大类。不同种类的细菌大小不一，大多数球
菌直径约1 µm，杆菌长2∼5 µm，宽0.3∼1
µm。
球菌(coccus)
葡萄球菌G＋
淋病奈瑟氏菌G－
杆菌(bacillus)
大肠杆菌G-
螺形菌(spiral bacterium)
弧菌：一个弯曲 螺菌：多个弯曲
空肠弯曲菌
霍乱弧菌
细菌的特殊结构
荚膜、鞭毛、芽胞、菌毛
微生物与免疫学实验（三）
内
容
血清学反应（二）：
（三）免疫标记技术（录像）
操作：ELISA
示教：免疫荧光（C301）
细菌学总论：
细菌基本形态、特殊结构 操作：革兰染色
（三）免疫标记技术
将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物， 反 映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 常用的标记物有：
革兰染色操作步骤
【涂片】
取载玻片 接种环取混合菌液1-2环涂片（直径 约1cm） 自然干燥 固定（通过火焰三次）
【染色】
结晶紫1min 水洗 碘液1min 酒精脱色30S 水洗 稀释复红1min 吸水纸印干 油镜观察 *注意无菌操作！
有菌玻片放在水池旁玻片缸内!
水洗 水洗
作业：
1. 作图—细菌基本形态、特殊结构 2. ELISA：原理、方法、结果、结论
荚膜（Capsule）
荚膜：细菌细胞壁外包裹的一层较厚、粘性、胶冻样的 物质，普通染色不易着色。 主要功能：1.与细菌的毒力有关，抗吞噬、抗消化 2.潴留水分，抗干燥 一般在机体内和营养丰富的培养基中形成
肺炎双球菌
鞭毛（flagellum）
多种细菌（大多数杆菌，少数球菌，全部弧菌和螺菌）菌体 上有细长而弯曲的丝状物，称为鞭毛
免疫荧光
酶联免疫吸附试验（ELISA ） （Enzyme linked lmmunosorbent Aassa（主要有辣根过氧化 物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来， 并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的 酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原， 从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量 成正比。 【方法】主要有间接法和双抗体夹心法