多浪羊IFN-γ基因克隆及核苷酸序列分析

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牧羊犬IFN-茁基因的克隆和序列分析(精)

牧羊犬IFN-茁基因的克隆和序列分析(精)

摘要院为对犬干扰素-茁(IFN-茁)进行研究袁用 PCR 技术从犬血细胞基因组 DNA 中扩增了牧羊犬 IFN-茁 基因袁并克隆到 pGEM-T
载体袁转化大肠杆菌 JM109 感受态细胞袁阳性克隆经 PCR 和酶切鉴定后进行测序遥 结果表明院牧羊犬 IFN-茁 基因含 561bp袁编码
186 个氨基酸袁前 21 个为信号肽遥 成熟蛋白理论分子量为 20kD袁等电点为 5.737袁有 2 个潜在磷酸化位点尧5 个 N 糖基化位点和 4
Identification of recombinant plasmid by PCR; C. Identification of recombinant plasmid by Sac I digestion)
M. DNA Ladder; 1. Negative control; 2. PCR product; 3. Negative control
沈阳农业大学学报袁圆园11原08袁42穴4雪院449-453 允燥怎则灶葬造 燥枣 杂澡藻灶赠葬灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁圆园11原08袁42穴4雪院449-453
牧羊犬 IFN-茁 基因的克隆和序列分析
夏润玺 1袁张曼夫 2*
渊1.沈阳农业大学 生物科学技术学院袁沈阳 110161曰2.中国农业大学 生物学院袁北京 100094冤
酶切鉴定结果显示袁 重组质粒被切成约 500bp 和约 3000bp 的 2 个片段渊图 1C冤袁与理论相符遥 2.3 基因测序和序列分析
将 2 个鉴定正确的重组克隆测序袁 结果表明 2 个克隆序列一致袁 测得的核苷酸序列及推导的氨基 酸序列如图 2遥 分析表明袁克隆的序列与 GenBank 中 犬 IFN-茁 基因序列一致袁含 561bp袁是一个完整的读 码框袁编码 186 个氨基酸袁前 21 个为信号肽遥 成熟蛋

多浪羊双肌臀基因Callipyge序列分析

多浪羊双肌臀基因Callipyge序列分析
漩涡震荡仪 电泳仪及电泳槽 -80 益超低温冰箱 台式高速冷冻离心机 PCR 基因扩增仪 凝胶成像检测仪
型号 YXO-280Aห้องสมุดไป่ตู้Dragon-med
WH-861 DYY-1A SANYO MDF-U32V Sigma-3K 30 JBIOMETRO Alphalmager200
产地 中国上海 中国上海 中国上海 中国北京
等咱圆暂的研究都证明了这一观点袁这和动物生产者的 经济利益相关性最强遥 此外袁悦葬造造蚤责赠早藻 基因还对屠宰 率尧饲料利用率尧胴体性状等产生一定的影响遥
本研究采集多浪羊血液样本袁 设计引物袁 扩增 CalliPyge 基因袁旨在验证多浪羊 Callipyge 基因是否 存在突变遥
员 材料与方法
员援员 材料 员援员援员 样品 在塔里木大学动物科学学院实验站随 机选取 圆猿 只多浪羊母羊袁 用 员园 皂蕴 的真空采血管 渊柠檬酸钠抗凝冤颈静脉采血 缘 皂蕴袁放置在冰盒内带 回实验室原愿园 益保存备用遥 员援员援圆 孕悦砸 引 物 设 计 悦葬造造蚤孕赠早藻 基 因 引 物 参 照 云则藻噪蚤灶早咱圆暂等在 郧藻灶月葬灶噪 中发表的包括 悦蕴孕郧杂晕孕 位 点的 阅晕粤 序列渊登录号院粤云源园员圆怨源冤设计引物袁长度 为 猿园猿 遭责遥 引物由生工生物工程渊上海冤股份有限公 司合成遥 上游引物 悦葬造造蚤原云院缘忆原悦粤郧悦粤郧悦粤郧粤郧悦粤郧 粤郧粤粤悦原猿忆曰下游引物 悦葬造造蚤原砸院缘忆原粤粤粤栽栽郧郧粤粤郧郧悦
悦葬造造蚤责赠早藻 的遗传效应在肉用型尧毛用型和多胎 型等得到了广泛的研究袁 其中最显著的就是提高双 肌臀羊的瘦肉率这一遗传效应袁悦葬造造蚤责赠早藻 基因使双 肌臀羊腰部和腿部的肌肉过度发育而显著增大曰同 时袁该基因还能使皮下尧肌间尧肌内和肾脏周围的脂 肪减少袁 进而间接地增加了绵羊的瘦肉率遥 云则藻噪蚤灶早

《山羊、牛MyoG启动子序列克隆及其活性分析》范文

《山羊、牛MyoG启动子序列克隆及其活性分析》范文

《山羊、牛MyoG启动子序列克隆及其活性分析》篇一一、引言随着基因工程和分子生物学的快速发展,启动子作为基因表达调控的关键元件,其研究在生物医学领域中显得尤为重要。

MyoG(Myogenin)是一种在肌肉发育和分化过程中发挥关键作用的基因。

其启动子序列的克隆和活性分析,对于理解肌肉发育的分子机制、改良动物育种及医学研究具有重大意义。

本文将就山羊、牛MyoG启动子序列的克隆技术及其活性分析进行详细的探讨。

二、材料与方法1. 材料本实验所需材料包括山羊、牛的肌肉组织样本,PCR引物,DNA提取试剂,载体,感受态细胞等。

2. 方法(1)DNA提取:从山羊、牛的肌肉组织样本中提取基因组DNA。

(2)PCR扩增:利用特异性引物,通过PCR技术扩增MyoG启动子序列。

(3)序列克隆:将PCR产物克隆至载体,转化感受态细胞,筛选阳性克隆。

(4)序列分析:对阳性克隆进行测序,分析MyoG启动子序列。

(5)活性分析:通过荧光素酶报告基因系统,分析MyoG 启动子序列的活性。

三、实验结果1. MyoG启动子序列克隆通过PCR扩增及序列克隆技术,成功克隆了山羊、牛的MyoG启动子序列。

序列比对结果显示,山羊和牛的MyoG启动子序列存在一定的同源性,但也有一定的差异。

2. 序列分析对克隆得到的MyoG启动子序列进行测序,发现其中包含多个潜在的转录因子结合位点,这些位点可能参与MyoG基因的表达调控。

3. 活性分析通过荧光素酶报告基因系统分析MyoG启动子序列的活性,结果显示,山羊和牛的MyoG启动子序列均具有一定的活性,且牛的MyoG启动子序列活性略高于山羊。

这可能与物种间的基因表达调控机制差异有关。

四、讨论本实验成功克隆了山羊、牛的MyoG启动子序列,并通过序列分析发现了多个潜在的转录因子结合位点。

这些位点可能参与MyoG基因的表达调控,为进一步研究肌肉发育的分子机制提供了重要的基础。

此外,通过荧光素酶报告基因系统分析发现,山羊和牛的MyoG启动子序列均具有一定的活性,且牛的MyoG启动子序列活性更高。

羊γ干扰素IFN-γ酶联免疫分析ELISA

羊γ干扰素IFN-γ酶联免疫分析ELISA

羊γ干扰素(IFN-γ)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定羊血清,细胞上清液及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)的含量。

实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中羊γ干扰素(IFN-γ)水平。

用纯化的羊γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ),再与HRP标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中羊γ干扰素(IFN-γ)含量。

试剂盒组成:样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。

加入一定量的PBS,PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

多浪羊IL-1β基因的克隆及序列分析

多浪羊IL-1β基因的克隆及序列分析

多浪羊 I L一1 p基 因的克隆及序列分析
曾国航 , 曹玉华 , 王娟娟 , 潘伊微’ ,贾山玲 , 徐 宏伟 , 李 莲瑞2 ,
( 1塔里木 大学生命科 学学院 , 新疆阿拉 尔 8 4 3 3 0 0 ; 2 . 新疆兵团塔里木畜牧科技 重点实验 室,
新疆阿拉 尔 8 4 3 3 0 0 ; 3 . 塔里木大学动物科 学学院, 新疆阿拉 尔 8 4 3 3 0 0 )
XU Ho n g —we i .L I L i a n—r u i t 。
( 1 . C o l l e g e o fL i f e S c i e n c e , T a r i m U n w e  ̄ i t y , A f a r X i n j i a n g 8 4 3 3 0 0 ,C h i n a ; 2 . K e y L a b o r a t o r y f o T a r i m A n i m a l H u s b a n d y r S c i e ce n a d n T e c h n o l o g y ,X i n i f a n g P r o d u c t i o n& C o n s t r u c t i o n C 0 ,C o l l e g e f o A n i m a l S c i e ce n , T a r i m U n i v e r s i t y , A l a r X i n i f a n g 8 4 3 3 0 0 , C h i n a ; 3 . C o l l e g e fA o n i m a l S c i e ce n , T a r i m U n i v e  ̄ i t y , A l a r X i n i f a n g 8 4 3 3 0 0 ,C h i n a )

新疆多浪羊白细胞介素8 cDNA的克隆测序及其变异SNP的分析

新疆多浪羊白细胞介素8 cDNA的克隆测序及其变异SNP的分析
c ts s lt n o e tt l ye ,i a i ft oa mRNA,t et o—se TP o o h h w tp R CR.T e sq e c a rv d t e t ei tre k n8 o u ln h e f r h h e u n e w sp o e b n el u i fd o a gs e p at e o h et
了初 步 的分 析 。 关键 词 多 浪 羊 ;白细 胞 介 素 8 S P; 列 分 析 ;m N 二 级结 构 ;N 序 RA 文 献 标 识 码 : A D I1.9 9 ji n 10 06 .0 10 .0 O :0 3 6/.s .09— 5 82 1. 10 1 s 中 图分 类 号 :8 6 ¥ 2
摘要 采集多浪羊的血液 , 分离 白细胞 , 提取总 R A, N 用白细胞介素 8 I 8 的引物进行两步法 的 R (L一 ) T—P R扩增 、 C 克隆与酶
切鉴定 , 测序后进行序列 比对 , N 0 104 1 1同源性 高达 9 % , 与 M_ 00 9 0 . 9 初步判定为多浪羊的 I L一8编码全长 c N D A。通过序列 比对 , 发现多浪羊 I L一8的基因起始密码子上游第七个碱基发生突变 , N 0 104 1 1中是 T, 在 M_0 09 0 . 而在测序的多浪羊 的 I 8 L一 中是 c 。对该 测序序列进行数据库搜索和序列 比对 , 发现该碱基变异很独特 , 并对 该变异可能对 mR A蛋白翻译 的影响进行 N
C nt c o ru , l , i i g8 3 0 ) o s ut nG o p A a X n a 4 3 0 r i r jn
Ab ta t T e tr e g n a o y s re h n s s c s d a s r c h a g t e e w sg t e ist i g u h a r w—b o d fo u ln h e ,ioai n o ep rp e a b o d lmp o b lo r m d oa gs e p s lt ft ei h r l lo y h — o h

山羊基因克隆实验方案设计

山羊基因克隆实验方案设计

山羊基因克隆实验方案设计第五组1.提取DNA2.DNA检测(电泳)3.目的DNA片段基因扩增(PCR)4.DNA检测(电泳)5.目的基因片段与载体连接6.大肠杆菌感受态细胞的制备7.导入受体细胞与蓝白斑筛选8.阳性克隆鉴定9.DNA测序一、DNA提取【实验目的】指导DNA提取原理(羔羊片),熟悉DNA提取步骤。

【实验原理】组织细胞被PK消化后,经过萃取漂洗获得纯净DNA。

【实验步骤】1. <30 mg组织,用眼科剪剪碎,加入200 TL buffer+20 μL PK,55℃水浴1-3 h。

2. 加入220 μL buffer BL,振荡15 s,70 ℃放置10 min,溶液变清亮。

3. 10000 r离心2 min,移上清液至新离心管。

4. 加220 μL无水乙醇,充分振荡15 s,可能会出现絮状沉淀。

5. 将溶液和絮状物加入到吸附柱中,12000 r离心30 s,弃废液。

6. 向吸附柱加入500 μL WB,12000 r离心30 s,弃废液。

7. 向吸附柱加入500 μL wash buffer,12000 r 离心30 s,弃废液,空滤一次。

8. 将吸附柱转入干净离心管,加入50 μL TE,放置5 min,12000 r离心2 min,备检。

二、DNA电泳检测【实验原理】琼脂糖凝胶电泳技术是分离、鉴定和提纯DNA片断的有效方法。

凝胶分辨率决定于使用材料的浓度,并由此决定凝胶的孔径。

琼脂糖凝胶可分辩0.1~6.0kb的双链DNA片段。

琼脂糖凝胶电泳是一个电场作用。

它首先利用琼脂糖的分子筛效应,此外,在弱碱性条件下,DNA分子带负电荷,从负极向正极移动。

根据DNA分子大小、结构及所带电荷的不同,它们以不同的速率通过介质运动而相互分离。

借助溴化乙锭(EB)能与双链DNA结合的作用,利用EB染色,并通过紫外线激发即可观察被分离DNA片段的位置。

【仪器与试剂】琼脂糖、10×TAE电泳缓冲液(40mMTris,20mMNaAc,1mMEDTAPH8.0)、载体缓冲液(0.25%溴酚蓝,30%甘油)、溴化乙锭水溶液(10mg/ml)、凝胶槽、电泳仪【实验步骤】1.取琼脂糖0.9g,加入100ml1xTAE电泳缓冲液于250ml烧瓶中,100℃加热溶解。

编码ifn-γ的基因

编码ifn-γ的基因

编码ifn-γ的基因
基因IFNG(Interferon Gamma)编码的是干扰素γ蛋白(Interferon Gamma Protein)。

IFNG基因位于人类染色体12号上,具体位置为12q24.1。

IFNG蛋白是一种细胞因子,对免疫系统具有重要作用。

它主要由免疫细胞(如T细胞、NK细胞等)产生,能够促进免疫细胞的活化和增殖,并调控各种免疫反应。

IFNG 蛋白还具有抗病毒、抗肿瘤等作用。

IFNG基因的编码过程包括转录和翻译两个步骤。

首先,IFNG基因的DNA序列将被转录成mRNA(信使RNA)。

在转录过程中,DNA的双链解旋,并被RNA聚合酶酶链合成mRNA的单链链,该链包括与DNA模板链相互互补的碱基。

转录过程需要一系列的调控元件和转录因子的参与,其中包括启动子区域、启动子结合蛋白、转录因子等。

转录结束后,mRNA将离开细胞核,进入细胞质中进行翻译。

在翻译过程中,mRNA上的核苷酸序列被翻译成氨基酸序列。

翻译是由核糖体(细胞质中的蛋白质合成机器)进行的,核糖体将mRNA上的密码子与tRNA上的特定氨基酸配对,从而将氨基酸聚合成蛋白质链。

整个翻译过程涉及到启动子、elongation子、termination 子等多个步骤。

最终,经过转录和翻译过程,IFNG基因编码的mRNA被翻译成干扰素γ蛋白。

干扰素γ蛋白进一步参与免疫反应的调控,发挥各种生理功能。

需要注意的是,人类基因编码过程受到多种调控因素的影响,包括转录因子的结合、DNA甲基化、染色质的结构等。

这些调控机制使得基因表达在不同组织和
不同发育阶段呈现出差异性。

重测序策略挖掘多浪羊多胎基因及候选基因与产羔数的分析

重测序策略挖掘多浪羊多胎基因及候选基因与产羔数的分析

重测序策略挖掘多浪羊多胎基因及候选基因与产羔数的分析重测序策略是一种常见的基因分析方法,利用高通量测序技术对基因组进行整体测序,可以帮助研究人员快速获取大量基因信息,并进一步挖掘基因与生物特征之间的关联。

在多浪羊多胎基因分析中,重测序策略可以用来发现与产羔数相关的候选基因,并探索其分子机制。

首先,对多浪羊进行重测序分析,可以获得其基因组的整体测序数据。

通过对测序数据进行质量控制和数据预处理,可以得到高质量的测序reads。

接下来,使用不同的对比组设计,例如对比多产羔和少产羔的多浪羊种群,通过比较其基因组的差异,从而筛选出与产羔数相关的候选基因。

在挖掘多浪羊产羔数相关基因时,首先可以进行不同基因表达水平的比较分析。

通过比较多产羔和少产羔两组样本的基因表达差异,可以筛选出在产羔过程中可能起关键作用的基因。

此外,还可以使用功能注释工具对差异表达基因进行富集分析,以进一步挖掘与产羔数相关的生物学过程及通路。

除了基因表达分析,还可以进行SNP(单核苷酸多态性)分析,寻找与产羔数相关的位点。

通过对多产羔和少产羔样本的基因组比较,可以筛选出与产羔数相关的SNP位点。

进一步结合GWAS(基因组关联研究)分析方法,可以找到与产羔数显著相关的SNP位点,以及其周围的候选基因。

此外,还可以利用网络分析方法,构建基因调控网络,揭示与产羔数相关的调控模式。

通过将差异表达基因与调控因子、转录因子及其调控关系构建成网络,可以分析整体基因调控网络的结构,找到关键的调控节点及其调控通路。

这有助于我们进一步理解产羔数的分子调控机制。

最后,验证和功能研究是必不可少的步骤。

通过实验验证和功能研究,可以验证产羔数相关基因的功能,并进一步阐明其在产羔过程中的具体作用。

例如,可以利用转基因技术和基因敲除技术,对候选基因进行功能验证实验,以验证其对产羔数的调控作用。

综上所述,重测序策略可以帮助挖掘多浪羊多胎基因及候选基因与产羔数的关联。

通过基因表达分析、SNP分析、网络分析等方法,可以筛选出与产羔数相关的候选基因,并进一步研究其分子机制。

14651411_山羊CLAIa链基因的克隆及生物信息学分析

14651411_山羊CLAIa链基因的克隆及生物信息学分析

科技大学某养殖场(
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!@&*1链 基 因 多 态 性 与 相 关 免 疫 应 答 的 关 系 ! 为阐明不同品种山羊抗病力方面的差异提供参
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#G#! 样 品 采 集 阿 尔 巴 斯 绒 山 羊 "5FNX!7#?=#全 血 采 自 内 蒙
古 鄂 尔 多 斯 市 某 养 殖 场 &河 西 绒 山 羊 "OM!7#?=# 全 血 采 自 甘 肃 肃 南 裕 固 族 自 治 县 某 养 殖 场 &红 寺
湖 绒 山 羊 "OXO!7#?=#全 血 采 自 甘 肃 山 丹 县 某 养 殖 场 &陕 北 绒 山 羊 "XN!7#?=#全 血 采 自 陕 西 榆 林 市 某 养 殖 场 &简 阳 大 耳 山 羊 "JaEF!7#?=#全 血 '金 堂 黑 山 羊 "J;O!7#?=#全 血 均 采 自 安 徽 临 泉 县 某 养 殖 场 &西 农 萨 能 奶 山 羊 "M4X4!7#?=#全 血 '美 姑 山 羊 "[Q!7#?=#全 血 '大 足 黑 山 羊 "ERO!7#?=#全 血 '努 比 亚 山 羊 "4Na!7#?=#全 血 均 采 自 西 北 农 林

IFN-γ在不同生殖周期奶山羊卵巢中的表达

IFN-γ在不同生殖周期奶山羊卵巢中的表达

IFN-γ在不同生殖周期奶山羊卵巢中的表达孙健红;赵慧英;苏正元;尹宝英;张涌【期刊名称】《西北农林科技大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2007(035)004【摘要】应用免疫组织化学SP法检测γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)在不同生殖周期奶山羊卵巢中的表达情况,探讨IFN-γ的变化规律及其与生殖的关系.结果显示,在间情期三级卵泡颗粒细胞胞膜、发情期三级卵泡和成熟卵泡颗粒细胞、妊娠期卵泡颗粒细胞、妊娠7周粒黄体细胞、妊娠12,16和20周膜黄体细胞胞核中均有IFN-γ的表达;在三级卵泡和成熟卵泡的卵泡液中也有IFN-γ的表达;妊娠12,16和20周粒黄体细胞上IFN-γ表达量很低.IFN-γ可能在不同类型的细胞上发挥着不同的作用.【总页数】4页(P15-18)【作者】孙健红;赵慧英;苏正元;尹宝英;张涌【作者单位】西北农林科技大学,生物工程研究所,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生物工程研究所,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生物工程研究所,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生物工程研究所,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,生物工程研究所,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】S814.1【相关文献】1.弥散性神经内分泌细胞标志物在不同生殖周期小鼠卵巢中的表达 [J], 李伟;唐骏启;陈树林;韩苗苗;周涛;王桂花2.不同生殖周期阶段对犬卵巢卵母细胞体外发育的影响 [J], 李继鹏;王锡香;尹熙俊;崔成都3.犬不同生殖周期阶段卵巢的组织结构观察 [J], 赵鹏;李继鹏;刘丹阳;尹熙俊;崔成都4.奶山羊发情期与间情期卵巢中CircRNA差异性表达谱分析 [J], 杨少华; 安小鹏; 张磊; 曹斌云; 宋敏艳5.IFN-γ在多囊卵巢综合征中的表达及对卵巢颗粒细胞的影响 [J], 张丽娜;王娟;姚雪;李春梅;史兵伟;夏圣因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

兔IFN-γ基因的克隆、遗传进化分析及其表达

兔IFN-γ基因的克隆、遗传进化分析及其表达

兔IFN-γ基因的克隆、遗传进化分析及其表达孟庆玲;乔军;才学鹏;闫鸿斌;骆学农;景志忠【期刊名称】《甘肃农业大学学报》【年(卷),期】2008(043)004【摘要】运用RT-PCR技术对用ConA刺激后的中国白兔外周血淋巴细胞(PBMCr)进行扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行序列测定,并进行遗传进化分析.结果发现:该基因全长501bp,编码167个氨基酸,其中前20个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IFN-γ基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IFN-γ氨基酸序列中,在41~43、108~110和117~119位存在3个潜在的N-联糖基化位点,同时存在3个Cys残基.转化重组质粒pETIFN-γ的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后,重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为22.6kDa的重组蛋白.经凝胶薄层扫描,重组蛋白表达量可占菌体蛋白的19.2%.【总页数】5页(P7-11)【作者】孟庆玲;乔军;才学鹏;闫鸿斌;骆学农;景志忠【作者单位】中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046;甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046【正文语种】中文【中图分类】S829.1.2【相关文献】1.萧山鸡γ-干扰素(IFN-γ)成熟蛋白基因的克隆、原核表达及真核表达载体的构建[J], 徐根亮;由振强;余夏萌;吕冬梅;于涟2.山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 安贝;赵玄多;杨雯昱;侯伟杰;高洋;陈德坤3.狂犬病病毒CVS株G基因和IFN-α基因的克隆及双基因真核表达载体的构建[J], 李江涛;殷相平;柳纪省;李宝玉;李学瑞;杨彬;兰喜;胡永浩4.兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备 [J], 万小颖;秦立志;施丽娟;王文洲;李挺;李碧春;吴信生5.北极狐、貉、犬IFN-β基因克隆及表达 [J], 李紫仟; 廉士珍; 胡博; 张蕾; 朱言柱; 李滋睿; 李伟; 白雪; 张海玲因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

多浪羊双肌臀基因Callipyge 序列分析

多浪羊双肌臀基因Callipyge 序列分析

多浪羊双肌臀基因Callipyge 序列分析作者:方翟,范文斌,高庆华来源:《湖北畜牧兽医》 2019年第7期方翟1,2,范文斌1,高庆华1,2(1.塔里木大学动物科学学院,新疆阿拉尔 843300;2.新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室,新疆阿拉尔 843300)摘要:绵羊的双肌臀(Callipyge)基因表现型为后臀肌肉增大近30%,由位于绵羊第18号常染色体上基因上游存在一个N→ C的单核苷酸多态性(SNP)标记(命名为SNPCLPG)产生的,该SNP 标记的存在与Callipyge表现完全吻合。

为此,根据已知多态性,选择设计合成了1对引物,以多浪羊为研究对象,对PCR扩增产物直接测序,进行了SNPCLPG位点的检测。

获得303 bp的扩增片断,测序后进行序列分析,发现在38 bp处碱基产生A到G的突变,在80、92、149、219 bp处碱基产生T到C的突变。

关键词:多浪羊;PCR;双肌臀;突变中图分类号:S826文献标识码:A文章编号:1007-273X(2019)07-0005-03多浪羊是新疆特有的一个优良的肉脂兼用型绵羊品种,因其中心产区在麦盖提县,故又称麦盖提羊。

多浪羊体格大、产肉多、肉质鲜嫩、性成熟早、繁殖率高、遗传性能稳定。

大部分母羊可达到两年三产,双羔率达30%~40%,4~5月龄羔羊体重可达35 kg;育肥性能好,育肥羊屠宰率可达55%以上,是组织羔羊肉生产的理想品种。

在绵羊的品种改良中,培育产肉量高、肉质好、嫩度高的绵羊品种一直是育种工作者不懈的追求,通过传统的遗传改良和营养调控手段来提高动物的瘦肉率和肌肉品质已很难再有大的进展。

近年来,随着分子生物学技术的迅速发展和动物基因组研究的深入开展,加快了对绵羊双肌(Callipyge)性状更进一步的研究。

研究发现该性状是由于18号常染色体上的一个野生型等位基因(N)发生突变所致,而且该突变基因以非孟德尔方式遗传[1]。

山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备

山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备

山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备安贝;赵玄多;杨雯昱;侯伟杰;高洋;陈德坤【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2014(000)011【摘要】为获得山羊IFN-γ重组蛋白,提取山羊外周血淋巴细胞总 RNA,反转录得到cDNA,以此为模板经PCR扩增获得IFN-γ的ORF区,构建重组克隆载体。

经PCR扩增得到编码山羊IFN-γ成熟肽的基因序列,连入重组表达载体pET-32a,转入 BL21(Codon Plus)感受态细胞中,测序并分析。

重组表达载体经IPTG诱导后,对产物进行SDS-PAGE分析,并过镍柱纯化。

用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。

结果显示,编码山羊IFN-γ成熟肽部分的片段长432 bp;SDS-PAGE 分析显示,融合蛋白大小约为34.9 ku,在30℃条件下,以0.3 mmol/L的IPTG诱导6 h,可得到大量可溶性表达的目的蛋白;间接 ELISA测定制得的多克隆抗体效价为1∶106。

%To obtain the expression products of goat IFN-γ,to tal RNA was extracted from activated goat PBMCs,and cDNA was synthesized and used as template for PCR.The recombinant cloning vector was constructed.The sequence encoding mature peptide region was cloned by PCR and inserted into the ex-pression vector pET-32a,and the recombinant plasmid was transformed into the competent cell BL21 (Co-don Plus),followed by sequencing and analysis.After induced by IPTG,the expression products were and analysized by SDS-PAGE and purified by Ni-NTA.The purified protein was immunize rabbits to prepare polyclonal antibodies.Sequence analysis suggested that sequence encoding themature peptide was 432 bp. SDS-PAGE indicated that the fusion protein was about 34.9 ku,and a large amount of soluble protein could be expressed when induced with a total concentration of 0.3 mmol/L/L IPTG for 6 h at 30℃.The titter of polyclonal antibodies was 1∶106 detected by indirect ELISA.【总页数】6页(P29-33,34)【作者】安贝;赵玄多;杨雯昱;侯伟杰;高洋;陈德坤【作者单位】西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备 [J], 杨青原;张军杰;秦运杰;王冬梅;夏平安;崔保安2.猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 刘伟;郭抗抗;林鸷;盛洁;赵娣;赵紫印;张彦明3.莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A和m/c的克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 王锦明;刘爱红;任巧云;马米玲;刘志杰;李安岩;李有全;赵帅阳;张浩浩4.基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备 [J], 赵立娜;崔言顺;任建亭;李建亮;黄兵;李玉峰;马秀丽5.埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 翟慧;王政艳;吕清巧;程金芝;李世琪;杨茜;商正玲;吴家红因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

基于特异性重组受体的牛IFN-γ检测的研究的开题报告

基于特异性重组受体的牛IFN-γ检测的研究的开题报告

基于特异性重组受体的牛IFN-γ检测的研究的开题报告1. 研究背景和意义IFN-γ是一种免疫调节因子,可以激活巨噬细胞和T淋巴细胞等免疫细胞,增强它们对抗病原菌的能力。

因此,IFN-γ在动物医学和兽药工业中有着广泛的应用,例如用于检测和治疗动物感染或某些疾病的多种治疗方案中。

然而,传统的IFN-γ检测方法通常需要大量样品和复杂的实验流程,因此需要一种简单、快速、准确的检测手段来替代传统方法。

2. 研究内容和目标本研究旨在开发一种基于特异性重组受体的牛IFN-γ检测方法,以减少检测时间和成本,并提高检测的准确度。

具体研究内容包括:1)构建特异性牛IFN-γ受体的表达向量;2)通过转染将特异性牛IFN-γ受体引入肉牛分泌细胞中;3)对引入特异性牛IFN-γ受体的肉牛分泌细胞进行IFN-γ检测。

本研究的目标是开发一种简单、快速、准确、经济的牛IFN-γ检测方法,以提高动物医学和兽药工业中IFN-γ的检测效率,促进相关领域的发展。

3. 研究方法和技术路线本研究的主要方法包括:1)构建特异性牛IFN-γ受体的表达向量。

将设计好的牛IFN-γ特异性受体基因进行克隆,与适当的表达载体连接,构建出特异性牛IFN-γ受体的表达向量。

2)通过转染将特异性牛IFN-γ受体引入肉牛分泌细胞中。

将构建好的特异性牛IFN-γ受体表达载体转染至肉牛分泌细胞,使其获得能识别IFN-γ的特异性受体。

3)对引入特异性牛IFN-γ受体的肉牛分泌细胞进行IFN-γ检测。

使用ELISA等常规方法,对引入特异性受体的肉牛分泌细胞进行IFN-γ的定量检测,评估新方法的检测效果。

4. 预期结果和意义通过本研究,我们将建立一种基于特异性重组受体的牛IFN-γ检测方法。

相比传统方法,这种新方法具有简单、快速、准确和经济的优点,可以大大提高IFN-γ的检测效率,对动物医学和兽药工业的发展具有重要的意义。

同时,本研究还可能为类似检测方法的开发提供新的思路和指导,并为相关领域的研究提供新的理论和实践基础。

牛IFN-γ基因的原核表达及单克隆抗体的研制的开题报告

牛IFN-γ基因的原核表达及单克隆抗体的研制的开题报告

牛IFN-γ基因的原核表达及单克隆抗体的研制的开题报告一、研究背景与意义干细胞治疗、基因治疗、免疫治疗等新型治疗手段为患者提供了更为优秀的治疗选择,免疫治疗尤其是借助免疫细胞释放的细胞因子提高人体免疫反应,进而起到治疗作用。

在免疫治疗中,人源或动物源的细胞因子往往难以克服免疫排异的问题,因此研发、应用同种或近源性高的动物细胞因子显示出重要的应用价值。

而IFN-γ是牛免疫反应中一种非常重要的细胞因子,对于提高免疫效力、增强动物的防御应答及抗病能力都起到了积极的作用。

因此本研究试图构建一个牛IFN-γ原核表达系统,生产出具有较高纯度的单克隆抗体,以期更好地满足免疫治疗等领域的应用需求。

二、研究内容1.牛IFN-γ的原核表达载体的构建本研究将利用PCR技术从牛间充质干细胞中扩增IFN-γ基因,并构建牛IFN-γ的原核表达载体,将IFN-γ基因与原核表达载体融合,以便于高效地表达IFN-γ。

2.表达及纯化牛IFN-γ将构建好的牛IFN-γ原核表达载体转化至大肠杆菌中,经过诱导表达,收集细胞,利用破裂细胞技术将IFN-γ从菌体中提取出来,再通过不同的纯化步骤进一步纯化IFN-γ,得到较高的纯度。

3.单克隆抗体的制备和鉴定将纯化好的牛IFN-γ用于制备单克隆抗体,用Western blot等方法对单克隆抗体进行鉴定,检测其特异性、亲和力和稳定性。

三、研究进展目前,已经完成了牛IFN-γ基因的克隆,构建了原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了IFN-γ。

正在进行IFN-γ的纯化及单克隆抗体的制备。

四、研究计划下一步计划对IFN-γ进行纯化和单克隆抗体的制备,并对单克隆抗体进行鉴定和研究其在免疫治疗中的应用效果。

人IFN-γ基因启动子的克隆鉴定及功能分析

人IFN-γ基因启动子的克隆鉴定及功能分析

人IFN-γ基因启动子的克隆鉴定及功能分析汤必奎;程禹;翟素莲;刘小粉;胡明洁;吴守伟【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2014(000)017【摘要】目的:克隆鉴定人IFN-γ基因启动子序列,并进行功能分析。

方法通过生物信息学方法预测启动子区域,PCR克隆至 pGL3报告载体,双荧光素酶法检测启动子活性。

结果克隆得到人IFN-γ基因翻译起始点上游700 bp启动子区域,经检测具有活性,可启动报告基因表达;同时,该区域DNA被甲基化修饰后启动活性下降达4倍。

结论克隆构建人IFN-γ基因启动子成功。

%Objective To obtain and identify human IFN-γpromoter region.Methods Promoter region was predicted by bioinfor-maticsmethods,andthenclonedtopGL3reportervector.Promoteractivitywasd eterminedbydual-luciferaseassay.Results 700bpIFN-γpromoter region was obtain by PCR and had promoter activity under activation.Conclusions Vector containing human IFN-γpromoter re-gion is constructed successly.【总页数】3页(P4901-4903)【作者】汤必奎;程禹;翟素莲;刘小粉;胡明洁;吴守伟【作者单位】蚌埠医学院生物科学系,安徽蚌埠233030;蚌埠医学院生物科学系,安徽蚌埠 233030;蚌埠医学院生物科学系,安徽蚌埠 233030;蚌埠医学院生物科学系,安徽蚌埠 233030;蚌埠医学院生物科学系,安徽蚌埠 233030;蚌埠医学院生物科学系,安徽蚌埠 233030【正文语种】中文【中图分类】R373.1【相关文献】1.人黑素瘤细胞A375 MIA/CD-RAP基因启动子的克隆及其鉴定 [J], 陈思远;黄长征;钱悦;涂亚庭2.人胰岛因子1基因启动子的克隆及活性鉴定 [J], 路康;金蕊;周国平3.人iNOS基因启动子克隆鉴定及功能分析 [J], 汤必奎;翟素莲;程禹;胡明洁;吴守伟4.人乙酰肝素酶基因启动子驱动的真核细胞表达载体构建、鉴定及功能分析 [J], 陈晓鹏;胡良鹤;王永5.人CyclinD3基因启动子区的分子克隆及在A2780细胞中的功能分析 [J], 孟凡凯;谭细友;李春蕊;黄丽芳;刘文励;周剑峰;孙汉英因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

南疆三种绵羊品种血液蛋白遗传标记特征及聚类分析

南疆三种绵羊品种血液蛋白遗传标记特征及聚类分析

南疆三种绵羊品种血液蛋白遗传标记特征及聚类分析李海;饶丽娟;王勇;程良润;李小武【期刊名称】《塔里木大学学报》【年(卷),期】2001(013)001【摘要】利用血液蛋白多态性标记新疆南部三种绵羊遗传结构,证实了它们相互间的遗传差异.结果表明:Tf位点,多浪羊和卡拉库尔羊具有A,B,C等显性基因控制,巴音布鲁克羊还检测出D基因.Hb位点,多浪羊和卡拉库尔羊具有A,B等显性基因控制,巴音布鲁克羊还检测出C基因.以上两个位点各种等显性基因频率因品种而有差异.按照Nei‘s遗传距离法(1987),计算了三品种间的遗传距离,证明新疆南部三种绵羊品种的遗传距离以多浪羊和卡拉库尔羊为最小,多浪羊与巴音布鲁克羊的遗传距离为最大.用类聚类法分析表明:多浪羊与卡拉库尔羊首先相聚,然后再与巴音布鲁克羊相聚.【总页数】5页(P15-19)【作者】李海;饶丽娟;王勇;程良润;李小武【作者单位】塔里木农垦大学,动物科技学院,新疆,阿拉尔,843300;塔里木农垦大学,动物科技学院,新疆,阿拉尔,843300;塔里木农垦大学,动物科技学院,新疆,阿拉尔,843300;巴音布鲁克自治州,农垦22团,新疆,库尔勒,831302;巴楚地区,农垦51团,新疆,巴楚,843803【正文语种】中文【中图分类】S826.2【相关文献】1.不同品种马血液蛋白(酶)遗传多态性及聚类分析 [J], 杨虹;孟克;王烨辉;芒来2.新疆南部部分绵羊品种血液遗传标记特征及聚类分析 [J], 李海;饶丽娟;张伟信;程良润;李小武3.四个地方绵羊品种血液蛋白多态性及其分类的研究 [J], 杨俊年4.陕西马种血液蛋白遗传标记特征及聚类分析 [J], 侯文通5.宁夏滩羊与四种引进羊种血液蛋白遗传标记特征及聚类分析 [J], 张慧茹;丁园;顾亚玲;李颖康因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

IFN-γ基因多态性与HBV感染及原发性肝细胞癌易感性的研究

IFN-γ基因多态性与HBV感染及原发性肝细胞癌易感性的研究

IFN-γ基因多态性与HBV感染及原发性肝细胞癌易感性的研究柏桦;仇小强;刘顺;贝春华;曾小云;余红平【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2012(39)3【摘要】目的探讨细胞因子IFN-γ基因-1615C/T和+5171A/G位点单核苷酸多态性在广西人群中的分布及其对原发性肝细胞癌(HCC)发生、乙型肝炎病毒(HBV)感染的影响。

方法设计以医院为基础的病例对照研究,对375名HCC患者、377名HBV携带者和406健康对照进行频数匹配,采用Taq-Man MGB实时荧光定量PCR技术对上述位点进行分型。

应用Logistic回归模型分析基因型在三组中的分布差异及基因环境交互作用,并进行连锁不平衡和单倍型分析。

结果 -1615C/T和+5171 A/G位点的基因多态性在三组中分布差异无统计学意义(P>0.05)。

Logistic回归分析结果显示,吸烟、饮酒和肝癌相关家族史与基因存在交互作用;饮酒联合-1615C/T位点突变型基因T能增加HBV感染风险(OR=1.72,95%CI:1.11~3.26);两个位点的突变型基因T和G联合肝癌相关家族史能增加HCC患病风险(OR:29.24、52.03,95%CI:6.91~123.6、7.02~385.4)。

IFN-γ的-1615C/T和+5171A/G位点存在连锁不平衡(D′=0.976,P=2.22-16),但单倍型分布在HCC组与总对照组(HBV携带者对照和健康对照)间无统计学差异。

结论IFN-γ的-1615C/T和+5171A/G位点的突变型基因可能不是广西人患HCC 和感染HBV的直接危险因素,但环境危险因素对HCC发生和HBV感染有协同作用。

【总页数】6页(P329-334)【关键词】原发性肝细胞癌;HBV感染;IFN-γ;基因多态性【作者】柏桦;仇小强;刘顺;贝春华;曾小云;余红平【作者单位】广西医科大学公共卫生学院流行病学教研室;桂林医学院公共卫生学院;桂林医学院科技处【正文语种】中文【中图分类】R181.2;R735.7【相关文献】1.驱动蛋白家族成员1B基因rs17401966位点多态性与原发性肝细胞癌遗传易感性的关联研究 [J], 潘欢欢;苏成豪;林勇;牛建军2.IFN-γ+874基因单核苷酸多态性与宫内HBV感染易感性关系的研究 [J], 俞蕙;朱启殚;顾绍庆;费林娥;浦东波3.OPN基因启动区-156delG多态性与中国HBV相关肝细胞癌的易感性 [J], 时红;吴元凯;林国莉;李向永4.IL-10基因多态性与 HBV 感染易感性研究 [J], 高建梅;刘华兴;邹云莲;董虹;严新民(通讯作者)5.结合珠蛋白基因多态性与HBV相关性肝细胞癌易感性的关系分析 [J], 杨海娇; 杨广民因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

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文献标识码 : A D I1 .9 9ji n 10 0 6 .0 10 .0 O : 36 /.s .0 9— 5 8 2 1 .2 04 0 s 中图分类 号 :8 6 ¥2
C o iga dS q e c n ls f F — fo D oa gS epi i i g lnn n eu n eA ayi o N rm u ln h e X n a s I n jn
第2 3卷
第2 期







V0 . 3 No 2 12 .
21 0 1年 6月
J u a fT rm ie s y o r lo ai Unv ri 8 2 1 )2- 0 9— 5 10 0 6 (0 1 0 0 1 0
Z o W e bn u n i P n Hu L in 2 a i i a mi- L
( o eeo Lf S ine T r nvr t, lr X ni g8 3 0 ) 1C l g f i c c , ai U i s y A a , i a 4 3 0 l e e m ei jn ( e a oao f a m A i a H sa d c n ea dT c nlh f ij n rd c o n 2K yL b rt yo f nm l ub n r S i c n eh o yo ni gPo ut na d r Ti y e o X a i C nt ci ru s T r nvr t-Aa X ni g8 3 0 ) o s u t nG op , ai U iesy l r o m i r, ij n 4 3 0 a ( o eeo nm l ce c , ai n es y A a , i i g8 3 0 ) 3C l g f i a S i e T r U i r t, lr X n a 4 3 0 l A n m v i jn
读框 , 通过 G n ak中的 B s 序列 比较分 析 , eB n lt an 多浪羊 的 IN一 F 基 因与普通绵羊 的同源性高达 9.2 , 多浪羊 IN一 的 98% 为 F
功能研究 及多浪羊免疫应答基 因的筛选奠定基 础。 关键词 多浪羊 ; N一 基 因克隆 ; I ; F 核苷 酸序列分析
摘要
为 了分析新疆多 浪羊 的 IN一 基因 , F 根据 G n ak中 N 0 10 8 3的 m N eB n M_0 0 90 R A序列设计 引物 , 以新疆多浪羊淋 巴细胞
的总 R A为模板 , R N 用 T—P R扩增 多浪 羊 IN一 基 因序列 。测 序结 果表明 , N一 C F I 基 因序列包 含 了一个 5 2b F 8 p的开放 阅
A s a t A crigt m N eune( O. M_0 0 9 0 )f m G n ak oepio f e w sds n d T e F gn bt c cod R A sq ec N N 0 10 83 r e B n , n ar f i  ̄ a ei e . h N一 e e r n o o pm g I
多浪羊 IN一 基 因克 隆及核 苷酸序 列分析 F
左文斌 潘 辉 李莲瑞
( 塔里木大学生命科学学院 , 1 新疆 阿拉尔 8 30 ) 4 30 ( 2塔里木畜牧科技兵团重点实验室 , 新疆 阿拉尔 830 ) 4 30
( 3塔里木大学动物科学学院 , 新疆 阿拉尔 83 0 ) 4 30
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