利用噬菌体展示肽库筛选鸡传染性支气管炎病毒模拟抗原表位

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从噬菌体表面展示肽库中筛选衣原体单克隆抗体识别的抗原表位

ｏｈｏｅｉｉｅＥＬ＆ｄｍｏｓｒｔｄｔａｈｈｇ［ｎｓｗｈｃｄｔｅＣＤ￣ｆｔｅｃｍｐｔｖＬｔＳｅｎｔｅｈｔｅｐａｅｅｅｉｈｈｈＯＳａｔｏａ
ｒｅａｔｅ．ｉｎｉｎｖｇＫｅｒｂ：ＰａｅｄｓｌｙＲａｄｍｅｆｅｌｒｒＣｈａｄａＥｐｔｐｙｗ０【ｈｇｉａ；ｎｏｐｐｄｉａｙ；ｔｍｙｉ；ｉｅｐｉｂｏ
正常小鼠ｌＧ筛选结果为阴性（）ｇ０。三轮筛选后，若Ｐ０比值大于２可认为出现富集，／０随机挑选单克隆制备原种。筛选所用单抗Ｃ７正常小鼠ｔ１及ｇＧ包被酶联板，％ＢＡ封闭非特异性结合位点。加５Ｓ单克隆噬菌体原种与包被抗体充分结合后，以ＨＩ一ｎｉ３、ＭＢ显色。Ｄ３２Ａ型酶联免ａｔＭ１ＡｂＴＧ０２
２１生物淘洗（ｉａｎｎ）．Ｂｏｎｉｐｇ单抗Ｃ７和正常小鼠［Ｇ溶液各１０ｌ被１ｇ０包酶联板微孔，盒４过夜，％ＢＡ封闭。淘洗方湿 ℃ ５Ｓ
心的研究、小分子肽疫苗设计、抗原表位的确定中显示出优势－。１Ｊ３
疫检测仪测０３５。１４０２３提取阳性克隆单链Ｄ．ＮＡ＋ＱＩｒｐＳｉ按ＡｐｅｐｎＭ１ｔ５）剂盒操作指南进行。送北京市普京３Ｋｉ０试（康生物工程技术有限公司测序，序列比较分析。进行２４竞争抑制试验Ｌ．５Ｊ衣原体超声波破碎抗原包被酶联板，％ＢＡ５Ｓ

利用噬菌体随机肽库筛选Rh(D)血型抗原的模拟表位

安徽医科大学学报
ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ２０１３Ｊｕｌ；４８（７）
・８１７・
利用噬菌体随机肽库筛选Ｒｈ（Ｄ）血型抗原的模拟表位
Ｒｈ（Ｄ）血型抗原模拟表位。方法
（Ｄ）抗体血清对噬菌体随机十二肽库进行３轮“ 吸附一洗脱
一
扩增 ” 过程筛选，随机挑取噬菌体克隆；用ＥＬＩＳＡ法检测
在前期已用抗Ｒｈ（Ｄ）单克隆抗体筛选噬菌体肽库获得Ｒｈ（Ｄ）血型抗原表位模拟肽基础上Ｊ，现拟用人源纯化的混合抗Ｒｈ（Ｄ）多克隆抗体筛选肽库
安徽医科大学第一附属医院输血科，合肥作者简介：刘淑均，女，硕士研究生；
沈继龙，男，医学博士，教授，博士生导师，责任作者，Ｅ —
每孔包被微孔板，４ ℃过夜洗板，含５ｇ／Ｌ牛血清蛋白（ＢＳＡ）的ＮａＨＣＯ３（ｐＨ８．６）缓冲液３７￣１２封闭１ｈ，ＴＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ）洗涤６次，ＴＢＳＴ将噬菌体稀释到３×１０ ” 后每孔加人１００Ｉｘｌ。室温条件下轻摇１
菌体展示的多肽对Ｒｈ（Ｄ）血型抗原结合的模拟作用。结果
经过３轮筛选和相应鉴定后得到６个抗Ｒｈ（Ｄ）抗体的特异性噬菌体克隆，其中４个克隆展示相同的氨基酸序列为

噬菌体展示技术的原理和方法

噬菌体展示技术的原理和方法噬菌体展示技术是一种利用噬菌体表面展示特定肽段或蛋白的技术。

这项技术自20世纪80年代问世以来，已在许多领域显示出广阔的应用前景，包括药物研发、疫苗设计、蛋白质相互作用研究等。

本文将详细介绍噬菌体展示技术的原理和方法，并探讨其优缺点和发展趋势。

噬菌体展示技术利用的是噬菌体的特性，噬菌体是一种病毒，专门感染细菌等微生物。

它们由蛋白质外壳和内部遗传物质组成，其中蛋白质外壳又由多个蛋白亚基组成。

噬菌体展示技术利用噬菌体表面展示特定的肽段或蛋白，这些肽段或蛋白可以来自天然蛋白质，也可以是人工合成的。

展示在噬菌体表面的这些肽段或蛋白能够与特异性受体结合，从而实现表面展示的功能。

噬菌体展示技术的关键之一是选择合适的展示载体。

载体通常是一种丝状噬菌体，其基因组可以容纳较小的外源基因片段。

常用的载体包括M filamentous phage等。

这些载体具有一些共同的特性，如对外源蛋白质的容纳能力较强，能在体内和体外环境中稳定存在等。

在噬菌体展示技术中，需要筛选出能感染特定细菌的噬菌体。

这些噬菌体可以是自生的，也可以是通过基因工程改造得到的。

在筛选过程中，可以利用不同细菌的特性，如受体类型、细胞壁结构等，来选择合适的噬菌体。

还需要考虑噬菌体的毒性、繁殖能力等因素。

在噬菌体展示过程中，需要反复感染以积累足够数量的展示肽段或蛋白。

这个过程中，通常需要使用超滤或凝胶过滤等手段对噬菌体进行纯化，以确保得到的展示肽段或蛋白的纯度和浓度。

反复感染的过程不仅可以增加展示肽段或蛋白的数量，还能帮助排除展示过程中可能产生的突变。

克隆选择是噬菌体展示技术的另一个关键步骤。

这个过程中，通过将展示肽段或蛋白与特定配体结合，筛选出能够与配体结合的克隆。

这些克隆可以进一步扩增和纯化，从而获得高亲和力和高特异性的克隆。

噬菌体展示技术的优点在于其能够将蛋白质或多肽特异性与噬菌体的生物学特性相结合，从而实现表面展示的功能。

噬菌体展示技术的原理及其应用

Smith GP. Filamentous fusion phage : novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface. Science, 1985, 228: 1315 - 1317.
1990年Scott等首次将随机序列肽与丝状噬菌体表面蛋白g 融合展示在噬菌体表面，建立了噬菌体展示随机肽库。
• pVIII (50aa, ~2700 copies) • pVI (112aa, 5~8copies)
http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S1415-47572005000100001&script=sci_artt1ex0t
载体的插入位点
11
pIII 和pVIII 噬菌体展示系统
4
特点
该技术的主要特点是将特定分子的基因型和表型统一在同一病毒颗粒内，即在噬菌体表面展示特定蛋白质，而在噬菌体核心DNA中则含有该蛋白的结构基因。另外，这项技术把基因表达产物与亲和筛选结合起来，可以利用适当的靶蛋白将目的蛋白或多肽挑选出来。
5
Phages
•Filamentous phages
• The combination of the phage and peptide is known as a Fusion Protein
13
选择方法：
淘选（Panning)
而不是
筛选（Screening)
14
非展示系统
展示系统
15
淘选系统淘选方法
固相完整细胞组织，器官
常规法正负法竞争法
M13 Fd F1

应用噬菌体展示随机12肽库筛选诺如病毒抗原模拟表位

应用噬菌体展示随机12肽库筛选诺如病毒抗原模拟表位周飞园1王璐1△梁芷妍1林璧慧2李佳恒1王宇1井多娜1张绪富2戴迎春1（1.南方医科大学公共卫生学院流行病学系，广州 510515；2.南方医科大学中医药学院，广州 510515）中图分类号R392.11 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2024）02-0383-06［摘要］目的：利用Ph.D.-12噬菌体展示肽库筛选诺如病毒（NoV）的抗原模拟表位。

方法：包被与GⅡ.4、GⅡ.6、GⅡ.17型NoV具有高特异性及中和能力较强的单链可变片段抗体（scFv），用Ph.D.-12噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选。

ELISA鉴定淘选所得噬菌体与scFv的结合活性及其与NoV P蛋白的竞争作用；阳性克隆测序后进行生物信息学分析，合成多肽鉴定其抗原性。

结果：发现1段与GⅡ.6 VP1区同源性较高的氨基酸序列“MG-D-W”，综合分析提示其可能为GⅡ.6 NoV的抗原模拟表位，且合成的包含“MG-D-W”的多肽可竞争抑制P蛋白与人类组织血型抗原（HBGAs）受体的结合。

结论：“MG-D-W”是与NoV单链抗体高亲和力的肽段，可能模拟了GⅡ.6 NoV与scFv结合的抗原表位。

［关键词］诺如病毒；12肽库；抗原模拟表位；单链可变片段抗体Screening antigen mimic epitope of Norovirus by phage random 12-peptide libraryZHOU Feiyuan1， WANG Lu1△， LIANG Zhiyan1， LIN Bihui2， LI Jiaheng1， WANG Yu1， JING Duona1，ZHANG Xufu2，DAI Yingchun1. 1. Department of Epidemiology， School of Public Health， Southern Medical University， Guangzhou 510515， China； 2. School of Traditional Chinese Medicine， Southern Medical University， Guangzhou 510515， China ［Abstract］Objective：To screen mimic epitope of Norovirus （NoV） by Ph.D.-12 phage display peptide library. Methods：Sin‐gle-chain variable fragment antibody （scFv） with high specificity and neutralizing ability against GⅡ.4/GⅡ.6/GⅡ.17 NoV were coated and screened for 3 rounds with Ph.D.-12 phage library. ELISA was used to identify binding activity of phage with scFv and its competi‐tion with NoV P protein. Positive clones were sequenced and bioinformatic analysis was performed， antigenicity was identified by syn‐thetic peptides. Results：A sequence was found to be with highly homologous to GⅡ.6 VP1 region： MG-D-W， suggesting that it was a specific epitope of GⅡ.6 NoV. Peptide containing "MG-D-W" was further synthesized， which could competitively inhibit binding of P protein to HBGA receptor. Conclusion：MG-D-W is a peptide with high affinity for NoV scFv and likely mimics antigenic epitope of GⅡ.6 NoV bound to scFv.［Key words］Norovirus；12-peptide library；Antigen mimic epitope；Single-chain variable fragment antibody诺如病毒（Norovirus，NoV）是导致非细菌性胃肠炎散发及暴发的主要病原体，约占全球急性胃肠炎发病率的1/5［1］。

传染性支气管炎病毒抗原模拟表位在大肠杆菌鞭毛上的展示

证通过噬茵体肽库筛选得到的２个传染性支气管炎病毒（Ｖ）原模拟表位在脱离噬茵体后仍具摘进Ｉ抗Ｂ
有与ＩＶ抗体结合的生物学活性。方法：用基因工程技术合成２个ＩＶ抗原模拟表位（ＳＫＳＳＬＢ应ＢＫＰＨＳＡＨＦ和ＳＩＭＮＨＲＩＱＬ
研究报告
传染性支气管炎病毒抗原模拟表位在大肠杆菌鞭毛上的展示
安烨１，宏俊，慧，玉梅，，王２徐龚张培君
１．北京市农林科学院畜牧兽医研究所，京１０９；２北００７．首都师范大学生命科学学院，京１０３北００７
维普资讯
生
Ｌ＇ＳＩＢＯＴＨＮＯＬＧＹＶ１９Ｎ．ｙ０８ＥＴＩＥＲＮＩＥＣＯｏ．ｏ３Ｍａ，２０１
物
技
术
通
讯
４０１
文章编号：０９－０２２ｏ）３Ｊ０＿３１０－０（ｓ＿４ｌ０００００
【ｂｔａｔＯｊｃｉｅｏａｅｔｉｔｅｔｏｉｅｔｕｒｎｈｔｉｓＩＶＡｓｒｃ】ｂｅｔ：Ｔｔｓｆｈｗｎｃｏｓｂｏｃｉｓｖｕ（）ｍｉｔｐｓｗｉｅｅｏｔｉｅｒｍｐａｅｖｔｆｉｉｒＢｍｏｅｈｈｗｒｂａｄｆｈｇｏｃｎｏ
ＰＳ的编码碱基序列，其分别插入质粒ｐｌｒ，建重组展示载体ｐｒ）将Ｆｉｘ构Ｔｌ和ｐ，分别转化大肠杆菌Ｇ８６形成展示ＩＶ２并Ｉ２，Ｂ

噬菌体展示的原理及应用

噬菌体展示的原理及应用1. 噬菌体展示技术简介噬菌体展示技术是一种利用噬菌体病毒颗粒表面展示特定外源蛋白或肽段的方法。

噬菌体是一种寄生细菌的病毒，可以将外源蛋白或肽段插入噬菌体基因组，使其在噬菌体颗粒表面展示出来。

噬菌体展示技术在蛋白质工程、药物研发和抗体库筛选等领域具有广泛的应用。

2. 噬菌体展示的原理噬菌体展示技术的原理基于噬菌体病毒的寄生特性和其基因组的可重组性：•插入外源基因：在噬菌体基因组中，利用重组技术将外源基因插入噬菌体感染机器中的特定位置。

外源基因可以是编码特定蛋白或肽段的DNA序列。

•融合外源蛋白：插入外源基因后，在噬菌体感染机器中可以进行外源基因的表达，产生融合蛋白。

融合蛋白包括外源蛋白或肽段以及噬菌体封套蛋白。

这样，外源蛋白或肽段就与噬菌体病毒颗粒连接在一起。

•展示在颗粒表面：融合蛋白随后会组装成为完整的噬菌体病毒颗粒。

外源蛋白或肽段以及噬菌体封套蛋白都会以面向外界的方式展示在病毒颗粒的表面。

3. 噬菌体展示技术的应用噬菌体展示技术由于其独特的原理和特点，在许多领域有着广泛的应用。

以下是噬菌体展示技术在一些领域的应用示例：•蛋白质工程：可利用噬菌体展示技术进行蛋白质工程研究，通过插入外源基因，并在噬菌体表面展示融合蛋白，可以实现对蛋白质的功能、稳定性和抗原性等方面的优化。

•药物研发：噬菌体展示技术可以用于药物研发中的靶标筛选和药物设计。

通过在噬菌体表面展示特定的蛋白，可以高通量地筛选出与该蛋白相互作用的潜在药物分子，并进一步优化和开发。

•抗体库筛选：噬菌体展示技术在抗体库筛选中发挥着重要作用。

通过将外源抗体基因插入噬菌体基因组，并将融合抗体展示在噬菌体表面，可以实现对大规模抗体库的高通量筛选，从而寻找到具有特定亲和力和特异性的抗体。

•疫苗研究：噬菌体展示技术可以用于疫苗研究中的抗原筛选和疫苗设计。

通过插入外源抗原基因，并将融合抗原展示在噬菌体表面，可以实现对抗原结构和免疫原性的调控，从而提高疫苗的有效性和安全性。

利用噬菌体肽库筛选Survivin结合肽

利用噬菌体肽库筛选Survivin结合肽刘思远;许向云【摘要】目的:将纯化的Survivin蛋白作为诱饵,从噬菌体肽库中筛选出结合肽.方法:用纯化的Sur-vivin蛋白包被35 mm的塑料培养皿,加入随机12肽的噬菌体肽库,用靶分子溶液竞争性洗脱结合的噬菌体.通过测定噬菌体滴度检测Survivin蛋白的吸附、富集效果,筛选阳性噬菌斑,制作DNA测序模板进行测序.结果:经3轮筛选,噬菌体显示有良好的富集效果.从第3轮筛选产物中挑取8个蓝色噬菌斑(阳性克隆)进行测序,DNA测序结果表明,具有一致性序列GIANNFFTLKIS.结论:从噬菌体随机肽库中,筛选到能与Survivin蛋白特异性结合的一段短肽,为Survivin蛋白的进一步研究奠定基础.【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2010(042)005【总页数】3页(P524-526)【关键词】噬菌体肽库;筛选;Survivin;结合肽【作者】刘思远;许向云【作者单位】呼和浩特市卫生学校,内蒙古,呼和浩特,010050;呼和浩特市疾病预防控制中心,内蒙古,呼和浩特,010030【正文语种】中文【中图分类】R392.1细胞增殖和凋亡调节失控与肿瘤的发生发展密切相关。

近年研究发现凋亡蛋白抑制因子(Inhibitors of apoptosis protein,IAPs)家族在凋亡的基因调控中发挥重要作用[1]。

1997年Ambrosini等发现了定位于人染色体17q 25的Survivin基因,其编码蛋白为142个氨基酸,分子量约为16.5 kDa,是IAPs家族中最小的成员[2,3]。

与其他IAPs因子不同,Survivin仅表达于胚胎发育组织,在分化的正常组织中沉默,但特异性地表达于几乎所有人类的肿瘤组织,在100多种肿瘤特异性表达基因中,其表达特异性列前四位[2～7]。

有资料显示Survivin作用于caspase凋亡途径的会聚点,即直接抑制终末效应蛋白caspase-3和caspase-7的自发活化,强烈抑制由于二者过度表达诱发的凋亡[8,9]。

噬菌体展示肽库说明说中文版

应用噬菌体表面展示肽库快速筛选肽配体使用手册含tet选择性F因子的新大肠杆菌宿主菌：不再需要minimal平板贮存于：-20℃目录：简介 (2)培养基和溶液 (5)常规M13方法 (6)淘选程序（固定靶分子） (8)结合克隆的特征 (12)其他淘选方法（液相结合法） (15)其他抗原表位作图方法（Protein A/G捕获法） (16)附录：优化肽结合相互作用 (19)文库的氨基酸分布 (21)试剂盒组成：（如无特殊说明，试剂盒中所有成分均需-20℃保存）：•随机十二肽噬菌体展示文库100 µl, 1.5×1013 pfu/ml。

贮存于含50%甘油的TBS溶液中。

复杂度~2.7×109个转化子。

• -28 gIII测序引物5’-HO GTA TGG GAT TTT GCT AAA CAA C-3’, 100 pmol, 1 pmol/µl• -96 gIII测序引物5’-HO CCC TCA TAG TTA GCG TAA CG-3’, 100 pmol/µl, 1 pmol/µl• E.coli ER2738宿主菌F’ lacI q Δ(lacZ)M15 proA+B+ zzf::Tn 10 (Tet R)/fhuA2 supE thi Δ(lac-proAB) Δ(hsdMS-mcrB)5 (r k –m k–McrBC–)。

该菌株以含50%甘油的菌体培养物形式提供，非感受态细胞。

贮存于-70℃。

• 链霉亲和素Streptavidin, 冻干粉1.5 mg• 生物素，10 mM 100 µl Ph.D.TM是New England Biolabs, Inc. 的注册商标。

该产品仅售为研究用，不得以任何形式进行商业再销售。

用该类产品发现的序列的商业化可能需要来自Dyax公司的美国专利5,223,409、5,403,484和/或5,571,698及其相关专利权的授权。

噬菌体展示技术在生物检测上的应用

噬菌体展示技术在生物检测中的应用摘要：噬菌体展示技术（Phage display technology，PDT）是通过将外源基因与噬菌体基因组中编码外壳蛋白的基因融合，在噬菌体侵染宿主细胞后，能够将目的基因编码的多肽展示在噬菌体表面的技术。

噬菌体展示技术已被用于药物开发、肿瘤研究以及免疫学等领域。

本文主要介绍噬菌体展示技术的基本原理以及该技术在真菌毒素、农药等生物检测上的应用。

关键词：噬菌体展示技术；生物检测；真菌毒素；农药Phage Display Technology and Its Application in BiologicalDetectionGuan Pang Academic advisor: Yongheng LiangAbstract：Phage display technology is a technology which fuses exogenous gene and phage gene encoding phage coat protein，which can display the protein encoded by target gene on phage surface after infecting the host cell. Nowadays, phage display technology has been used in the fields of drug development, cancer research and immunology. This paper mainly introduces the basic principle of phage display technology and its application in mycotoxin and pesticide detection.Key words: Phage display technology；biological detection；mycotoxin；pesticide噬菌体展示技术是最早是由美国的Smith GP创建，首次将外源基因插入丝状菌体f1的基因Ⅲ，使目的基因编码的多肽展示在噬菌体表面[1]。

噬菌体展示肽库技术及其在分子病原细菌学研究中的应用

粒上只含有少数几个拷贝，因而对于获得高亲和力的多肽很有好处，Ｐｌ几乎是目前所有噬菌体展示库的骨架。而故ｌＩｐ只能融合较小的外源肽段， Ⅶ 携带肽段太大会影响噬菌体粒子的组装与感染能力，但其拷贝数高，重组噬菌体作为免疫原时，可产生良好的免疫应答反应，在疫苗研制中应用价值大。
噬菌体展示肽库技术在分子病原细菌学中的应用；并对今后的研究方向进行了展望。关键词：噬菌体展示肽库；病原细菌学；应用中图分类号：８２６Ｓ５．１文献标志码：Ａ文章编号：１７－８（０１０－３－５６２７３２１）１０４０９０
的线索和依据。
噬菌体表面展示技术是Ｓｉｍｔ１８ｈ于９５年首先建立起来的～种新的生物技术Ｊ它将外源基因插入丝状噬菌体基因，组中，从而使表达的外源肽或蛋白与噬菌体衣壳蛋白融合而展示在噬菌体表面，被展示的蛋白或肽可以维持相对稳定的
空间结构和生物学活性ｌ。１９，ｏ等首次将随机序列肽与丝状噬菌体表面蛋白ｇ４９０年ＳｔＪｃｔ融合展示在噬菌体表面，建立了噬菌体展示随机肽库。之后，噬菌体肽库技术讯速发展，已广泛用于抗原表位筛选、免疫学诊断、疫苗研制、物筛药选等方面，尤其在蛋白质结构研究、】抗原表位分析、 ” 人工抗体制备、］激素或病毒受体结合序列及酶的底物或抑制剂序列的确定、因子拮抗剂的研制和寻找细胞内信号蛋白等研究中发挥重要作用。笔者从噬菌体展示技术的基细胞Ｊ
克隆。以６肽为例，至少应获得１１０～０以上的独立克隆。肽库的建立基于以下事实：１含有关键残基的小肽可以模（）

单抗的抗原表位的鉴定方法

单抗的抗原表位的鉴定方法
单抗的抗原表位的鉴定方法有多种，包括但不限于以下几种：
1. 噬菌体随机肽库：利用噬菌体展示技术，将多肽编码基因插入噬菌体外壳蛋白基因中，从而将多肽表达于噬菌体外壳表面，然后通过与特异性抗体结合，筛选出与抗体结合的噬菌体，再通过测序确定多肽序列，从而鉴定出抗原表位。

2. X-射线晶体学：通过X-射线晶体学技术，对抗原-抗体复合物进行结构解析，从而确定抗原表位的结构特征和空间构象。

3. 丙氨酸扫描：利用丙氨酸替换法，将抗原中的每个氨基酸逐一替换为丙氨酸，然后检测替换后抗原与特异性抗体的结合能力，从而确定关键的抗原表位。

4. 氢氘交换质谱（HDX-MS）：通过氢氘交换质谱技术，检测抗原与特异性抗体结合时氢氘交换的情况，从而确定抗原表位的构象变化和亲和力。

5. 生物信息学表位预测方法：基于生物信息学技术，对已知的抗原和抗体序列进行分析和模拟，从而预测抗原表位的位置和特征。

总的来说，选择哪种方法取决于抗原表位的性质、抗体的特异性以及实验条件。

这些方法可以单独使用，也可以结合使用以提高鉴定结果的准确性和可靠性。

应用噬菌体展示肽技术筛选尘螨变应原B细胞表位模拟肽及其体内外生物学功能的研究

应用噬菌体展示肽技术筛选尘螨变应原B细胞表位模拟肽及其体内外生物学功能的研究尘螨是引起变应性疾病的主要变应原,用尘螨变应原提取物进行临床检测和特异性免疫治疗应用广泛。

然而尘螨提取物受原材料和提取技术等因素的影响,在蛋白成分、含量及纯度等方面差异性大,直接影响了临床诊断的准确性以及特异性免疫治疗的疗效和安全性。

本研究中,我们抛开对变应原本身的研究,用尘螨变应原阳性患者血清中针对尘螨的特异性IgE抗体为钓饵,进行由果到因的反推。

通过噬菌体展示随机肽技术进行阴阳双重筛选,得出与尘螨特异性IgE结合的模拟肽。

首先用尘螨变应原IgE阴性的过敏患者血清中IgE进行阴性筛选排除IgE保守的重链结合肽,再用尘螨阳性患者血清中IgE为钓饵,得到和IgE抗体高变区结合的尘螨B细胞线性以及构象表位模拟肽库。

为了验证筛选的尘螨B细胞表位模拟肽的体内生物学功能,我们利用户尘螨诱发的变应性鼻炎伴支气管哮喘小鼠模型,观察所筛选的尘螨B细胞表位模拟肽1,2与3对小鼠模型气道炎症的治疗作用,为进一步研制和开发尘螨特异性免疫治疗的B细胞表位疫苗提供实验依据。

一、与尘螨IgE结合的噬菌体的筛选1、噬菌体的亲和筛选：以尘螨IgE阴性的过敏患者血清IgE为诱饵进行阴性筛选,获得不能结合的噬菌体,然后再以尘螨阳性患者血清IgE抗体为诱饵进行阳性筛选,选出能够结合的噬菌体。

在筛选过程中,通过降低钓饵的浓度、减少钓饵与肽库作用时间、增加洗脱强度,去除不能与尘螨IgE结合和与尘螨IgE结合较弱的噬菌体,经三轮筛选后得到富集程度较高的分别与尘螨IgE特异性结合的噬菌体克隆。

2、挑选与IgE特异性结合的噬菌体克隆：从经过阴性和阳性筛选后的洗脱物中随机挑选出100个噬菌体单克隆,通过ELISA技术进一步鉴定其与尘螨IgE 结合的特异性,结果得到84个能与尘螨IgE特异性结合的噬菌体。

3、DNA测序与多肽合成：将84个噬菌体克隆进行DNA测序后,除去相同序列以及克隆无效的序列,最后获得44个噬菌体克隆。

应用噬菌体展示随机肽库淘筛mAb5H5识别的抗原表位

应用噬菌体展示随机肽库淘筛mAb5H5识别的抗原表位李光玉;白雪帆;潘蕾;杨为松【期刊名称】《中国病毒学》【年(卷),期】2001(016)004【摘要】本文利用噬菌体随机9肽库探索汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)B细胞抗原表位.以抗HTNV NP单克隆抗体(mAb)5H5作为筛选分子,生物淘洗噬菌体递呈的随机9肽库.阳性克隆经夹心ELISA、竞争ELISA鉴定后,随机挑取10个克隆,DNA测序,与HTNV 76～118株S基因进行同源性分析.结果显示筛选到的噬菌体能特异地与5H5结合,这种结合可被天然抗原所抑制.10个克隆的氨基酸序列相同,均为VRDAEEQYE,与76～118株NP氨基端的aa25～33一致.证实了该线性表位是mAb 5H5识别的表位,噬菌体肽库有助于病毒抗原表位的确定.【总页数】4页(P386-389)【作者】李光玉;白雪帆;潘蕾;杨为松【作者单位】第四军医大学唐都医院感染病诊疗中心,;第四军医大学唐都医院感染病诊疗中心,;第四军医大学唐都医院感染病诊疗中心,;第四军医大学唐都医院感染病诊疗中心,【正文语种】中文【中图分类】R512.8【相关文献】1.噬菌体展示随机十肽库的构建及抗WSSV单链抗体A1的模拟抗原表位的淘选和鉴定 [J], 袁丽;王玉珍;肖囡;张晓华;戴和平2.应用噬菌体随机9肽库淘筛汉滩病毒核衣壳蛋白B细胞表位 [J], 李光玉;白雪帆;潘蕾;杨为松3.应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位 [J], 尹可欣;迟象阳;任军;房婷;刘树玲;刘炬;杨秀旭;李建民;于长明4.噬菌体展示随机肽库及其在抗原表位研究上的应用 [J], 王欣之;傅志强5.用噬菌体展示随机12肽库筛选HCV B细胞抗原表位 [J], 汤兆明;郭永建;卓孝福;苏东辉;王长青因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

噬菌体展示技术及其在抗原表位筛选中的应用-生物淘

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Ph.D.系统类型
根据所用噬菌体类型的不同，又可以分为丝状噬菌体(M13，fd,f1)展示系统、λ 噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统、T7噬菌体展示系统、噬菌粒展示系统等。
λ 噬菌体展示系统
T4噬菌体展示系统
1.T4噬菌体病毒颗粒是在宿主细胞内组装，被组装的融合蛋白无需通过质膜，不需要通过分泌途径，因而其表面展示多肽和蛋白的范围广。同时噬菌体还能在体外组装，这对构建表面展示噬菌体十分方便。 2. T4噬菌体展示周期在基于 T4生命的非必需衣壳蛋白SOC和HOC。
近几年来噬菌体展示技术在应用研究方面显示出极大的实用性一些极具应用前景的产品如tpo抗病毒多肽疫苗肿瘤相关抗原p53等正处于国际知名公司和研究机构的研究开发之中
噬菌体展示技术及其在抗原表位筛选中的应用
报告人：张瑞华 2010年11月
噬菌体
噬菌体是感染细菌、支原体、螺旋体、放线菌以及蓝细菌等的一类病毒，亦称细菌病毒。噬菌体的结构简单，基因数较少，已成为分子生物学研究的重要工具；另外，因其还可作基因的载体，故又被广泛应用于遗传工程的研究。
Ph.D.概念
噬菌体展示：将外源肽或蛋白与特定噬菌体衣壳蛋白融合并展示于噬菌体表面，进而通过筛选表达有目的肽或蛋白质的噬菌体，得到大量富集，然后通过DNA序列测定进行定性。
融合蛋白
M13噬菌体展示外源基因模式图
因此，噬菌体展示技术堪称表型与基因型的统一。外源蛋白或多肽的表型和基因型被统一在了同一噬菌体颗粒内，通过表型筛选就可以获得其编码基因。
Ph.D.生物淘洗程序示意图
包被靶分子并加入肽库，肽库特异性吸附靶分子洗去未结合的噬菌体洗得特异性结合的噬菌体

用噬菌体肽库筛选SjC-TPI的模拟抗原表位

用噬菌体肽库筛选SjC-TPI的模拟抗原表位余传信;朱荫昌;殷旭仁;何伟;许永良;管晓虹【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2001(19)1【摘要】目的筛选日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (SjC TPI)分子的模拟抗原表位 ,研究其免疫学特性。

方法用纯化的抗重组SjC TPI抗体 (IgG)筛选 12肽库 ,获取SjC TPI的模拟抗原表位 ,并研究其抗原特性。

结果获得SjC TPI分子的两个模拟抗原表位M1和M2 ,Westernblotting分析结果表明由这两个模拟抗原表位免疫小鼠产生的免疫血清能识别SjC TPI分子和含此两抗原表位的噬菌体外壳蛋白。

DNA测序结果显示这两个模拟抗原表位的氨基酸序列与SjC TPI无同源性。

结论本研究获得的模拟抗原表位M1及M2为SjC TPI的空间构型抗原的模拟表位。

【总页数】4页(P11-14)【关键词】日本血吸虫;磷酸丙糖异构酶;模拟抗原表位;噬菌体;肽库【作者】余传信;朱荫昌;殷旭仁;何伟;许永良;管晓虹【作者单位】江苏省血吸虫病防治研究所;南京医科大学【正文语种】中文【中图分类】R383.24【相关文献】1.利用噬菌体随机肽库筛选抗原模拟表位的研究进展 [J], 裴亚峰;胡骁飞;王耀;侯玉泽;张改平;邓瑞广2.用噬菌体展示肽库技术筛选甲肝病毒抗原模拟表位 [J], 曹经瑗;李建东;郑惠惠;毕胜利;李德新3.利用噬菌体随机肽库筛选Rh (D)血型抗原的模拟表位 [J], 刘淑均;沈继龙;卞茂红;张循善;闻慧琴4.噬菌体肽库筛选抗人B7-H4中和抗体的模拟抗原表位及其免疫原性鉴定 [J], 李晓菊;高源;张旺倩;张存5.两种方法筛选噬菌体肽库所获日本血吸虫抗原模拟表位的抗原性比较 [J], 雷家慧;姜昌富;李天群;魏兰英;朱晓华;潘虹;时红波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

噬菌体展示技术在免疫学和分子生物学中的应用

噬菌体展示技术在免疫学和分子生物学中的应用张云20112026 生物化学与分子生物学摘要：噬菌体展示技术指将外源蛋白质分子或肽段的基因克隆至噬菌体基因组DNA中，并使其编码的分子呈现于噬菌体表面，从而构建蛋白质或多肽文库，包括噬菌体抗体库技术和噬菌体肽库技术。

噬菌体抗体库模拟了天然抗体库，使得人们可以不经过复杂的免疫过程，而是直接利用抗原就可以从抗体库中筛选出特异性抗体成为可能。

噬菌体肽库技术在分析抗原表位，开发新型疫苗，筛选肿瘤细胞特异性接合肽和研究蛋白质间相互作用等方面有突出优势。

关键词：噬菌体展示技术，噬菌体抗体库，噬菌体肽库，抗体工程The Usage of Phage Display T echnique in Immunology and Molecular BiologyAbstract: Phage display technique is to clone the genes of foreign proteins or peptides into the genome of phage, displaying the encoded molecules on the surface of phage . In this way the protein or peptide library is constructed, and the technique consists of phage antibody library technology and phage peptide library technology. Phage antibody library simulates the natural library, making it possible for people to screen the specific antibody from antibody library directly by antigen instead of going through the complicated immune processes. Phage peptide library technique has great advantage in analyzing epitopes, developing new vaccines, screening specifically conjugated peptides of tumor cells and researching the interaction between proteins.Key words: phage display technique, phage antibody library, phage peptide library, antibody engineering噬菌体展示技术指利用分子生物学技术，将外源蛋白质分子或肽段的基因克隆至噬菌体基因组DNA中，并使其编码的分子呈现于噬菌体表面，从而构建蛋白质或多肽文库，被展示的外源蛋白或多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性，利用外源蛋白或多肽与筛选靶标的特异性亲和作用，通过吸附、洗脱、扩增的重复过程，将含有特异性外源蛋白或多肽的噬菌体从表达有各种外源蛋白的噬菌体库中筛选出来，并得到大量富集。

噬菌体随机12肽库中VEGF模拟表位的筛选及初步鉴定

噬菌体随机12肽库中VEGF模拟表位的筛选及初步鉴定【摘要】目的：从噬菌体随机12肽库中筛选能与抗血管内皮生长因子(VEGF）mAb阿瓦斯汀(Avastin)特异性结合的多肽. 方法：用Avastin为靶分子，对噬菌体12肽库进行3轮生物淘洗，随机挑取80个克隆，ELISA法鉴定其亲和性，将亲和性高的阳性克隆进行DNA序列测定，推导与噬菌体外壳融合的12肽氨基酸序列. Fmoc固相法合成12肽，戊二醛交联12肽与血蓝蛋白（KLH），打点印迹（Dot blot）检测偶联物能否与Avastin 结合. 结果： ELISA显示，42个噬菌体克隆与Avastin有较强的亲和性，测序发现41个阳性克隆表达的融合12肽的序列一致，1个不同；化学合成的12肽能与Avastin 特异性结合，12肽KLH偶联物也能与Avastin特异性结合. 结论：初步证明12肽模拟了VEGF部分表位.【关键词】 Avastin(bevacizumab) 细菌噬菌体肽库血管内皮生长因子交联0引言血管生成是肿瘤生长和转移的前提［1］. 血管内皮生长因子(VEGF) 是促进血管形成过程中的关键因子［2-3］.肿瘤组织中VEGF表达水平与肿瘤血管化的程度、恶性程度呈正相关［4-5］. 因此，VEGF是肿瘤抗血管生成治疗中比较理想的靶分子. 噬菌体随机肽库含有的大量不同序列结构多肽可作为任何靶抗原表位的模拟肽，运用肽库筛选时不需要靶蛋白的任何结构，只需靶抗原的mAb就可以获得具有免疫原性和抗原性的多肽，它们反映了抗原结合位点的特定的构像［6-7］. 我们利用抗VEGF mAb 阿瓦斯汀（Avastin）对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选，旨在筛选出能与Avastin有高亲和力的噬菌体克隆，并分析其展示的多肽序列能否模拟VEGF的表位.1材料和方法材料抗VEGF mAb Avastin(罗氏公司)；噬菌体随机12肽库（新英格兰生物公司）；PEG8000（华美生物公司）；IPTG,X Gal、辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗噬菌体单克隆羊抗体(HRP anti M13，皮尔斯生物技术公司）；血蓝蛋白（KLH，西格玛公司）. 550型ELISA读数仪（美国伯乐公司）.方法模拟表位肽的筛选噬菌体库的生物淘洗用100 g/L Avastin 150 μL包被96孔板的1个孔，4℃过夜，封闭后加入100 μL TBST稀释10 μL 12肽库，室温作用1 h，用1 ml/L TBST冲洗10次. 加入洗脱液 mol/L Glycine HCl,1 g/L BSA)100 μL作用8 min，吸出洗脱液，再用1 mol/L Tris HCl 15 μL中和上述洗脱液. 吸取1 μL洗脱液测定滴度，其余液体加入20 mL LB培养基（含ER2738 200 μL，四环素贮液20 μL）进行扩增和纯化. 按以上步骤进行第2,3轮筛选，但分别用3，5 mL/L TBST洗涤.阳性噬菌体的鉴定第3轮筛选完成后，挑选80个分割良好的噬菌体克隆分别进行扩增和纯化. 将纯化好的噬菌体分别加入预先包被了Avastin和人IL15 mAb（阴性对照）的96孔板中，室温作用1 h；加入HRP标记的抗M13（1∶2000）抗体，作用1 h. OPD 显色，测定A490 nm值，以A490 nm值高于阴性对照倍作为阳性克隆.阳性噬菌体与Avastin结合的剂量依赖实验以 5 mg/L Avastin包被96孔板,每孔100 μL，同时对每个Avastin包被孔设立IL15 mAb的包被孔为阴性对照，4℃孵育过夜. 加入封闭液（5 mg/L BSA, mol/L NaHCO3, pH ），4℃封闭2 h，将阳性噬菌体稀释至5×1014pfu/L后作倍比稀释（pfu：噬菌斑形成单位），直至其滴度为×1010pfu/L ，分别加入Avastin及IL15 mAb包被孔，100 μL/孔，室温孵育2 h，每孔加入HRP标记的小鼠抗M13噬菌体mAb（1∶5000）100 μL，室温孵育1 h，OPD显色后测定A490 nm值.阳性噬菌体单链DNA的提取及测序取500 μL上述噬菌体贮液，加入200 μL PEG8000/NaCl放置10 min，离心10 min，弃上清，沉淀重悬于100 μL碘化物缓冲液中，加入250 μL乙醇，室温作用100 min，离心100 min，弃上清，用700 mL/L乙醇洗沉淀，短暂真空干燥. 沉淀重悬于30 μL TE mol/L Tris HCl，1 mmol/L EDTA)中，取上述溶液5 μL送上海生工生物公司测序.人工合成12肽与Avastin结合的剂量依赖实验将不同稀释度的合成12肽加入对应的孔中（初始浓度为16 g/L，倍比稀释至终浓度为 g/L），每孔100 μL ,4℃过夜；封闭2 h，将Avastin和IL15 mAb分别加入对应孔中,每孔100 μL，室温反应1 h；每孔加入小鼠抗人IgG抗体（1∶1000) 100 μL，室温反应1 h；每孔加入HRP标记的山羊抗小鼠抗体（1∶5000) 100 μL，温孵育1 h，OPD 显色后测A490 nm值.人工合成12肽与KLH偶联［8］将10 mg KLH融于2 mL pH 10的硼酸盐缓冲液中，温和震荡，加入12肽15 mg，缓慢滴入3 mL/L 戊二醛溶液1 mL，震荡2 h至溶液变为黄色，加入1 mol/L甘氨酸作用30 min. 将反应物在pH 的硼酸盐缓冲液中4℃透析过夜，更换缓冲液继续透析4 h.偶联物的Dot blot鉴定［9］取12肽KLH偶联物5 μL，缓慢点在NC膜上，待干透以后，以含2 g/L BSA的TBS（pH ）封闭2 h. 5 mL/L TBST洗涤3次，每次5～10 min. 加入10 mg/L Avastin 室温孵育2 h. TBST同法洗涤后，加入AP羊抗人二抗，室温孵育1 h. 洗涤后显色，以不加戊二醛的反应体系产生的蛋白及无关12肽KLH偶联物为对照.分光光度法计算偶联物的结合比取KLH溶液、12肽溶液、结合物溶液，分别测定其A280 nm值，根据朗伯比尔定律计算3种溶液在280 nm处摩尔吸光系数ε. 由光的加合性原理可知ε结合物=ε12肽+εKLH ，结合物中KLH与12肽的结合比由以下公式计算：结合比= （ε结合物-εKLH）/ε12肽. 2结果噬菌体库生物淘洗在3轮生物淘洗中，阳性噬菌体的得率逐渐增大(表1)，表明所淘选的噬菌体得到了选择性的富集.表1亲和淘选对噬菌体的富集（略）阳性噬菌体克隆的鉴定ELISA结果显示80个噬菌体克隆中有42个噬菌体可以较好地与Avastin结合，而不与对照IL15 mAb 结合，确定这42个为阳性噬菌体克隆(图1).图1阳性噬菌体克隆与抗体的结合力（略）阳性噬菌体特异性分析随着阳性噬菌体投入量的增大，A490 nm值也增大，表明噬菌体与Avastin的结合呈剂量依赖性，也表明阳性噬菌体与Avastin的结合为特异性（图2）.阳性噬菌体克隆测序对42个阳性噬菌体克隆进行DNA序列测定，根据所测得的DNA序列推导其所编码的融合12肽氨基酸序列，发现41个阳性克隆所展示的12肽具有同样的序列,一个噬菌体展示的序列不同.图2阳性噬菌体与Avastin结合的剂量依赖试验（略）人工合成12肽与Avastin结合的剂量依赖性化学合成的12肽可与Avastin特异性结合，该结合呈剂量依赖性(图3).图3人工12肽与Avastin结合呈剂量依赖关系（略）偶联物Dot blot 结果及结合比12肽KLH偶联物与Avastin可特异性结合（图4），偶联物中12肽与KLH的结合比为520.1：12肽KLH偶联物； 2：KLH； 3：无关对照12肽KLH 偶联物.图412肽KLH偶联物与Avastin结合的Dot blot 鉴定（略）3讨论Avastin是针对VEGF的第一个上市的单克隆抗体，它具有良好的抗肿瘤及抗血管生成效果［10-12］，然而Avastin又存在价格昂贵、不良反应较多等缺点，从而限制了其应用，如果能找到VEGF 的表位，并以此构建针对VEGF的自体疫苗，便可避免mAb的诸多缺点. 噬菌体展示技术，多肽人工合成技术和蛋白质化学偶联技术为构建这种疫苗提供了平台，已有研究者应用这些技术成功构建了自体疫苗，如Angelika使用Cetuximab筛选了EGFR的模拟表位，构建了针对EGFR的自体疫苗［13］.按照以上思路构建的VEGF模拟多肽制备疫苗，与传统的直接用重组的人VEGF作为抗原刺激机体相比具有以下优点：制备简单，价格低廉；避免了VEGF潜在的引起肿瘤的作用；性质稳定，无内毒素和感染源等.我们用Avastin对噬菌体随机12肽库进行了3轮生物淘洗，在特异性噬菌体得到富集后，随机挑选80个噬菌体克隆，确证其中42个噬菌体克隆与Avastin具有较高的亲和性，然后提取噬菌体DNA 后进行序列分析，发现有41个噬菌体表达的融合12肽序列完全一致，这一结果提示该12肽模拟了VEGF的表位. 但同时发现这41个噬菌体与Avastin的结合力却有差异，分析原因是噬菌体在扩增后滴度不同，导致等体积噬菌体悬液与Avastin的结合力不同. 我们将在下一步试验中优化扩增噬菌体的条件，使扩增后的噬菌体滴度一致，从而减少这种差异.在本实验中，我们直接合成了筛选的12肽，但由于合成的12肽所处的环境与表达在噬菌体表面时不同，所以阳性噬菌体虽然能与Avastin结合，而我们仍然要验证合成的12肽能否与Avastin 结合，结合试验表明合成的12肽能够与Avastin结合，且结合呈剂量依赖性， 12肽脱离噬菌体后性质不变.12肽是小分子物质，分子量只有1700 ku，抗原性很弱，不能直接诱导机体产生体液免疫反应，因此必须将12肽与分子量大的载体蛋白连接，使之具备抗原性. 载体和连接方法的选择我们采取了以下原则［14］：①12肽的氨基酸组成；②连接过程不能影响12肽的结构特异性；③连接反应的效率高、产物均一、易于纯化；④连接后载体蛋白不能对12肽产生空间位阻. 根据以上原则我们选取KLH 作为载体，连接方法为戊二醛法，最终成功的将12肽与KLH连接，打点印迹表明偶联物能与Avastin结合，12肽与载体蛋白偶联后结构未受影响. 小分子物质与载体连接后需要测定两种物质的结合比，方法有化学法、放射性示踪法、分光光度法等. 本试验中，我们在对12肽、KLH、连接产物进行的紫外全波段扫描中发现这3种物质在280 nm处均有吸收峰，于是决定使用分光光度法测定结合比，成功测得偶联物中12肽与KLH结合比为520. 试验表明，分光光度法具有操作简便，安全性高、结果比较可靠的优点.【参考文献】［1］ Folkman J. 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列，ＫＰＨＳＡＨ即ＳＫＳＳＬＦ和ＳＦＮＨＲＴ。未发现这２种序列与Ｇｎａｋ中已发表的ＩＶ氨基酸序列有同源性。结论：ＦＱＬＬＰＳ且ｅＢｎＢ
结果提示，２个肽可能是ＩＶ抗原的模拟表位。这Ｂ
［ｂｔａｔＡｓｃ］０ｂｅｔｅｏｏｔｉｔｅｍｍ￣ｅｏａｉｎｃｏｓｂｏｃｉｓｖｒｓＩＶ）ｂｈｇｉｌｅｔｅｌｒ．ｒｊｃｉ：Ｔｂａｈｉｏｐｖｎｉｆｔｕｒｎｈｉｉ（ｖｎｆａｅｉｔｕＢｙｐａｅｄｓａｐｐｉｉａｐｙｄｂｒｙ
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维普资讯
生物技术通讯Ｌｒ＇ＳＩＢＯＴＣＨＮＯＬＥＩＥＲＮＩＥｑＯＧＹＶ１１．ｖ，２０ｏ．８Ｎｏ６Ｎｏ．０７
９３１
文章编号：０－０２０７６０３－４１９００（０）－９１０２００
［关键词］鸡传染性支气管炎；菌体展示肽库；原表位噬抗
［图分类号］Ｑ８；３２中７９Ｒ９
［文献标识码］Ａ
ＳｒｅｉｇｆｃｅｎｎｏＭｉｏｏｅｏｉｎｎｅｔｏｓｍｔｐｓｆＡｖａＩｆｃｕＢｒｎＤｉｐａｓｌｙ
Ｍｅｈｏｓｔｄ：ＩＧｆＩＶｇｏＢｗａｐｒｅｒｍｃｉｋｎｅａｎｕｅａａｔｒｅｏｃｅｎｈｈｇｄｓｌｙｒｎｏｓｕｆｄｆｏｉｉｈｃｅｓｒａｄｓｄｓｇｔｔｓｒｅｔｅｐａｅｉｐａａｄｍ１一ａ２ｐｐｉｅｉｒｒ．ＴｅｐｃｆｐａｅｌｎｓｅｅｎｙｅｆｒｈｂｎｉｇｂｌｙｗｉＥＩＡａｄｏｅｉｖｉｈｂｔｎｅｔｌａｙｄｂｈｓｅｉｃｈｇｃｏｅｗｒａａｚｄｏｔｅｉｄｎａｉｔｔｉｌｉｈＬＳｎｃｍｐｔｉｅｎｉｉｏｔｉＥＩＡ．ＡｎｓＬＳｄｓＤＮＡｆｈｏｉｖｃｏｅｗｒｕｆｄｆｒＤＮＡｓｑｅｃｎ．Ｒｅｕｔ：Ａｔｒ３ｒｕｄｆｂｏａｎｎ，ｔｅｏｔｅｐｓｔｅｌｎｓｅｅｐｒｅｉｉｉｏｅｕｎｉｇｓｌｓｆｅｏｎｓｏｉｐｎｉｇｈｅｒｃｅａｉｈｇａｎｒａｅｏ２ｉｓ５ｈｇｌｎｓｗｒａｄｍｌｉｋｄａｄｉｅｔｅｙＥＬＳｎｎｈｄｒｔｏｐａｅｗｓｉｃｅｓｄｔ１５ｔｉｏｆｍｅ．０ｐａｅｃｏｅｅｅｒｎｏｙｐｃｅｎｄｎｆｄｂＩＡａｄｉｉｃｍｐｔｉｅｎｉｉｏＥＬＳｏｅｉｖｉｈｂｔｎｔｉＩＡ．１ｐｓｔｅｌｎｓｗｅｅｂａｎｄ２ｏｉｖｃｏｅｒｏｔｉｅ．Ｔｋｎｓｆｍｉｏｃｄｅｕｎｅｄｓｌｙｄｎ２ｉｗｏｉｄｏａｎａｉｓｑｅｃｓｉａｅｏ１ｐ
研究报告
利用噬菌体展示肽库筛选鸡传染性支气管炎病毒模拟抗原表位
安烨１，，王宏俊，２张培君
１．北京市农林科学院畜牧兽医研究所，京１０９；２北００７．首都师范大学生命科学学院。京１０３北００７
［要】目的：用噬菌体展示肽库技术筛选鸡传染性支气管炎病毒（Ｖ的模拟抗原表位。方法：ＩＶ阳性血清纯化摘利Ｉ）Ｂ用ＢＩＧ作为靶标，噬菌体展示随机１ｇ对２肽库进行筛选，过ＥＩＡ和竞争抑制ＥＩＡ鉴定筛选克隆的结合特性。对阳性克通ＬＳＬＳ并隆提取ｓＤＡ进行测序分析。结果：ｓＮ３轮生物淘洗后，目标噬菌体得到１５倍富集。随机挑选５２０个克隆进行ＥＡ和竞争ＵＳ抑制ＥＩＡ，中有１ＬＳ其２个噬菌体克隆可以与ＩＶ阳性血清高特异性结合。测序分析发现，１Ｂ这２个克隆带有２种氨基酸序