MTT法
MTT法
MTT法（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）检测细胞增殖曲线，研究对细胞存活的影响：取对数生长期的细胞，经0.25％胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液计数，(共36－40ml培养液)→调整细胞浓度为5×103个细胞／ml，反复吹打使细胞均匀，接种于96孔培养板中，每孔100ul（细胞数为 500个培养箱孵育过夜后，36小时后弃原培养液，以细胞/孔）， 37℃，5%CO2无血清培养基清洗2遍，分组加药，加入不同浓度药液（0、10、100、1000、10000）培养液100ul(入无血清培养基中)，每种浓度设立8个平行对照（商），并设正常对照（无药对照）及空白对照（不加细胞只加培养液，其他步骤一样，最后比色调零用），置正常培养条件下培养。
→加药后的第24、48、72、96、120、144h分别取出一板，弃去培养液，每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，继续培养4小时，→小心吸弃孔内上清培养液，每孔加入DMSO 100－200μl（白），振荡摇匀，10分钟充分溶解结晶物，→室温静置20－30分钟后选择490nm（570nm白、张），在酶联免疫检测仪（96孔酶标仪）上测定各孔吸光度（OD）值，并计算细胞存活率，即：细胞存活率=试验组吸光度值/对照组吸光度值×100%1．碘化丙啶（PI）：用PBS溶为1mg/ml，4℃避光保存。
2. MTT溶液(5mg/ml)：50mgMTT粉剂溶于10mlPBS中，以孔径为0.22um滤器过滤除菌。
呵呵以前做过的，大概的实验方法如下，不知道对你是否有用1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔180μl，3000-10000个/孔。
2）置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁，培养6-24小时。
3）加入待筛样品20μl，继续培养44小时。
4）小心吸去上清，加入80μl新鲜RPMI 1640培养液，再加入20 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。
MTT法又称MTT比色法
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的基培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
注意事项：MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.配制MTT时用用PBS溶解,也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。
mtt 法
mtt 法MTT法是一种常用的蛋白质组学技术，全称为多维液相色谱-串联质谱法（Multidimensional Protein Identification Technology）。
该技术利用多维液相色谱分离样品中的蛋白质，并通过串联质谱鉴定和定量这些蛋白质，从而实现对复杂混合物中蛋白质的高通量分析。
一、MTT法的原理MTT法主要包括两个步骤：样品前处理和多维液相色谱-串联质谱分析。
在样品前处理过程中，需要对样品进行裂解、消化和标记等处理，以便于后续的分离和鉴定。
在多维液相色谱-串联质谱分析过程中，则需要将裂解后的样品通过多次柱子分离，最终将样品中的蛋白质逐一鉴定并定量。
二、MTT法的优点1. 高通量：MTT法可以同时鉴定数千种不同的蛋白质，并且可以进行高通量筛选。
2. 灵敏度高：MTT法可以检测到低至femtomole级别的蛋白质。
3. 准确性高：MTT法可以精确鉴定样品中的蛋白质，并且可以进行定量分析。
4. 可重复性好：MTT法可以进行高度重复的实验，从而保证实验结果的可靠性。
5. 适用范围广：MTT法可以应用于多种生物样品，包括细胞、组织、血清等。
三、MTT法的应用1. 生物标记物发现：MTT法可以鉴定和筛选潜在的生物标记物，从而帮助诊断和治疗疾病。
2. 蛋白质互作研究：MTT法可以鉴定蛋白质之间的相互作用关系，从而揭示蛋白质网络中的关键节点。
3. 药效学研究：MTT法可以帮助评估药物对蛋白质组的影响，从而更好地理解药物作用机制。
4. 基因表达调控研究：MTT法可以帮助揭示基因表达调控网络中涉及到的蛋白质，并且可以评估不同条件下基因表达水平的变化情况。
四、MTT法存在的问题1. 样品前处理过程中存在的误差：由于样品前处理过程中存在很多环节，如裂解、消化和标记等，因此可能会引入一些误差。
2. 数据分析难度大：MTT法产生的数据量较大，数据分析难度较高。
3. 成本较高：MTT法需要使用复杂的仪器设备和试剂，因此成本较高。
MTT配制、操作步骤、结果分析、注意事项等全面指南(配图片)
一、MTT是什么MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
（可参考Sigma，货号M5655，Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide）二、MTT法用来做什么简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。
MTT主要有两个用途1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；2．细胞增殖及细胞活性测定。
三、为何MTT可以用来做上述工作检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。
四、实验所需材料1．MTT 溶液的配制通常MTT配成的终浓度为5mg/ml，须用PBS或生理盐水做溶剂。
市面上一般MTT的包装为100mg，250mg或1g。
1.1 对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。
具休做法：预先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml PBS，从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。
可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。
将MTT完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。
MTT法原理、步骤以及注意事项
MTT法原理、步骤以及注意事项MTT原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处（也有用570nm波长的，我目前用的都是570nm)测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml 的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml 保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
mtt 法
mtt 法
MTT法，即麻醉、体位、时间法，是临床常用的评估和管理术语，其目的是确保手术患者在手术过程中得到最佳的麻醉效果，减少手术过程中的危险因素，提高手术成功率和患者康复率。
麻醉是指通过药物或其他方法，使患者失去疼痛感觉和意识。
在手术前，麻醉师会对患者进行详细的麻醉评估，包括患者的身体状况、过敏史、用药史、家族病史等，以确定最合适的麻醉药物和剂量。
在手术过程中，麻醉师会不断监测患者的生命体征，如心率、血压、呼吸等，以确保患者在手术过程中的安全性。
体位是指手术患者在手术过程中的姿势。
正确的体位可以使手术过程更加顺利，同时减少手术风险。
例如，对于背部手术，患者应该采取平躺的姿势，以保持脊柱的稳定性。
对于腹部手术，患者应该采取半坐位或头低脚高的姿势，以减少手术过程中的出血量。
时间是指手术过程中的时间安排。
手术时间应该合理安排，避免手术时间过长或过短。
手术时间过长会增加手术风险和并发症的发生率，而手术时间过短则可能导致手术效果不佳。
因此，麻醉师和外科医生应该根据手术的复杂程度和患者的身体状况，合理安排手术时间。
除了麻醉、体位、时间外，MTT法还包括其他因素的考虑，例如手术器械和设备的准备、手术室的环境和卫生等。
这些因素的合理考
虑和管理，可以最大程度地保证手术的安全性和成功率，同时提高患者的康复率和生活质量。
MTT法是手术过程中重要的管理方法，麻醉师和外科医生应该认真考虑和实施，以确保手术的安全性和成功率。
同时，患者也应该积极配合，遵从医生的建议和指导，以获得最佳的手术效果和康复效果。
MTT分析法
悬浮细胞：MTT分析法是以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的for mazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的for mazan结晶可在含50%的N, N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
实验的时候建议关闭超净台上的日光灯来避光。
步骤如下：1:接种细胞：用含10％胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔 1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul。
2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3: 呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS <ph=7.4>配）20ul. 继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10 分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
注意事项：1、选择适当得细胞接种浓度。
2、避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
3、设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。
其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。
MTT检测法
MTT法检测细胞存活和生长MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT方法总结
MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。
formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm 和570nm处进行比色。
所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。
MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。
终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。
(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。
以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线。
MTT法原理步骤以及注意事项
MTT法原理步骤以及注意事项MTT法（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide法）是一种常用的细胞活力检测方法。
它通过测量细胞对MTT染料的还原能力来评估细胞的代谢活性和存活率。
MTT法的原理简单，步骤清晰，但也需要注意一些关键点以确保结果的准确性。
下面将详细介绍MTT法的原理、步骤以及注意事项。
1.原理：MTT是一种黄色的可溶性染料，它可以进入活细胞并被还原为紫色的形式，同时在还原过程中生成的产物能够积累在细胞内，形成紫色晶体结构。
这种紫色产物可以通过加入有机溶剂（如二甲基亚砜或二甲基甲酰胺）来溶解，并且通过测量其吸光度，可以对细胞的代谢活性进行定量分析。
2.步骤：MTT法通常包括以下步骤：步骤一：培养细胞首先，需要将细胞培养在含有适当培养基的组织培养皿中，并放置在37°C的恒温培养箱中培养到细胞达到一定密度。
步骤二：接种细胞将需要检测活力的细胞接种在96孔板中，每孔含有适当数量的细胞。
通常每孔含有约1×10^4至5×10^4个细胞。
步骤三：添加MTT染料将MTT染料溶液加入到每孔中，使其与细胞均匀接触。
染料浓度通常为0.5至1mg/mL。
步骤四：孵育细胞将96孔板放回恒温培养箱中，继续孵育细胞。
通常在37℃下孵育2至4小时，使细胞有足够的时间还原MTT染料。
步骤五：加入溶解剂去除培养液后，加入溶剂（如DMSO）溶解产生的紫色晶体。
溶剂的用量通常为100µL至200µL。
步骤六：测量吸光度用多通道酶标仪或分光光度计测量溶液的吸光度。
使用波长为570nm 至650nm的滤光片进行测量，同时使用一个基准波长（例如630nm）来进行校正。
3.注意事项：-MTT染料的浓度和作用时间应根据实验要求进行优化。
过高的浓度可能引起细胞中产生结晶体积过大，影响测量准确性。
-为了确保细胞的一致性和准确性，需要在实验开始前培养细胞的时间和条件相同。
mtt 法
mtt 法MTT法：一种有效的心理治疗方法MTT法是一种心理治疗方法，全称为“心理动态思维训练法”（Mental Dynamic Thought Training）。
它是由美国心理学家阿尔伯特·埃利斯（Albert Ellis）创立的，旨在帮助人们改变消极的思维模式，从而减轻心理压力和焦虑。
MTT法的基本原理是：人们的情绪和行为是由他们的思维方式所决定的。
如果一个人的思维方式是消极的，他就会感到沮丧、焦虑和无助。
相反，如果一个人的思维方式是积极的，他就会感到自信、乐观和有力量。
因此，MTT法的目的是帮助人们改变他们的思维方式，从而改变他们的情绪和行为。
MTT法的具体步骤如下：1. 识别消极思维模式需要识别自己的消极思维模式。
这些消极思维模式可能是“我不行”、“我一定会失败”、“我不值得被爱”等等。
这些思维模式会导致人们感到沮丧、焦虑和无助。
2. 挑战消极思维模式接下来，需要挑战这些消极思维模式。
这可以通过问自己一些问题来实现，比如：“这个想法是否真实？”、“我有证据证明这个想法是正确的吗？”、“这个想法是否有用？”等等。
通过这些问题，人们可以开始质疑自己的消极思维模式，并找到更积极的思维方式。
3. 替换消极思维模式一旦人们开始质疑自己的消极思维模式，就可以开始替换它们。
这可以通过找到更积极的思维方式来实现。
比如，如果一个人的消极思维模式是“我不行”，他可以替换为“我可以做到”。
这种积极的思维方式会让他感到更自信和有力量。
4. 实践新的思维方式需要实践新的思维方式。
这可以通过反复地告诉自己新的积极思维方式来实现。
比如，一个人可以在每天早上告诉自己“我可以做到”，并在遇到挑战时使用这种积极的思维方式。
通过反复实践，人们可以逐渐改变他们的思维方式，从而改变他们的情绪和行为。
MTT法的优点在于它是一种简单而有效的心理治疗方法。
它不需要人们去回忆过去的经历或者深入探讨他们的情感问题。
相反，它只需要人们关注他们的思维方式，并帮助他们改变它们。
mtt法的原理和应用
MTT法的原理和应用1. 简介1.1 MTT法的定义MTT法（Material Tranquility Test）是一种用于材料稳定性评估的方法。
它通过对材料在不同环境下的化学反应进行观察和分析，来判断材料的稳定性和耐久性。
1.2 MTT法的原理MTT法基于材料的化学反应和材料性能之间的关系。
在MTT法中，将材料置于多个环境条件下，并进行持续观察，以评估材料的稳定性。
通过分析材料在不同环境中的变化情况，可以判断材料的耐久性和性能。
2. MTT法的应用2.1 材料研究MTT法在材料研究中广泛应用。
通过对不同材料在不同环境下的化学反应进行观察和分析，可以评估材料的稳定性和耐久性。
这对于改善材料性能和寻找更好的材料有着重要意义。
2.2 产品开发在产品开发过程中，MTT法可以帮助评估材料的可靠性和耐久性。
通过将产品的关键部件进行MTT法测试，可以提前发现材料的潜在问题，从而降低产品的故障率和维修成本。
2.3 质量控制MTT法可作为质量控制的一项重要手段。
通过对原材料进行MTT法测试，可以筛选出符合要求的材料，并避免使用具有潜在问题的材料。
这有助于提高产品的一致性和稳定性。
3. MTT法的步骤3.1 实验准备首先，需要准备测试设备和试剂。
确保设备和试剂的质量良好，并遵循相关的安全操作规程。
3.2 材料测试将待测试的材料放置在不同的环境中。
可以选择不同的温度、湿度、氧气浓度等环境因素。
然后，根据设定的实验时间，进行材料测试。
3.3 观察和分析在测试过程中，需要定期观察和记录材料的外观变化，如颜色变化、表面形态变化等。
同时，还需要收集和分析材料在不同环境下的化学反应数据。
3.4 结果评估根据观察和分析的结果，评估材料的稳定性和耐久性。
如果材料表现出良好的稳定性和耐久性，可以进一步应用在相关领域。
如果材料存在问题，需要进一步优化或寻找替代材料。
4. MTT法的优势和局限性4.1 优势•MTT法可以评估材料的稳定性和耐久性，对材料性能的改进具有重要意义。
MTT
·吸光度测定 死细胞中珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原 为蓝紫色结晶。因此，结晶生成量与活细胞 数成正比。用DMSO溶解结晶，利用酶标仪 测定出在490nm处的光吸收值以反映出活细 胞相对数目。
原理
• 一般来讲，活细胞数越多，生成的蓝紫色结晶越多，检测 的OD就越大；活细胞数越少，生成的紫色结晶越少，OD 值越小。来自结果分析结果分析
100
细胞存活率（%）
80 60 40 20 0 0 0.78 1.56 3.12 6.25 12.5 浓度
生存率曲线（量效曲线）
结果分析
100
细胞死亡率(%)
80 60 40 20 0 0 0.78 1.56 3.12 6.25 12.5 浓度
生存率曲线（量效曲线）
结果分析
MTT实验技术介绍
内容
• MTT实验原理
• MTT法应用 • 所需材料和试剂 • 实验步骤 • 结果分析
• 注意事项
原理
MTT法是一种检测细胞存活及增殖的试 验方法。
原理
·活细胞还原 MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的荧 光染料，可被活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢 酶还原为不溶于水的蓝紫色甲瓒 （Formazan）结晶
二甲基亚砜（DMSO）、酶标仪、培养液、胰酶、 二氧化碳培养箱
实验步骤
胰酶消化制成细胞悬液 酶标仪震荡5min，测490nm处OD值
每孔5000个细胞接种于96孔板内
加100μl DMSO溶解颜色结晶
贴壁后加100μl药物溶液孵育24h
每孔加10μl MTT溶液,孵育3h
点板的设计排版
0 1 1 1 1 2 3 3 3 3 4 4 4 4 5 5 5 5 6 6 6 6
• 结论：活细胞数与OD值成正相关。
MTT法.
五、注意事项与常见问题
1）实验时应设置对照孔，加药孔。对照孔和加药 孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不 同的是对照加溶解药物的介质，而加药组加入不 同浓度的药物。 2）每孔中的细胞数可以根据细胞生长的速度调整， 并进行预实验调整浓度，太多敏感性降低，太少 观察不到差异。 3）如果不使用96孔板，培养基超过100 ml，MTT 按照10%的比例加入。 4）MTT一般4度保存两周，注意避光保存，或配 制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融， 最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包 住避光以免分解，配制完后可过滤一下。 5）对于DMSO，溶解后呈紫（红）色，570nm有 最大吸收值，并且建议以630nm作为参考波长。
1）对数生长期细胞 2）受试因素（药物或细胞） 3）Actinomycin D 4）MTT：以PBS配制成5mg/ml，抽虑除菌，避光 保存在4˚C 5）DMSO（二甲基亚砜） 6）96孔板 7）酶联免疫检测仪 8）细胞培养箱
三、实验步骤
1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度， 将待测细胞(L-929)调密度至3×105/ml，含 10% FCS的完全培养基，100l/孔，（边缘 孔用无菌水填充），5%CO2，37℃孵育， 至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）。 2）置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁过 夜。
7）每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即 0.5%MTT），继续培养4 h。 8）终止培养，小心吸去孔内培养液。 9）每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上 低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶 联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测 量各孔的吸光值。 10）对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解 介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每 组设定3复孔。
MTT方法总结详解
MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。
formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm 和570nm处进行比色。
所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。
MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。
终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。
(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。
以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线。
细胞实验-MTT法原理、操作方法步骤与注意事项
MTT原理、操作方法步骤与注意事项目录MTT原理 (1)简介 (1)MTT 溶液的配制方法 (2)普通MTT法实验步骤： (2)药物MTT法实验步骤 (2)注意事项： (3)简介MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处（也有用570nm波长的，我目前用的都是570nm)测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
MTT原理步骤结果分析方法及注意事项
MTT原理步骤结果分析方法及注意事项MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四氮唑溴化物）是一种常用的细胞增殖和存活试剂，用于评价细胞对药物、毒物和其他因素的影响。
MTT法通过检测细胞色素C还原酶的活性来间接测定细胞数量或细胞增殖情况。
下面将详细介绍MTT法的原理、步骤、结果分析方法及注意事项。
1.MTT法的原理：MTT法的基本原理是细胞内的色素C还原酶（mitochondrial dehydrogenase）能够将易溶性的MTT（黄色体层）还原成形成紫色的难溶性甲基紫晶体（formazan）。
甲基紫晶体会沉积在细胞内部，形成紫色的染色体层。
细胞数量或细胞增殖情况与形成的紫色染色体层的光密度成正比。
2.MTT法的步骤：步骤一：细胞培养：将待测的细胞分装到孔板中，根据实验需要，每口孔中大约加入1-2×104个细胞。
步骤二：细胞处理：给予相应的药物处理，并培养合适的时间。
步骤三：MTT染色：在每口孔中加入MTT溶液，使其浓度为0.5mg/ml，离心培养盘，孔中细胞会吸收MTT溶液。
步骤四：MTT溶解：将上一步中吸收MTT溶液的细胞加入DMSO中，溶解甲基紫晶体，使之溶于溶剂中。
步骤五：测量吸光度：将溶解后的MTT溶液转移到96孔板中，使用酶标仪测量在570nm波长下所吸光度来反映细胞存活情况，光密度越高，细胞数量越多或细胞增殖情况越好。
3.MTT法的结果分析方法：三个相邻的实验孔之间的平均值将被视为一个的A值，用于比较不同处理的细胞存活情况。
根据实验设计，可以计算药物对细胞的抑制率、活化率、半抑制浓度（IC50）等参数。
常见的结果分析方法包括：(1)药物对细胞的抑制率计算公式：抑制率（%）=（A值（对照）-A值（药物处理））/A值（对照）×100%(2)药物对细胞的活化率计算公式：活化率（%）=（A值（药物处理）-A值（对照））/A值（对照）×100%(3)IC50计算公式：以药物浓度为自变量，细胞存活率为因变量，绘制药物浓度-细胞存活率曲线，通过拟合直线或曲线来计算药物半抑制浓度，即细胞存活率为50%时的药物浓度。
mtt法检测原理
mtt法检测原理
MTT法是一种细胞活力检测方法，其原理是利用一种水溶性的四磺基联苯噻唑（MTT）化合物，该化合物酶解后能在细胞内氧化成紫红色的固体沉淀形式集中在细胞内或细胞外。
MTT法可以通过以下步骤进行：
1.使用MTT溶液处理细胞，MTT被细胞摄取并内部酶解，产生紫色颜料。
2.移除细胞培养基，加入溶解MTT晶体的溶液，其作用是使颗粒体内相对较水溶的紫色颜料转化为相对较油溶的品质以便测定。
3.加入70%的甲醛溶液停止反应，使细胞膜溶解并挥发掉培养基中的水分。
4.使用酸性异丙醇提取液提取细胞内的紫色颜料，然后利用平板读数器或光谱仪能够检测到颜色，根据其吸收峰的波长能够将颜色与细胞数量和活力相关联。
MTT法的优点是无需使用放射性标记物，可以检测多种细胞类型，快速、准确、灵敏，但也有一些缺点，如可能受到细胞内某些化合物干扰，也不适合用于长时间检测。
mtt评价法
mtt评价法摘要：1.MTT 评价法简介2.MTT 评价法的应用范围3.MTT 评价法的优缺点4.MTT 评价法在我国的发展正文：一、MTT 评价法简介MTT 评价法，全称为“最小总体培养时间法”（Minimum Total Time Method），是一种用于评估微生物生长速度的实验方法。
该方法通过比较不同条件下微生物生长至某一特定数量所需的最短时间，从而评估不同条件下微生物的生长速度。
这种方法被广泛应用于微生物学、生物技术、环境科学等领域。
二、MTT 评价法的应用范围MTT 评价法主要应用于以下几个方面：1.微生物生长速度的评估：通过比较不同条件下微生物生长至某一特定数量所需的最短时间，可以评估不同条件下微生物的生长速度。
2.抗生素敏感性测试：通过评估抗生素作用下微生物生长速度的变化，可以初步判断抗生素对微生物的敏感性。
3.生物降解能力评估：通过评估微生物降解有机污染物的速度，可以评估微生物的生物降解能力。
4.生物活性物质筛选：通过评估微生物在特定条件下的生长速度，可以筛选出具有潜在生物活性的物质。
三、MTT 评价法的优缺点1.优点：（1）操作简便：MTT 评价法操作简单，实验周期较短，适用于大规模筛选实验。
（2）结果直观：通过比较不同条件下微生物生长至某一特定数量所需的最短时间，结果直观且易于理解。
（3）适用范围广泛：MTT 评价法可用于评估微生物生长速度、抗生素敏感性、生物降解能力等，适用于多个领域。
2.缺点：（1）实验条件要求较高：MTT 评价法需要严格控制实验条件，如温度、湿度、培养基成分等，否则可能导致实验结果偏差。
（2）受主观因素影响较大：MTT 评价法评估结果依赖于实验者的观察和判断，可能存在主观差异。
四、MTT 评价法在我国的发展近年来，我国在MTT 评价法的研究和应用方面取得了显著进展。
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2.2.1 MTT法[5]
取对数生长期的NG-108细胞，胰酶消化，调整浓度为10000个/ml的单细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔200µl，24h后分别加入不同浓度的药物培养液，对照组加入等体积溶剂的培养液，每组设3个复孔，置培养箱中培养72h，终止时弃培养液上清，向细胞加入200μl/孔新鲜配制的含0.5mg/mlMTT的无血清培养液，37℃、5%CO2条件下继续孵育4小时，孔底清晰可见紫黑色甲瓉蓝颗粒。
轻轻吸走MTT液，每孔加入DMSO 200μl，振荡混匀后，在酶标仪上以波长为570nm测定光密度（OD）值，计算细胞存活率。
计算方法：存活率(% ) =(实验组细胞活力/对照组细胞活力) ×100% 。