第四章食品微生物检验方法手段.pptx

G 注射接种：
是用注射的方法，将待接的微生物转至 活的生物体内如人或其他动物中，常见的 是疫苗预防接种，来预防某些疾病。
H 活体接种：
是专门用于培养病毒或其他病原微生物 的一种方法，因为病毒必须接种于活的生 物体内才能生长繁殖。活体可以是整个动 物也可以是某个离体的活组织如猴肾，也 可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射， 也可以是拌料喂养。
1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀
A 划线接种： 是最常用的接种方法。即在固体培养基
表面作来回直线形的移动就可达到接种的 目的。常用的接种工具是接种环、接种针。 划线接种是在斜面接种和平板划线中常用 的方法。
B 三点接种（点植法）：
在研究霉菌的形态时常用此法。它是把 少量的微生物接种在平板表面成等边三角 形的三点上，让它各自独立形成菌落来观 察研究它们的形态。除三点外，还有一点 或多点接种的。
（3）半固体培养基中培养特征的观察
主要是其是否需氧及其运动情况，是在 上部还是在下部深层生长，是沿穿刺线生 长还是树根样生长。
（三）生化实验
各种微生物含有各自独特的酶系统，用于进行代谢活动， 在代谢过程中产生的产物也有各自的特点，可借此区别和 鉴定微生物的种类。利用这种特点可鉴别微生物。生化试 验或生化反应是通过利用生物化学的方法来测定微生物的 代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的 试验。
（1）降低培养基中的氧化还原电位：
常将还原剂谷胱甘肽，硫基酸盐等，加 如到培养基中，即可达到目的，有的将一 些动物死的或活的组织如牛心羊脑加入到 培养基中，也可适合厌氧菌的生长。
（2）化合去氧法：
主要有焦性没食酸吸收氧气，用磷吸收 氧气；用好氧菌与厌氧菌混合培养吸收氧 气，用植物的组织如发芽的种子吸收氧气， 用产生氢气与氧化合的方法除氧。
倾注平板法
（2）微生物的培养
根据培养时是否需要氧气，可分为
好氧培养：这种微生物在培养时，需要 有氧气加入，否则不能生长良好，实验是 中斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌 的空气。三角烧瓶液体培养多数是通过摇 床震荡，使外界的空气源源不断的进入瓶 中。
厌氧培养：这类微生物在培养时，不需 要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中， 最重要的一定是要除去培养基中的氧气。 可采用以下方法除去氧气。
（3）隔绝阻氧：
深层液体培养，用石蜡油封存，半固体 穿刺培养
（4）替代驱氧：
用CO2驱代氧，用氮气驱代氧，用真空 驱代氧，用氢气驱代氧，用混合气体驱代 氧
2．培养结果的观察
各种微生物经过培养后，表现出一定特 征，这在食品微生物学检验中，是鉴别 微生物种类的重要依据。
（1）固体培养基上菌落形态特征的观察
E 涂布接种（涂布法）：
与倾注法略有不同,即先倒好平板，让其凝固， 然后将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面 作来回左右的涂布，让菌液分布均匀，就可长出 单个的微生物菌落。
F 液体接种：
从固体培养基中将菌洗下，到入液体培 养基中，或从液体培养物中用移液管将菌 液接至液体培养基中，或从液体培养物中 将菌液移至固体培养基中都可称液体接种。
C 穿刺法接种：
在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时 常用此法。所用工具是接种针，培养基是 半固体培养基。具体做法：用接种针蘸取 少量菌种，沿半固体培养基中心向管底作 直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动， 则在穿刺线周围能够生长。
D 浇混接种（倾注法）：
是将待接的微生物先放入培养皿中，然后倒入 冷却至45左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这 样菌液就达到了稀释的目的。待平板凝固后，置 合适温度下培养，就可长出单个生物菌落。
在食品微生物学检验中，根据被检材料 的不同和检验步骤中的要求不同，在同一 种培养基上可以有不同的接种方法。在进 行菌落总数测定时，用的是倾注法接种， 再进行各种被检微生物得分离时，常采用 划线法接种，虽然他们用的都是琼脂平板， 但接种方法各异。食品微生物学检验中常 用的接种方法有涂布法、划线法、倾注法、 定植法、穿刺法。
细菌在固体培养基上，经过一定时间的 培养，即可出现肉眼可见的菌落，每种 细菌都有一定的菌落形态和特征，主要 包括菌落的大小、形状、边缘形态、颜 色、透明度等
观察菌落的形态特征，通常先用肉眼观 察，再用放大镜仔细观察，必要时可用 低倍镜观察。
（2）液体培养基中培养特征的观察
主要是液体的浑浊度是否产生沉淀，液 体表面有无菌膜形成，有无附着菌环，培 养液的颜色以及是否产气等。
2、悬滴法
将待观察的含菌液体滴在盖玻片上，然后将 其反扣在凹玻片上，使液滴悬挂在凹室内。
（二）染色标本的检验
染色标本是将检验标本根据检验目的， 按一定的方法涂片固定，用适当的染料染 色而成的标本。经过染色，微生物细胞与 其背景的色差增加，镜检时更加清晰可见。 染色标本除能显示微生物的形态、排列和 一定的构造外，还能显示某些细胞成分的 性质及其分布的位置、区别活菌与死菌、 鉴定微生物的种类。
革兰氏染色法
革兰氏染色法
卢戈氏碘液媒染 1min
95%乙醇脱色20Leabharlann 30s番红花红复染1-2min
革兰氏染色法
呈现第二次染色的效果-红色 革兰氏染色阴性菌
呈现第一次染色效果-紫色， 革兰氏染色阳性菌
二、培养检验 在食品微生物学检验中，分离培养是一项非常重要的工作，
它对进一步确定微生物的种类和研究它们的特性等都具有重 要意义。 微生物的接种和培养 接种工具有：接种针、环、钩、玻璃涂棒、接种圈、接种 锄、小解剖刀
（一）不染色标本的检验
在食品微生物学检验中，检验不染色标本是 为了观察微生物细胞在生活时期原有的形态、 大小及确定细胞能否运动等。不染色标本的基 本制片方法有以下两种：
1、压滴法
在载波片上加一滴生理盐水，再在其中滴加 少许要观察的含菌液体或少量要观察的固体培 养物，使菌体均匀分布在生理盐水中，然后盖 上盖玻片，即可进行镜检。
第四章 食品微生物检验方法手段
在食品微生物学检验 过程中，需要采用很多方 法和手段。下面就几种常 用的检验方法作一些基本 介绍。
一、显微镜检验
在食品微生物学检验中， 为了能够发现微生物或观 察其形态、排列及某些结 构，必须借助于显微镜。 显微镜观察的微生物标本 一般分为两种：染色标本 和不染色标本。