分泌抗恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
心 Ｅ ＩＡ检测 中单 抗 与 猪瘟 病 毒 呈 特 异 性 反 应 ， 正 常 的 猪 、 肾 组 织 提 取 液 及 其 血 清 Ｉ 无 交 叉 。抗 体 蛋 白 属 Ｉ ＬＳ 与 兔 ｇ ｇ Ｇ 类 ， 类 及 轻链 分别 为 Ｉ １ｈ Ｉ ２／ ， Ｇ ａＸＩＧ ／ 。 结 果 表 明 ， 亚 ｇ ／ ， Ｇ ａｔ Ｉ ２／ ， １￣ Ｇ ｇ ￣ｇ ｇ ， ４株 杂 交 瘤 是 分 泌 抗 猪 瘟 病 毒 单 克 隆 抗 体 的 细 胞 株 ， 长期传代无限分泌单抗 ， 可 是进 一 步研 究 猪 瘟 病 毒 和 开 发 敏 感 、 异 、 速 诊 断 猪 瘟 试 剂 盒 和 试 纸 探 针 的免 疫 学 特 快 特 异 性试 剂 来 源 。 关 键 词 ： 瘟 病 毒 ； 交 瘤 ； 克隆 抗 体 ； ＬＳ 猪 杂 单 Ｅ ＩＡ
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简述单克隆抗体的制备过程
简述单克隆抗体的制备过程随着生物技术的发展和应用的广泛，单克隆抗体作为一种重要的生物分子工具，在医学诊断、治疗和科学研究领域发挥着重要作用。
单克隆抗体是通过体外复制细胞免疫应答过程中产生的单一克隆抗体分子，具有高度特异性和亲和力。
下面将简要介绍单克隆抗体的制备过程。
第一步：免疫原的选择制备单克隆抗体的第一步是选择适当的免疫原。
免疫原可以是蛋白质、多肽、糖类、脂类等生物大分子，也可以是一种特定的细胞、细胞表面分子或化合物。
免疫原的选择应根据需要检测或研究的目标来确定。
第二步：免疫动物的选择和免疫过程为了制备单克隆抗体，需要选择适当的免疫动物。
常用的免疫动物包括小鼠、兔子、大鼠等。
免疫过程分为初次免疫和加强免疫两个阶段。
初次免疫是将免疫原注入免疫动物体内，刺激机体产生免疫应答。
加强免疫是在初次免疫后再次注入免疫原，以增强机体的免疫应答。
第三步：细胞融合和杂交瘤的建立细胞融合是制备单克隆抗体的关键步骤。
它是将免疫动物体内产生的抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
常用的骨髓瘤细胞包括SP2/0和NS0等。
融合细胞的选择和优化是确保制备高效单克隆抗体的重要因素。
第四步：筛选和克隆单克隆抗体细胞融合细胞后，需要进行单克隆抗体细胞的筛选和克隆。
常用的筛选方法包括限稀稀释法、酶联免疫吸附试验等。
通过这些筛选方法可以筛选出产生目标抗体的单个细胞克隆。
第五步：单克隆抗体的生产和纯化筛选出单克隆抗体细胞后，需要进行大规模培养和生产。
单克隆抗体的生产可以通过体外培养细胞和动物体内生产两种方式进行。
体外生产是将单克隆抗体细胞培养在培养基中，利用生物反应器等设备进行大规模培养。
动物体内生产是将单克隆抗体细胞移植到合适的动物体内，利用动物自身的机制产生单克隆抗体。
之后，通过各种纯化方法，如蛋白A/G亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等，从培养物中纯化出单克隆抗体。
第六步：单克隆抗体的特性研究和应用制备得到的单克隆抗体需要进行进一步的特性研究和应用。
杂交瘤细胞单克隆抗体的生产方法
杂交瘤细胞单克隆抗体的生产方法引言：单克隆抗体是通过细胞融合技术利用小鼠或其他哺乳动物的B细胞和体外培养的瘤细胞，产生具有高度特异性和亲和力的抗体。
这项技术是单抗药物的重要生产途径，广泛应用于疾病诊断、治疗、科学研究等领域。
本文将详细介绍杂交瘤细胞单克隆抗体的生产方法。
1.免疫原制备：根据所需的特异抗原，选择合适的免疫原制备方法，如蛋白质纯化、细胞提取物、多肽合成等等。
2.动物免疫：将免疫原与适宜的佐剂混合后接种于小鼠等哺乳动物体内，以激发免疫细胞产生特异性抗体。
3.细胞融合：-收集小鼠脾细胞：在免疫充分激活后，取出小鼠脾脏，用RPMI-1640培养基洗涤脾脏，收集脾细胞。
-人工瘤细胞准备：选择一株常用的髓母细胞瘤比如SP2/0-AG14，也可选择其他合适的细胞系，使其处于良好的生长状态。
-融合操作：将脾细胞与瘤细胞以一定比例混合，使用聚乙二醇（PEG）等化学试剂促使细胞融合。
接种融合细胞于选择性培养基上，培养6-8天，直至异源杂交瘤细胞形成。
1.筛选：将培养的杂交瘤细胞转移到96孔板中，每孔一个细胞。
利用ELISA等方法检测培养上清中是否含有目标抗体。
2.克隆：将阳性细胞转移至96孔板中进行单克隆培养，待细胞生长至一定程度后，进行二次筛选，直至获得单一细胞克隆。
3.培养和扩增：将筛选出的阳性单克隆细胞培养至足够数量，以供后续大规模生产。
单克隆抗体的纯化和鉴定：1.上清收集：将培养上清收集，去除细胞残渣和沉淀，得到含有目标抗体的液体。
2.亲和层析：利用免疫亲和层析柱，如蛋白A或蛋白G层析柱，将目标抗体与杂交瘤细胞上其他蛋白质分离开。
3.纯化：将抗体溶液经过洗脱等步骤，纯化目标抗体。
4. 鉴定：利用免疫电泳、Western blot等方法验证纯化得到的单克隆抗体的特异性和纯度。
单克隆抗体的应用和储存：1.应用：将纯化后的单克隆抗体用于疾病诊断、治疗等领域，在实验室科研中用于免疫组化、免疫沉淀、免疫荧光等实验。
分泌抗人红细胞单克隆抗体细胞株的建立
分泌抗人红细胞单克隆抗体细胞株的建立
刘玉华;杨奎
【期刊名称】《中国法医学杂志》
【年(卷),期】1996(011)001
【摘要】以人的红细胞膜为抗原，采用选择性免疫抑制的程序，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，经免疫的小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用血凝法筛选出３株分泌抗人红细胞膜种属特异性单克隆抗体的杂交瘤，即Ｍ１Ａ７Ｃ４，Ｍ３Ａ５Ｂ７和Ｍ３Ｄ９Ｆ１。
连续传代２个月及复苏冻存半年的杂交瘤，仍能稳定地分泌抗人红细胞膜单克隆抗体。
初步鉴定证明：该抗体具有稳定的种属特异性，可鉴别人与其它动物，特别是猴的红细胞，不与已知的血型特异性
【总页数】3页(P6-8)
【作者】刘玉华;杨奎
【作者单位】中国医科大学法医学系;南京农业大学动物医学系
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
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抗恩诺沙星单克隆抗体的制备与鉴定
检测范 围为 ２ ． ０ ５～ ９ ８ ． ３ ８． ｇ ／ ｍＬ ， 与其 他 同类 药物 无交 叉 反应 。试 验所 获得 抗 体效 价高 、 特 异性 强 ， 可 以为
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试剂盒和胶体金试纸条研发提供 良好的抗体材料。 关键词 ： 恩诺沙星 ； 杂交瘤技术 ； 单克隆抗体 ； 交叉反应
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江西农 业大 学学 报
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【推荐下载】浅谈抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选
浅谈抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选 【编者按】医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。
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浅谈抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选 作者：林月霞董斌袁茵段涛田素娟 【摘要】目的获得稳定、高效分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
方法以CAP?HS?BSA免疫BALB/c小鼠，用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞，体内诱生腹水法大量制备单抗。
捕获ELISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型，间接ELISA法测定腹水效价;用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法来纯化腹水。
结果成功建立了一株分泌抗CAP单克隆抗体(McAb) 的杂交瘤细胞4D10。
经检测, 其分泌的抗体亚类为IgG1, 杂交瘤染色体数目90～110 条, 间接ELISA 检测诱生小鼠腹水的抗体效价达1∶2.56 105，纯度达95%，该细胞连续培养生物学性状稳定。
结论成功制备的抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、纯度高，为利用该单抗研制检测氯霉素残留试剂盒提供原材料。
【关键词】氯霉素;细胞融合;单克隆抗体;间接ELISA Abstract:Objective To acquire stable and secretory monoclonal antibodies against chloramphenicol hybridoma cell lines. Methods BALB/c mice were immunized with CAP?HS?BSA and hybridoma lines secreting monoclonal antibody against chloramphenicol (CAP McAb) were screened by cell fusion, and the immunological titers of CAP McAb were determined. Capture ELISA method was used to determine isotypes of the mouse monoclonal antibody and the indirect ELISA method was performed to determine the titers of McAbs. Two?step ammonium sulfate precipitation and protein G affinity chromatography protein purification methods were used to purify ascites. Results One hybridoma cell line secreting CAP McAb 4D10 was established. The titer of purified McAb 4D10 was 1∶2.56 105, and the purity was 95%. Conclusion The anti?chloramphenicol McAb 4D10 prepared had high titer and high purity, and it could be used to develop CAP immunoassay kit for detection of CAP residues. Key words:chloramphenicol;cell fusion;monoclonal antibody;indirect ELISA 氯霉素﹙chloramphenicol，CAP﹚一种人工合成的广谱抗生素，因其效价高，价格低廉而广泛用于畜牧业，成为畜禽疾病防治的重要药物。
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分泌抗猪伪狂犬病病毒(北京株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立李富强;刘尚高;董红梅【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2000(026)010【摘要】用纯化的猪伪狂犬病病毒免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,3次有限稀释法克隆,获得了2株能稳定分泌抗伪狂犬病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株1H7和3B5.经鉴定两株单抗均为IgG1亚类、Kappa型轻链,杂交瘤细胞的平均染色体数为97,细胞培养液上清及腹水效价分别为1:1 024、1:1 024和1:108、1:107;1H7、3B5单克隆抗体不与猪繁殖-呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒发生交叉反应,显示良好的特异性,为进一步应用奠定了基础.【总页数】3页(P8-10)【作者】李富强;刘尚高;董红梅【作者单位】内蒙古农业大学动物科技学院,内蒙古,呼和浩特,010018;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100094;内蒙古农业大学动物科技学院,内蒙古,呼和浩特,010018【正文语种】中文【中图分类】S858.285.3【相关文献】1.分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 [J], 杨艳艳;张改平;肖治军;杨继飞;柴书军;冯春花;王选年2.分泌抗Bt Cry1Ac蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 [J], 乔艳红;张维;林敏;张杰;潘家荣3.分泌抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 [J], 刘洁;何文辉;李晶梅;王威;肖敏;谢红玲;廖园园;朱薇;漆世华4.分泌抗重组葡激酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 [J], 鲁波;缪德强;周蕊;谭琪;吴庆;佟彬;王世鹏5.分泌抗猪伪狂犬病毒(鄂A株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 [J], 金梅林;陈焕春;何启盖;方六荣;吴美洲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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抗恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及竞争ELISA试剂盒的研制赵银丽;王建华;王自良;滕蔓;刘庆堂;邓瑞广;范国英;张改平【期刊名称】《核农学报》【年(卷),期】2008(22)6【摘要】利用合成的完全抗原(BSA-ENR)免疫小鼠,通过细胞融合技术和间接竞争ELISA筛选出了能分泌恩诺沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制恩诺沙星残留检测的竞争ELISA试剂盒(competitive ELISA ENR-Kit),并测定其性能。
结果表明:筛选出的2株杂交瘤细胞,单抗亚类均为IgG1型,其中4G1-B3株的ENR mAb间接ELISA效价为1:1.024×106,亲和常数(Ka)为9×1010L/mol;竞争ELISA 试剂盒的线性检测范围为0.05~101.6μg/L、灵敏度0.05μg/L、半数抑制浓度(IC50)1.1μg/L,与其他化合物的交叉反应率(CR%)均小于0.01%,鸡肉样、鸡肝样、鱼肉样和牛奶样的平均添加回收率分别为81.5%8、7.6%、84.3%和95%,不同基质添加恩诺沙星标准品做竞争ELISA对ENR-Kit检测结果影响小,试剂盒保存期6个月以上。
结果说明该竞争ELISA试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点,适用于ENR残留的快速检测。
【总页数】6页(P898-903)【关键词】恩诺沙星;杂交瘤细胞;竞争ELISA试剂盒【作者】赵银丽;王建华;王自良;滕蔓;刘庆堂;邓瑞广;范国英;张改平【作者单位】西北农林科技大学动物医学院;河南工业大学生物工程学院;河南科技学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S859.84;S852.43【相关文献】1.抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制 [J], 王自良;张海棠;王艳荣;崔艳红;邓瑞广;朱超;张改平2.恩诺沙星单克隆抗体的制备及ciELISA试剂盒的研制 [J], 赵银丽;王建华;王自良;滕蔓;刘庆堂;邓瑞广;范国英;张改平3.抗链霉素杂交瘤细胞株的建立与竞争ELISA试剂盒的研制 [J], 范国英;王建华;朱金凤;张改平;邓瑞广;刘庆堂;杨继飞4.恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性 [J], 赵银丽;滕蔓;邓瑞广;柴书军;刘庆堂;张改平5.抗苯巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制 [J], 王自良;张改平;张海棠;杨艳艳;王艳荣;柴书军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
抗鹦鹉热衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用
抗鹦鹉热衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用邱洪流;谢琴
【期刊名称】《中国人兽共患病学报》
【年(卷),期】2005(021)012
【摘要】鹦鹉热衣原体（Chlamydia Psittaci，Cps）是感染人和多种畜禽的病原体，自70年代以来，我国青海、广西、湖南、四川、陕西等省区先后对衣原体病在山羊、猪、鸡、鸽、牦牛等动物中的流行及诊断研究作了报道。
随着单克隆抗体（McAb）检测技术的发展，如能将其引入该病的检测，必将大大提高该病检测技术的特异性、敏感性和简便性。
为此，我们进行了本项研究、制备了具有抗牛源鹦鹉热衣原体特异性的单克隆抗体并进行了初步应用研究，现报告如下。
【总页数】2页(P1125-1126)
【作者】邱洪流;谢琴
【作者单位】宁夏医学院护理学院,银川,750021;宁夏大学生命科学院
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分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体异源杂交瘤细胞株的建立的开题报告
分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体异源杂交瘤细胞株的建立的开
题报告
一、选题的背景和意义
猪瘟病毒是一种高度传染、致死率极高的病毒，对猪产业的影响非常严重。
目前治疗猪瘟病的药物较少，且对疫苗的有效性也有限。
因此，开发抗猪瘟病毒单克隆抗体是非常有前景的研究方向。
二、研究内容和方法
本研究旨在分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的异源杂交瘤细胞株的建立。
具体内容包括以下方面：
1. 采集抗猪瘟病毒的免疫小鼠。
2. 提取免疫小鼠的脾细胞并与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。
3. 筛选出分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞。
4. 对杂交瘤细胞进行验证和鉴定。
三、研究的预期目标和意义
成功建立分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的异源杂交瘤细胞株，可以为研究病毒的传播和致病机制提供重要实验材料。
同时，可以为开发抗猪瘟病毒的免疫诊断方法和治疗药物提供基础。
研究成果具有重要的理论和应用价值，对于保障猪产业的健康发展也具有积极的意义。
恩诺沙星单克隆抗体的制备及其鉴定
恩诺沙星单克隆抗体的制备及其鉴定
刘红;曾振灵;杨桂香;陈杖榴
【期刊名称】《中国兽药杂志》
【年(卷),期】2006(40)10
【摘要】采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法合成恩诺沙星的人工抗原,结合比为15: 1.用人工抗原腹腔免疫BALB/c小鼠,有限稀释法筛选获得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株2H10C2F11,并将该细胞株注射小鼠腹腔获得腹水.纯化后的抗体效价为
3.96×10-6 ,紫外分析方法计算蛋白含量为1.139 mg/mL,琼脂双扩实验表明抗体为IgG1型,SDS-PAGE电泳图谱显示纯化效果理想;经间接ELISA方法测定,抗体的亲和力为1.8×108 L/moL.
【总页数】4页(P5-8)
【作者】刘红;曾振灵;杨桂香;陈杖榴
【作者单位】中山市农产品质量监督检验检测中心,广东中山,528403;华南农业大学兽医学院,广东广州,510642;华南农业大学兽医学院,广东广州,510642;华南农业大学兽医学院,广东广州,510642
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5.恩诺沙星单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立 [J], 冯婷婷;刘一兵;李子颖;贾娟娟;袁志刚;韩世泉
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吉林农业大学
硕士学位论文
分泌抗恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
姓名：龙淼
申请学位级别：硕士
专业：临床兽医学
指导教师：刘清河;张乃生
20060501
２．４．２阳性杂交瘤细胞染色体数目
杂交瘤细胞染色体数目与其分泌抗体的稳定性有关。
细胞经秋水仙素处理后停止于细胞分裂中期，染色体形态规则，观察５０个杂交瘤细胞染色体并统计其数目，其中所占比例最大的即为杂交瘤细胞染色体数目。
骨髓瘤细胞染色体数为６２～６８，小鼠正常体细胞染色体数为４０，染色体计数结果显示杂交瘤细胞染色体数为９６，表明杂交瘤细胞是骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞的杂合体，能够稳定分泌抗体。
阳性杂交瘤细胞染色体形态见图２—１０。
图２—１０杂交瘤细胞株的染色体
ｈｙｂｒｉｄｏｍａｃｅＵｓｔｒａｉｎｓ
Ｆｉｇ２＊１０ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｏｆ血ｅ
２４．３杂交瘤细胞稳定性测定
将杂交瘤细胞体外连续传代培养２０代，每隔５代检测细胞培养上清的效价，结果见表２—１４：结果表明３Ｄ６杂交瘤细胞能够比较稳定的分泌单抗。
表２—１４不同代次的杂交瘤细胞上清抗体效价
１砧ｌｅ２－１４Ｔｈｅｔｉｔｅｒｏｆｄ曲ｂｒｃｎｔｐａＳｓ８９ｅｈｙｂ＾ｄＯｍａｃｅｌｌｓｕＰｅｍａｔａｎｔ
闰２—４ＳＰ２／ｏ细胞形态Ｆｉ９２—４ｍｙｅｌＯＨｌａｃｅＩＩｓ
圈２—５饲养细胞形态
Ｆｉｇ２－５ＦｅｅｄｅｒｃｅｌＩｓ
图２—６融合后第２天细胞开｝态Ｆｉｇ２－６ｃｅｌｌｓｉｎｓｐｃｃｔｃｄｉｎｍｅ２ｎｄｄａｙ
囤２—７融合后第４天细胞形态Ｆ遮２．７ｃｅｌＪｉｎｓｐｅｃｌｃｄｉｎｔｈｅ４“ｄａｙ
图？一８融合上的细胞形态（杂交瘟细胞、
Ｆｉ９２・８｝ｉｙｂｒｉｄｏｍａ
图２—９ｓＤｓ—ＰＡＧＥ电泳图谱
第一列为低分子量标准蛋白，自上而下分子量为９４４，６６２，４３Ｏ，２０．１，１４４ＫＤ
第二列为纯化后电泳图，第三列为纯化前电泳图。
Ｔｈｅｎｒｓｔｎｌｅｉｓｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅ培ｈｔｓｔａｎｄａｒｄｐｒｏｔｅｉｎ舳ｍｕｐｔｏｔｈｅｂｅｌｏｗｉｓ９７４，６６．２，４３０，２０１，１４．４ＫＤ，ｔｈｅｓｅｃｏｎｄ矗ｌｅｉｓｅｌｅ曲ｕｐｈｅｒｏＦ锄ａＲｅｒｐｕｒｉ丘ｃａｔｉｏｎ，ｔｈｅｔｈｉｒｄｎｌｅｉｓｅｌｅｃｔｍｐｈｅｒｏｇｒ哪ｂｅｆｏｒｅｐｕ＾ｎｃａｔｉｏｎ。