抗氧化酶测定实验方法

抗氧化酶测定实验方法
抗氧化酶是一类酶系统，它能够抵御氧自由基的伤害，维持细胞内环
境的稳定。

常见的抗氧化酶包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(Cat)
和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)等。

测定抗氧化酶活性能够评估抗氧化能力，进而为疾病的诊断和治疗提供参考。

以下是抗氧化酶测定的实验方法。

实验材料：
1.磷酸盐缓冲液：Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液(pH7-8)。

2.高速冰箱和离心机。

3. 0.1 mol/L L-酪氨酸盐酸缓冲液：将L-酪氨酸溶解于0.1 mol/L
的盐酸溶液中，并加入0.5% (w/v) 卵白饼干碎片。

4.超氧化物解毒酶(SOD)标准品：如肝脏SOD标准品。

5.乙醇、乙醚、碘仿、硝酸等有机试剂。

6.2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-（二苯嘧啶)-2H-四唑(INT)。

实验步骤：
1.组织预处理：取所需组织样品，酶解和离心得到提取液(组织块破
碎并添加合适的缓冲液)，离心清除杂质得到上清液。

2. 蛋白质含量检测：根据Bradford法或Lowry法，测定上清液中蛋
白质的含量。

3. 测定SOD活性：将上清液加入0.1 mol/L L-酪氨酸盐酸缓冲液，再加入0.5%的乙醇溶液，保护酪氨酸被SOD氧化，使其在酶作用下发生自动降解。

离心，取上清液。

在为反应液中加入INT（2.5 mmol/L），使之在SOD作用下发生氧化还原，反应生成紫色的一价酮衍生物。

在滤紙上滴加提取液，通过比色计测定OD值。

4. 测定Cat活性：将提取液加入3%的过氧化氢溶液并充分混合。

加入乙醚和碘仿的混合物，并离心。

提取水相层和乙醚层。

用硝酸溶液判断乙醚层中是否存在过氧化氢。

通过测定乙醚层吸收光谱的变化来测定Cat 活性。

5. 测定Gpx活性：加入适量的提取液到预先调配的反应体系中。

反应开始后，每2分钟测定OD值，记录10分钟之间的OD变化。

绘制OD值和反应时间的曲线，计算反应速率。

6.数据处理：根据测得的OD值和各反应时间点得到的反应速率，计算出抗氧化酶系数和活性。

本实验方法适用于测定抗氧化酶的活性，可以量化抗氧化酶的水平，为抗氧化剂的筛选和抗氧化能力评估提供参考。

在进行实验时，需要严格控制试剂的质量和实验条件，保证实验结果的准确性和可重复性。