发酵SOP

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发酵SOP
一、发酵工序操作要点
二、岗位技术安全操作法
1. 管路及阀门的试漏
2. 一级种子罐安全操作法
3. 二级种子罐安全操作法
4. 发酵罐安全操作法
5. 补料罐安全操作法
6. 放罐操作
三、发酵车间岗位责任制度
四、安全防火和劳动保护
五、异常现象的处理
六、中间体质量标准
七、主要设备的维护、检修、使用与清洗
八、发酵车间安全生产守则
一发酵工序操作要点
机密已删除
二岗位技术安全操作法
1. 管路及阀门的试漏
严试要求:发酵生产设备消毒前必须进行试漏,杜绝设备内和外界流通的一切可能存在的空隙通道,发现渗漏应及时通知检修,严试正确,确认严密度可靠,方可消毒进罐。

严试方法:
1、肥皂水法:将压缩空气引入被试设备,空气压力为0.1~0.2Mpa(1~2kg/cm2),设备表面刷上肥皂水以后稍等片刻,有气泡渗出者即为渗漏,(严试时应防止设备温度太高或设备内有液体物料堵塞而造成的误差)。

2、集气筒加水法:主要用于阀门的试漏,将水注满排气的集气筒内,开启罐上各阀门,关闭各阀门的小排气阀,然后关闭罐上阀门,开启小排气阀,看视筒内有否气泡翻出,判断其是否渗漏。

严试范围:
罐体:包括轴封,进出料阀,移种补料阀,罐底下水阀,空气分布管阀,取样及冲视镜阀及各阀所属小排气阀。

2. 一级种子罐安全操作法
配料操作
先核对所称取的物料、种类、数量与配方是否相符,在干净的小桶内放入适量水将物料加入,搅拌使之溶解(不易溶解的需加热使之溶解,淀粉无需加热),全部溶解后通过布氏漏斗(加纱布)过滤倒入罐内,剩余的物料倒入盛有适量水的桶内,用棒搅拌,再经过滤倒入罐内,如漏斗中有未溶解或结块的物料,仍须倒入桶内加少量水粉碎,混合后经过滤倒入罐内,最终使物料全部进入罐中。

然后,开动搅拌,加液碱将pH调至7.2。

实罐消毒操作
物料配置入罐后,加水至35L左右(一般为罐容积75%左右),盖紧罐盖,开动搅拌,检查并关闭夹层冷却水进、出水阀后,开下水阀,排掉夹套水后,将下水阀关至适度.检查并关闭空气分布管阀、出料阀、取样阀、打开接种口及小排气阀,做好消毒前一切准备工作。

分过滤器的消毒:
1.检查并关闭出气阀和进气阀。

2.缓慢通入细蒸汽,调节分过滤器上的小排气阀,使蒸汽压力逐渐升至
0.15~0.2Mpa(1.5~2kg/cm2),保温30分钟。

3.关闭小排气阀和细蒸汽阀,待压力下降至0.1Mpa以下,引入无菌空气,打开各小排气阀,吹干介质,时间30分钟,吹干后保压备用。

分过滤器消毒即将结束时,开启并控制夹套蒸汽阀,物料预热,夹层压力不得超过0.2Mpa,升温至80~90℃后,控制时间30~45分钟,到达预热温度后关闭夹层蒸汽阀。

微孔接种口应在70~80℃时用75%酒精棉消毒接种口数次后盖上新橡皮塞并拧紧铜帽。

分过滤器的消毒时间应和夹层预热的时间妥善衔接好,过滤器消毒用汽结束即由分布管,出料管直接进汽升温,调节蒸汽进气阀,使罐温逐渐上升至120℃。

升温至120℃时开始保温,罐压在0.1~0.11Mpa(1~1.1kg/cm2),罐温118~122℃,维持30分钟,罐内液料翻动良好不外溢,蒸汽站使用压力不低于0.2 Mpa(2 kg/cm2)。

到达保温时间消毒完后,先关闭过滤器下端排气阀,再顺序关闭各排气阀,出料空气分布管的蒸汽阀,关闭夹套下水道阀,开启冷却水回、进水阀,冷却料液,待罐压低于过滤器压力时,开空气分布管管阀加入无菌空气保压。

全面检查各阀开闭情况,填写操作原始记录和值班进行书面交接手续。

接种操作
微孔接种:
接前准备:接前30分钟必须检查缸温,使之符合工艺要求(一般为30~32℃),关好操作面附近的门窗及通气设备,尽量减少空气的流通,检查接种人是否已经用酒精和洁尔灭消毒接种口,所接的品种、批号、瓶数是否符合工艺要求和该生产批号记录。

接种过程:打开并调节进、排气阀,使罐压尽量恒定在0.03Mpa(0.3kg/cm2)后插入针头,插入接种口后,缓慢关小排气阀,升压不超过0.08 Mpa,然后开排气阀,使罐压缓慢降至0.03 Mpa,如此来回数次,使菌液全部进入罐内(若遇不进时,缸压可升至0.1 Mpa,严禁超压,以防孢瓶破裂)。

接完后可关小排气,使罐压逐渐回升至0.05 Mpa以上时,拔出针头。

接种时应注视罐内液面,严防逃液,若液面难以控制时,可缓慢进行罐压的升降并联系当班长,设法排除。

接后即按工艺要求控制并通知分析组取样。

火焰接种:调节空气进、排气阀,使罐压降至适当压力。

用酒精棉消毒接种口周围。

然后打开接种口,将酒精槽加上酒精并套在接种口上,点燃酒精,将三角瓶靠近火焰打开封口,直接将菌种液加入。

加完菌液后,立即将接种口盖旋紧。

看罐操作:
(一)加空气操作法
接种后,应按工艺要求,在规定时间加上空气,先开启进气阀,然后调节排气阀,使流量按梯形上升,且使罐压保持在0.04~0.06 Mpa,这样反复逐步开大进气阀与调节排气阀,使压、流量均达到工艺要求(空气流量一般为料液体积的1.2倍)。

如遇空气难加时,可适当提高罐压,严禁闷罐,超过工艺规定加不上空气,应及时向班长和有关人员联系。

(二)控制罐温操作法
正常情况下,当罐温降至工艺要求时,开启自动调节阀。

当罐温不符合工艺要求时,应采取夹套蒸汽加热或冷却的方法,加热时蒸汽在夹套内自上而下流动,冷却水自下而上流动,严禁同时开启蒸汽、冷却排水阀造成串流,严格控制阀门开启的大小和时间,操作时人不得离开操作现场。

(三)控制空气流量和罐压的操作
降流量应先关小排气阀,然后再调节进气阀;升流量时应先开大进气阀,然后再调节排气阀,使达到工艺要求,调节流量及罐压时,都应注意罐内液面情况,防止逃液和罐压到0位。

(四)取样操作法
1.生化分析样品:取样前半小时,应开足下水阀,放出管道内残存冷凝水,同时应检查取样阀是否关紧。

若有滴漏,应立即通知检修。

取样时应缓慢开启取样阀,放出管道内部分料液,配合取样人取好样。

取样后立刻关紧取样阀,开蒸汽阀冲洗管道后,关下水阀,再关蒸汽阀。

2.无菌试验样品:取无菌样期间应关好操作面附近门窗及通风设备,取样管道消毒时间不少于15分钟,要求取样蒸汽阀开足,下水阀关小,排气畅通适中,取样时应先关下水阀,再关蒸汽阀,打开下水阀的同时开启取样阀,并调节液流适当,配合取样人取好样,取样结束后冲洗管道同上。

3.二级种子罐安全操作法
配料操作
先核对所称取的物料、种类、数量与配方是否相符,在干净的桶内放入适量水将物料加入,搅拌均匀溶解后,将物料加入罐中。

实罐消毒
物料配置入罐后,加水至体积(一般为罐容积75%左右)要求,盖紧罐盖,开动搅
拌,检查并关闭夹层冷却水进、出水阀后,开下水阀,排掉夹套水后,将下水阀关至适度.检查并关闭空气分布管阀、出料阀、取样阀、打开接种口及小排气阀,做好消毒前一切准备工作。

分过滤器的消毒:
1.检查并关闭出气阀和进气阀。

2.缓慢通入细蒸汽,调节分过滤器上的小排气阀,使蒸汽压力逐渐升至
0.15~0.2Mpa(1.5~2kg/cm2),保温45分钟。

3.关闭小排气阀和细蒸汽阀,待压力下降至0.1Mpa以下,引入无菌空气,打开各小排气阀,吹干介质,时间30分钟,吹干后保压备用。

分过滤器的消毒的同时开启并控制夹套蒸汽阀,物料预热,夹层压力不得超过0.2Mpa升温至80~90℃的时间控制在30~45分钟,到达预热温度后关闭夹层蒸汽阀。

分过滤器的消毒时间应和夹层预热的时间妥善衔接好,过滤器消毒用汽结束即由分布管,取样管,出料管直接进汽升温,同时调节蒸汽站阀使罐温逐渐上升至120℃。

维持30分钟,罐内液料翻动良好不外溢,蒸汽站使用压力不低于0.2Mpa
(2kg/cm2)。

到达保温时间消毒完后,先关闭过滤器下端排气阀,在顺序关闭各排气阀,出料空气分布管的蒸汽阀,关闭夹套下水道阀,开启冷却水回、进水阀,冷却料液,待罐压低于过滤器压力时,开空气分布管管阀通入无菌空气保压。

全面检查各阀开闭情况,填写操作原始记录和值班进行书面交接手续
移种操作
移种前必须检查种子的菌形状态,检查种子的生长情况和灭菌情况。

根据工艺要求控制好种子的出罐标准,不能按作业计划正常出罐时,应及时与当班人或有关人员联系。

接种前2小时填写移种通知单,并通知化验室发酵分析组,取接后或出罐生化样品的时间,出罐前半小时取样,以备取无菌样品。

种子罐移种时,应先将移入罐的空气流量调至工艺要求,罐压调至0.03~0.05 Mpa (0.3~0.5 kg/cm2),罐温应符合工艺要求(一般为35℃左右)。

开启搅拌,种子罐移种前应先停搅拌,关排气升压,观察种子液的体积,并做好记录,移种。

移种时应注意被移种罐内液面情况,严禁逃液,不能控制时与当班长或有关人员联系设法排除。

看罐操作:
(一)加空气操作法
接种后,应按工艺要求,在规定时间加上空气,先开启进气阀,然后调节排气阀,使流量按梯形上升,且使罐压保持在0.04~0.06 Mpa,这样反复逐步开大进气阀与调节排气阀,使压、流量均达到工艺要求(空气流量一般为料液体积的1.2倍)。

如遇空气难加时,可适当提高罐压,严禁闷罐,超过工艺规定加不上空气,应及时向班长和有关人员联系。

(二)控制罐温操作法
正常情况下,当罐温降至工艺要求时,开启自动调节阀。

当罐温不符合工艺要求时,应采取夹套蒸汽加热或冷却的方法,加热时蒸汽在夹套内自上而下流动,冷却水自下而上流动,严禁同时开启蒸汽、冷却排水阀造成串流,严格控制阀门开启的大小和时间,操作时人不得离开操作现场。

(三)控制空气流量和罐压的操作
降流量应先关小排气阀,然后再调节进气阀;升流量时应先开大进气阀,然后再调节排气阀,使达到工艺要求,调节流量及罐压时,都应注意罐内液面情况,防止逃液和罐压到0位
(四)取样操作法
1.生化分析样品:取样前半小时,应开足下水阀,放出管道内残存冷凝水,同时应检查取样阀是否关紧。

若有滴漏,应立即通知检修。

取样时应缓慢开启取样阀,放出管道内部分料液,配合取样人取好样。

取样后立刻关紧取样阀,开蒸汽阀冲洗管道后,关下水阀,在关蒸汽阀。

2.无菌试验样品:取无菌样期间应关好操作面对近门窗及通风设备,取样管道消毒时间不少于15分钟,要求取样蒸汽阀开足,下水阀关小,排气畅通适中,取样时应先关下水阀,再关蒸汽阀,打开下水阀的同时开启取样阀,并调节液流适当,配合取样人取好样,取样结束后冲洗管道同上。

4. 发酵罐安全操作法
配料操作
先核对所称取的物料、种类、数量与配方是否相符,在干净的桶内放入适量水将物料加入,搅匀后直接加到罐中.
实罐消毒
物料配置入罐后,加水至体积(一般为罐容积75%左右)要求,盖紧罐盖,开动搅拌,检查并关闭夹层冷却水进、出水阀后,开下水阀,排掉夹套水后,将下水阀关至适度.检查并关闭空气分布管阀、出料阀、取样阀、打开接种口及小排气阀,做
好消毒前一切准备工作。

分过滤器的消毒:
1.检查并关闭出气阀和进气阀。

2.缓慢通入细蒸汽,调节分过滤器上的小排气阀,使蒸汽压力逐渐升至
0.15~0.2Mpa(1.5~2kg/cm2),保温45分钟。

3.关闭小排气阀和细蒸汽阀,待压力下降至0.1Mpa以下,引入无菌空气,打开各小排气阀,吹干介质,时间30分钟,吹干后保压备用。

分过滤器消毒的同时开启并控制夹套蒸汽阀,物料预热,夹层压力不得超过
0.2Mpa升温至80~90℃的时间控制在30~45分钟,到达预热温度后关闭夹层蒸汽阀。

分过滤器的消毒时间应和夹层预热的时间妥善衔接好,过滤器消毒用汽结束即由分布管,取样管,出料管直接进汽升温,同时调节蒸汽站阀使罐温逐渐上升至120℃。

维持30分钟,罐内液料翻动良好不外溢,蒸汽站使用压力不低于0.2Mpa (2kg/cm2)。

到达保温时间消毒完后,先关闭过滤器下端排气阀,再顺序关闭各排气阀,出料空气分布管的蒸汽阀,关闭夹套下水道阀,开启冷却水回、进水阀,冷却料液,待罐压低于过滤器压力时,开空气分布管管阀加入无菌空气保压。

全面检查各阀开闭情况,填写操作原始记录和值班进行书面交接手续。

移种操作
移种前必须检查种子的菌形状态,检查种子的生长情况和灭菌情况。

根据工艺要求控制好种子的出罐标准,不能按作业计划正常出罐时,应及时与当班人或有关人员联系。

接种前2小时填写移种通知单,并通知化验室发酵分析组,取接后或出罐生化样品的时间,出罐前半小时取样,以备取无菌样品。

种子罐移种时,应先将移入罐的空气流量调至工艺要求,罐压调至0.03~0.05 Mpa (0.3~0.5 kg/cm2),罐温应符合工艺要求(一般为35℃左右)。

开启搅拌,种子罐移种前应先停搅拌,关排气升压,观察种子液的体积,并做好记录,移种。

移种时应注意被移种罐内液面情况,严禁逃液,不能控制时与当班长或有关人员联系设法排除。

看罐操作:
(一)加空气操作法
接种后,应按工艺要求在规定时间加上空气。

先开启进气阀,然后调节排气阀,使流量按梯形上升,且使罐压保持在0.04~0.06 Mpa。

这样反复逐步开大进气阀
与调节排气阀,使压、流量均达到工艺要求(空气流量一般为料液的1.2倍)。

如遇空气难加时,可适当提高罐压,严禁闷罐,超过工艺规定加不上空气,应及时向班长和有关人员联系。

(二)控制罐温操作法
正常情况下,当罐温降至工艺要求时,开启自动调节阀。

当罐温不符合工艺要求时,应采取夹套蒸汽加热或冷却的方法,加热时蒸汽在夹套内自上而下流动,冷却水自下而上流动,严禁同时开启蒸汽、冷却排水阀造成串流,严格控制阀门开启的大小和时间,操作时人不得离开操作现场,确认罐温已稳定正常后方可离开。

(三)控制空气流量和罐压的操作
降流量应先关小排气阀,然后再调节进气阀;升流量时应先开大进气阀,然后再调节排气阀,使达到工艺要求,调节流量及罐压时,都应注意罐内液面情况,防止逃液和罐压到0位
(四)取样操作法
1.生化分析样品:取样前半小时,应开足下水阀,放出管道内残存冷凝水,同时应检查取样阀是否关紧。

若有滴漏,应立即通知检修。

取样时应缓慢开启取样阀,放出管道内部分料液,配合取样人取好样。

取样后立刻关紧取样阀,开蒸汽阀冲洗管道后,关下水阀,在关蒸汽阀。

2.无菌试验样品:取无菌样期间应关好操作面对近门窗及通风设备,取洋管道消毒时间不少于15分钟,要求取样蒸汽阀开足,下水阀关小,排气畅通适中,取样时应先关下水阀,在关蒸汽阀,打开下水阀的同时开启取样阀,并调节液流适当,配合取样人取好样,取样结束后冲洗管道同上。

5.补料罐安全操作法
配料操作
先核对所称取的物料、种类、数量与配方是否相符,在干净的桶内放入适量水将物料加入,搅匀后,加到补料罐中.
实罐消毒
物料配置入罐后,加水至体积(一般为罐容积75%左右)要求,盖紧罐盖,开动搅拌,检查并关闭夹层冷却水进、出水阀后,开下水阀,排掉夹套水后,将下水阀关至适度.检查并关闭空气分布管阀、出料阀、取样阀、打开接种口及小排气阀,做好消毒前一切准备工作。

分过滤器的消毒:
1.检查并关闭出气阀和进气阀。

2.缓慢通入细蒸汽,调节分过滤器上的小排气阀,使蒸汽压力逐渐升至
0.15~0.2Mpa(1.5~2kg/cm2),保温45分钟。

3.关闭小排气阀和细蒸汽阀,待压力下降至0.1Mpa以下,引入无菌空气,打开各小排气阀,吹干介质,时间30分钟,吹干后保压备用。

分过滤器消毒的同时开启并控制夹套蒸汽阀,物料预热,夹层压力不得超过
0.2Mpa升温至80~90℃的时间控制在30~45分钟,到达预热温度后关闭夹层蒸汽阀。

分过滤器的消毒时间应和夹层预热的时间妥善衔接好,过滤器消毒用汽结束即由分布管,取样管,出料管直接进汽升温,同时调节蒸汽站阀使罐温逐渐上升至120℃。

维持30分钟,罐内液料翻动良好不外溢,蒸汽站使用压力不低于0.2Mpa (2kg/cm2)。

到达保温时间消毒完后,先关闭过滤器下端排气阀,在顺序关闭各排气阀,取样阀,出料空气分布管的蒸汽阀,关闭夹套下水道阀,开启冷却水进、回水阀,冷却料液,待罐压低于过滤器压力时,开空气分布管管阀通入无菌空气保压。

全面检查各阀开闭情况,填写操作原始记录和值班进行书面交接手续。

补料操作:
1.接到补料通知后,按规定时间消毒补料,检查并确认补料罐补料阀已经关闭。

打开管道排气阀,导入高压蒸汽消毒管道,蒸汽总压力不低于0.35Mpa(3.5kg/cm2)时间1小时。

2.关闭各排气阀,切断蒸汽,同时打开发酵罐上各补料阀保压至补料罐的出料阀处。

3.关闭补料罐排气阀随即打开进气阀和出料阀,将料压入发酵罐内,待发酵罐压下降至0.08Mpa(0.8kg/cm2)以下即关闭出料阀,并重复上述补料操作顺序。

4.关闭发酵罐上补料阀,最后打开补料管道各排气阀,引入蒸汽冲洗使用过的管道数分钟,补料操作即完毕。

6.放罐操作
发酵结束后,降温至最低,然后检查排污阀是否关闭,打开混合罐进料阀后,再打开混合罐夹套循环低温水(10℃以下)阀门。

发酵罐停止搅拌,关小排气,打开出料阀,保持罐压在0.15Mpa左右。

打料至混合罐搅拌叶以上,开始搅拌,同时加入吸附剂10%,使发酵温度降至10℃。

同时与下一岗位(发酵液离心分离岗)联系,做好分离准备。

打开打料泵,混合液打至离心分离机。

放罐结束后,冲洗罐内。

三.发酵车间岗位责任制度
1. 交接班是岗位责任制执行情况的大检查,严格执行口头、书面、现场三交接,交接班原始记录本应认真记录登记不得遗漏,字迹清楚,记录完毕,检查签名。

2. 称料完毕,应先自检,然后专人核对并签名,同时把当班操作和交接记录,本班所接受的生产工艺通知及操作遗留的各项事宜,按本岗位工艺控制范围和使用情况(口头及书面),现场向接班者详细交接清楚,征得接班者同意后,方可离岗下班。

3. 接班者应根据交接班者所提供的内容仔细认真地进行全面检查核对,发现有异议时应及时向交接者提出,发现问题应及时与有关人员联系,弄清情况,接班后即承担本岗位的全部职责。

4. 配料时应严格按配料通知单配,投料前必须先将管道排污阀关闭,然后准备投料。

配料结束后应及时记录配料体积以备核查。

5. 消毒后即检查操作原始记录是否完整并核实时间温度等项,消毒后应做好书面记录,发现不正常立即提出或与有关人员联系。

6. 遇种子罐出罐时间离上次取样时间超过1小时以上,应重复取出罐中样品,并同时取下级罐消后样品。

7. 种子罐移种时,确认无染菌后方可移种,移种时须检查移种罐的本身全部样品及其种子系统样品。

四.安全防火和劳动保护
(一).一般规定:
1. 严格按照工艺要求和岗位操作法进行操作,确保生产工艺正常进行。

2. 坚守岗位遵守各项制度,贯彻“勤跑、勤看、勤查”的原则,随时观察发酵情况,注意设备运行情况,控制好补料量、罐温、罐压、流量等及其他所有特殊要求的各项工艺参数。

3. 操作者(包括外来实习人员,新工人)须经现场安全教育后,方可上岗。

4. 生产人员或调入新岗位的操作人员须经技术安全培训,考核合格后方可独立操作和调岗安全教育(填表)。

5. 配料操作时应穿戴好工作衣鞋,不准穿拖鞋,配料罐边倒料时应防止跌滑,配料中途异物落入罐中,应及时停搅拌捞出。

在配料时上衣口袋内不要放东西。

(二)岗位安全操作规定:
1. 压力容器或设备的开盖或维修,必须先放除压力至0,严禁带压开盖拆阀和
用气压顶开罐盖。

(压力表一定要正确)
2. 检查并确认搅拌电源已断开,并挂牌方可下罐操作,同时注意跌滑受伤。

3. 消毒操作时必须穿戴工作衣鞋和手套,开启阀门时,必须侧操作,不可迎面或正对阀门阀座,禁止卷起衣袖操作,以防烫伤。

4. 开阀门时,必须事先检查设备阀门的走向是否正确,防止蒸汽、料液、空气引入旁路,放汽口放汽时,应注意放汽口周围有无他人或电器设备,有则应劝其远离或与有关人员联系。

应立侧面,绝对避免正面,以防蒸汽冲击伤人。

5. 高温操作时必须保护好罐上各视镜玻璃,严禁汽水冲洗或硬物撞击而引起爆裂。

6. 下罐前,应先将罐用水冲洗,然后拉去电闸,并试开开关以确认断电,罐内再开压缩空气吹一下,方能下罐,下罐时罐外要有一人留下监护,罐内操作人员未出罐前,监护人员不得离开。

7. 一切运转设备不得用手及其他物品触及,以免发生危险。

8. 所有设备不得带病运转,如有异常、异味,应立即切断电源,检查并检修。

9. 运转设备经修理后,试车时应注意运转方向。

10. 机器严禁超负荷运转。

11. 机器运转期间发现电机有起燃先兆,应立即停止。

12. 作清洁时,电气设备不得冲水。

(三).防火防爆:
1. 防爆区域严禁吸烟及携带易燃、引火物品。

2. 进入车间人员严禁穿有铁钉的鞋子,严禁铁器相撞。

3. 严格遵守压力容器的耐压规定,不得任意超压、超温。

高温空罐严禁使用冷却水,防止闷罐造成负压损坏设备。

4. 一切易燃物品,不准随意堆放在车间内,如生产上需要应放在指定安全地带,蒸汽管路上不能放置棉纱物件,以防燃烧。

5. 防止容器及管道的跑、冒、滴、漏,以及蒸汽逸发。

6. 所有使用设备应有接地装置,所有电器及照明均应防爆。

7. 室内应配有灭火器具和报警装置,在灭火器材和报警装置周围不得堆放物件。

8. 发生火警应立即报警,后采取补救措施。

五.异常现象的处理
1. 发酵罐染菌放罐后:于空消前加入罐容量的0.01%~0.02%甲醛溶液,升温。

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