北芪五加颗粒长期毒性试验研究

北芪五加颗粒长期毒性试验研究
赵留涛;吴洪银;吴冠连;陈五常;徐洪德;袁之润;吴春丽
【摘要】为考察北芪五加颗粒对动物的安全性,采用大鼠进行长期毒性试验.设北芪五加颗粒原料(5、2.5、1.25 g/kg)剂量组及空白对照组,给药量分别相当于猪每日临床用量的100、50、25倍;给药28 d后停药,各组抽取腹主动脉血进行血液学检测和血液生化指标测定,对心、肝、脾、肺、肾等脏器进行组织病理学检查.结果显示,北芪五加颗粒原料高、中、低剂量组与对照组相比除个别指标外,其余指标差异均无统计学意义(P>0.05),未见与药物有关的病理变化.说明北芪五加颗粒临床应用安全.
【期刊名称】《动物医学进展》
【年(卷),期】2018(039)009
【总页数】5页(P58-62)
【关键词】北芪五加颗粒;长期毒性;大鼠
【作者】赵留涛;吴洪银;吴冠连;陈五常;徐洪德;袁之润;吴春丽
【作者单位】郑州大学药学院,河南郑州 450001;商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司,河南虞城 476300;郑州爱己爱牧生物技术有限公司,河南郑州 450001;郑州大学药学院,河南郑州 450001;商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司,河南虞城476300;郑州爱己爱牧生物技术有限公司,河南郑州 450001;郑州大学药学院,河南郑州 450001;商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司,河南虞城 476300;郑州爱己爱牧生物技术有限公司,河南郑州 450001;商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司,河南虞城 476300;郑州爱己爱牧生物技术有限公司,河南郑州 450001;郑州大学药学院,
河南郑州 450001;商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司,河南虞城 476300;郑州爱
己爱牧生物技术有限公司,河南郑州 450001;郑州大学药学院,河南郑州 450001;郑州市新型兽药制剂创新重点实验室,河南郑州 450001
【正文语种】中文
【中图分类】S853.76
北芪五加颗粒由黄芪和刺五加，经水煎煮提取，减压浓缩成浸膏，加辅料混合均匀，制成颗粒，具有益气健脾功能[1-2]。

本研究在前期急性毒性试验的基础上，参照《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》相关规定[3]，对其长期用药的安
全性进行评价。

1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品北芪五加颗粒，批号20110203(北芪五加颗粒浸膏和北芪五加颗粒原料)，规格1 g∶1 g生药，由商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司提供。

临用前用无菌水配成0.250、0.125、0.062 5 g/mL的液体。

1.1.2 实验动物 5周龄SD大鼠120只，SPF级，雌雄各半，购自河南省实验动物中心，许可证号为SCXK(豫)2010-0002。

1.1.3 主要仪器与试剂 ABX-PENTRA-80全自动血液细胞分析仪检测，法国Horiba ABX公司产品；BT-2000PLUS生化分析仪，意大利产Biotemcnica公司产品；XSP-24N型生物显微镜，南京江南光电集团股份有限公司生产；FA1004N 电子天平，上海精密科学仪器公司天平仪器厂生产；YD-12P型全自动生物组织脱水机、YD-6L型全自动生物组织冷冻包埋机、YD-6D型全自动生物组织包埋机、YD-B型智能型生物组织烤片机、 YD-A型智能型生物组织摊片机，浙江金华益迪
医疗设备厂生产；LEICA RM2235型生物组织切片机，德国LEICA公司生产；XSP-24N型光学显微镜，南京江南光电集团股份有限公司生产；DM-BA300数
码生物显微镜，厦门麦克奥迪公司生产。

谷丙转氨酶(ALT)测试盒、谷草转氨酶(AST)测试盒、尿素氮(BUN)测试盒、血清(浆)尿肌酐(Cr)测试盒、总蛋白(TP)测试盒、白蛋白(ALB)测试盒、葡萄糖(GLU)测试盒和甘油三酯(TG)测试盒等，均购自
南京建成生物工程研究所。

1.2 方法
1.2.1 分组及给药选用临床健康大鼠80 只，随机分为4 个组，每组20只，雌雄
各半，分笼饲养，每笼5只，用双染色法进行编号标记。

由实验室前期对北芪五
加颗粒原料急性毒性试验研究结果可知，以最大给药量(即67.5 g/kg 体重)给药后，小鼠未见任何异常与死亡。

依据兽药研究技术指导原则汇编(2006年-2011年)中《兽药30 d和90 d喂养试验指导原则》[4]及不同种类动物间用药剂量换算公式[5-6]。

猪，每kg饲料4.0 g，连用7 d，即等同于猪每天每kg体重颗粒用量
0.32 g～0.4 g(相当于猪每天每kg体重用干浸膏0.04～0.05 g)。

设计给药剂量，即北芪五加颗粒原料5、2.5、1.25 g/kg和空白对照组，给药各组分别以猪每日
临床100、50、25倍剂量的北芪五加颗粒原料给大鼠灌胃，按20 mL/kg体重的用量，每天上午灌胃给药1次，空白对照组灌服同体积的无菌水。

1.2.2 观察指标[7-10]
1.2.2.1 一般观察试验期间逐日观察并记录大鼠的精神状态、行为表现、采食情况、粪便。

1.2.2.2 体重影响每周逐只称重1次，并根据体重变化调整灌胃量，连续给药28 d，观察至给药结束。

1.2.2.3 血液学及血液生化指标测定给药第28天停药，各组末次给药 24 h后，称重、采血，用于生理和生化指标测定，血液学检查指标包括白细胞数(WBC)、红细
胞数(RBC)、血红蛋白含量(HGB)、白细胞计数(WBC)及其分类[中性粒细胞(NEU)、淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MON)、嗜酸性粒细胞(EOS)、嗜碱性粒细胞(BAS)]；血液生化检查指标包括谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、血清白蛋白(ALB)、血葡萄糖(GLU)和甘油三酯(TG)。

1.2.2.4 剖检情况给药第28天，将采血后的20只大鼠处死，进行系统剖检，肉
眼观察其组织器官，同时取其心、肝、肾、肺、脾睾丸、卵巢、子宫等脏器进行称重，计算脏器系数。

脏器系数(%)= 脏器(mg)/体重(g)×100%
1.2.3 数据分析处理采用SPSS11.0进行统计分析,One-way ANOVA法检验，组
间用LSD法两两比较，P<0.05表示差异显著，P<0.01 表示差异极显著。

2 结果
2.1 一般观察
整个试验过程中，4组大鼠精神状态、行为表现、采食情况均正常，粪便呈棕黑色颗粒状。

2.2 体重变化情况
大鼠连续灌胃给药28 d后,各给药组雌雄动物的体重及增值与对照组动物比较，除雌性小鼠2.5 g/kg给药组给药第21天体重与对照组相比体重增加且差异显著
(P<0.05)外，其余各组均未见显著性差异(表1)。

2.3 血常规指标变化
大鼠灌胃给药28 d后对所有实验动物进行血液学检测。

其中，雌性动物2.5 g/kg 给药组RBC数较对照组极显著升高(P<0.01)，雄性动物2.5 g/kg、5 g/kg给药
组WBC较对照组极显著降低(P<0.01)，雄性动物2.5 g/kg给药组MONO较对
照组显著升高(P<0.05)，其他指标均未出现统计学差异(表2)。

2.4 血液生化指标变化
大鼠灌胃给药28 d后对所有实验动物进行血液生化学检测。

其中，雄性动物2.5
g/kg给药组、5 g/kg给药组TG较对照组极显著降低(P<0.01)。

其他指标均未出现统计学差异(表3)。

表1 北芪五加颗粒对大鼠体重的影响Table 1 Effect of Beiqi Wujia granules on body weights of rats g给药后观测点Observation points after administration性别Sex空白对照组Control group低剂量组Low-dose group 中剂量组Middle-dose group高剂量组High-dose group给药前 Before administration♂166.60±18.15165.40±18.55167.20±17.41167.00±17.71♀16 1.90±13.10161.90±17.11161.90±14.77165.10±13.31第7天 The seventh day♂214.40±19.88215.80±26.24229.10±19.82225.10±20.58♀179.00±12.90 182.60±19.66185.40±14.69185.90±8.70第14天 The fourteenth
day♂264.20±25.56261.20±23.44270.40±24.5276.80±22.1♀194.80±13.9519 9.90±19.42203.10±14.57201.40±9.34第21天 The twenty-first
day♂300.50±24.96296.90±22.46313.00±28.7314.00±22.38♀206.90±11.962 09.30±21.92220.20±10.97∗211.70±9.20第28天 Thetwenty-eight
day♂321.40±32.79311.10±26.39333.30±26.25337.40±23.18♀214.50±17.03 216.00±21.40228.30±16.32222.00±7.93
注：与空白对照组相比，“*”P<0.05 差异显著。

Note：Compared with blank control group,“*”significant
difference(P<0.05).
表2 北芪五加颗粒对大鼠血常规的影响Table 2 Effect of Beiqi Wujia granules on the haematological indexes of rats指标Index性别Sex空白对照组Control group低剂量组Low-dose group中剂量组Middle-dose group高剂量组High-dose groupRBC/(1012·L-
1)♂7.73±0.257.05±2.127.79±0.367.78±0.47♀7.05±0.297.31±1.057.75±0.41
∗∗7.51±0.65HGB/(g·L-
1)♂145.00±3.09134.00±40.20145.70±4.72148.20±5.01♀133.30±4.64131.33±18.34136.80±6.61130.56±11.18WBC/(109·L-
1)♂10.28±1.948.56±3.246.55±2.41∗∗6.19±1.91∗∗♀5.76±1.876.16±2.054.23±1.234.03±1.23NEUT/%♂16.13±3.6020.83±4.2218.93±7.1016.89±4.91♀16. 80±5.1814.31±4.5414.53±7.4613.04±5.32LYMPH/%♂76.23±4.7967.55±5.9 272.73±8.0674.11±6.12♀78.32±5.4974.46±19.5181.43±7.1483.20±6.45MO NO/%♂6.29±1.419.93±2.06∗7.12±2.536.24±1.53♀3.58±1.193.79±1.733.30±2.102.99±1.93EOS/%♂0.65±0.280.94±0.740.68±0.350.76±0.44♀0.51±0.33 0.36±0.320.26±0.340.26±0.26BAS/%♂0.70±0.120.75±0.200.54±0.140.50±0. 09♀0.79±0.860.42±0.080.48±0.120.51±0.12
注：与空白对照组相比，“*”P<0.05 差异显著，“* *”P<0.01 差异极显著。

Note：Compared with blank control group,“*”significant
difference(P<0.05); “* *”very significant difference(P<0.01).
2.5 主要脏器系数测定结果
大鼠连续给药28 d后雄性动物2.5 g/kg、5 g/kg给药组肝脏的脏器系数较对照组极显著减小(P<0.01)，并呈浓度依赖性；而在雌性动物，只有5 g/kg给药组肝脏的脏器系数较对照组极显著减小(P<0.01)。

其余各组均未见显著性差异(表4)。

2.6 组织病理学检查
HE染色后镜检观察，高剂量组大鼠的心、肝、脾、肺、肾与空白对照组相比，均未见与受试物毒性作用相关的组织病理学变化。

3 讨论
表3 北芪五加颗粒对大鼠血生化指标影响Table 3 Effect of Beiqi Wujia granules on blood biochemical indexes of rats指标Index性别Sex空白对照
组Control group低剂量组Low-dose group中剂量组Middle-dose group高剂量组High-dose group谷草转氨酶/(U·L-
1)AST♂220.30±82.94221.22±29.63189.67±30.81194.10±52.08♀200.10±49. 72202.00±28.78173.50±37.98165.80±39.77谷丙转氨酶/(U·L-
1)ALT♂59.67±9.8761.12±22.4045.27±9.7443.16±8.03♀53.70±13.9547.58±7 .8750.39±7.9242.94±13.55葡萄糖/(mg·dl-
1)GLU♂4.80±0.884.98±1.035.05±0.784.85±1.07♀6.34±1.267.24±1.296.51±
2.148.49±1.12总胆固醇/(mmol·L-1)
TCHO♂1.17±0.201.15±0.121.18±0.191.13±0.17♀1.40±0.311.29±0.161.41±
0.191.43±0.17甘油三酯/(mmol·L-
1)TG♂0.79±0.210.65±0.170.54±0.14∗∗0.55±0.10∗∗♀0.44±0.160.55±0.190. 40±0.150.57±0.20白蛋白/(g·L-
1)ALB♂34.16±1.3334.12±1.3435.49±1.8534.90±1.34♀37.18±2.6037.20±1.6 938.78±2.4539.35±2.37尿素/(mmol·L-
1)BUN♂7.90±0.797.57±0.907.14±0.727.49±0.66♀8.69±1.358.25±1.288.61±1.448.39±0.58肌酐/(μmmol·L-
1)CREA♂87.50±18.4386.78±15.0792.44±12.8884.20±9.74♀90.20±13.8190.8 0±9.48103.10±13.4584.10±11.78
注：与空白对照组相比，“* *”P<0.01 差异极显著。

Note：Compared with blank control group,“* *”very significant difference(P<0.01).
表4 北芪五加颗粒对大鼠主要脏器系数测定结果Table 4 Effect of Beiqi Wujia granules on the main organ indexes of rats脏器Organ性别Sex空白对照组Control group低剂量组Low-dose group中剂量组Middle-dose group高剂
量组High-dose group心 Heart♂0.313 4±0.020 80.301 4±0.020 00.318
1±0.023 60.296 6±0.020 0♀0.321 2±0.023 10.328 2±0.021 70.328 9±0.018 20.320 7±0.019 6肝 Liver♂3.076 6±0.233 42.892 3±0.234 92.718 6±0.127 9∗∗2.750 4±0.143 2∗∗♀3.014 1±0.175 83.021 0±0.212 42.828 4±0.149 52.766 0±0.185 5∗∗脾 Spleen♂0.240 1±0.024 70.253 5±0.042 40.266
3±0.065 50.231 4±0.032 5♀0.255 8±0.052 50.280 1±0.071 00.250 3±0.029 10.259 2±0.038 2肺 Lung♂0.386 7±0.044 90.447 9±0.065 10.424 1±0.038 20.403 1±0.053 2♀0.561 2±0.084 40.551 0±0.082 80.551 9±0.092 50.606
6±0.073 6左肾 left kidney♂0.339 3±0.032 90.336 2±0.028 30.319 8±0.021 60.313 5±0.020 6♀0.313 8±0.025 90.301 3±0.018 80.308 1±0.025 20.292
4±0.012 6右肾 right kidney♂0.338 2±0.025 00.337 7±0.025 00.316 9±0.019 80.323 7±0.019 3♀0.329 1±0.024 00.315 2±0.018 80.321 8±0.024 60.304
2±0.015 9左睾丸 Lift testis♂0.474 5±0.064 30.496 4±0.074 50.475 4±0.037 00.447 4±0.050 0右睾丸 Right testis♂0.474 4±0.058 80.487 4±0.073 50.465 8±0.039 50.446 6±0.047 5左卵巢 Lift ovary♀0.029 6±0.004 10.027 1±0.002 50.026 8±0.002 70.027 6±0.003 6右卵巢 Right ovary♀0.027 8±0.004 70.027 4±0.004 20.027 8±0.003 80.025 7±0.004 7子宫 Uterus♀0.244 7±0.065 50.218 4±0.041 20.268 6±0.091 10.235 4±0.059 5
注：与空白对照组相比，“* *”P<0.01 差异极显著。

Note：Compared with blank control group,“* *”very significant difference(P<0.01).
北芪五加颗粒原料以1.25、2.5、5 g/kg等3个剂量，连续给药28 d，试验观察期间，各组动物的精神状态、行为表现、采食、饮水、粪便均正常。

其中，雌性大鼠2.5 g/kg给药组第21天体重与对照组相比有统计学差异，其余各组均无统计
学差异。

在血液学及血液生化学分析中显示雌性动物2.5 g/kg给药组RBC数较对照组有统计学差异，雄性动物2.5 g/kg、5 g/kg给药组WBC较对照组有统计学
差异，雄性动物1.25 g/kg给药组MONO较对照组有统计学差异，雄性动物2.5 g/kg、5 g/kg给药组TG较对照组有统计学差异，这些指标改变均无剂量依赖趋势，也未超出本试验参考范围[11-13]，提示该项改变与供试品毒性无关。

在脏器
指数检测中，肝的脏器系数高剂量组较对照组有统计学差异[14]，但改变无剂量依赖关系，且病理学组织检查未见与药物毒性相关的病理改变，表明上述改变非药物毒性所致。

卞愧等在五加芪粉长期毒性试验研究结果表明,五加芪粉以8.4 g/kg连续灌胃给药28 d未对大鼠产生毒副作用[15]，与本研究结果一致。

综上所述，SD大鼠灌胃给予北芪五加颗粒原料以1.25、2.5、5 g/kg等3个剂量，分别是临床拟用量的25、50、100倍，连续给药28 d并未对大鼠产生毒副作用。

因此，北芪五加颗粒按照推荐的给药剂量和疗程使用，无长期毒性，临床应用安全。

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