青黛脂溶性提取物固体分散体制备及溶解性研究

【摘要】目的考察共研磨技术对难溶性药物的增溶能力。

方法分别利用共研磨技术和共沉淀法制备青黛脂溶性提取物的固体分散体，并以靛玉红为指标，采用hplc测定其表观溶解度。

结果共研磨技术和共沉淀法有效提高了靛玉红的表观溶解度，不同载体研究表明共研物中亲水载体的羟基对改善难溶性药物的溶解度有着重要的影响。

结论共研磨技术能有效地提高难溶药物的溶解度。

【关键词】共研磨技术超细粉碎难溶性药物靛玉红
共研磨技术（cogrinding method）是近年来发展起来的、将超细粉碎技术与包合技术或固体分散技术结合起来的一种新技术［1］。

它既可以避免传统固体分散技术中的溶剂或温度对药物稳定性的影响［2］，又可以避免超细粉碎技术中因粒子团聚而引起的药物溶出下降［3］。

它通过降低药物的结晶性，改善可湿性以及增加表面积等促进药物的溶出，是改善药物溶解度和溶出速率的有效途径［4］。

青黛（natural indigo）是一种良好的传统中药材，具有清热解毒、凉血定惊作用。

用于瘟病、发斑、胸痛咳血、口疮、喉痹、小儿惊痫［5］。

其脂溶性提取物成分（lipophilic extract from indigo lei）含有靛玉红、色胺酮等化合物，在抗肿瘤、抑菌、抗炎和抑制细菌内毒素等方面起重要作用［6,7］。

但是这些成分在水中的溶解度较小，难以吸收，生物利用度差［8］。

其中靛玉红(iindirubin)是青黛中的主要成分，不溶于水，通常用作评价青黛制剂质量的指标性成分。

本实验分别用固体分散技术和共研磨技术，制备青黛固体制剂，并选用靛玉红为质控指标，以hplc法初步研究该固体分散体的溶解特性。

1 材料与仪器
lc-1500高效液相色谱仪（日本jλsco公司）；行星式磨机（美国fritsch公司）；旋转蒸发仪（日本būchi公司）；恒温真空干燥箱（上海一恒科学仪器设备厂）。

青黛（镇江存仁堂药业，批号020801）；靛玉红标准品（中国药品生物制品检定所，批号717-200204）；聚维酮（pvp，规格k30，上海国药集团化学试剂有限公司）；聚乙二醇（peg，规格4000，上海国药集团化学试剂有限公司)；羟丙甲纤维素（hpmc，规格e6-lv，型号2910，黏度6cp ；规格e-4m，型号2910 ，黏度4000cp上海卡乐康公司赠送)；乙醇（色谱纯江苏汉邦科技）；聚乙烯醇（pva，规格17-88，美国cook公司）；所有试剂均采用分析纯。

2 方法
2.1 青黛脂溶性提取物的制备
称取青黛50.0 g，先用水渗漉法提去水溶性成分，剩余物干燥后置圆底烧瓶中，以10倍量95%乙醇回流提取3次，4 h/次，合并提取液1 500 ml，减压浓缩至黏稠膏状液体，70℃水浴上挥去乙醇，40℃真空干燥24 h即得。

2.2 超细共研磨物的制备将青黛醇提物（0.5 g）分散于peg4000（0.5 g）中，温度70℃，自然冷却至室温，等量分为3 份，分别与pvp，pva，hpmc等亲水性载体（4 g）混合均匀，选用行星式磨机超细粉碎2 h，过80目筛即得。

2.3 共沉淀物的制备称取青黛醇提物（0.5 g）无水乙醇复溶后，加入pvp k30（4.5 g），减压浓缩至溶液呈半固体状,取出在约70℃水浴上挥去乙醇,黏稠物置真空恒温干燥箱中24 h,脆化后取出,粉碎,过80目筛即得。

2.4 普通研磨混合物的制备将青黛醇提物（0.5 g） 70℃分散于peg4000（0.5 g）中,自然冷却后，置于研钵中，加入hpmc（4 g）混合，强烈研磨2 h后，过80目筛即得。

2.5 靛玉红的含量测定方法采用hplc法测定。

色谱条件：色谱柱 hanbang c18 柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-1%hac （81∶19），检测波长290 nm，流速0.8 ml/min，取对照品溶液及样品供试液各20 μl进样,记录色谱图, 计算峰面积,按外标法计算靛玉红的含量。

2.6 表观溶解度的测定称取分散体约1.0 g（含过量的靛玉红），放置于装有500 ml蒸
馏水的玻璃瓶中，100 r/min恒速搅拌，温度（37±0.5）℃，定时取样5 ml溶出液经4.5 μm微孔滤膜过滤,精密吸取滤液1.0 ml，甲醇定容至5.0 ml，用hplc法测定含量。

3 结果与讨论
3.1 hplc测定方法的建立
3.1.1 标准曲线的建立精密称取25mg的对照品，配制成10 μg/ml的甲醇对照品贮备液，精密吸取对照液0.1，0.5，1.5，2.5，3.5，5 ml置于 50 ml 量瓶中，加甲醇稀释成靛玉红浓度分别为0.02，0.1，0.3，0.5，0.7 ，1 μg/ml的溶液，分别进样测定，记录峰面积。

以峰面积a对浓度c（μg/ml）进行线性回归，回归方程为a＝287 890c ＋15 184，r ＝0.999 2，说明在 0.02～1 μg/ml范围内线性关系良好。

3.1.2 精密度实验
日内精密度实验：取1 μg/ml对照品溶液，日内连续测定5次，计算得峰面积rsd为0.47%。

日间精密度实验：取1 μg/ml对照品溶液，进样1次/d，共进样5次测定，计算得峰面积rsd 为1.19%(n＝5)。

3.1.3 回收率的测定精密量取对照品贮备液5.0，1.0，0.5 ml，置10 ml量瓶中，按处方比例分别加入相应量的pvp，peg4000，hpmc（e-6lv和e-4m）以及已知含量的提取液，加甲醇定容后，振摇5min，配成高、中、低（5.0，1.0，0.5 μg/ml）3种不同的浓度的溶液。

分别进样测定，记录色谱图，计算得载体中的平均回收率分别为100.3%，99.8%，101.69%，100.7%，101.2%rsd均小于1.5%。

3.2 不同方法制备固体分散体的溶解性质考察及机理分析见图1。

从图1可以看出，与普通研磨混合物比，共研磨技术和共沉淀法均能显著地提高靛玉红在去离子水中的溶解度。

但二者改善难溶性药物溶出的机理有所差别。

pvp共沉淀法原理是pvp 在溶液中成网状结构，药物分子进入pvp分子网状骨架中而呈分子状态分散，共蒸发过程中不易形成分子结晶，使药物形成高能量的非结晶型无定形物，从而增加了药物的溶出［9］。

制备超细共研磨物所采用超细粉碎技术，可以瞬间产生巨大的能量，在这种强烈和持久的机械力作用下，药物发生不同程度的晶格畸变，直径变小，结构无序化，形成无定型甚至发生多晶型转换［10］。

此外，还认为在超细粉碎过程中，药物与载体之间形成氢键并分散于载体中，避免了药物的重新聚合，下面以靛玉红为例简单分析它们之间的氢键作用。

见图2。