抗CyclinD1胞内抗体AD5N基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

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Cyclin G_2表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞的作用

ＧＴＡ１ＴＡｒＡ－，游引物５＿ＣＧＡＣＣＧＧＴＧＴＧ３下Ｉ，ＧＧＴ－Ｇ
ＣＡＧＡＡＧＣＡＴＣＧ３。Ｒ —Ｃ反应按ＡＧＣＣＡＧＴＡＡＡ一ＴＰＲ
非传统意义的细胞周期蛋白，在人体多种正常组织中有表达，口腔鳞癌、在胃癌、甲状腺癌等多种恶性肿瘤中表达显著下降，推测其可能是一种抑癌基因，在肿瘤发生及恶化进程中具有重要作用。２００７年
１２１ＣｃｎＧＤＡ克隆肾小管上皮细胞．．ｙｌ，ｃＮｉＨ－Ｋ２常规培养，用ＴＩｌｅｇｎ提取总ＲＡ，采ＲｚａｅｔｏＲＮ根据Ｇｎａｋ记录的ＣｃｉＧ（Ｍ－０３４ｃＮｅｂｎｙｌ２Ｎ０４５）ＤＡｎ序列，由上海生工设计相应引物并加ＸｏＩ和ＢｍｈａＨＩ内切酶位点，游引物５一ＣＣＣＡＡＡＧ上ＣＧＴＧＧＡＧ
文献标志码：Ｂ文章编号：０２２６２１）１０５２１０ —６Ｘ（０１４－５－００
成功构建了ｐｓｅ２ＣｃｉＧＤＲｄ－ｙｌ：ｎ
融合表达质粒，转染ＭＣ－Ｆ７细胞后散在分布于细胞质和细胞，核转染重组质粒的ＭＣ－Ｆ７细胞凋亡率明显增高（Ｐ＜关键词：乳腺肿瘤；细胞周期蛋白Ｇ；：真核表达载体；凋亡
购自上海生物工程公司；粒提取试剂盒购于质
ＴＡＧＮ公司；ｗｔＮＣｉ胶回收试剂ＩＮＥＴｏＳｅＲＡＰＲＫｔｐ、

Fascin真核表达载体的构建及其在肺癌A549细胞中的表达

ｗｔｐＤＡ．（＋）一ｆｃ．ＴｅｅｗｒｍｏｌｏｉｏｍｄａｔｅｅｇｆＡ４ｅｓｔｎｆｃｄｗｔｃ — ｉｃＮ３１ｈｓｎａｉｈｒｅｅｒｆｏｄｓｆｒｅｔｄｅｏ５９ｃｌｒｓｔｉｐＤｅｉｐａｈｌａｅｅｈＮ３１Ａ．（＋）一ａｃｙｉｍｕｏｕｒｅｎｓｉｉｇｏｃｓｎ：ｅｅｋｒｏｃｅｐｅｓｎｖｃｒｃＮ３１ｆｓｉｂｎｍｎｆｏｅｅｔｔｎｎ．ＣｎｌｉＴｕａｔｘｒｓｏｅｔＤＡ．（＋）ｌｓａｕｏｈｙｉｉｏｐ
（校：志明）编张
Ｆｓｉａｃｎ真核表达载体的构建及其在肺癌Ａ４５９细胞中的表达
赵晋波马楠白光振张志培姜，，，，涛韩，勇，周勇安李小飞，
Ｃｎｔｃｉｎｏｓｉｅｅｅｋｒｏｉｅｐｅｓｏｅｔｒｎｓｅｐｅｓｏｎｌｎａｃｒｏｓｒｔｆａｃｎｇｎｕａｙｔｘｒｓｉｎｖｃｏｄｉｘｒｓｉｎｉｕｇｃｎｅｕｏｆｃａｔ
一
ｆｃｎｗａｕｃｓｆｌｏｓｒｃｅｎｒｎｆｃｅｎｏＡ５９ｃｌ．Ｉｗａｂｅｅｈｔｒｌｐｄａｏｔｎｎｓａｉｓｓｃｅｓｕｌｃｎｔｕｔｄａｄｔａｓｅｔｄｉｔ４ｅｌｙｓｔｓｏｓｒｄｔａｅｆｏｏｉｓｃｎａｉｇｖｍｏｉｉ
ｈｌＴ，ｈｎＫ，ＷａｇＺ，ｃ１ＩｄｃｉｎｏｅｎＸｔａ．ｎｕｔｆｔｏｈｅ［４Ｂｗａ— ＫａｆＣｅｇＪ１］ａ

人PSF真核表达载体构建及其在CHO细胞中的表达

第２９卷第３期２１０２年６月
贵州大学学报（自然科学版）ＪｕｎｌｆｕｈｕＵｉｒｔＮｔｒｌｃｎｅ）ｏｒａｏｉｏｎｅｓｙ（ａａＳｉｃｓＧｚｖｉｕｅ
Ｖｏ．２．３１９Ｎｏ
Ｊｎ０２ｕ．２１
ｍｉｉｅｒｃｎｄｎｐｏｅｎ・ｓｏｉｔｄｐｉｉｇａ・ｄｎｔａｔｂｉｉｇｒｔｉ－ｓｃａｅｓｌｃｎｆｃ－ａ
公司，鼠二抗购自ＫＬ公司，Ｃ抗ＰＥＬ曝光底物购自
碧云天公司，曝光底片（ｕｉｌ，ＡＩ自ＳｇＦｊｆｍ）ＤＰ购ｉｉ— ｍａ公司。１２引物设计．
Ｔ４连接酶，限制性内切酶ＨｎｌｉｄＩＩ和Ｘａ，ｘａｂＩＥＴｑ
火１ｍｎ７ｉ，２℃延伸２ｍｉ，５个循环后７ｎ３２℃延伸
ＤＡ聚合酶，ｒｏ试剂盒均购自ＴＫＲｉｅＮＴｉｌｚａａａＢｏｃｔ
ｔ，ＰＦ，子量１０ｋａ与多嘧啶序列（ｏ — ｏＳ）分ｒ０Ｄ，Ｐｌｙ
ｐｒｉｉｅｔｃｂｎｉｇｐｏｅ，ＦＢ）合成为剪ｙｉｄｎａｔｉｄｎｒｔｎＦ结ｍｒｉ接复合体＿，与前体ｍＮ的剪接加工＿。１参］ＲＡ２］
摘
要：目的是构建人ＰＦ基因真核表达载体ｐＧＰＮＳ并在检测其在ＣＯ细胞株中的表ＳＥＦ —１ＰＦ，Ｈ
达情况。应用ＤＡ重组技术和ＰＲ方法从人宫颈癌Ｈｌ胞中扩增ＰＦ基因，入ｐＧＰＮＣｅａ细Ｓ插ＥＦ—

miR-503-5p靶向VEGFA基因通过PI3KAKT信号通路调控人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭

miR -503-5p 靶向VEGFA 基因通过PI3K /AKT 信号通路调控人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭谢迎春邓丹①张玉梅②王琴③（贵州中医药大学第一附属医院妇科检查室，贵阳550001）中图分类号R737.33文献标志码A文章编号1000-484X （2021）06-0655-06［摘要］目的：探讨微小RNA -503-5p （miR -503-5p ）对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。

方法：培养滋养层细胞HTR8/Svneo 和人绒毛膜癌细胞系JEG -3、BeWo 和JAR ，实时荧光定量PCR （qRT -PCR ）检测miR -503-5p 和血管内皮生长因子A （VEGFA ）mRNA 表达水平，Western blot 法检测VEGFA 蛋白表达水平。

以JEG -3细胞为研究对象，构建过表达miR -503-5p 或敲低VEGFA 的JEG -3细胞，MTT 检测细胞增殖，Transwell 检测细胞的迁移和侵袭能力，Western blot 检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（p -PI3K ）、磷酸化的蛋白激酶B （p -AKT ）蛋白水平。

生物信息学软件预测VEGFA 的3'非翻译区（3'UTR ）中含有与miR -503-5p 互补的核苷酸序列，双荧光素酶报告基因实验验证miR -503-5p 与VEGFA 调控关系。

结果：与HTR8/Svneo 细胞比较，人绒毛膜癌细胞系JEG -3、BeWo 和JAR 中miR -503-5p 水平均降低（P <0.05），VEGFA mRNA 和蛋白水平均升高（P <0.05）。

过表达miR -503-5p 或敲低VEGFA 可降低JEG -3细胞OD 值、迁移数和侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9、p -PI3K 和p -AKT 蛋白表达水平（P <0.05）。

生长分化因子5基因真核表达质粒pcDNA3．1（＋）／hGDF5的构建、鉴定及其活性检测

生长分化因子5基因真核表达质粒pcDNA3．1（＋）／hGDF5的构建、鉴定及其活性检测杨治;张铭;刘林;彭侃;许鹏【摘要】Objective To construct and identify eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1(+)/hGDF5 con-taining growth/differentiation factor 5 gene.The activity of pcDNA3.1 (+)/hGDF5 was detected.Met-hods According to the sequence of GDF5 in Genbank,the primers were designed and synthesized.The product was cloned with pcDNA3.1(+)vector after amplification with polymerase chain reaction (PCR). The eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1(+)/hGDF5 was identified by double restrictive edonuclease and PCR.The eukaryotic expression plasmids were transferred into MC615 and 293 cells.The expression of GDP5 mRAN and protein were detected by PCR,Western blotting and immunofluorescence.Results The eukaryotic expression plasmidpcDNA3.1(+)/hGDF5 was successfully constructed and identified by double restrictive edonuclease digestion and PCR.The expression of GDF5 mRAN and protein could be de-tected in MC615 and 293 cells by PCR,Western blotting and immunofluorescence.Conclusion The eu-karyotic expression plasmid pcDNA3.1 (+)/hGDF5 was successfully established, which lays the foundation for the function research of GDP5 .%目的：构建生长分化因子5（growth／differentiation factor 5，GDF5）基因的真核表达质粒 pcDNA3．1（＋）／hGDF5，并对其进行鉴定和活性检测。

PcDNA3.1-GCNF真核表达载体构建及其对HeLa细胞凋亡的影响

PcDNA3.1-GCNF真核表达载体构建及其对HeLa细胞凋亡的影响陈芳;王菊;宋勇;周宗瑶【摘要】To construct the pcDNA3.1-GCNF eukaryotic expression vector and transient transfection into cervical cancer HeLa cells and observe the influence of GCNF genes on HeLa cells apoptosis,PCR method was used to amplify GCNFcDNA from the pMD18-T-GCNF vector, the amplification product was cloned into the pcDNA3.1 (-) vector and sequencing, the recombinant plasmid pcDNA3.1-GCNF transfected into cervical cancer HeLa cells,RT-PCR and indirect immunofluorescence identified the result of transfected. Analysis apoptosis of HeLa cells by Annexin V-PI double staining flow cytometry. The pCDNA3.1-GCNF recombinant plasmid was successfully constructed and confirmed by DNA sequence. Then the pcDNA3. 1-GCNF recombinant plasmid was successfully transfected into cervical carcinoma HeLa cells. Recombinant plasmid transfectedgroup(6.72％) of cell apoptosis lower than empty vector transfected group(9.78％)and control group(9.34％ ), (P＜0. 00313). The pcDNA3.1-GCNF recombinant plasmid was transfected into HeLa cells. GCNF gene could inhibit apoptosis of HeLa cells.%构建人pcDNA3.1-GCNF真核表达载体,并瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,观察GCNF基因对HeLa细胞凋亡的影响.采用PCR 的方法从pMD18-T-GCNF载体中扩增全长GCNF cDNA,将扩增产物克隆至真核表达载体pcDNA3.1(一),测序鉴定后,重组质粒pcDNA3.1-GCNF转染HeLa细胞,RT-PCR以及间接免疫荧光鉴定转染结果,并用Annexin V-PI双染流式细胞术分析细胞凋亡情况.结果显示,克隆的重组真核表达载体经序列测定分析后,证实pcDNA3.1-GCNF重组真核表达质粒构建成功,并获得瞬时转染pcDNA3.1-GCNF 的HeLa细胞.流式细胞术检测:转染重组质粒组的细胞凋亡率(6.72%)低于转染空质粒组(9.78%)以及末转染组(9.34%),P＜0.00313,转染重组质粒后细胞凋亡率降低.由此可知,pcDNA3.1-GCNF重组质粒瞬时转染子宫颈癌HeLa细胞后,GCNF基因可以抑制HeLa细胞凋亡.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(029)002【总页数】5页(P193-197)【关键词】GCNF;真核表达载体;HeLa细胞;转染【作者】陈芳;王菊;宋勇;周宗瑶【作者单位】石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学医学院,石河子832002;石河子大学医学院,石河子832002【正文语种】中文【中图分类】R394.1在我国子宫颈癌患病率位于妇科肿瘤第一位,而且近年来患病率也在逐年上升且有年轻化的趋势,它的恶性生物学行为与某些促进细胞增殖或抑制细胞凋亡的基因密切相关。

抑癌基因p53及细胞周期素cyclinD1与胃癌的关系

抑癌基因p53及细胞周期素cyclinD1与胃癌的关系
抑癌基因p53和细胞周期素cyclinD1是胃癌的两个重要因素。

p53是一个负责细胞修复和细胞周期调节的基因。

这个基因在
正常细胞中起着重要作用，可以防止癌细胞的发生和恶性增殖。

细胞周期素cyclinD1则是一种参与细胞周期调控的蛋白质。

这个基因的异常表达也被发现是许多癌症的并发症之一。

在胃癌发生过程中，p53的变异和缺乏发生较为频繁。

它的缺
失会导致细胞的自身修复功能的丧失，并可能导致肿瘤细胞的积累。

而细胞周期素cyclinD1的异常表达也存在于许多胃癌
患者中。

一些研究表明，这种细胞周期素的过度表达可能会导致正常前胃腺细胞向胃癌细胞的转化，从而促进了胃癌的发展。

虽然实际机制还存在许多不确定性，但很多研究表明，p53和cyclinD1基因的失调是胃癌发生的重要因素。

因此，人们常常
通过检测这两个基因的表达以诊断和监测胃癌的发展。

一项最新研究还发现，p53和cyclinD1基因会以复杂的互相作用来调
节细胞周期，因此更全面的研究也是必须的。

在未来，如果我们能够了解p53和cyclinD1基因的详细机制
和互相之间的作用关系，就能更好地降低胃癌的风险和提高治疗效果。

同时，这些研究也可应用于多种癌症治疗中，为人类健康事业作出重要的贡献。

AKT靶向miRNA表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖侵袭的影响

ｐｏｉｒｔｎａｄｉｖｓｏｆｇｓｒａｃｒｃｌｒｌｅａｉｎａｉｎｏａｔｉｃｎｅｅｌｆｏｎｃｓ
ＸＯｉｎｇａｇ，Ｉｉｎ —ｈＨｉ－ｉＹｏｇｇｎＩＮＧＪａ —ｕｎｌＬａｇｃｕ，ＥＸａｆ，ＵＨｎ —８ｇＸｏｅ（ｅｔｏｉｌｆＸａｎｎｉ，ｉｎｉｇ４７０２ＰＲＣｉａ１ＣｎｅＨｓｔｉｎｉＣｔＸａｎｎ３０，．．ｈｎ）ｒｐａｏｇｙ１
粒转染成功。
２２ＡＴｍＮ和ＡＴ蛋白表达．ＫＲＡＫ
对照组、载空
１３细胞培养及转染．
人胃癌ＢＣ２Ｇ８３细胞于含
隆ＡＴ抗体购自Ｓｇ公司、鼠抗人ＢａｔＫｉｍａ小 —ｃｎ单克ｉ
节肿瘤细胞生长、殖等生物学行为，增并在肿瘤细胞耐药性的形成中起重要作用［。２１２００年６月，３我们
基金项目：国家自然科学基金资助项目（０７９７。３７０６）
互补配对引起靶ｍＲＡ降解或抑制其翻译，到调Ｎ达
控基因表达的目的ＪｉＮ１。ｍＲＡ能高效和特异性阻断靶基因的表达，是继ｓＮｉＡ之后ＲＡ干扰领域一ＲＮ种重要的研究手段和实验工具。蛋白激酶Ｂ（Ｋ）ＡＴ是一种丝氨酸／氨酸蛋白激酶，ＩＫＡＴ通路位苏Ｐ３／Ｋ于多种基因信号通路的核心部位，过不同机制调通

幽门螺杆菌VacA N端真核表达载体的构建、鉴定及其诱导巨噬细胞空泡化和凋亡的观察

ｗａｍｐｉｅｓｎｈｒｍｅｓｄｓｇｅｙＰｒｍｅ．ｏｔｒｎｈ－ｅｏｓｔｍｐａｅａｄｔｅｌｎｄｔｕａｙｔｓａｌｉｄｕｉｇｔｅｐｉｒｅｉｎｄｂｏｒ５０ｓｆｗａｅａｄｔｅＨｐｇｎｍｅａｅｌｔｎｈｎｃｏｅｏｅｋｒｏｉｆｃｅｐｅｓｎｐａｍｉｐ－ｄＭｏｏｒＣ１Ａｆｅｎｏｕｌａｅｄｇｓｉｎ，Ｒｄｎｉｃｔｎａｄｓｑｅｃｎ，ｈｓｇｎｓｘｒｓｉｌｓｄＤｓＲｅ・ｎｍｅ－．ｏｔｒｅｄｎｃｅｓｉｅｔｏＰＣｉｅｔｉａｉｎｅｕｎｉｇｔｉｅｅｗａｆｏｔａｓｅｔｄｉｔｒｎｆｃｅｏＴＨＰ１ｍａｒｐｇｓｎ－ｃｏａｅ．ＴｈｘｒｓｉｎｏｒｔｉｃｗａｅｅｍｉｅｙｅａｎｔｎｗｉｈｆｕｒｓｅｃｃｓｅｅｐｅｓｏｆｐｏｅｎＶａＡｓｄｔｒｎｄｂｘｍｉａｉｔｌｏｅｃｎｅｍｉｒ－ｏｏｃｐｎｅｔｒｌｔｉｇｏｙａｄＷｓｅｎｂｏｔ．Ｍｅｎｎａｗｈｌ．ｈａｕｌ－ｉｅｌｓｏｎｐｐｏｉｒｂｅｖｄｗｉｈｅｅｔｏｃｏｃｐ。ｎｈｉｔｅｖｃｏｅｌｅｉｎａｄａｏｔｓｓｗｅｅｏｓｒｅｔｌｃｒｎｍｉｒｓｏｙａｄｔｅｅｋａｏｐｏｉａｅｗａｅｅｍｉｅｙｆｏｃｔｍｅｒｎｌｓｓＩｗａｅｎｔａｅｈｔａｔｒｅｅｅｆａｍｅｔｗｉｈａｍｏｅｕａｐｔｔｃｒｔｓｄｔｒｎｄｂｌｗｙｏｔｙａａｙｉ．ｔｓｄｍｏｓｒｔｄｔａａｇｔｇｎｒｇｎｔｌｃｌｒｍａｓｏ４８ｂｓｗａｂａｎｄｔｒｕｈＰＣａｌｉａｉｎｓｆ１２ｐｓｏｔｉｅｈｏｇＲｍｐｉｃｔ．Ａｓｄｍｏｓｒｔｄｂｅｔｉｔｏｎｏｃｅｓｓａａｙｉｎｅｕｎｆｏｅｎｔａｅｙｒｓｒｉｎｅｄｎｕｌａｅｎｌｓｓａｄｓｑｅ・ｃ

过表达N-cadherin基因慢病毒表达载体的构建及稳定细胞株的建立

过表达N-cadherin基因慢病毒表达载体的构建及稳定细胞株的建立李想;秦雪柳;丁梅;曲德伟【摘要】Objective To establish a stable human gastric cancer MGC-803 cell line overexpressing N-cadherin.Methods N-cadherin gene coding sequences were cloned from plasmids containing N-cadherin byPCR.Lentiviral particles were preparated and concentrated,overexpression of N-cadherin lentiviral vectors transfected MGC-803 cells.The positive clones screened by puromycin were subcultured for 5 generations,the expression of N-cadherin in cells was identified.Results Overexpression of N-cadherin group under fluorescence microscope showed green fluorescence.Specific bands containing N-cadherin gene coding sequence were amplificated by PCR.In overexpression of recombinant N-cadherin,overexpression of N-cadherin coding sequence was almost coincident with the target sequence.Western blotting showed that the molecular weight was 98 kD with a corresponding strip.Conclusion Stable overexpression of N-cadherin human gastric cancer MGC-803 cells are established successfully,this study provides a good basis for further research on the function of N-cadherin gene.%目的建立稳定过表达N-cadherin的人类胃癌MGC-803细胞系.方法从含有N-cadherin的质粒中利用PCR技术克隆N-cadherin基因编码序列.制备并浓缩慢病毒颗粒,将构建好的过表达N-cadherin慢病毒载体感染MGC-803细胞,并稳定遗传,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养5代后鉴定细胞内N-cadherin的表达.结果荧光显微镜下过表达N-cadherin组细胞有绿色荧光表达;PCR扩增得到含N-cadherin基因编码序列的特异性条带;重组的过表达N-cadherin载体中,过表达N-cadherin编码序列与目标序列几乎一致;Western blotting结果显示,在分子量为98 kD处有相应条带.结论成功建立稳定过表达N-cadherin的人类胃癌MGC-803细胞,此研究为进一步探讨N-cadherin基因的功能提供了良好的研究基础.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2017(026)012【总页数】3页(P1370-1372)【关键词】人类胃癌MGC-803细胞;N-cadherin;过表达【作者】李想;秦雪柳;丁梅;曲德伟【作者单位】徐州医科大学,江苏徐州221000;徐州医科大学,江苏徐州221000;徐州医科大学,江苏徐州221000;徐州医科大学神经生物实验室【正文语种】中文【中图分类】R735.2胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一，据国际癌症研究中心(International Agency for Research on Cancer，IARC)公布的最新统计结果显示，胃癌是全世界第四大恶性肿瘤[1-2]。

Notch1蛋白胞内段重组慢病毒载体的构建及其在原发性渗出性淋巴瘤细胞中的功能验证

Notch1蛋白胞内段重组慢病毒载体的构建及其在原发性渗出性淋巴瘤细胞中的功能验证赵润然;沈忱悠;严沁;卢春【摘要】目的:构建含Notch1胞内段(intracellular Notch1,ICN)基因的重组慢病毒载体,并检测其对Notch信号通路以及卡波氏肉瘤病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)潜伏感染的原发性渗出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma,PEL)细胞增殖能力的影响.方法:从真核表达质粒pIP-Flag-ICN中扩增出ICN基因片段,并将其插入慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen(pHAGE)质粒中以构建重组质粒pHAGE-ICN.在人胚肾上皮细胞293T 细胞中共转染重组质粒pHAGE-ICN、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G,获得表达ICN的重组慢病毒,采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度.以ICN重组慢病毒感染PEL细胞系BCP-1细胞,通过蛋白质印迹法检测ICN以及Notch信号通路下游靶蛋白的表达,采用细胞计数法检测过表达ICN对BCP-1细胞增殖能力的影响.结果:质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pHAGE-ICN构建成功.通过慢病毒三质粒包装系统成功包装携带ICN基因的重组慢病毒,并经梯度稀释法测得病毒滴度约为2×107 TU/mL.以ICN重组慢病毒感染BCP-1细胞,蛋白质印迹证实ICN蛋白获得有效过表达,并且能够促进Notch信号通路下游靶蛋白Hes-1的表达.细胞计数结果显示,过表达ICN能显著增强BCP-1细胞的增殖能力.结论:成功构建了含ICN基因的重组慢病毒载体,重组慢病毒介导的ICN过表达能够增强Notch信号通路活性,并增强PEL细胞的增殖能力.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2018(028)002【总页数】5页(P121-125)【关键词】Notch1胞内段;慢病毒;卡波氏肉瘤病毒;原发性渗出性淋巴瘤;细胞增殖【作者】赵润然;沈忱悠;严沁;卢春【作者单位】南京医科大学病原生物学系,江苏南京211166;南京医科大学病原生物学系,江苏南京211166;南京医科大学病原生物学系,江苏南京211166;南京医科大学病原生物学系,江苏南京211166【正文语种】中文【中图分类】R393作为进化高度保守的信号通路，Notch通路借助于相邻细胞间受体与配体的通讯，参与细胞分化和组织发育等重要的生物学过程。

受强力霉素调节的自杀基因表达载体系统的构建和在乳腺癌细胞株(MCF-7)+的表达

1 材料和方法
1. 1 材料 1. 1. 1 细胞
乳腺癌细胞株( MCF-7) 来自中南大学湘雅医学院细胞中心. 1. 1. 2 质粒
RevTe-t On 表达系统购自 Clontech 公司 ( 美国) , 该系统内含 pRevTRE 和 pRevTe-t On 两个质粒; 含有 tk 基因的 pGEM7Z-tk 质粒为中南大学湘雅医学院肿瘤研究所曹亚教授惠赠. 1. 1. 3 试剂
第6 卷第2期 2002 年 6 月
生命科学研究 Life Science Research
Vol. 6 No. 2 June 2002
受强力霉素调节的自杀基因表达载体系统的构建和在乳腺癌细胞株( MCF-7) 的表达¹
罗赛群, 胡维新, 易伟峰, 曾赵军, 陈迁
( 中南大学湘雅医学院分子生物学研究中心, 中国湖南长沙 410078)
TK2 5c-TAGCCAAGCTTTATTGCCGTCATAGCGC- 3c;
TK3 5c-TGGAGCAGAAAATGCCCACG- 3c; TK4 5c-TGCTGCCCATAAGGTATCGC- 3c. 1. 2 方法 1. 2. 1 PCR 和 RT- PCR 扩增 PCR 反应体系含 1 Lg 模板 DNA, 0. 2 Lmol/ L 引物, 200 Lmol/ L dNTP 及 2 U Taq DNA 聚合酶, 反应体积为 50 Ll. 94 e 变性 5 min 后, 进行热循环反应, 反应条件为 94 e 30 s, 50 e 30 s, 72 e 50 s, 共 35 个循环, 反应完成后, 72 e 延伸 10 min, 于 1. 5% 琼脂糖凝胶电泳观察实验结果. RT- PCR 时先进行逆转录反应, 将 HSVtk 的 mRNA 逆转录为 cDNA, 反应条件为: 总 RNA 约 1 Lg, Oligo( dT ) 16 0. 5 Lg, RNasin 20 U, 5 @ RT 缓冲液 4 Ll, 10 mmol/ l dNTPs 1 Ll, AMV 逆转录酶 10 U, 加 H2O 到 20 LL, 42 e 保温 30~ 60 min, 冰上冷却, 离心数秒钟, 然后进行 PCR 扩增. 1. 2. 2 重组质粒的构建由于 pGEM7Z- tk 质粒上没有合适的酶切位点切下 HSVtk 基因, 故用 PCR 扩增 pGEM7Z- tk 质粒, 获得 HSVtk 基因 DNA 片段. 所用为引物 TK1 和 TK2, 设计引物时, 在引物 TK1 的 5c加上 BamH Ñ 酶切位点, 在引物 TK2 的 5c加上 Hind Ó 酶切位点, 以便定向克隆到 pRevTRE 质粒上. 该 DNA 片段用 BamH Ñ 和 Hind Ó 消化, 然后与 BamH Ñ 和 Hind Ó 消化的载体 pRevTRE 连接. 1. 2. 3 细胞转染实验用磷酸钙共沉淀法对细胞进行转染, 将乳腺癌细胞株 MCF- 7 用 DMEM 培养基( 含 10% FCS) 稀释, 接种于 6 孔板上, 每孔含有 4 @ 105 个细胞. 24 h 后, 取 10 Lg ( ~ 10 Ll) 质粒 DNA, 90 Ll H2O, 10 Ll 溶液 Ñ , 100 Ll 溶液 Ò , 逐个加入到 Eppendorf 离心管中并充分混合, 室温放置 15 min 后, 逐滴加入到细胞中, 37 e 培养. 2 d 后用 400 mg/ L 相应抗生素进行筛选, 以获得稳定表达的细胞株.

细胞周期相关蛋白CyclinD1、CyclinE、p16和p21在卵巢高级别浆液性癌中的表达及其意义

ＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｙ，ｔＷｅｎｚｈｏｕ，３２５０００
墨团匝
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣｙｃｌｉｎＤ１，ＣｙｃｌｉｎＥａｎｄｔｈｅｉｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｐｌ６，ｐ２１ｉｎｈｉｇｈ —
ｇｒａｄｅｏｖａｉａｒｎｓｅｉｏｒｕｓａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｔｈｅｉｒｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｐａｒａｉｎｆ — ｅｍｂｅｄｄｅｄｔｉｓｓｕｅｓｏｆ３３ｃａｓｅｓｏｆｏｖａｒｉａｎｓｅｒｏｕｓｂｏｒｄｅｒｌｉｎｅｔｕｍｏｒａｎｄ５０ｃａｓｅｓｏｆｏｖａｒｉａｎｈｉｇｈ — ｇｒａｄｅｓｅｒｉｏｕｓａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｗｅｒｅ
ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｔｈｅｉｒｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅＬＵＱｉｎｇｙｉｉ．ＹｌＮＸｉａｏｎａ２ＤＯＮＧＬｅｉ２ＣＨＥＮＧｕｏｒｏｎｇ２．

抗CyclinD1胞内抗体AD5N对宫颈癌HeLa细胞的影响

blo
t
、
M 1 vr 法及流
，
式细胞术分析该胞内抗体的细胞内表达和抗肿瘤效应
，，
结果：A D 5 N 在稳
定筛选的细胞株中有效表达与空细胞和空质粒转染的细胞株相比
0 0 1
．
一
明显抑制 H e L a 细胞增殖并诱导细胞凋亡 ( P <
，
，
，
。
关键词 E f i
e c
Cy c lin D l
胞内抗体
增殖
a
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’
，
宫颈癌
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y c lin D 1 I n t r
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) 细胞周期 G 。 G ．期指数增高 1 0 3 5 ％ S 期指数下降 1 5 7 7 ％凋亡细胞指数上升 6 3 8 ％
，
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，
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结论：抗 C y c l i n
D1
胞内
抗体 A D 5 N 基因的表达抑制宫颈癌细胞的增殖阻滞细胞周期进展并诱导细胞凋亡

Caveolin-1真核表达载体的构建及其Hepa1-6细胞中的表达

Caveolin-1真核表达载体的构建及其Hepa1-6细胞中的表达汪淑晶;汪晓敏;师伟;张嘉宁【摘要】Caveolin-1 plays different roles in different kinds of tumors. Caveoiln-1 may act as tumor-suppressor, as well as tumor-promoter. This study aims to analyze the expression of caveolin-1 in mouse hepatoma cell lines and construct stable hepa1-6 cells expressing exogenous caveolin-1. The expression of caveolin-1 in mouse hepatoma cell lines (H22,Hca-F and Hepal-6)was investigated by RT-PCR and Western-blot assays; mouse caveolin-1 cDNA expression vector was constructed by molecular clone, and stable hepa1-6 cells transfected with caveolin-1 gene were obtained through transfection and screening. Results showed that the expression levels of caveolin-1 were undetectable in hepa1-6 cells, and upregulated in H22 and Hca-F cells. Mouse caveolin-1 cDNA expression vector and stable transfected hepa1-6 cells were generated successfully. The stable hepa1-6 cells transfected with caveolin-1 will lay a foundation for further studies of caveolin-1 function.%Caveolin-1在不同肿瘤中发挥作用不同,既发挥抑癌基因样作用又发挥癌基因样作用.旨在分析caveolin-1 在小鼠肝癌细胞系中的表达情况及建立稳定表达外源caveolin-1的Hepa1-6细胞.利用RT-PCR和Western-blot 方法检测caveolin-1在小鼠肝癌H22、Hea-F和Hepa1-6细胞中的表达;通过分子克隆构建小鼠caveolin-1 cDNA真核表达栽体,利用脂质体转染等方法建立稳定表达外源caveolin-1的Hepa1-6细胞株;通过RT-PCR、Western-blot、免疫细胞化学等方法鉴定其稳定表达细胞株.结果显示,caveolin-1在Hepa1-6细胞中表达呈阴性,在H22和Hca-F 中高表达;成功获得小鼠caveolin-1 cDNA真核表达载体pEGFP-N2/Cav-1,筛选并鉴定出高表达外源caveolin-1的Hepa1-6稳定细胞株C1和C4,为进一步分析caveolin-1在肝癌中所发挥的作用奠定了一定的研究基础.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2011(028)006【总页数】5页(P26-30)【关键词】caveolin-1;分子克隆;转染;肝癌【作者】汪淑晶;汪晓敏;师伟;张嘉宁【作者单位】大连医科大学生物化学与分子生物学教研室糖生物学研究所,大连,116044;大连医科大学生物化学与分子生物学教研室糖生物学研究所,大连,116044;大连医科大学生物化学与分子生物学教研室糖生物学研究所,大连,116044;大连医科大学生物化学与分子生物学教研室糖生物学研究所,大连,116044【正文语种】中文【中图分类】Q78胞膜窖（caveolae）是50～100 nm烧瓶状的细胞膜结构，和信号传导密切相关。

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诱导细胞凋亡。
［关键词］ＣｃｎＤ；内抗体；ｙｌ１胞ｉ核定位；增殖；乳腺癌
ＣｏｓｒｃｉｎｏｘｒｓｉｎｖｃｏｏｎｉｃｃｉｎｒｂｄｎｔｕｔｆｅｐｅｓｅｔｒｆｒａｔｙｌＤ１ｉｔａｏｙＡＤ５ａｄｉｎｏｏ－ｎＮｎｔｉ－ｓ
ｈｂｔｒｆｅ￣ｏｅｌｐｒｌｅａｉｎｏｅｓａｅｉｉｏｙｅｃｎｃｌｏｉｒｔｏｆｂｒａｔｃｎｃｒｆＺＯｉｏｇ，ＨｕＣＯＹ—ｕＷＮｅ，ＨＮｏｇ，ＵＢｉｏｇ，ＩＧｉｉＫｙＬｂｒｔｙｏＨＵＬ— ｎＺＵＸｎ，ＡｕＨａ，ＡＧＬｉＣＥＹｎＤａ— ｎＬｕＹｎｅａｏｏｒＨＲ — ｇ．ａｒｆＭｏｃｌｒｎｒｌｙａｄＥｇｎｅｎｌｕｚｒｏｎｎｉｅｉｏｎｔｄｃｔｎ倒ｉｎｅｉ，ｈｎｃｕ３０１ＣｉｅａＥｙ￣ｇｒｇｆＭｉｉｒｏｕａｏ，ｎＵｉｒｔＣａｇｈｎ１０２，ｈｎｓｙｆＥｉｖｓｙａ
方法：利用ＰＲ技术和分子克隆技术，ｅ构建编码细胞核定位的抗ＣｃｎＤ胞内抗体基因（ＤＮ）真核表达载体ｐＤＡ．— ｙｌ１ｉＡ５的ｃＮ３ＩＡ５利用脂质体介导法转染ＭＣ－ＤＮ，Ｆ７细胞，ＴＰＲ间接免疫荧光、ｓｒｌ和流式细胞术分析该胞内抗体基因Ａ５Ｒ－Ｃ、ＷｅｔｂｏｅｎｔＤＮ在ＭＦ７Ｃ－细胞中的表达、定位及抑瘤效应。结果：经限制性内切酶分析及序列分析发现，成功构建编码细胞核定位的抗ＣｃｎＤｙｌ１ｉ胞内抗体（ＤＮ基因的真核表达载体ｐＤＡ．－ＤＮ基因片段为８５ｂ，Ａ５）ｃＮ３１５，Ａ５ｐ编码２５８个氨基酸，分子量约为３ＤＴＰＲ免０ｋ。Ｒ－Ｃ、
疫荧光及Ｗｅｅｏ实验结果显示，ｓｒｂｔｔｌｎ仅在转染胞内抗体基因的ＭＦ７Ｃ－细胞中存在该胞内抗体的表达，主要分布在细胞核并且
区域。与野生型ＭＦ７细胞和转染空质粒的细胞相比，ＭＣ－／ｃＮ３１Ａ５Ｃ－在Ｆ７ｐＤＡ．－ＤＮ细胞中Ａ５ＤＮ的表达可明显抑制ＭＣ－Ｆ７细
胞增殖，显著诱导细胞凋亡（００）使Ｇ－１细胞周期指数增高１．％，期指数下降１．％，Ｐ＜．１，０Ｇ期２６Ｓ４５２２凋亡细胞指数上升
９１％。结论：．５细胞核定位的抗ＣｃｎＤ胞内抗体Ａ５ｙｌ１ｉＤＮ基因的表达，可有效抑制乳腺癌细胞的增殖，阻滞细胞周期进展，并
周立宏朱迅② 曹玉华王磊③ 陈勇杜柏榕② 李桂英
（吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室，长春１０２）３０１
中国图书分类号（邪文献标识码Ａ文章编号１０－８Ｘ｛０８０－７３０００４４２０）的抗ＣｃｎＤ胞内抗体基因的真核表达载体并分析其对乳腺癌细胞增殖的抑制效应。构ｙｌ１ｉ
ｎｃａｃｌａｏｉａＮＳａｏｓｔ．ｈｎｉｗｓｓｃｎｄｉｏｐＤＡ．ｔｃｎｔｃｔｃｍｉｎｅｐｅｓｎｖｔｃ — ｕｌｒｏａｚｔｎ￣ｎｌ（Ｌ）Ｗｓｎ￣ｃｄＴｅａｂｌｅｔｃＮ３１ｏｏｓｕｔｅｒｏｂａｔｘｒｓｏｅｏｐＤｅｌｉｉｓｃｔｅｔｕｏｎｒｅｈｎｉｃｒ
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周立宏等抗ＣｃｎＤ胞内抗体ＡＳ基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用笫ｖｉ１ｌＤＮ
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抗ＣｃｎＤ１内抗体Ａ５ｙｌ胞ｉＤＮ基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用 ①
［ｂｔａｔＯｊｃｖ：ｏｃｎｔｔｈｅｔｔｃｃｎＤｔｌＭｉｕｌｒｏａｚｔｎｓｎｌＮ）ａｄｓａｔｔ— Ａｓｃ］ｂｅｔｅＴｏｓｅｖｃｒｆｎｉｙｌ１ｉｘｘｙｗｔｎｃａｌｌａｏｉａ（】ｎ￣ｙｏａｉｕｒｉ￣ｃｔｏｏａ — ｉｎａｈｅｃｉｉｓｔｎｎ — ｍｔｆｃｒＦ７ｃｉ．ｔｄ：ｓｇＰＲａｄｍｌｕｒｌｉｈｉｕ，ｅｖｔｔｃｃｎＤｔｂｄｅｅ（ＤＮ）ｗｔｏｅｔｆ－ｅｓＭｅｏｓＵｉＣｏｌｏｎｔｎｅｔｅｏｏａｉｙｌ１ｉｒｏｙｇｎＡ５ｉｈｅｓｏＭＣｌｈｎｎｃｅａｃｎｇｅｑｈｃｒｆ－ｉｃｎｎａ