血清中类固醇激素的检测-CleanertSLE（20161102）

血清中类固醇激素的检测-CleanertSLE（20161102）
血清中类固醇激素的检测-Cleanert SLE
一背景
类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。

它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。

类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。

本实验采用Cleanert SLE 对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，可为临床研究提供参考。

二目标物信息
表1 目标物结构信息
三材料
Cleanert SLE (200mg/3mL)；Cleanert M96 生物样品前处理仪；Cleanert V96 氮吹浓缩仪；V enusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）；API 4000+。

四样品处理方法
（1）移取200μL血清样品至样品管中，并加入一定体积的甲醇，使溶液中甲醇的含量为5%，摇匀待净化。

（2）将经过预处理的血清样品上样至Cleanert SLE中，可开启负压装置(真空度＜-0.04MPa)将样品抽过上筛板或使用Cleanert M96生物样品前处理仪将样品压下筛板，待样品全部流至填料中后，静止10min。

（3）在每孔中加入600μL甲基叔丁基醚(MTBE)用于目标物的洗脱，控制洗脱速度为1~2mL/min，在第一次洗脱完成之后，间隔1min再进行第二次洗脱，合并洗脱液。

（4）将合并的洗脱液用96位氮吹仪进行氮吹浓缩，温度设定为40℃，氮吹至近干。

（5）使用200μL乙腈/水（3/7，v/v）将样品进行重溶，摇匀，进样检测。

五仪器检测条件
5.1 正模式方法（针对黄体酮、睾酮、勃地酮）
5.1.1 HPLC条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）
流速：200μL/min
柱温：30℃
进样量：5μL
流动相：水/乙腈（45/55，v/v）
5.1.2 质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式
采集模式：多反应监测（MRM）
5.2 负模式方法（针对可的松）
5.2.1 HPLC条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm,150 ?）流速：200μL/min
柱温：30℃
进样量：5μL
流动相：水/乙腈（70/30，v/v）
5.2.2 质谱条件
扫描模式：电喷雾电离负模式
采集模式：多反应监测（MRM）
表3 质谱参数
六结果
表4 数据结果
图1 可的松标准溶液色谱图（浓度为5 ng/mL）
图2 勃地酮、睾酮与黄体酮标准溶液色谱图（浓度为5 ng/mL）
图3 血清样品色谱图（负模式）
图4 血清样品色谱图（正模式）
图6 血清加标样色谱图（正模式-加标浓度为5ng/mL ）七订货信息表。