实验三继代培养

实验三继代培养
一、目的要求
1、熟练掌握继代培养的基本操作步骤；
2、掌握继代培养的意义。

二、原理
初代培养获得的愈伤组织、胚状体和无根的芽苗等，数量有限，不能满足生根及实际生产上的需求。

为了解决上述问题，可采用切割茎段法、切块法等方法，把初代培养得到的培养物转接在继代培养基上，使其继续增殖，如此重复，就可以进行扩大培养。

三、仪器用品
超净工作台；酒精灯；75%酒精棉球；培养基；记号笔；火柴；95%酒精；接种工具等。

四、方法与步骤
1、超净工作台灭菌：接通电源，打开紫外灯照射20min。

同时打开风机20min；
2、人员准备：洗净双手，穿上实验服进入接种室。

在超净台内用酒精棉球擦拭双手，台面及接种工具、种苗瓶表面。

种苗瓶要选择生长好的初代培养物。

取10瓶左右的空白培养瓶放入超净台内；
3、转接：将酒精灯放在距超净台边缘30cm，正对身体正前方处。

将种苗瓶放在灯前偏左处，空白瓶放在灯前处，消毒瓶放在灯右处，以利方便操作；打开原种瓶，将瓶口过火一次，置于一定位置。

剪刀和镊子灼烧灭菌后，用镊子将原种瓶内一株试管苗取出，夹住第一节，用剪子将其剪成1cm左右，带一个节及一个叶的小段（节上少留，节下多留），剪成的小段先放在无菌培养皿内。

打开空白瓶，瓶口过火一次，用过火、冷却的镊子夹住小段迅速转接在空白瓶中，每瓶1～3个，接完后瓶口过火封口。

以后重复上述动作。

如果是愈伤组织，则将它切成小块后再转接，方法同上。

如果分离芽丛，接种者最好戴无菌手套，左手持芽丛，右手持镊子分割芽丛。

4、每接种5瓶后，再用酒精棉球擦拭双手一次，以防交叉感染；
5、每接完10瓶后，写明标号，移出超净台，置于台顶，再接下一批；
6、转接结束后，将材料放在培养室内培养。

3天后检查污染情况，及时清除。

五、作业
继代时，减少污染的关键环节是什么？
1。