不同生化检测系统实现结果可比性的方法课件

0.23±0.08IU/ml
乙型肝炎表面抗原（HBsAg）血清（液体）标准物质
GBW(E)090039
0.74±0.23IU/ml
乙型肝炎表面抗原（HBsAg）血清（液体）标准物质
GBW(E)090040
1.31±0.42IU/ml
乙型肝炎表面抗原（HBsAg）血清（液体）标准物质
GBW(E)090041
• 是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有 发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。
• 用于发展及评价参考方法和一级标准品。
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参考方法（reference method）
• 是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少， 系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当 的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。这类方法在条件许可 的实验室中应经常使用。
中子活化法
白蛋白
——
免疫化学法 溴甲酚绿法
总蛋白
——
双缩脲法 双缩脲法
肌酐
ID-MS、
离子交换层析法
苦味酸法
离子交换层析法
尿素
ID-MS
尿素酶法 尿素酶法
尿酸
ID-MS
尿酸酶法（紫外法）
尿酸酶法
胆红素
——
重氮反应法
重氮反应法
葡萄糖
ID-MS
己糖激酶法
葡萄糖氧化酶法
胆固醇
ID-MS
Abell-Kendall 法，
参考方法名称
血清葡萄糖同位素稀释液相色谱串联质谱法 血清尿素同位素稀释气相色谱质谱法
血清尿酸同位素稀释液相色谱串联质谱法 血清肌酐同位素稀释液相色谱串联质谱法 丙氨酸氨基转移酶活性浓度（37℃）参考测定方法
天冬氨酸氨基转移酶（AST）
IFCC-Spectrophotometry
天冬氨酸氨基转移酶活性浓度（37℃）参考测定方法
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选择检测系统的原则：
①选择性能优良的仪器和质量好的试剂； ②以性能和质量为主要标准，价格为次要标准； ③仪器制造商和试剂生产商的美誉度； ④培训和售后服务； ⑤考虑发展因素； ⑥检测系统经过评价确定后，不可随意更换任一要素，特别是试剂和程序。
除非有特殊原因，如原使用的试剂停产等。特别不能因为经济利益的原因， 随意更换试剂。 ⑦如果确实需要更换试剂，必须重新评价新检测系统的性能指标，证明是有 效的检测系统，方可在实际工作中应用。
证书编号 GBW09153 GBW09172
GBW09173
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免疫和核酸标准物质（国家标准）
标准物质名称 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）血清（冻干）标准物质
标准物质编号 GBW09164
浓度 28.0±3.2IU/ml
乙型肝炎表面抗原（HBsAg）血清（液体）标准物质
GBW(E)090038
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项目
决定性方法
参考方法
常规方法
钙
ID-MS
原子吸收分光光度法
邻甲酚肽络合法
氯
电量滴定法、
电流滴定法 电量分析法
中子活化法
硝酸汞滴定法
镁
ID-MS 原子吸收分光光度法
甲基麝香草酚兰比色法
磷
ID-MS
——
——
钾
ID-MS、
火焰光度法 火焰光度法
中子活化法
钠
重量分析法、
火焰光度法 火焰光度法
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• 临床实验室使用常规方法和日常校准品，涉及到分析仪器、 试剂、分析参数和校准品。如果常规方法的检测结果经一系 列合理实验的验证，其量值能够溯源到高级标准物质，说明 检验结果有溯源性。
• 最高级标准为国际或国家标准，如无国际或国家标准，常规 测量结果通常应该溯源到厂家标准。
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• 实验室认可的两个国际标准ISO/IEC17025（检测和校准实 验室能力认可准则）和ISO/15189（医学实验室—质量和能 力的专用要求）都对检验结果的溯源性和可比性提出了明 确要求，强调
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仪器
试剂
校准品
实验程序
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固定检测系统（封闭检测系统）：
• 由公司选定的仪器、试剂、校准品、检验程序等组成 固定的组合，用户实验室不能更改。这样的检测系统 经过公司与参考系统校准比对，可以保证结果的可比 性和量值溯源性。
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自建检测系统（开放检测系统）：
• 实验室自行选择的仪器、试剂、校准品、检验程序的组 合，其中的每一要件都可以更改。如果自建的检测系统 经过比对、校准验证和偏倚评估，证明其有效性。则成 为有效的检测系统，其检测结果具有可比性和量值溯源 性。
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• 如果自建的检测系统未经过比对、校准验证和偏倚 评估，其检测结果的可比性和量值溯源性未知，则 称为“自攒检测系统”。
• 如何改进EQA成绩，提高地区间不同实验室之间结 果的可比性呢？
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问题3
• 病人抱怨在不同医院检验结果不一致，不知道该 相信谁。
• 医师不知道该如何依据检验结果对患者诊断和治 疗。
• 卫生部要求不同实验室之间结果“互认”，降低医疗 成本。
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5
怎样解决这些问题呢？
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• 用于评价常规方法和试剂盒，鉴定二级标准品。
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常规方法（routine method）
• 指性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密度、 准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。
• 这类方法经有关学术组织认可后可称为推荐方法 （recommended method），推荐方法应具有足够的实验证 据。
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钥匙
• 实现同一检测项目在不同检测系统中的检测结果具有可比 性，是临床诊断疾病的基本要求，也是卫生部提倡“结果 互认”的基础，更是实验室管理的重要目标。
• 解决“可比性”的关键在于检测系统的量值溯源。
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7
检测系统：
• 是指完成一个检测项目所需要的仪器、试剂、校准 品、检验程序等的组合。
转肽酶（GGT）
IFCC-Spectrophotometry
r-谷氨酰转移酶活性浓度（37℃）参考测定方法
乳酸脱氢酶（LDH）
IFCC-Spectrophotometry
乳酸脱氢酶活性浓度（37℃）参考测定方法
肌酸激酶（CK）
IFCC-Spectrophotometry
肌酸激酶活性浓度（37℃）参考测定方法
丙型肝炎病毒（HCV）抗体血清（液体）标准物质
GBW(E)090045
2.10±0.29NCU/ml
丙型肝炎病毒（HCV）抗体血清（液体）标准物质
GBW(E)090046
4.35±0.72NCU/ml
丙型肝炎病毒（HCV）抗体血清（液体）标准物质
GBW(E)090047
8.4 ±1.1NCU/ml
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生化标准物质（国家标准）
1.GBW 09174冰冻人血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素标准物质
2.GBW 09175冰冻人血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素标准物质
3.GBW 09176冰冻人血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、尿素标准物质
4.GBW 09177冰冻人血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰基 氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、α-淀粉酶活性浓度标准物质
• 用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为二级标 准品定值。
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二级标准品（次级参考物质）
• 这类标准品可由实验室自已配制或为商品，它的示值必须 用一级标准品和参考方法确定；
• 主要用于常规方法的评价或为控制物定值和常规测定的结 果计算。
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日常校准品
• 用二级标准品和常规方法测定得到校准品，用于常规测定 中的标准。
ID-GC/MS
血清总胆固醇同位素稀释气相色谱质谱法
甘油三酯（TG）
ID-LC/MS/MS
血清甘油三酯同位素稀释液相色谱串联质谱法
甘油三酯（TG）
ID-GC/MS
血清甘油三酯同位素稀释气相色谱串联质谱法
皮质醇（Co）
ID-LC/MS/MS
血清皮质醇同位素稀释液相色谱串联质谱法
睾酮（T）
ID-LC/MS/MS
2.55±0.80IU/ml
乙型肝炎表面抗原（HBsAg）血清（液体）标准物质
GBW(E)090042
4.6±1.3IU/ml
丙型肝炎病毒（HCV）抗体血清（冻干）标准物质
GBW09160
8.00±0.20NCU/ml
丙型肝炎病毒（HCV）抗体血清（液体）标准物质
GBW(E)090044
0.86±0.09NCU/ml
胆固醇氧化酶法
胆固醇氧化酶法
甘油三酯 ID-MS
酶学习法交流PPT
酶法
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生化参考方法（卫生部临检中心2011.12.23）
分析项目 葡萄糖（Glu） 尿素（Urea）
尿酸（UA） 肌酐（Crea） 丙氨酸氨基转移酶（ALT）
分析原理
ID-LC/MS/MS ID-GC/MS
ID-LC/MS/MS ID-LC/MS/MS IFCC-Spectrophotometry
不同生化检测系统 实现结果可比性的方法
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1
问题的提出
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2
问题1
• 目前，很多实验室都有两台或多台生化分析仪，经 常有不同仪器检测同一项目结果不一致的情况。
• 怎样才能使两台仪器之间的结果具有可比性呢？
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3
问题2
• 即使只有一台生化分析仪，但参加EQA结果不成功， 地区间不同实验室结果可比性差。
• 方法学比对试验是实现准确度溯源和患者标本检验结果可 比性的重要途径
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30
• 美国临床和实验室标准协会（CLSI）EP9-A2文件提供了不同 检测系统比对试验的作精密度评价。 EP5-A2文件提供了精密度评价方法。
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31
精密度和准确度
糖化血红蛋白液相色谱串联质谱IFCC法 高密度脂蛋白及其亚类胆固醇超速离心-高效液相色谱法
低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）
Ultracentrifugation-HPLC
低密度脂蛋白及其亚类胆固醇超速离心-高效液相色谱法
胆固醇（TC）
ID-LC/MS/MS
血清总胆固醇同位素稀释液相色谱串联质谱法
胆固醇（TC）
5.GBW 09178血清总胆固醇、总甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固 醇标准物质
6.GBW 09179血清总胆固醇、总甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固 醇标准物质
7.GBW 09180血清总胆固醇、总甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固 醇标准物质
8.GBW 09181人血红蛋白溶液中糖化血红蛋白标准物质
血清睾酮同位素稀释液相色谱串联质谱法
孕酮（P）
ID-GC/MS
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血清孕酮同位素稀释气相色谱质谱法
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血液参考方法（卫生部临检中心2011.12.23）
检测项目
检测原理
白细胞计数（WBC） 红细胞计数（RBC） 血红蛋白测定（HGB） 红细胞比容测定（Hct） 血小板计数（PLT）
单通道电阻抗法 单通道电阻抗法 HiCN分光光度法 微量毛细管离心法 流式细胞术法
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32
1. 精密度试验
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33
• 精密度实验一般选择2个标本，1个为正常或在医学决定水平 附近，另1个为异常值。
• 以本实验室研制的改良血清蛋白方法（中华检验医学杂志，2005， 11：1197-1200）的精密度评价为例，实验用1份正常值混合血 清和1份高值混合血清。
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13
实验方法的分级
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14
检验方法学包括：
• (1)经详尽研究尚未发现不准确度或不确定性原因的决定性方 法；
• (2)经详尽研究证实不准确度与不精密度可以忽略的参考方法； • (3)可满足临床或其他目的需要的日常使用的常规方法。
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15
决定性方法（definitive method）
9.GBW 09182人血红蛋白溶液中糖化血红蛋白标准物质
10.GBW 09183人血红蛋白溶液中糖化血红蛋白标准物质
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血液标准物质（国家标准）
检测项目
标准物质名称
HGB 氰化高铁血红蛋白国家一级标物质
WBC、 RBC、 HBG、
PLT
血细胞分析国家一级标准物质
HCT 红细胞比容国家一级标准物质
参考方法名称
白细胞计数参考方法 红细胞计数参考方法 血红蛋白测定参考方法 红细胞比容测定参考方法 血小板计数参考方法
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21
标准品的分级（3级）
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22
一级标准品（原级参考物质）
• 是一种稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定， 或由高度准确的方法确定，所含杂质也已经定量，且有证 书；
淀粉酶（AMY） 钠（Na） 镁（Mg）
糖化血红蛋白A1c 高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）
IFCC-Spectrophotometry ICP/MS ICP/MS
IFCC-LC/MS/MS Ultracentrifugation-HPLC
淀粉酶活性浓度（37℃）参考测定方法 血清钠电感耦合等离子体质谱法 血清镁电感耦合等离子体质谱法